PEMISAHAN DAN IDENTIFIKASI ASAM AMINO DENGAN KROMATOGRAFI KERTAS ARTIKEL.doc

PEMISAHAN DAN IDENTIFIKASI ASAM AMINO DENGAN KROMATOGRAFI KERTAS

Pande Putu Indira Prima Dewi 1603051016 Program Studi Analisis Kimia, Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, !DIKS"A Jalan da#ana, Singara$a%&ali 'mail ( [email protected] ( [email protected]

ABSTRAK  Asam Asam amino amino memilik memilikii si)at si)at #ang #ang k*as k*as dan +er+eda +er+eda dengan dengan #ang #ang lain aki+at adan#a rantai saming asam amino- "al ini men#e+a+kan asam amino daa daatt dii diisa* sa*ka kan n dan dan diid diiden enti ti)ik )ikasi asi ke+e ke+erad radaan aann# n#aa meng menggu guna naka kan n meto metode de  emisa*an #aitu kromatogra)i kertas- Pemisa*an se.ara kromatogra)i rinsin#a adala* emisa*an .amuran karena er+edaan distri+usi komonen dalam dua )ase #aitu )ase gerak dan )ase diam- Dalam kromatogra)i kertas #ang meruakan )ase gerak adala* elarut #ang digunakan sedangkan )ase diamn#a adala* air, kertas kertas +er)un +er)ungsi gsi se+aga se+agaii a+sor+ a+sor+en en temat temat meleka melekatn# tn#aa )ase diamdiam- Jarak Jarak #ang #ang ditemu* ole* setia asam amino dari garis dasar relati) ter*ada $arak temu*  elarut/eluen dide)inisikan se+agai )- Setia komonen asam amino memiliki *arga ) tertentu- &esaran ) ini men#atakan dera$at retensi suatu komonen dalam dalam )ase )ase diam diam-P -Pra rakt ktik ikum um ini ini +ert +ertu$ u$ua uan n untu untuk k meng menget eta* a*ui ui er+ er+an andi ding ngan an koe)isien distri+usi )2 dari setia asam amino terutama glisin, leusin, alanin, dan trito)an melalui kromatogra)i kertas dengan teknik as.ending- Praktikum #ang dilaksa dilaksanak nakan an di la+ora la+orator torium ium D3 Analis Analisis is Kimia Kimia ndiks ndiks*a *a ada ada tangg tanggal al 1 Setem+er Setem+er 014 ini menggunaka menggunakan n  +ua* eluen #aitu )enol ( auades auades 0 m ( 4 m2 dan n%+utanol ( auades ( asam asetat glasial 100 m ( 100 m ( 7 m2"asil engu$ian ter*ada samel diketa*ui +a*wa masing%masing asam amino memiliki *arga ) #ang +er+eda- ntuk eluen ertama samel asam amino leusin memiliki nilai ) #ang aling +esar- Sedangkan untuk eluen kedualeusin $uga menun$ukkan nilai ) #ang aling +esarKata Kunci : kromatografi kerta! e"uen! #era$at reteni%  ABSTRACT   Amino acidshaveuniquecharacteristicsand are differentfr differentfromot omothersdue hersduetothe tothepr presenceo esenceoff amino amino acidsidecha acidsidechains. ins. Thiscausesth Thiscausesthee amino acidstobeseparatedandtheirpr acidstobeseparatedandtheirpresenceidentifiedusingtheseparationmethod, esenceidentifiedusingtheseparationmethod, namelypaperchromatography. The chromatographicseparationprincipleistheseparationofthemixturebecauseofdiffere nces in thedistributionofcomponents in twophases, namelythemobilephaseandthestationaryphase. In  paperchromatographywhichisthemobileph  paperchromatographywhichisthemobilephaseisthesolventusedwhilethestationaryp aseisthesolventusedwhilethestationaryp haseiswater, thepaperfunctions as anabsorben anabsorbentwher twherethest ethestation ationaryph aryphaseisat aseisattached tached.. The distancetrave distancetraveledbye ledbyeach ach amino acidfro acidfromtheb mthebaselin aselinerel erelativeto ativetothesolv thesolvent ent / eluentmilea eluentmileageisdef geisdefined ined as f.

 !achcomponentof amino acids has a certainfprice. Thisfmagnituderepresentsthedegreeofretentionof a component in thestationaryphase. Thispracticumaimstodeterminetheratioofthedistributioncoefficient "f# ofeach amino acid, especiallyglycine, leucine, alanine, andtryptophanthroughpaperchromatographywithascendingtechniques. The  practicumcarriedout in the $% laboratoryof&ndi'sha (hemical Analysison )eptember *+, *+- used * eluentsnamelyphenol aquades "* m - m# and n0 butanol aquades glacialaceticacid "+ m + m *1 m# . The testresultsonthesamplenotethateach amino acid has a differentfprice. 2or  thefirsteluentsamplethe amino acidleucine has thelargestfvalue. As  forthesecondeluentleucinealsoshowsthegreatestfvalue.  Keywords: Paper chromatography, eluent, degreeofretention.


