PENDAHULUAN
Latar Belakang
Mikroorganisme sebagai makhluk hidup sama dengan organisme hidup lainnya, sangat membutuhkan energi dan bahan-bahan untuk membangun pertumbuhannya, seperti dalam sintesa protoplasma dan bagian-bagisn sel yang lainnya. Bahan-bahan tersebut disebut nutrien. Untuk memanfaatkan bahan-bahan tersebut, maka sel memerlukan sejumlah kegiatan, sehingga menyebabkan perubahan kimia di dalam selnya. Semua reaksi yang terarah yang berlangsung di dalam sel ini disebut metabolisme. Metabolisme yang melibatkan berbagai macam reaksi di dalam sel tersebut, hanya dapat berlangsung atas bantuan dari suatu senyawa organik yang disebut katalisator organik atau biasa disebut biokatalisator yang dinamakan enzim. Untuk dapat memahami tentang nutrisi dan metabolisme ini, pengetahuan dasar biokimia angat dibutuhkan (Natsir dan Sartini, 2006). Media adalah salah satu campuran bahan yang terdiri dari zat-zat hara (nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Media agar adalah salah satu jenis media yang paling umum digunakan dalam mengisolasi atau mengkultivasi mikroorganisme. Media agar memungkinkan untuk dilakukannya isolasi bakteri dari suatu sampel, karakteristik morfologi, sampai dengan perhitungan bakteri (total plate count). Bentuk dan jenis je nis mikroorganisme yang akan dibiakkan akan ak an mudah diidentifikasi dengan pengbahan komposisi nutrient maupun penambahan indicator warna. Komposisi nutrient dapat dimodifikasi sehingga media dapat digolongkan menjadi media selektif, media umum, atau media diferensial (Manangsang, Arya. 2012).
2
Pada pembuatan media hal penting yang harus dilakukan adalah mensterilkan tempat, alat, dan tangan menggunakan alkohol. Hal ini agar lingkungan menjadi aseptis bebas dari mikroba (Satish Gupte, 1990). Pertumbuhan mikroorganisme tergantung dari tersedianya air. Bahan-bahan yang terarut dalam air yang digunakan oleh mikroorganisme untuk membentuk bahan sel dan memperoleh energi. Media tumbuhnya bakteri banyak jenisnya, pada dasarnya sesuatu larutan yang baik harus memenuhi syarat yang cukup. Didalamnya harus tersedia semua unsurnya (Schlegel, 1994). Tujuan Praktikum
Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui cara pembuatan meiaselektif untuk passeudomonnas flouresscens dan acillus sp.
3
TINJAUAN PUSTAKA
Untuk menelaah mikroorganisme di laboratorium, kita harus dapat menumbuhkan mereka. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami atau dengan bantuan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui substrat yang disebut media. Untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrient yang diisyaratkan oleh bakteri dan juga macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya (Mila, 2005). Media buatan merupakan tempat hidup bagi mikroba. Media yang dipakai pada praktikum ini adalah jenis agar. Yaitu media TSA. Pada pembuatan media, hal penting yang harus dilakukan adalah mensterilkan tempat, alat dan tangan menggunakan alcohol. Hal ini agar lingkungan menjadi aseptis bebas dari mikroba. (Satish, 1990). King’s B adalah media non-selektif dan digunakan untuk subkultur diduga isolat. Selain antibiotik seperti cephalexine akan membuat media (King’s B) cocok untuk deteksi beberapa pseudomonad seperti Pseudomonas syringae pv, syringae pv dan Pseudomonas savastonoi. Media King’s B digunakan untuk deteksi dan subkultur dari Pseudomonas fluorescent dari biji dan tanaman. Pathovars Pseudomonas syringae menghasilkan pigmen neon biru yang menjadi terlihat di bawah UV light. King’s B memberikan jumlah tertinggi unit pembentuk koloni, dan di beberapa lingkungan (Atlas, 2005). Media ini digunakan untuk mendeteksi fluorescens bakteri di air, khusus untukPseudomonas fluorescens dalam air minum. Pergantian fosfat hidrogen dikalium dengan fosfat kalium tri-3-hidrat mencegah penurunan pH setelahdi
4
autoklaf dan penurunan yang dihasilkan dalam produksi fluorescein. King’s B atau raja agar B memungkinkan produksi fluoresceine (pyverdin), pigmen kuning-hijau yang berfluoresensi di bawah sinar ultraviolet dalam strain tertentu pseudomonas. Media yang digunakan terutama dalam analisis air untuk deteksi dan diferensiasi pseudomonas aeruginusa, yang menghasilkan pigmen karakteristik sementara spesies lain dari Pseudomonas.Spesies-spesies pseudomonad fluorescens ditandai oleh kemampuannya dalam mengekskresi pigmen-pigmen hijau-kuning yang larut dan fluorescens di bawah sinar UV. Pigmen-pigmen ini terutama dihasilkan dalam media yang defisien dalam besi atau media khusus (King’s B). Beberapa spesies pseudomonad fluorescens juga menghasilkan pigmen-pigmen phenazine biru, hijau atau orange yang k has (terutama dalam media King’s A), (Pujiati, 2012).
