Partes del microscopio óptico y sus funciones Ocular:: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y amplía la imagen formada 1 * Ocular en los objetivos. Objetivo:: lente situada cerca del revolver. Amplía la imagen, es un elemento vital que 2 * Objetivo permite permite ver a través de los los oculares oculares 3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
Diafragma:: regula la cantidad de luz que llega al condensador. 4 * Diafragma Foco:: dirige los rayos luminosos hacia el condensador. 5 * Foco 6 * Tubo: es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera. 7 * Revólver: Es un sistema que agarra los objetivos, y que rota para utilizar un objetivo u otro 8 * Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura. 9 * Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparació preparación, n, que permite permite el paso paso de los rayos rayos proced procedentes entes de de la fuente fuente de de iluminació iluminaciónn situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparació preparaciónn de delante delante hacia atrás o de izquierd izquierdaa a derecha derecha y viceversa viceversa.. 10 * Base: Es la parte inferior del microscopio que permite el sostén del mismo. Parte mecánica: -
Sistema de soporte o estativo:
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Pie
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Brazo
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Tubo
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Platina •
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Microscopios Todos los fabricantes de Microscopios www.medicalexpo.esEnlaces www.medicalexpo.es Enlaces patrocinados Revolver Sistema de ajuste:
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Tornillo macrométrico
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Tornillo micrométrico
Parte óptica: -
Fuente de iluminación
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Condensador y diafragma
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Lentes: oculares (10x y 12x) y objetivos (4x, 10x, 40x y 100x).
* PIE: Sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al aparato. En los microscopios antiguos tenía forma de herradura o de trípode pero en la actualidad suele ser una plataforma rectangular. En él se integra la fuente luminosa. * BRAZO: Es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie con con el tubo. tubo. * TUBO: Es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera. Tiene el revolver con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior. * PLATINA: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparació preparaciónn de delante delante hacia atrás o de izquierd izquierdaa a derecha derecha y viceversa viceversa.. En la parte posterior posterior de uno de de los laterales laterales se encuentra encuentra un nonius nonius que permite permite fijar las las coordena coordenadas das de cualquier campo óptico; de esta forma se puede acudir a el cuando interesa. * REVOLVER : Es un sistema que coge los objetivos, y que rueda para utilizar un objetivo u otro. * TORNILLOS MACRO Y MICROMÉTRICO: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia arriba y hacia hacia abajo. abajo. El macrom macrométrico étrico lo lo hace hace de forma rápida y el micrométrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura. * FUENTE DE ILUMINACIÓN: Se trata de una lámpara halógena de intensidad graduable. Esta situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualización. * CONDENSADOR Y DIAFRAGMA: El condensador es un sistema de lentes situadas bajo la platina su función función es es la de concentrar concentrar la la luz generada generada por por la fuente fuente de iluminación iluminación hacia la preparación. En el interior del condensador existe un diafragma (iris) cuya función es limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados (regula la cantidad de luz y ajusta la Apertura Numérica).
* OCULARES: Están colocados en la parte superior del tubo. Se denominan así, porque están muy cercanos al ojo. Su función es la de captar y ampliar la imagen formada en en los objetivos. En los modernos microscopios hay dos oculares (microscopios binoculares) que están unidos mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar. En general los mas utilizados son los de 10X ( producen un aumento de 10 veces ). * OBJETIVOS : Están colocados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metálica, denominada revolver, que permite cambiarlos fácilmente. Generan una imagen real, invertida y aumentada. Los mas frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100 aumentos. Este último se llama de inmersión ya que para su utilización se necesita utilizar aceite de cedro sobre la preparación. En la superficie de cada objetivo se indican sus características principales, aumento, apertura numérica, y llevan dibujado un anillo coloreado que indica el número de aumentos (rojo 4X, amarillo 10X, azul 40X y blanco 100X).
El Microscopio óptico compuesto PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO
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Sistema óptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecánico SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, ….. REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. o
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TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto.