PENDAH&'&AN

Pada umumn#a asam amino

dua

ulu*

asam

amino alami #ang la=im- Kedua

larut dalam air dan tidak larut dalam

 ulu* asam amino alami

 elarut organik non olar seerti eter,

la=im, memiliki rangka #ang terdiri

aseton, dan kloro)orm- Kelarutan

dari gugus asam kar+oksilat dan

asam amino ini +er+eda

dengan

gugus #ang terikat se.ara ko>alen

asam kar+oksilat dan amina- Asam

 ada atom usat kar+on al)a2- Dua

amino memun#ai titik le+ur #ang

gugus lainn#a ada

tinggi

iala* *idrogen dan gugus  #ang

+ila

di+andingkan

dengan

meruakan

menun$ukkan +a*wa asam amino

amino- Si)at kimia gugus rantai

.enderung memun#ai struktur #ang

samingla*

 +ermuatan dan memun#ai olaritas

 er+edaan

tinggi dan +ukan sekedar sen#awa

Fessenden dan Fessenden, 1;;?2-

gugus 89::"

dan gugus 8!" - "al ini tamak ula  ada

si)at

asam

amino

elektrolit Poed$iadi, 1;;72-

se+agai

saming

al)a

asam kar+oksilat dan amina- "al ini

#ang memun#ai

rantai

kar+on

#ang

#ang si)at

asam

men#e+a+kan asam

amino

Asam amino en#usun rotein daat  +er+agai

digolongkan

+erdasarkan

kategori-

&erdasarkan

komosisi kimia gugus , asam amino daat digolongkan men$adi

asam amino ali)atik glisin, alanin,

)enilalanin, treonin, trito)an dan

>alin, leusin, isoleusin2, asam amino

>alin2 
*idroksil serin, treonin2, asam amino sul)ur

sistein,

metionin2,

asam

amino aromatik )enilalanin, tirosin, trito)an2, asam amino asam asam asartat, asaragin, asam glutamat, glutamin2,

asam

amino

+asa

arginin, *istidin, lisin2 dan asam amino imino rolin2- Sedangkan  em+agian asam amino +erdasarkan  olaritas molekuln#a, #aitu asam amino olar dengan gugus  olar  9%:, 9%!, :%"2 seerti glisin, sistein, asam glutamat, serin, tirosin, treonin, asam

asartat, glutamin,

*istidin, arginin, asaragin lisin- Sedangkan

golongan

dan asam

amino nonolar dengan gugus   nonolar 9%9, 9%"2 seerti >alin, alanin,

leusin,

metionin,

isoleusin, )enilalanin Asam%asam

amino

digolongkan

rolin,

dan

tirosin-

$uga

daat

sintesis

manusia dan

*ewan

tu+u*

#aitu

asam

amino non%esensial alanin, rolin, serin,

sistein,

tirosin,

asaragin, glutamin, asam asartat dan asam glutamat2 dan amino

esensial arginin,

isoleusin,

leusin,

asam *istidin,

lisin,metionin,

amino

meruakan

satuan monomer en#usun rotein"idrolisis lengka ter*ada suatu  rotein akan meng*asilkan 0 $enis asam amino +er+eda #ang men#usun  rotein

ed*ana,

0102-

Semua

 $enis asam amino terse+ut memiliki  er+edaan si)at karena er+edaan rantai saming dari asam aminoPer+edaan si)at asam amino terse+ut misaln#a er+edaan interaksi asam amino

ter*ada

tertentu-

suatu

Per+edaan

elarut

si)at

#ang

dimiliki ole* asam amino meruakan si)at #ang k*as dan +er+eda dengan asam amino #ang lain- "al ini men#e+a+kan

asam amino

diisa*kan

dan

daat

diidenti)ikasi

ke+eradaann#a menggunakan metode  emisa*an

se.ara

kromatogra)i

kertas-

+erdasarkan

kemamuan

glisin,

Asam

Pemisa*an kromatogra)i  emisa*an  er+edaan

se.ara

rinsin#a .amuran distri+usi

adala* karena

komonen

dalam dua )ase #aitu )ase gerak dan )ase diam @os*ito Ta'euchi, 00;2Dalam

kromatogra)i

kertas #ang

meruakan )ase gerak adala* elarut #ang

digunakan

sedangkan

)ase

diamn#a adala* air, kertas +er)ungsi

kromatogra)i- Samel kemudian akan

se+agai a+sor+en temat melekatn#a

 +ergerak dalam eluen )ase gerak2

)ase

#ang ditam+a*kan dan akan ter$adi

diam-

Pemisa*an

.amuran

dengan kromatogra)i kertas ter$adi

 emisa*an-

karena

ke.enderungan

 emisa*an .amuran asam amino

komonen-

misaln#a eluen )enol #ang $enu*-

terdaat

 er+edaan

si)at

Ke.enderungan terse+ut adala*(

kertas-

untuk 

melarut dalam .airan  +- Ke.enderungan molekul%molekul

ada adatan

*alus adsorsi2 .- Ke.enderungan

relati)

ter*ada

$arak

temu*

)- Setia komonen asam amino memiliki *arga ) tertentu- &esaran ) ini men#atakan dera$at retensi