5
BAHAN DAN METODE
BahandanAlat
Bahan
Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah sebagai berikut: a) Media TSA (Tryptone Soya Agar) : 1. Pepton Casein (15 g). 2. Pepton Soymeal (5 g). 3. Sodium Chloride (5 g). 4. Agar (15 g). 5. Air Aquades (1 L). b) Media King’s B 1. Glycerol (15 ml). 2. Pepton (20 g). 3. Agar (20 g). 4. K ₂HPO₄ (0,5 g). 5. MgSO₄7H₂O (0,25 g). 6. Air Aquades (1 L).
Alat
Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah gelas beaker, botol C1000, alumunium foil, cling warp dan autoklaf.
6
Waktu danTempat
Praktikum ini dilaksanakan pada hari Rabu, 10 Oktober 2018 pada pukul 13.00 – 14.40 WITA di Laboratorium Fitopatologi, Fakultas Pertanian, Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru.
ProsedurKerja
Adapun prosedur kerja praktikum ini adalah sebagai berikut : a. Prosedur Kerja TSA (Tryptone Soya Agar) 1. Siapkan alat dan bahan. 2. Semua bahan dicampurkan merata dalam gelas beaker dan dipanaskan. 3. Setelah semua bahan larut, selanjutnya dimasukkan kedalam botol C1000. 4. Mulut botol C1000 ditutup dengan aluminium foil dan dibalut dengan cling warp. 5. Selanjutnya disterilisasikan dalam autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 15 psi selama 30 menit. b. Prosedur Kerja King’s B 1. Siapkan alat dan bahan. 2. Campur semua bahan dan aduk sampai rata lalu dipanaskan. 3. Setelah semua bahan larut, masukkan kedalam botol C1000. 4. Tutup dengan aluminium foil dan balut dengan cling warp. 5. Sterilkan pada autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 15 psi selama 30 menit.
7
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Adapun hasil praktikum kali ini sebagai berikut : Tabel 1. Media TSA (Tryptone Soya Agar) dan Media Kings’B No Gambar Keterangan
1. Media TSA (Tryptone Soya Agar)
2. Media Kings’B
Pembahasan
8
Media selektif (selective media) adalah media yang mampu menumbuhkan bakteri tertentu (bakteri target atau bakteri yang kita inginkan) dan menghambat bakteri non target. Sedangkan media diferensial (differential media) adalah media yang berfungsi untuk membedakan karakter tertentu dari bakteri yang dekat kekerabatannya (karakter tersebut berupa warna, bentuk koloni atau pun kemampuan untuk memfermentasikan suatu bahan atau komponen di dalam media tersebut). Perbedaan karakter yang terbentuk menjadi tahap yang penting untuk identifikasi selanjutnya. Cara kerja autoclave: a. Sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu banyaknya air dalam autoklaf. Jika air kurang dari batas yang ditentukan, maka dapat ditambah air sampai batas tersebut. Gunakan air hasil destilasi, untuk menghindari terbentuknya kerak dan karat. b. Masukkan peralatan dan bahan. Jika mensterilisasi botol beretutup ulir, m aka tutup harus dikendorkan. c.
Tutup autoklaf dengan rapat lalu kencangkan baut pengaman agar tidak ada uap yang keluar dari bibir autoklaf. Klep pengaman jangan dikencangkan ter lebih dahulu.
d. Nyalakan autoklaf, diatur timer dengan waktu minimal 15 menit pada su hu 121oC. e. Tunggu samapai air mendidih sehingga uapnya memenuhi kompartemen autoklaf dan terdesak keluar dari klep pengaman. Kemudian klep pengaman ditut
9
up (dikencangkan) dan tunggu sampai selesai. Penghitungan waktu 15’ dimulai sejak tekanan mencapai 2 atm. f. Jika alarm tanda selesai berbunyi, maka tunggu tekanan dalam komparte men turun hingga sama dengan tekanan udara di lingkungan (jarum pada preis ure
gauge
menunjuk
ke
angka
nol). Kemudian
klep-
klep pengaman dibuka dan keluarkan isi autoklaf dengan hati-hati. Autoclave sendiri adalah alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan media yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas bertekanan.karena prinsipnya mikroba akan lebih mudah berkoagulasi dalam kondisi basah. Tekanan yang digunakan pada umumnya 15 Psi atau sekitar 2 atm dan dengan suhu 121oC (250oF). Jadi tekanan yang bekerja ke seluruh permukaan benda adalah 15 pon tiap inchi (15 Psi = 15pounds per square inch). Medium yang akan disterilkan ditempatkan di dalam autoclave selama 15-20 menit, hal ini bergantung pada banyak sedikitnya barang yang perlu disterilkan. Medium yang akan disterilkan ditempatkan dalam beberapa botol yang agak kecil(digabung) daripada dikumpul dalam satu botol yang besar. Setelah pintu autoclave ditutup rapat, barulah kran pada pipa uap ditutup dan temperatur akan terus-menerus naik sampai 121oC. TSA merupakan media kultur universal, hampir semua jenis bakteri bisa tumbuh pada media ini. Trypticase Soy Agar digunakan untuk medium pertumbuhan dengan tujuan mengamati morfologi koloni, mengembangkan kultur murni, pertumbuhan untuktes biokimia. TSA juga biasa digunakan untuk penghitungan jumlah bakteri.