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO 1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones. 2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. 3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque: a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino. 2. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión. 3. Empleo del objetivo de inmersión: a. Bajar totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este
momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación. j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. 5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador). 7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
. Principales normas de cuidado y utilización del microscopio óptico El microscopio es un instrumento de precisión que debe tratarse con cuidado y debe manejarse correctamente para evitar errores, cansancio y pérdida de tiempo. Tenga en cuenta las siguientes consideraciones: 1. Debe mantenerse en un lugar estable. El observador debe colocarse de espaldas a los focos de luz, prefiriéndose la luminosidad amortiguada, lejos de las ventanas y sobre una mesa negra para eliminar luces parásitas y evitar una fatiga innecesaria.
2. Debe colocarse lejos del extremo del mesón, para evitar que se vuelque. La mayoría de los desperfectos se producen por golpes. 3. El microscopio se transporta verticalmente, sujeto por la empuñadura con una mano y por la base con la palma de la otra. El transporte incorrecto puede descansar todo el peso sobre el control de enfoque micrométrico, erosionando sus muescas. 4. Debe estar cubierto mientras no se usa y no debe sacársele el ocular. El polvo desgasta los componentes y se deposita en las lentes. 5. No deben tocarse los lentes oculares, objetivos ni condensador con los dedos. Las manchas de grasa y sudor los dada. 6. Las lentes deben soplarse enérgicamente con una pera de goma, no deben limpiarse con un paño seco (las partículas de polvo pueden rayarlas), ni soplando con la boca (una película líquida es muy difícil de eliminar), ni con los dedos. Si queda polvo debe emplearse papel especial o pincel que se carga electrostáticamente acercándolo a una ampolleta encendida, lo cual permite recoger las partículas. 7. Para observar hay que sentarse cómodo, en posición descansada. Las malas posiciones causan cansancio y dolores musculares. 8. Debe observarse con ambos ojos abiertos. Al estar un ojo cerrado prolongadamente, la contracción muscular y la presión sobre el globo ocular causan cansancio y a veces dolor ocular o de cabeza. 9. Debe mirarse a través del microscopio, no "en" el microscopio. Si el observador mira como si la imagen estuviese junto al ojo, la vista se cansa innecesariamente y puede producirse dolor ocular. 10. Debe haber una distancia adecuada entre el ojo y el ocular. Acérquese desde algunos centímetros poco a poco hasta observar el campo visual grande y definido. 11. Toda observación comienza con lupa y pasa ordenadamente a mayores aumentos. Esto facilita centrar y enfocar, da un campo visual inicial amplio que proporciona visión de conjunto, facilita la interpretación y permite ubicar fácil y rápidamente las estructuras. La zona de la preparación que desea observarse debe quedar en el centro del campo antes de pasar al siguiente aumento. 12. El condensador está regulado cuando se encuentra en su posición más alta o un poco más bajo. Para aumentar el contraste no conviene descenderlo excesivamente ni cerrar el diafragma, es preferible regular la iluminación con el control deslizable. 13. No debe colocarse ni retirarse una preparación estando el objetivo mayor o el objetivo a inmersión en posición de trabajo, porque pueden rayarse las lentes frontales. 14. Los movimientos de los mandos de enfoque deben ser lentos y suaves. El control macrométrico se acciona con precaución para no chocar el objetivo con la preparación, lo cual estropea la lente frontal del objetivo y rompe la preparación. No debe utilizarse el control macrométrico con inmersión. El control micrométrico debe mantenerse en