:le* karena itu, *arga ) $uga

untuk 

 +ereaksi se.ara kimia ertukaran

setia asam amino dari garis dasar 

suatu komonen dalam )ase diam-

molekul%molekul komonen

Jarak #ang ditemu* ole*

 elarut/eluen dide)inisikan se+agai

untuk 

melekat  ermukaan

dalam

air #ang tersera ada ori%ori

molekul%molekul

komonen

gerak

Se+agai )ase diam, ada umumn#a

a- Ke.enderungan

komonen

Fase

dise+ut dengan )aktor re)erensi atau )aktor re)ensi
ion2


  3ara'  yang  ditempuh sampel  dari  garis 

  3ara'  yang  ditempuh  pelarut  dari garis

 !ilai ) dari suatu sen#awa  ada

sistem

kromatogra)i

kertas

 +ergantung ada +an#akn#a >aria+el, diantaran#a

sistem

elarut,

temeratur, laman#a elusi, dan $enis kertas- :le* karena itu, nilai ) suatu sen#awa

#ang

di$adikan

se+agai

tela*

diketa*ui

standar

untuk 

menentukan nilai ) dari sen#awa lainn#a, +egitu ula aa+ila sen#awa

#ang akan diisa*kan adala* asam

=ona- !ilai ) *arus sama +aik ada

amino-

des.ending mauun as.ending- !ilai "arga%*arga

sen#awa%sen#awa di+andingkan

)

untuk 

) akan menun$ukkan identitas suatu

daat

=at #ang di.ari, .onto*n#a asam

*arga%*arga

amino dan intensitas =ona itu daat

murni

dengan

standar- Sen#awa standar +iasan#a

digunakan

memiliki si)at%si)at kimia #ang miri

konsentrasi dengan mem+andingkan

dengan sen#awa #ang diisa*kan

dengan noda%noda standar-

 ada kromatogram- Adaun )aktor%

se+agai

Proses

ukuran

engeluaran

asam

)aktor #ang memengaru*i *arga ) 

mineral dari kertas desalting- arutan

sen#awa se+agai +erikut ( Da# dan

ditematkan

nderwood,002-

menggunakan mikroiet ada $arak 

1- Struktur sen#awa

kimia #ang

dari sedang

diisa*kan - Si)at dari en#eraan dan dera$at akti)itasn#a 3-
dera$at

ua dalam mana +e$ana #ang

digunakan 6-
itu

dengan

83 .m dari sala* satu u$ung kertas dalam

+entuk

*ori=ontal-

.oretan Setela*

garis kertas

dikeringkan, ia diletakan didalam ruangan

#ang

suda*

di$enu*kan

sesuai-


tiga

te*nik 

 elaksanaan analisis- Pada te*nik  as.ending elarut +ergerak keatas dengan

ga#a

kailer-

Sedangkan

ketiga dikenal dengan .ara radial atau kromatogra)i kertas sirkuler-

#ang

digunakan 4- Su*u ;- Kesetim+angan Pengukuran

kertas

dengan air atau dengan elarut #ang

kemurniann#a2 )ase gerak  5- Dera$at ke$enu*an dari

 engem+angan

ada

Kromatogra)i

kertas

adala*

sala* satu .ara analisa #ang amu* dan dilakukan

sering

 enelitian

digunakan

komonen%komonen

dengan mengukur $arak dari titik 

suatu

 em+erangkatan

mem+andingkan

usat

=ona

dalam

.amuran-

Dengan

eminda*an

=at

.amuran awal2 ke garis dean

diselidiki dengan eminda*an =at%=at

 engem+ang dan usat raatan tia

standar #ang diketa*ui, seringkali

kita daat mengeta*ui =at #ang kita

Asam amino daat ditentukan se.ara

selidiki- Dalam ekserimen ini, kita

kuantitati)

*endak menganalisa se.ara kualitati) 

menggunakan intensitas warna #ang

suatu larutan #ang +erisi +erma.am%

ter+entuk

se+anding

ma.am asam amino-

konsentrasi

asam

Pada  en#emrotan

er.o+aan dengan

ini larutan

nin*idrin dilakukan untuk ewarnaan noda%noda asam amino ada kertas kromatogra)i #ang tela* kering- $i nin*idrin ter$adi aa+ila nin*idrin dianaskan +ersama asam amino akan ter+entuk komleks +erwarna-

dengan

amino

$alan

dengan #ang

terse+ut- Pada reaksi ini dileaskan 9:  dan !" 7  se*ingga asam amino daat ditentukan se.ara kuantitati)  dengan mengukur $umla* 9: dan  !"3

#ang

amino

dileaskan-Asam%asam

#ang

+ereaksi

dengan

nin*idrin mem+entuk suatu roduk  #ang

dise+ut ungu u*mann

!#oman, 0102Adaun reaksi umum se.ara keseluru*ann#a, adala* se+agai +erikut (

C

nin*idrin

anion ungu C 9": C 9: C 3": C "C

Asam amino larut dalam air 

Semua asam amino, ke.uali

dan elarut olar lainn#a, tetai tidak 

glisin daat diangga se+agai deri>at

larut dalam elarut organik non

alanin-

 olar, seerti dietil eter atau +en=ena-

 ertama kalin#a ole* Be#l dari *asil

Alanin

dierole*

untuk 

*idrolisis )i+roin, #aitu rotein #ang terdaat ada suteraStruktur alanin (

lisin adala* asam amino #ang  aling seder*ana dan terdaat ada sklerorotein-

Pada

ta*un

&ra.onnot menemukan glisin dari *asil *idrolisis gelatin-

140

Struktur glisin (

Se+an#ak 100 m larutan n%

METODE PER(OBAAN

 +utanol ditam+a*kan dengan 100 m

 Alat dan Bahan :

