PENETAPAN TIAMIN HIDROKLORIDA DALAM TABLET VITAMIN B1 SECARA HPLC Fahreza Gusnawan, Syifa Luthfiyani Luthfiyani F, Toupan Bilal Bilal A, Yayan Sopian, Yuke Djulianti Kelompok 6 Kelas XIII-2 SMK-SMAK BOGOR BOGOR
ABSTRAK Tiamin dalam tablet vitamin B1 dapat dianalisis dengan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Larutan standar tiamin yang digunakan dengan konsentrasi 30 ppm. Sampel vitamin B1dilarutkan dan diencerkan dengan larutan buffer fosfat. Pemisahan tiamin dilakukan dengan menyuntikkan analit ke dalam instrumen HPLC. Dalam tahap mobile digunakan campuran buffer fosfat dan metanol (55:45), dengan laju alir 0,5 mL per menit. Detektor yang digunakan adalah detektor UV-VIS dengan panjang gelombang 254 nm. Dengan membandingkan luas daerah sampel dan standar, konsentrasi thiamin dalam tablet vitamin B1 dapat diketahui. Jumlah thiamin dalam tablet vitamin B1 adalah 25,56 mg / tablet. ABSTRACT Thiamine in tablets of vitamin B1 can be analyzed using High Performance Liquid Chromatography. Thiamine standard solution used with a concentration of 30 ppm. Samples B1dilarutkan vitamins and diluted with phosphate buffer solution. Separation of thiamine is done by injecting the analyte into the HPLC instrument. In the mobile phase used a mixture of phosphate buffer and methanol (55:45), with a flow rate of 0.5 mL per minute. The detector used is a UV-VIS detector with a wavelength of 254 nm. By comparing the area of the sample and standard, the concentration of thiamin in vitamin B1 tablets can be known. Number of thiamin in vitamin B1 tablet is 25.56 mg / tablet.
PENDAHULUAN Seperti yang kita ketahui, pengurangan konsumsi asupan gizi seperti vitamin terjadi di masyarakat, Sehingga membuat inovasi pada industri farmasi untuk memproduksi berbagai macam tablet dengan kandungan vitamin spesifik seperti vitamin B1. Sehingga setiap industri berlomba lomba memasarkan produk tersebut dengan berbagai macam merek dan keunggulan. Lepas dari hal tersebut, permasalahannya adalah produk yang beredar sering tidak memenuhi/tidak sesuai aturan batas kadar thiamin yang yang
ditentukan oleh Farmakope Indonesia yang menentukan label kadar thiamin menggunakan sampel dari vitamin B1. Maka dilakukan analisis kadar thiamin pada produk tablet vitamin B1 dari salah satu merek yang beredar di pasaran untuk menentukan tingkat kualitas thiamin yang terkandung di dalamnya. Tujuan dari pembuatan Laporan Khusus ini adalah untuk menetapkan kadar thiamin pada tablet vitamin B1 dengan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Kegunaan Tiamin sangat penting bagi tubuh yaitu memelihara
sistem saraf yang sehat ofi, membantu mengubah glukosa menjadi energi yang dapat digunakan untuk beraktifitas, merangsang tindakan dalam otak , meningkatkan pertumbuhan secara umum, membantu mencerna karbohidrat, membantu mempertahankan jumlah darah normal merah dan lain lain. Namun disamping itu bila kekurangan tiamin akan menyebabkan Anorexia nervosa, beriberi , sembelit , depresi, kelelahan, kelemahan secara umum, tangan kelumpuhan, sakit kepala, dan lain – lain. TINJAUAN PUSTAKA A.
KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) KCKT yang dalam bahasa inggrisnya disebut HPLC adalah suatu sistem kromatografi yang fase geraknya dialirkan dengan cepat dengan bantuan tekanan dan pompa dan hasilnya dideteksi dengan suatu instrumen. Jenis HPLC yang digunakan adalah kromatografi partisi terbalik (Tjandrawati, 2003). Metode HPLC bekerja dengan cara memisahkan campuran menjadi komponen-komponen penyusunnya. Setelah itu, dilakukan analisis kualitatif dan kuantitatif untuk mengetahui jenis senyawa penyusun campuran dan kadarnya (Rubianto, 1999). HPLC dikenal sebagai prosedur analisa antioksidan yang paling mudah dan paling efisien. Teknik ini lebih spesifik untuk menentukan konsentrasi senyawa antioksidan dibandingkan dengan cara tradisional. Metode HPLC juga lebih cepat dalam menentukan turunan senyawa yang dibutuhkan dibandingkan dengan teknik GLC. Kelebihan HPLC adalah mampu menentukan semua tingkat antioksidan dalam single chromatogram. Semua senyawa polar hingga nonpolar dapat ditentukan dengan menggunakan teknik gradien elusi. Deteksi yang paling umum
digunakan adalah absorpsi UV pada gelombang 280 nm, pengukuran emisi fluoresensi pada 315 nm, dan deteksi amperiometer. Deteksi amperiometer mampu menangkap sensivitas dan spesifisitas antioksidan fenol (Macrae, 1988). B. Vitamin Vitamin adalah suatu zat senyawa kompleks yang sangat dibutuhkan oleh tubuh kita yang berfungsi untuk mambantu pengaturan atau proses kegiatan tubuh. Tanpa vitamin manusia, hewan dan makhluk hidup lainnya tidak akan dapatmelakukan aktifitas hidup dan kekurangan vitamin dapat menyebabkan memperbesar peluang terkena penyakit pada tubuh kita. Dalam penentuan apakah makanan itu mengandung vitamin apa tidak, diperlukan suatu pengujian agar dapat mengetahui kadar vitamin yang ada seperti vitamin A, B1, B2, B3, B5, B6, B8, B9, B12, C, D, E, dan K. Dengan mengetahui kadar vitamin yang ada dalam bahan pangan, maka kita dapat mengetahui kadar vitamin yang diperlukan oleh tubuh kita agar tidak terjadi kekurangan vitamin yang dapat mengganggu kesehatan tubuh kita. Oleh karena itu dibuatlah paper ini untuk mengetahui tentang jenis-jenis vitamin, ciri-ciri, sumber, struktur, dan analisisnya agar pembaca mendapatkan referensi tentang vitamin. C. Vitamin B1 (Thiamin) Thiamin atau vitamin B1 merupakan gabungan dari senyawa dengan cincin utama pirimidinnya dan senyawa dengan cincin utama tiasol. Karena peranannya sebagai koenzim dalam metabolisme perantara dari asam alfa- keto dan karbohidrat, maka tiamin terdapat pada hampir semua tanaman dan hewan. Sayuran dan buah-buahan
mengandung sedikit vitamin B1. Vitamin B1 terdapat dalam jumlah yang tinggi pada biji-bijian, terutama dalam bagian kecambah dan bekatul padi. Vitamin B1 juga banyak terkandung dalam khamir atau ragi baik ragi roti ataupun khamir bir (Andarwulan, 1992). Sumber thiamin yang baik ialah butir serealia utuh, daging organ hewan seperti hati, jantung dan ginjal, daging babi yang tidak berlemak, telur, kacang dan kentang. Satuan yang biasa digunakan ialah mg per 100 kg makanan, atau dalam SI yang setara dengan 3µg thiamin hidroklorida. Konsumsi minimum pada manusia adalah 1 mg per 2000 kkal (deMan, 1997). Thiamin berbentuk padat, berwarna putih, dan larut dalam air. Thiamin ditemukan dalam semua bijibijian serealis. Kebanyakan thiamin terdapat pada lembaga dan bekatul bijibijian. Thiamin berperan dalam oksidasi nutrien dan pelepasan energi dalam tubuh. Di dalam sel-sel tubuh glukosa berangsur-angsur dipecah dalam suatu reaksi yang melepaskan energi dalam keadaan terkontrol. Tiap reaksi membutuhkan suatu enzim yang khusus. Senyawa kompleks yang mengandung thiamin bertindak sebagai koenzim untuk dua reaksi yang berurutan (Gaman & Sherrington, 1994). Vitamin B1 (thiamyne) adalah salah satu dari macam vitamin yang mempunyai tingkat kestabilan yang kurang. Berbagai operasi pengolahan makanan dapat sangat mereduksi kandungan vitamin B1 dalam bahan pangan. Panas, oksigen, belerang dioksida, dan pH netral atau basa dapat mengakibatkan perusakan vitamin B1 ini sedangkan cahaya tidak mengurangi vitamin ini (de Man, 1997). Thiamin merupakan vitamin larut air yang stabil pada kondisi asam dan tidak stabil dalam kondisi netral atau basa. pH optimumnya adalah pada 2-3. Pada
kondisi alkali, pemecahan thiamin terjadi sangat cepat dan menghasilkan produk yang reaktif. Thiamin juga stabil dengan cahaya, namun tidak stabil oleh oksigen atau udara. Thiamin mudah tereduksi akibat panas, agen pereduksi dan ion logam (Davidek et al., 1990). METODE PERCOBAAN Alat: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15.