posición central y accionarse un poco hacia un lado u otro. Se llega al extremo de su recorrido y se insiste, se pueden romper sus muescas, lo cual obligarla a cambiarlo. 15. La preparaciones se colocan con el cubreobjetos hacia arriba. Si la preparación está al revés, al tratar de enfocar choca el objetivo con la preparación y se daña. Antes de colocar la preparación sobre la platina compruebe la posición del cubreobjetos con la uña. 16. Si la preparación carece de cubreobjetos no debe observarse con un objetivo mayor a 10X, de lo contrario el objetivo puede chocar con la preparación y se puede rayar. 17. No debe colocarse aceite de inmersión sobre objetivos secos (lupa, menor, mayor) ni utilizarse el objetivo a inmersión como objetivo seco, porque se puede rayar. 18. Para sacar de los lentes el aceite de inmersión debe utilizarse un paño humedecido ligeramente con éter o xilol, no debe usarse alcohol, que disuelve el adhesivo de las lentes, ni algodón, que deja fibrillas pegadas al vidrio dificultando la visión. 19. No deben derramarse líquidos sobre el microscopio, si esto sucediera accidentalmente debe secarse de inmediato. No debe manejarse el microscopio con los dedos húmedos. 20. No debe dejarse el microscopio junto a un mechero encendido, por razones obvias. 21. El microscopio no debe estar encendido mientras no se usa, debe evitarse así su calentamiento excesivo. Recuerde además que su ampolleta es de alto costo y tiene una vida útil limitada. 22. Las lentes están montadas en forma muy precisa, sólo se deben limpiar externamente, sin desmontarlas. Sólo un técnico especializado puede hacerlo para una limpieza completa. 23. No se debe invertir ni ladear el microscopio sin quitar previamente el ocular, que entra por deslizamiento. 24. Cada vez que el microscopio se deja de usar debe guardarse en forma adecuada: a) ubicación lejos del borde del mesón, b) lámpara apagada, c) cable de la lámpara desenchufado, d) platina limpia y ubicada al tope superior, e) objetivo lupa en posición de trabajo, f) carro en posición central, g) condensador en su posición más alta, h) diafragma abierto.
5. Partes del microscopio óptico Los microscopios ópticos constan de dos tipos de componentes, la parte mecánica y la parte óptica. A los componentes básicos se agregan accesorios opcionales. A) Componentes mecánicos ("Montura"): Piezas fijas, que sirven como soporte para el sistema óptico (estativo), y piezas móviles, que intervienen en la ubicación adecuada de la preparación (enfoque y centrado).
1. Base o Pie: pieza horizontal maciza, de forma variable, pesada, situada en la parte inferior del microscopio, al que sirve de apoyo y da estabilidad. Generalmente lleva asociada la fuente luminosa. 2. Empuñadura o Brazo: pieza vertical más o menos curva que se une al tubo, a la platina y a la base. Sirve para tomar al microscopio durante su traslado y lleva los controles de enfoque. En algunos modelos corresponde a dos piezas independientes: el brazo, en la parte superior, y la columna, inferior, que se unen mediante una charnela, articulación que permite inclinar al microscopio en mayor o menor grado y adaptarlo a la altura de la vista. 3. Cabezal: pieza hueca, típicamente cilíndrica (cuando es así se le denomina "tubo") en la que se insertan los tubos portaoculares y el portaobjetivos. A través del cabezal se observa la imagen microscópica, sirviendo para sostener a los componentes ópticos y mantenerlos a la distancia correcta. Puede ser monocular o binocular. En los modelos binoculares cada montura de los tubos portaoculares está rodeada por anillos que permiten ajustar la longitud del tubo, y los tubos portaoculares pueden desplazarse horizontalmente, lo que permite graduar su distancia. 4. Portaobjetivos múltiple (revólver): pieza giratoria que sostiene a los tubos portaobjetivos de diferente aumento. Se desplaza horizontalmente para colocar en posición de observación a cualquiera de ellos. 5. Platina lisa o fija: pieza plana horizontal ubicada entre el objetivo y el condensador, con un orificio central circular que permite el paso de los rayos luminosos provenientes del condensador, y sobre el cual se coloca la preparación para ser observada. 6. Platina mecánica o móvil (Carro): dispositivo acoplado a la platina lisa que sujeta al portaobjetos y permite su desplazamiento. Es un sistema de piñones que actúan sobre cremalleras ubicadas perpendicularmente entre sí, produciendo desplazamiento horizontal en sentido lateral y anteroposterior, lo cual permite ubicar y fijar la zona de la preparación que desea observarse. lleva incorporadas dos pinzas que entran a presión y sujetan la preparación y escalas graduadas para medir sus desplazamientos. 