Alat%alat

#ang

digunakan

auades dan 7 m asam asetat

 ada er.o+aan ini adala* 1 +ua*

glasial-

 iet mikro, 1 +ua* .*am+er, 1 +ua*

ditematkan dalam .orong isa* dan

gelas kimia 50 m, 5 +ua* gelas

kemudian

kimia 100 m,  +ua* +atang

terli*at

 engaduk, 1 +ua* satula,  +ua*

kemudian kedua

 iet tetes, 1 +ua* enggaris, 1 +ua*

diisa*kan-

gunting, 1 +ua* inset, 1 +ua* *ot air 

Pen*ia+an Kerta Kromatografi

gun

emanas2,

Sedangkan

dan

diko.ok-

kedua

terse+ut

Jika

laisan

suda*

ter+entuk 

laisan terse+ut

Kertas kromatogra)i disiakan

#ang

digunakan ada er.o+aan ini adala* larutan elusi n%+utanol, asam .uka glasial,

auades,

larutan

larutan

leusin,

larutan

trito)an,

larutan

alanin,

larutan

nin*idrin,

glisin,

alko*ol, "9l ekat, Fenol, dan kertas

 Prosedur Percoaan

larutan

ensil-

+a*an%+a*an

saring-

Ketiga

dengan ukuran 4-5 .m E 10 .m disesuaikan dengan .*am+er #ang digunakan- Kemudian ada kertas saring di+erikan $arak sekitar 1-5 .m dari

tei +awa* kertas ditandai

dengan ensilProe

Kromatografi

Menggunakan

E"uen

Dengan Feno"

:

A,ua#e -./ m' : 0 m'1 Pem)uatan 'arutan E"ui

Kertas

kromatogra)i

dengan

ukuran?-5 .m E 10 .m ada u$ung

atas kertas saring diliat ada +atang

antara samel satu dengan #ang

 engaduk dan direkatkan dengan

lainn#a adala* 1-5 .m- Kemudian

menggunakan

kertas

saring #ang

kertas saring #ang suda* direkatkan

totolan

samel

 ada +atang engaduk di.o+a untuk 

dikeringkan dengan menggunkan *ot

dimasukan

air gun- &esarn#a noda *endakn#a

se*ingga

seloti-

ke

Kemudian

dalam

u$ung

.*am+er 

+awa*n#a

suda* asam

+erisi amino

teat

tidak mele+i*i 0-7 .m- Kertas saring

men#entu* dasar .*am+er dan tidak 

di$aga teta +ersi* dan sedaatn#a

meliat- Kemudian kertas

saring

tidak tersentu* ole* $ari- Kemudian

dikeluarkan dari .*am+er dan di+uat

kertas saring dimasukkan ke dalam

garis mendatar sekitar 3 .m

dari

.*am+er #ang tela* +erisi eluen-

u$ungatas dan 1-5 .m dari u$ung

Kertas digantungkan dalam ruang

 +awa* dengan menggunakan en.il

kromatogra)i

dan enggaris- Kemudian elarut

 +e+eraa

$am

eluen2 Fenol ( Auades  0 m ( 4

 +er$alan-

Setela*

m 2 dimasukkan ke dalam .*am+er-

 +er$alan  10 .m dari +atas samel,

Kemudian kertas saring #ang suda*

elusi di*entikan dan kertas saring

disiakan

dalam

dikeluarkan dari .*am+er- Kemudian

men$enu*kan

kertas saring dikeringkan dengan

dimasukkan

.*am+er

untuk

ke

keadaan ruang kromatogra)i-

 $enu*, #ang ditandai dengan naikn#a eluen mem+asa*i kertas saring, maka saring

dikeluarkan

dari

.*am+er- Kemudian kertas saring dengan ukuran ?-5 .m E 10 .m tadi ditotol

dengan

larutan

samel

trito)an, leusin, alanin, dan glisin2, ditotolkan

dengan

agar

selama

elusi

daat

larutan

elusi

menggunakan hot air gunemanas2-

Setela* .*am+er dalam keadaan

kertas

.*am+er2

menggunakan

 ietmikro dengan $arak  .m dari u$ung kertas saring- Jarak totolan

Setela* kertas dikeringkan kemudian disemrot dengan larutan nin*idrin #ang

selan$utn#a

dikeringkan

kem+ali dengan menggunakan hot  air gunemanas2 samai noda%noda asam amino #ang +erwarna tamak  ketika dikeringkan- Kemudian noda% noda #ang tamak terse+ut ditandai dengan

menggunakan ensil dan

ditentukan nilai ) dari masing% masing noda dengan menggunakan  ersamaan se+agai +erikut(