10
King’s B adalah media non-selektif dan digunakan untuk subkultur diduga isolat. Selain antibiotik seperti cephalexine akan membuat media (King’s B) cocok untuk deteksi beberapa pseudomonad seperti Pseudomonas syringae pv, syringae pv dan Pseudomonas savastonoi. Media King’s B digunakan untuk deteksi dan subkultur dari Pseudomonas fluorescent dari biji dan tanaman. Pathovars Pseudomonas syringae menghasilkan pigmen neon biru yang menjadi terlihat di bawah UV light. King’s B memberikan jumlah tertinggi unit pembentuk koloni, dan di beberapa lingkungan. Media ini digunakan untuk mendeteksi fluorescens bakteri di air, khusus untukPseudomonas fluorescens dalam air minum. Pergantian fosfat hidrogen di-kalium dengan fosfat kalium tri-3-hidrat mencegah penurunan pH setelahdi autoklaf dan penurunan yang dihasilkan dalam produksi fluorescein. King’s B atau raja agar B memungkinkan produksi fluoresceine (pyverdin), pigmen kuning-hijau yang berfluoresensi di bawah sinar ultraviolet dalam strain tertentu
pseudomonas.
Media yang digunakan
terutama
dalam analisis air
untuk deteksi dan diferensiasi pseudomonas aeruginusa, yang menghasilkan pigmen karakteristik sementara spesies lain dari Pseudomonas.Spesies-spesies pseudomonad fluorescens ditandai oleh kemampuannya dalam mengekskresi pigmen-pigmen hijau-kuning yang larut dan fluorescens di bawah sinar UV. Pigmen-pigmen ini terutama dihasilkan dalam media yang defisien dalam be si atau media khusus (King’s B). Beberapa spesies pseudomonad fluorescens juga menghasilkan pigmen-pigmen phenazine biru, hijau atau orange yang khas (terutama dalam media King’s A), (Pujiati, 2012).
11
KESIMPULAN
Kesimpulan yang dapat diperoleh dari praktikum yang telah dilaksanakan adalah sebagai berikut: 1. Dalam pembuatan media, suasana steril harus selalu terjaga untuk mencegah kontaminan menkontaminasi media agar yang dibuat. 2. Pada praktikum kali ini dapat disimpulkan
bahwa Trypticase Soy
Agar (TSA) merupakan media agar yang digunakan untuk kegiatan pengisolasian dan pembudidayaan berbagai macam mikroorganisme yang bersifat aerobik. Medium ini digunakan untuk berbagai tujuan yang mencakup pemeliharaan stok budidaya, isolasi berbagai macam spesies mikroorganisme, serta sebagai dasar untuk media termasuk darah. 3. Trypticase Soy Agar (TSA) merupakan media agar yang digunakan untuk kegiatan
pengisolasian
dan
pembudidayaan
berbagai
macam
mikroorganisme yang bersifat aerobik. Medium ini digunakan untuk berbagai tujuan yang mencakup pemeliharaan stok budidaya, isolasi berbagai macam spesies mikroorganisme, serta sebagai dasar untuk media termasuk darah 4. Media King’s B dapat digunakan sebagai media umum untuk non-selektif isolasi dan pigmen produk sispesies Pseudomonas.
12
DAFTAR PUSTAKA
Atlas, Ronald. 2005. Handbook of Media for Environmental Microbiology Second Edition.USA: Taylor & Francis Group. Gupte. Satish. 1990. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Binarupa Aksara.
Manangsang, Arya. 2012. Paduan Pembuatan Media Na dan Strerilisasi. Online. aryamanangsang2.wordpress.com/2012/12/02/paduan praktikum-pembuatan-media-nutrient-agar-dan-sterilisasi.html.
diakses
tanggal 31 Desember 2016). Mila, Ermila. 2005. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Erlangga: Jakarta.
Natsir, Djide dan Sartini, 2006, Mikrobiologi Farmasi Dasar, Universitas Hasanuddin, Makassar. Pujiati. 2012. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Dasar. Madiun: Ikip PGRI Madiun Press. Satish. 1990. Mikrobiologi Dasar. Terjemahan E. Suryawidjaja: The Short Textbook of Medical Mikrobiology. Bina Rupa Aksara: Jakarta. Schlegel Hans G, 1994. Mikrobiologi Umum. Penterjemah Tedjo Baskoro. Edisi keenam. Gajah Mada University Press. Yogyakarta.