7. Subplatina: Conjunto de piezas situadas bajo la platina y que soportan al aparato de iluminación. Su composición varía según el modelo, pero en general consiste en un aro que sostiene al condensador, el que se mueve de arriba-abajo mediante un tornillo, y también contiene anillos portafiltros, que alojan cristales que mantienen la luz adecuada constante, y un diafragma-iris, que regula la entrada de la luz y se controla con una palanca lateral, lo que permite obtener distintos tamaños del cono luminoso que entra en el condensador. 8. Controles de enfoque: dos o cuatro botones ubicados en la empuñadura o columna que desplazan a la platina fija o al cabezal, según el modelo, lo cual permite enfocar con precisión. Corresponden a uno o dos botones macrométricos, o de enfoque aproximado, y uno o dos botones micrométricos, de enfoque fino. Los botones o mandos macrométricos son más grandes y de avance rápido, sirven para buscar rápidamente un punto aproximado al del enfoque. Si hay dos botones macrométricos se enfrentan a ambos lados del brazo y están sincronizados, basta mover a uno de ellos. Los botones o mandos micrométricos producen movimientos lentos y permiten obtener un enfoque exacto. Si son dos, también están sincronizados. En algunos modelos de microscopios existe un solo botón que
cumple funciones de macrométrico y micrométrico: a igual velocidad de giro el movimiento de la platina es más rápido cuanto más lejos se halla la preparación del plano de enfoque. B) Componentes ópticos ("Tren óptico"): Piezas implicadas en la formación de la imagen. Incluye tres sistemas de lentes que funcionan armónicamente entre sí y una fuente de iluminación. 1. Condensador: Sistema de lentes convergentes de gran abertura que concentra la luz visible y la proyecta uniformemente sobre una muestra de tejido convenientemente preparada. Se encuentra montado en un armazón metálico sujeto a la parte inferior de la platina fija y puede subirse y bajarse a voluntad accionando un control ubicado lateralmente. 2. Sistema de objetivos: Complejo sistema de lentes (a veces hasta 10) ubicados próximos al objeto, que actúa como una sola lente convergente que recoge las longitudes heterocromáticas de la luz visible, entregando mayores aumentos que los del ocular y produciendo inversión de la imagen. Los objetivos participan en la primera etapa de ampliación: producen una imagen ampliada del objeto y la proyectan sobre un plano ubicado en el interior del cabezal. Cada objetivo, ubicado en el interior de un tubo (tubo portaobjetivo), puede estar formado por una lente o por un complejo sistema de lentes convergentes. Los modelos actuales presentan tres o cuatro objetivos ubicados en sendos tubos, cuya longitud se relaciona con su poder de aumento. Existen objetivos en seco y de inmersión. Los objetivos en seco ("lupa", "aumento menor", "aumento mayor") se utilizan dejando aire entre ellos y la preparación, en cambio el objetivo de inmersión se emplea colocando una gota de líquido ("aceite de inmersión"), cuyo índice de refracción es superior al del aire. 3. Sistema ocular: Formado por dos lentes plano-convexas centradas y empotradas en un tubo metálico más o menos corto (tubo portaocular), al que se acerca el ojo del observador, en cuya retina proyecta la segunda imagen aumentada. La lente superior se denomina propiamente lente ocular y la inferior lente de campo o frontal. Lentes adicionales corrigen las aberraciones cromáticas y esféricas. Los oculares son intercambiables y pueden tener diferentes aumentos. Permiten observar varias veces más amplificada la imagen que forma el objetivo. 4. Fuente luminosa: Antiguamente era un espejo, en la actualidad se utiliza mucho más una lámpara con filamento de tungsteno incandescente enrollado, de 6 a 12 V, montada sobre un portalámparas especial ubicado en la base del microscopio. La intensidad luminosa se regula en forma continua girando un botón o moviendo una palanca de control deslizante. C) Accesorios Se fabrican accesorios opcionales para colocar en los modelos modernos de microscopios compuestos, los que pueden colocarse temporalmente en los microscopios compuestos para desarrollar funciones especiales, otorgándole mayor flexibilidad al aparato. Entre ellos se cuentan accesorios para la observación simultánea de dos personas, condensadores de campo obscuro, obturador central para campo obscuro, accesorio de
polarización, iluminador vertical, ocular graduado, accesorios para dibujo, accesorios para fotomicrografía.