 !ilai ) G

Dengan

men$enu*kan

Menggunakan E"uen (am+uran

kromatogra)i-

Proe

Kromatografi

N2Butano"

: A,ua#e

: Aam

Aetat G"aia" - 3// m' : 3// m' : .4 m'1

keadaan

ruang

Setela* .*am+er dalam keadaan  $enu*, #ang ditandai dengan naikn#a eluen mem+asa*i kertas saring, maka

Kertas

kromatogra)i

dengan

kertas

saring

dikeluarkan

dari

ukuran4-5 .m E 10 .m kemudian

.*am+er- Kemudian kertas saring

 ada u$ung atas kertas saring diliat

dengan ukuran ?-5 .m E 10 .m tadi

 ada

ditotol

+atang

direkatkan

engaduk

dengan

dan

menggunakan

dengan

larutan

samel

trito)an, leusin, alanin, dan glisin2,

seloti- Kemudian kertas saring #ang

ditotolkan

suda*

+atang

 ietmikro dengan $arak  .m dari

 engaduk di.o+a untuk dimasukan

u$ung kertas saring- Jarak totolan

ke dalam .*am+er se*ingga u$ung

antara samel satu dengan #ang

 +awa*n#a teat men#entu* dasar 

lainn#a adala* 1-5 .m- Kemudian

.*am+er

kertas

saring #ang

Kemudian kertas saring dikeluarkan

totolan

samel

dari

garis

dikeringkan dengan menggunkan *ot

dari u$ung

air gun- &esarn#a noda *endakn#a

atas dan 1-5 .m dari u$ung +awa*

tidak mele+i*i 0-7 .m- Kertas saring

dengan menggunakan en.il dan

di$aga teta +ersi* dan sedaatn#a

 enggaris- Kemudian elarut eluen2

tidak tersentu* ole* $ari- Kemudian

 !%&utanol(Auades(Asam

.uka

kertas saring dimasukkan ke dalam

glasial dengan er+andingan 100

.*am+er #ang tela* +erisi eluen-

m ( 100 m ( 7 m dimasukkan ke

Kertas digantungkan dalam ruang

dalam .*am+er- Kemudian kertas

kromatogra)i

saring

disiakan

 +e+eraa

$am

dimasukkan ke dalam .*am+er untuk 

 +er$alan-

Setela*

direkatkan

dan

.*am+er

ada

tidak

dan

di+uat

mendatar sekitar 3 .m

#ang

meliat-

suda*

dengan

menggunakan

suda* asam

.*am+er2 agar

+erisi amino

selama

elusi

daat

larutan

elusi

 +er$alan  10 .m dari +atas samel,

elusi di*entikan dan kertas saring

air gunemanas2 samai noda%noda

dikeluarkan dari .*am+er- Kemudian

asam amino #ang +erwarna tamak 

kertas saring dikeringkan dengan

ketika dikeringkan- Kemudian noda%

menggunakan hot air gunemanas2-

noda #ang tamak terse+ut ditandai

Setela* kertas dikeringkan kemudian

dengan

disemrot dengan larutan nin*idrin

ditentukan nilai ) dari masing%

#ang

masing noda dengan menggunakan

selan$utn#a

dikeringkan

kem+ali dengan menggunakan hot 

menggunakan ensil dan

 ersamaan se+agai +erikut(

 !ilai ) G

HASI' DAN PEMABAHASAN  !asil Ta)e" 3%Proses Kromatogra)i dengan Menggunakan 'luen Fenol dan Auades 0

m ( 4 m2  !o137-

arutan Samel
Jarak
5-5 ?-4 ?-? ?-5

!ilai )

Barna

0-66 0-;7 0-;3 0-;0

 !oda Hiolet Hiolet Hiolet Hiolet

Ta)e" .%Proses Kromatograf Dengan Menggunakan Eluen Campuran N-Butanol : Aquades : Asam Asetat Glasial ( !! m" : !! m" : #$ m"%

 !o137-

arutan Samel
Jarak
6-4 ?-? 3-? -4

!ilai )

Barna

0-40 0-;1 0-73 0-33

 !oda Hiolet Hiolet Hiolet Hiolet

air +ersi)at olar, $adi asam asetat

 Pemahasan

Kromatogra)i

kertas

adala*

sala* satu .ara analisa #ang amu* dan

sering

 enelitian suatu

digunakan

dalam

komonen%komonen .amuran-

mem+andingkan

Dengan

eminda*an

=at

diselidiki dengan eminda*an =at%=at standar #ang diketa*ui, seringkali kita daat mengeta*ui =at #ang kita selidiki- Dalam ekserimen ini, kita *endak menganalisa se.ara kualitati)  suatu larutan #ang +erisi +erma.am%

dan air

akan saling

+er.amur,

sedangkan n%+utanol dan dua elarut lain

akan

tidak

saling

.amur-

Setela* mendiamkan +e+eraa saat larutan terisa* men$adi dua dengan laisan atas keru* dan laisan +awa*  +ening- 'luen kemudian dimasukkan ke