HPLC Labu ukur 100 ml Labu ukur 50 ml Pipet serologi Pipet volum 5 & 10 ml Pipet tetes Piala gelas 400 ml Piala gelas 800 ml Corong Pengaduk Tabung ulir Syringe Kertas saring 41 Kertas saring milipore Tissue
Bahan : 1. 2. 3. 4.
Vitamin B1 Aquadest Buffer Fosfat Thiamin-HCl (pa)
CARA KERJA: Persiapan standar 1. Pembuatan larutan induk 1000 ppm Timbang standard thiamin-HCl (pa) sebanyak 0,1000 gram lalu encerkan dalam labu ukur 100 ml dengan buffer fosfat. Kocok sampai homogen. 2. Pembuatan larutan kerja thiamin 30 ppm Dipipet 3 ml larutan induk 1000 ppm lalu diencerkan dengan buffer fosfat sampai volume 100 ml. lalu disaring dengan kertas saring milipore dan filtratnya siap untuk diinjeksikan.
Persiapan contoh
SPEMBAHASAN
1. Timbang 5 tablet vitamin B1 lalu rataratakan bobotnya. Ambil 2 tablet lalu haluskan.
Setelah melakukan pengukuran kadar thiamin menggunakan HPLC, hasil yang didapatkan adalah 25,56 mg/tablet, lebih dari kadar yang tertera pada kemasan sample sebesar 25,00 mg/tablet. Hasil ini tidak sesuai dengan kadar yang tertera pada kemasan sample.
2. Ditimbang ±0,2000 gram contoh vitamin B1 lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml, lalu ditambahkan buffer fosfat sampai tanda tera. 3. Setelah itu dikocok selama 5 menit, lalu dibiarkan mengendap dan disaring dengan kertas saring Whatman 41. Pipet 5 ml filtrat ke dalam labu ukur 50 ml, lalu dihimpitkan sampai tanda tera, dikocok lalu disaring dengan kertas asring milipore. Filtratnya siap untuk diinjeksikan. HASIL DAN PEMBAHASAN Data Pengamatan : -
Bobot 5 tablet Bobot rata rata Bobot sample Faktor pengenceran Slope Intersep
No 1
2
Nama Std. 0 ppm Std. 5 ppm Std. 10 ppm Std. 15 ppm Std. 20 ppm Std. 30 ppm Std. 50 ppm Simplo
= 1.0507 gram = 0,2104 gram = 0,2001 gram = 100/10=10kali = 7,98285 = 7,44355
Waktu Retensi 0 2,560 2,549 2,537 2,531 2,530 2,502 2,513
KESIMPULAN Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan untuk mengetahui kadar thiamin dalam vitamin B1 didapatkan kadar sebesar 25,56 mg/tablet. Sedangkan yang kita ketahui dalam kemasan sample kadar thiamin tertera 25,00 mg/tablet. Hasil ini tidak sesuai dengan kadar yang tertera pada kemasan sample. DAFTAR PUSTAKA
Area
0 48,71556 90,50892 130,92076 171,01172 243,60741 405,11139 201,83083
Perhitungan
= 25,56 mg/tablet
Andarwulan, N & S. Koswara. (1992). Kimia Vitamin. PAU – Pangan dan Gizi IPB. Bogor. Rubianto, L. (1999). HPLC As Method of Chemical Analysis. Majalah BISTEK Volume 7. No.9 : 67-71. http://smkkimiaindustri.com/o ld/index.php?option=com_co ntent&view=article&id=58&Ite mid=72&showall=1 http://tonyachmadsmartboy.blogspot.com/2014/ 05/vitamin-metode-analisadan-manajemen.html http://zonazaenal.wordpress.c om/