6. Problemas frecuentes en el manejo del microscopio Defectos de Iluminación: a) Campo obscuro, sin imagen. Causas probables: l) Falta de luz. Corrección: Accione el interruptor, enchufe el cable, verifique si hay energía eléctrica o si la lámpara esta quemada. 2) Objetivo fuera de lugar. Corrección: Gire el objetivo a su posición de enfoque. b) Campo ovalado, iluminado parcialmente. Causa probable: Objetivo fuera de lugar. Corrección: Gire el objetivo a su posición de enfoque. c) Imagen muy obscura. Causas probables: l) Diafragma cerrado. Corrección: Desplace la palanca lateral del diafragma. 2) Condensador muy bajo. Corrección: Accione el control que sube el condensador. 3) Condensador defectuoso. Corrección: Avise para que lo repare un técnico. d) Imagen muy clara. Causas probables: l) Diafragma muy abierto. Corrección: Desplace la palanca lateral del diafragma. 2) Condensador muy alto. Corrección: Accione el control que baja el condensador. Defectos de Enfoque: a) Falta de imagen. Causas probables: l) Preparación mal centrada. Corrección: Accione los controles del carro. 2) Preparación mal enfocada. Corrección: Accione el mando macrométrico. b) Imagen borrosa. Causas probables: l) Preparación mal enfocada. Corrección: Accione el mando micrométrico. 2) Preparación al revés. Corrección: Coloque la preparación hacia arriba. 3) Suciedad en la preparación, ocular u objetivo. Corrección: Límpielos. Imágenes extrañas: a) Manchas o enturbiamientos irregulares, que se desplazan al mover la preparación. Causa probable: Suciedad en el cubreobjetos. Corrección: Limpie la preparación. b) Manchas o enturbiamientos irregulares que se desplazan al mover el ocular. Causa probable: Suciedades en el ocular. Corrección: Limpie la lente ocular. c) Manchas o enturbiamientos que desaparecen al cambiar el objetivo. Causa probable: objetivo sucio o con aceite. Corrección: Limpie el objetivo. d) Manchas o enturbiamientos que no se desplazan ni desaparecen al mover el ocular, objetivo o preparación. Causa probable: Suciedad en la lente superior del condensador. Corrección: Limpie el condensador.
e) Líneas finas brillantes. Causa probable: Rayaduras en las lentes o trizaduras en la preparación. Corrección: De cuenta al profesor. f) Otras alteraciones de la imagen (espacios blancos, espacios finos y rectos, grumos intensamente tenidos, bandas obscuras, círculos con bordes obscuros, etc.). Causa probable: defectos en las preparaciones (retracción del tejido, muescas en el cuchillo del micrótomo, fijador o colorante precipitado, tejido plegado, burbujas de aire, etc.). Corrección: Examine un sector de la preparación no alterado o solicite otra preparación.
PRÁCTICA DE BIOLOGÍA Nº 1 “El Microscopio” Introducción
Objetivos
Recursos Procedimientos Marco Teórico
Observaciones en la Práctica
Autoevaluación
Introducción
“OBSERVANDO LO INVISIBLE. Gracias al Microscopio Óptico es posible conocer lo más pequeño del mundo que nos rodea”. Desde el descubrimiento del Microscopio por parte de Zacarías Jansen, la ciencia, particularmente la biológica, ha venido década tras década aportando nuevos conocimientos, desde la observación de la célula y su descubrimiento, el de las bacterias, hasta la situación actual con la visualización de la ultraestructura celular. Y nosotros en nuestra formación como entes promotores y forjadores de salud, es de gran importancia el conocimiento y desarrollo de destrezas en este instrumento, que en un futuro no muy lejano, será un medio auxiliar de la carrera.
Objetivos •
Reconocer al microscopio y sus elementos.
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Identificar los diferentes tipos de microscopios.
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Aprender la forma de manejo y el cuidado de un microscopio.
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Asimilar la técnica adecuada para el enfoque.