dalam

.*am+er

dan

ditutu

samai $enu*, tu$uann#a #aitu untuk  men$enu*kan .*am+er dengan ua  elarut

se*ingga

memer.eat

 emisa*anAsam

ma.am asam amino-

asetat

glasial

ada

 em+uatan eluen ini +ertu$uan untuk  Kromatogra)i #ang dilakukan

mendistri+usikan kedua elarut air 

se+an#ak  kali #aitu menggunakan

dan n%+utanol2 #ang tidak saling

elusi )enol dengan auades 0 m (

 +er.amur, dimanaauades dan n%

4 m2 dan $uga .amuran dari n%

 +utanol

sama%sama

daat

 +utanol ( auades ( asam asetat

terdistri+usi

dalam

asetat

glasial 100 m ( 100 m ( 7 m2-

se*ingga ada er+andingan >olume

Pada .amuran n%+utanol, akuades,

tertentu daat dierole* .amuran

dan

ter$adi

#ang mengandung n%+utanol, asam

auades

asetat, dan air dalam satu )ase ada

meruakan sen#awa olar sedangkan

laisan atas dari .amuran ketiga

n%+utanol

 elarut terse+ut #ang di*asilkan2-

asam

 er+edaan

asetat )ase

glasial karena

meruakan

nonolar-Ketika

sen#awa larutan

Pemili*an

asam

eluen

sangat

di.amurkan, ter+entuk dua laisan-

 enting

Se*ingga

digunakan memiliki konsentrasi #ang

dierlukan

dalam

en.amuraan#a

engo.okan

karena

$ika

eluen

#ang

dan

tidak sesuai dengan samel #ang

diisa*kan dalam .orong isa*- "al

akan diisa*kan, maka kromatogra)i

ini ter$adi karena n%+utanol +ersi)at

tidak daat +er$alan-

non olar sedangkan asam asetat dan

Jika eluen

terlalu

olar

akan

 +ergerak ada )ase diamn#a- Pada

men#e+a+kan seluru* noda #ang

saat menggaris +atas +awa* dan

ditotolkan ada kertas naik samai

 +atas atas *arus menggunakan ensi,

 +atas

karena ensil ter+uat dari gra)it #ang

atas

maka

tana

mengalami

 emisa*an- Jika eluen kurang olar,

tidak

maka noda #ang ditotolkan tidak 

Sedangkan $ika menggunakan ulen

akan +ergerak sama sekali-

maka tinta akan larut #ang akan

Pada er.o+aan ini, kertas saring #ang akan ditotolkan larutan samel

asam amino 

akan

larut

dalam

eluen-

mengganggu enamakan nodaSamel asam amino #ang akan

trito)an,

digunakan dalam er.o+aan adala*

leusin, alanin, dan glisin2 di+erikan

trito)an, leusin, alanin, dan glisin-

 +atas atas dan +atas +awa* dengan

Setela* itu, masing%masing samel

ukuran 3 .m dan 1-5 .m- Pem+erian

asam amino ditotolkan ada kertas

 +atas terse+ut +ertu$uan untuk ( ada

saring dengan menggunakan iet

 +atas

mikro- Setela* samel ditotolkan

+awa*

didaera*

untuk

mana

mem+atasi

samel

akan

 ada kertas saring, terli*at larutan

temat

samel asam amino trito)an, leusin,

tidak 

alanin, dan glisin2 tersera ole*

ter.elu ada eluen )ase gerak2- "al

kertas saring, se*ingga tidak terli*at

ini dimaksudkan agar samel #ang

adan#a larutan- Penotolan samel

tela* ditotolkan ada garis +atas

*arus

#ang tela* di+uat ada kertas saring

ketika dilakukan elusi tidak akan

tidak larut dalam )ase gerak, $ika *al

dierole* ele+aran warna noda dari

ini ter$adi totolan samel ter.elu

samel, #ang +erarti emisa*an #ang

 ada kertas saring2, maka roses

dilakukan

elusi emisa*an2 tidak akan ter$adi

 !amun, $ika dierole* ele+aran

karena eluen tidak mem+awa samel

warna noda, +erarti emisa*an #ang

#ang akan diisa*kan- Sedangkan

dilakukan kurang +aik- Kemudian

tu$uan em+erian +atas atas +er$arak 

kertas saring #ang tela* ditotolkan

3

samel

ditotolkandimana

ada

 enotolan

terse+ut

samel

.m dimaksudkan

agar roses

seke.il

mungkin

daat

se*ingga

dikatakan

dikeringkan

dengan

 em+awaan samel atau gerak eluen

menggunakan

daat

Pengeringan kertas saring setela*

dideteksi

se+eraa

$au*

hot

+aik-

air

gun.

 enotolan

samel

dengan

#angaling atas meruakan samel

menggunakan hot air gun meruakan

#ang aling larut dalam elarut

sala*

#angartin#a +ersi)at aling non olar 

satu

roses

mengeluarkan

asam

untuk  

amino

dari

di+andingkan

samel

asam

kertas- kemudian dimasukkan ke

amino lainn#a- Molekul%molekul se

dalam

.*am+er

di$enu*kan

ole*

#ang

tela*

erti ini akan +ergerak sean$ang kerta

ua

eluen-

sdiangkut ole* elarut- Mereka akan

Kemudian .*am+er ditutu raat agar

ter$adi

emisa*an

#ang

semurna- Pemisa*an asam amino dengan

.ara

kromatogra)i

dise+a+kan koe)isien  elarut

adan#a artisi

er+edaan

antara

organik-

kertas

air

Fase

air

dan akan

terta*an dengan kuat di ori%ori kertas karena adan#a interaksi #ang kuat

antara

air

dengan

gugus

*idroksil dari selulosa, dimana gugus ini

+ersi)at *idro)ilik-

koe)isien

artisi

 er+edaan

la$u

Per+edaan

menun$ukkan ram+atan

ada

 ermukaan kertas dari air dan elarut organik

#ang

meram+at

se.ara

 erla*an-

Pada saat kertas saring ditotolkan larutan samel asam amino, maka akan

.amuran

memilikisedikit

interaksi

non%olar  akan

ter$adi

emisa*an,

dimana

 elarut organik meram+at ke atas melalui kailer kertas mengangkut .amuran asam amino #ang ada ditotolkan ada kertas saring- Asam amino #ang aling larut di dalam  elarut organik, akan diangkut aling .eat dan asam amino #ang aling kurang larut akan tertinggal aling  +awa*- Jadi, karena elarut #ang digunakan adala* n%+utanol ( asam asetat ( air dan )enol ( air +ersi)at nonolar, maka dari keemat samel asam

Molekul%molekul dalam

memiliki nilai ) #ang relati)tinggi-

amino

#ang

digunakan

trito)an, leusin, alanin, dan glisin2, daat

dili*at

si)at

keolarann#a-

dengan

Samel #ang aling atas meruakan

molekul%molekul air dan molekul%

samel #ang aling larut dalam

molekul#ang melekat ada selulosa,

 elarut #ang artin#a +ersi)at aling

dan

non olar di+andingkan samel asam

karena akan meng*a+isakan

 +an#akwaktun#a untuk larut dalam

amino

lainn#a-

 elarut #ang +ergerak- Maka samel

men.aai

+atas

Setela* #ang

samel tela*

ditentukan,samel dikeluarkan dari

noda%noda ada kertas saring daat

eluen

terli*at #akni noda #ang +erwarna

dan

mengeringkan

menggunakan hot air gun. Kemudian

ungu

men#emrotkan

larutan nin*idrin ada kertas saring tadi- Asam amino meruakan $enis =at tidak +erwarna, se*ingga untuk  mengeta*ui letak noda dierlukan  ereaksi lokasi- Dalam er.o+aan ini digunakan larutan nin*idrin #ang disemrotkan

ada

kertas

saringsetela* dikeringkan, se*ingga

ketika

kertas

dikeringkan

lagi

menggunakan

ini

dengan

hot

 gun-
kromatogra)i

noda

dise+a+kan

air   +erwarna karena

ter$adin#a reaksi antara *idrat dari triketon siklik nin*idrin2 dengan asam

amino-Adaun

ersamaan

reaksi #ang ter$adi untuk tia samel adala* se+agai +erikut (

Alanin

&

nin*idrin

Anion ungu

C 9"39": C 9: C 3": C "C

eaksi alanin dengan nin*idrin se.ara tererin.i iala* (

lisin

&

nin*idrin

anion ungu C "9": C 9:  C 3": C "C

eaksi glisin dengan nin*idrin se.ara tererin.i iala* (

eusin


 !oda%noda ini kemudian diukur  dengan

mem+andingkan

$arak 

dengan $arak ergerakan elarut, disim+olkan dengan )-

komonen #ang diisa*kan analit2

 !ilai ) G

Dari

*asil

 er*itungan

nilai

diketa*ui

)   +a*wa

masing%masing asam amino memiliki *arga ) #ang +er+eda- ntuk eluen  ertama #aitu trito)an ) G 0-66  leusin ) G 0-;7 alanin ) G 0-;3 dan glisin) G 0-;0- Sedangkan untuk eluen kedua, iala* *arga )  trito)an G 0-40 ) leusin G 0-;1)  alanin G 0-73  dan )glisinG 0-33Per+edaan

ini

diengaru*i

ole*

keterikatan analit ter*ada eluenKarena

eluen

#ang

digunakan

 +ersi)at non olar maka sen#awa #ang le+i* non olar akan terikat le+i* kuat ada eluen se*ingga *arga ) akan semakin +esar- &erdasarkan literatur, *arga ) untuk alanin, leusin, glisin, dan trito)an adala* 0-34 0-6? 0-6 0-66- "arga ) ini  +er+eda

dengan *asil

er.o+aan,

kemungkinan

terdaat

karena  er+edaan

komosisi

eluen

dan

 +esarn#a ukuran kertas kromatogar)i #ang digunakanntuk eluen ertama, *arga )  samel asam amino dari #ang aling  +esar adala* leusin, trito)an, alanin dan glisin- Artin#a glisin le+i* olar  di+andingkan