Recursos
Humanos •
Grupo de estudiantes
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Ayudante de cátedra
Materiales
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Microscopio Simple de Luz
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Laminas cubreobjetos y portaobjetos
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Objetos para la observación (Papel cuadriculado, Cabello)
Procedimientos •
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Exposición teórica: brevemente se hablará y abordara temas como los objetivos de la práctica, materiales necesarios, los procedimientos, definición del microscopio, historia, estructura, manejo y cuidado, recomendaciones. Reconocimiento del Microscopio y sus elementos con la colaboración del ayudante de cátedra. Visualización de objetos e identificación de la técnica correcta para enfocarlos. El papel cuadriculado y el cabello los colocamos en portaobjetos, cubrimos con el cubreobjetos y observamos con los objetivos de 4x, 10x y 40x.
Marco Teórico
Definición Etimológicamente microscopio viene del griego: "mikro" = pequeño y "scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas) En definitiva un microscopio es “cualquier instrumento que se utiliza para obtener una imagen aumentada de objetos minúsculos o detalles muy pequeños de los mismos.” En su afán de llegan siempre más lejos en la investigación de la naturaleza, de lo que los límites de sus órganos sensoriales le imponen, el hombre ha construido múltiples instrumentos que le han permitido acceder allí donde los sentidos no podían penetrar. Así como el telescopio abrió a la humanidad las puertas de lo infinitamente grande, el microscopio hizo posible conocer los mundos de dimensiones ínfimas, entre ellos la
célula, base de la vida. Se contaban así las bases de las modernas ciencias biológicas que hasta bien entrada la edad moderna se habían fundado en las observaciones directas. El tipo más común de microscopio y el primero que se inventó es el microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción. La ciencia que investiga los objetos pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía.
Historia La curiosidad innata al hombre ha hecho que este haya intentado saber más acerca de los objetos más lejanos, pero también de los más próximos; desde la antigüedad se conoce algunos datos de observaciones hechas por diversas personas, sobre la propiedad de ciertos materiales (los vidrios) de modificar la imagen de lo que observamos, pero yéndonos a datos precisos, este es un resumen con fechas y nombres de hechos importantes relacionados con el microscopio:
Estructura El microscopio óptico común está conformado por dos sistemas: •
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El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque. El sistema óptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas.
La parte mecánica del Microscopio La parte mecánica del microscopio comprende: el pie, el cabezal, el revólver, la platina, el tornillo micrométrico y el tornillo micrométrico. Estos elementos sostienen la parte óptica y de iluminación, además permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. •
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El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular El cabezal o tubo óptico. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares. El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija. La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie.
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La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se va a observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que permite el paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares. El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo óptico o la platina del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación. El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
Sistema Óptico El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Está formado por los lentes oculares, los objetivos, la fuente de luz, el condensador y el diafragma. •
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Los oculares. Los oculares están constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un tubo corto. Los oculares generalmente más utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos. Los objetivos. Los objetivos producen aumento de las imágenes de los objetos y organismos y, por tanto, se hallan cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersión. Se disponen en una pieza giratoria denominada revólver.
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Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación. En la cara externa llevan una serie de índices que indican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos. El número de objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X. El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos círculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior. La Fuente de Luz: Que puede ser natural (a través de un espejo) o artificial (una lámpara conectado a una fuente de energía eléctrica). Condensador. El condensador está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación. El condensador se halla debajo de la platina. El condensador puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que determina su movimiento ascendente o descendente. Diafragma. Generalmente, el condensador está provisto de un diafragma o iris, que regula su abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a través del condensador.
Tipos de Microscopios La búsqueda de imágenes de mejor calidad y contraste, ha llevado al descubrimiento de nuevas y mejoradas clases de microscopios. Las principales clases de microscopios se resumen en el siguiente cuadro: Los microscopios ópticos utilizan la propiedad de los lentes de aumentar la imagen de los objetos y de esa manera visualizarlos con el uso de la luz visible (espectro de luz). Los microscopios ópticos especiales en cambio utilizan otros tipos de luz o modificaciones a la luz visible para obtener imágenes que de otra manera no se pueden visualizar. El microscopio electrónico dejó a un lado la utilización de fotones (partículas que componen la luz) y de los lentes, y pasó al uso de electrones para la visualización y campos magnéticos que hacen las veces de lentes obteniéndose así imágenes de mejor calidad y de un mayor aumento.