denganleusin,

trito)an, dan alanin, dimana leusin  +ersi)at non olar- "al ini sesuai dengan literatur #aitu ada eluen  ertama ini digunakan elarut )enol #ang +ersi)at non olar, se*ingga sen#awa #ang le+i* larut urutann#a adala* leusin terle+i* da*ulu lalu trito)an dan alanin karena dili*at dari strukturn#a leusin +ersi)at le+i* non olar di+andingkan kedua asam amino lainn#a, dan trito)an +ersi)at le+i* non olar di+andingkan dengan asam amino alanin dan glisin atau daat dikatakan +a*wa alanin dan glisin meruakan asam amino #ang  aling olar di+andingkan kedua samel asam amino #ang digunakan-


kromatogra)i

ini daat ditun$ukkan ole* *arga ) 

sedangkan n%+utanol +ersi)at non

dan

 olar #ang akan melarutkan asam

dari

literatur-

Pada

eluen

se+agai

)ase

keduaauades le+i* tertarik ada

amino

dan

daat

kertas

 ergerakann#a

dengan

kromatogra)i, kertas

#ang

diam,

diketa*ui *arga

) 

 +ersi)at *idro)ilik, se*ingga asam

diatas, dengan +egitu daat diketa*ui

amino #ang +ersi)at non olar le+i*

si)at keolaran dari masing%masing

larut +ersama dengan elarut !%

asam amino terse+ut-

&utanol #ang +ersi)at non olar $uga, *al ini daat dili*at dari *arga )  alanin #ang le+i* +esar di+andingkan

KESIMP&'AN

dengan glisin dan trito)an-

&erdasarkan *asil er.o+aan

Sedangkan untuk eluen kedua,

#ang tela* di+a*as, maka daat

samel

disimulkan +a*wa nilai ) ada

menun$ukkan

eluen ertama menun$ukkan +a*wa

ke.enderungan semakin +esar dari

masing%masing samel asam amino

trito)an, leusin, dan alanin namun

menun$ukkan nilai ) #ang +er+eda-

nilai ) turun ada glisin- Artin#a

 !ilai ) samel asam amino ada

alanin dan leusin le+i* larut dalam

eluen ertama #aitu trito)an 0-662,

eluen kedua, #aitu n%+utanol #ang

leusin 0-;72, alanin 0-;32, dan

 +ersi)at non olar se*ingga daat

glisin 0-;02- Sedangkan ada eluen

dikatakan +a*wa alanin dan leusin

kedua $uga menun$ukkan nilai ) 

 +ersi)at le+i* non olar di+andingkan

#ang +er+eda%+eda ada masing%

dengan kedua samel lainn#a, tetai

masing samel asam amino #aitu

karena *arga ) leusin le+i* +esar 

trito)an 0-402, leusin 0-;12, alanin

di+andingkan dengan alanin, maka

0-732,

daat

si)at

&erdasarkan literatur, *arga ) untuk 

keolaran leusin le+i* renda* dari

alanin, leusin, glisin, dan trito)an

 ada alanin- Dalam *al ini asam

adala* 0-34 0-6? 0-6 0-66- "arga

asetat dan air +ersi)at olar se*ingga

)

daat

 er.o+aan,

*arga asam

)

masing%masing amino

din#atakan

larut

+a*wa

+ersama%sama

dan

 +erkumul dalam ori%ori kertas

dan

ini

glisin

+er+eda karena

0-332-

dengan

-

*asil

kemungkinan

terdaat er+edaan komosisi eluen

dan

+esarn#a

ukuran

kertas

kromatogar)i #ang digunakan-

AnalisisKimia Kuantitati) 'disi Keen am- Jakarta ( 'rlangga Fessenden dan

Fessenden-

1;;7-

 4imia 5rgani' 6ilid * !disi 4etiga-

&(APAN TERIMAKASIH

'rlangga( .aan terimakasi* enulis samaikan keada

Dr- I !#oman

 Jakarta Poed$iadi, A-, 1;;7, $asar0dasar


 7io'imia, I%Press, Jakartaed*ana, I Ba#an- 010- 8enuntun

a raktikum +erlangsung *ingga en

 8ra'ti'um 7io'imia-

ulis mamu men#elesaik%an

Singara$a( ni>ersitas

artikel

ini, Made Bira*adi Kusuma selaku

Pendidikan anes*a

asisten dosen, dan !i Putu ilik 

a+oratorium D3 Analis Kimia atas


 +antuan dalam melengkai segala


Pratami,

S-Si selaku

keerluan

+a*an

la+oran di

dan

alat

di

@os*ito

-

00?-

 4romatografi 4ertas- Diakses

la+oratorium #ang +erkaitan dengan

dari

 raktikum se*ingga er.o+aan ini

tr#-org/kromatogra)ikertas

daat dilaksanakan dengan lan.ar-

 ada tanggal 6 Setem+er 

DAFTAR P&STAKA

014

*tt(//www-.*em%is%


,Jim-

00?-  4romatografi

 4ertas-

Diakses

dari

*tt(//www-.*em%is%

 ada tanggal 6 Setem+er  014 A-,

Junior

nderwood-

dan

Singara$a(

7io'imia. ni>ersitas

Pendidikan anes*a-

tr#-org/kromatogra)ikertas

Da#,

 8rati'um

A-006-