Propiedades del Microscopio Poder separador. También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad del microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro.
En el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micra, y en el microscopio electrónico, el poder separador llega hasta 10 ángstrom. Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes utilizadas. Poder de aumento. En términos generales se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto.
Manejo y Enfoque En forma sistemática se debe seguir el siguiente modelo para un adecuado manejo y la técnica del enfoque: •
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Encender la fuente de luz o colocarlo en un lugar iluminado en el caso de microscopio con fuente natural. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. Para realizar el enfoque: o
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Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
Al pasar al siguiente objetivo la imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Empleo del objetivo de inmersión: o
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Bajar totalmente la platina. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de 40X.
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Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico.
Recomendaciones •
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Levantar y transportar el microscopio por el brazo. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al inicio y final de la sesión práctica. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación. La cantidad de luz que ingresa por el condensador va ha depender del objetivo que estemos utilizando, a mayor aumento mayor cantidad de luz. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En nuestro caso podemos hacer uso de pañuelos que no dejen pelusa. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. Mantener seca y limpia la platina del microscopio.
Observaciones de la Práctica
Ponga el nombre de cada una de las partes del Microscopio Óptico Compuesto:
Grafique lo observado en el microscopio:
Autoevaluación
Son componentes del sistema mecánico del microscopio. Excepto:
El tubo óptico.
El brazo.
La platina.
El diafragma.
Los tornillos macro y micrométrico.
Todos.
Ninguno.
Sobre el manejo y cuidado del microscopio. Señale lo correcto:
Se debe levantar y transportar el microscopio por el brazo.
Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al inicio y final de la sesión práctica.
Nunca hay que tocar las lentes con las manos.
No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
Todos.
Ninguno.
Señale 2 diferencias entre el microscopio óptico y el microscopio electrónico:
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¿Qué entiende por poder de definición del microscopio?
________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ¿Cómo explica usted observar la imagen impresa en el papel milimetrado ( < ) de modo inverso en el microscopio?
________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ 4x 4x 10x 10x 40x 40x Objeto: _____________________ Objeto: _____________________ Microscopios ópticos o
microscopio simple
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microscopio compuesto
Microscopios ópticos especiales
o
microscopio de luz ultravioleta
o
microscopio en campo oscuro
o
microscopio de fase
Microscopios electrónicos o
microscopio electrónico de transmisión
o
microscopio electrónico de barrido
Tornillo Micrométrico Tornillo Micrométrico Oculares Interruptor Pie Platina Brazo Tubo óptico Objetivos Fuente de Luz Revolver Condensador Diafragma •
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1608 Zacarías Jansen construye un microscopio con dos lentes convergentes. 1665 Hooke utiliza un microscopio compuesto para estudiar cortes de corcho y describe los pequeños poros en forma de caja a los que él llamó "células". Publica su libro Micrographia 1674 Leeuwenhoek informa su descubrimiento de protozoarios. Observará bacterias por primera vez 9 años después.
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1838 Schleiden y Schwann proponen la teoría de la célula y declaran que la célula nucleada es la unidad estructural y funcional en plantas y animales. 1876 Abbé analiza los efectos de la difracción en la formación de la imagen en el microscopio y muestra cómo perfeccionar el diseño del microscopio. 1881 Retzius describe gran número de tejidos animales con un detalle que no ha sido superado por ningún otro microscopista de luz. En las siguientes dos décadas él, Cajal y otros histólogos desarrollan nuevos métodos de tinción y ponen los fundamentos de la anatomía microscópica. 1882 Koch usa tinte de anilina para teñir microorganismos e identifica las bacterias que causan la tuberculosis y el cólera. En las siguientes dos décadas, otros bacteriólogos, como Klebs y Pasteur identificarán a los agentes causativos de muchas otras enfermedades examinando preparaciones teñidas bajo el microscopio. 1937 Ernst Ruska y Max Knoll, físicos alemanes, construyen el primer microscopio electrónico.
