LAPORAN PRAKTIKUM FARMAKOGNOSI ANALITIK PERCOBAAN I PENETAPAN KADAR AIR, KADAR SARI, KADAR ABU, KADAR MINYAK ATSIRI, SERTA PEMBUATAN AMILUM Tanggal Percobaan : 23 Februari 2018 Tanggal Pengumpulan : 2 Maret 2018
Disusun oleh: Neng Ernawati (10715073) Kelompok J-1 Shift Jum’at
Asisten: Fadhila Syifa Permata Sari (10714033)
LABORATORIUM FARMAKOGNOSI PROGRAM STUDI SAINS DAN TEKNOLOGI FARMASI SEKOLAH FARMASI INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2018
PERCOBAAN I PENETAPAN KADAR AIR, KADAR SARI, KADAR ABU, KADAR MINYAK ATSIRI, SERTA PEMBUATAN AMILUM
I.
TUJUAN 1. Menentukan kadar abu total, kadar abu tidak larut dalam asam, dan kadar abu larut air dari simplisia Hibisci sabdariffae flos (bunga rosella). 2. Menentukan kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol dari simplisia Hibisci sabdariffae flos (bunga rosella) dengan metode maserasi. 3. Menentukan kadar air dari simplisia Hibisci sabdariffae flos (bunga rosella) dengan metode destilasi azeotrop. 4. Menentukan kadar minyak atsiri dari simplisia Syzygii aromatic flos (bunga rosella) dengan metode destilasi stahl. 5. Menentukan hasil rendemen dan karakteristik dari Amylum oryzae (pati beras) yang telah dibuat.
II.
PRINSIP PERCOBAAN Simplisia yang digunakan sebagai bahan jamu atau fitofarmaka harus
memenuhi
syarat
monografi
yang
telah
ditentukan.
Kegunaannya adalah untuk menjaga agar mutu yang diharapkan dapat terpenuhi. Beberapa karakteristik simplisia yang harus dipenuhi syarat monografinya antara lain kadar abu total, abu tidak larut asam, abu larut air, kadar sari larut air dan larut etanol.Abu merupakan bahan sisa (residu) anorganik yang berasal dari proses pembakaran atau oksidasi komponen organik suatu bahan. Oleh karena itu, kadar abu dapat menunjukkan kadar mineral, kemurnian, dan keberadaan kontaminan bahan simplisia. Penetapan kadar sari merupakan metode kuantitatif untuk jumlah kandungan senyawa dalam
simplisia
yang
dapat
2
tersari
dalam
pelarut
tertentu.
Penetapannya dapat digunakan dua cara berdasarkan kelarutan senyawa
yang
terkandung
dalam
simplisia,
yaitu
dengan
menggunakan pelarut air dan etanol. Kadar air merupakan salah satu parameter standardisasi simplisia. Penentuan kadar air dilakukan untuk menentukan apakah suatu simplisia masih memiliki kadar air yang berada pada batasnya atau tudak. Jika kadar air melebihi batas maka simplisia tersebut rentan terhadap pertumbuhan mikroba. Minyak atsiri merupakan campuran senyawa alami yang mudah menguap. Komponen minyak atsiri sebagian besar terdiri dari monoterpen, seskiterpen, aromatik aldehid atau alkohol. Penetapan kada minyak atsiri berguna untuk penentuan mutu simplisia. Minyak atsiri biasanya digunakan sebagai salah satu campuran pada bahan baku pada industri kosmetik, sabun dan deterjen, farmasi, produk makanan dan minuman, serta pengikat aroma pada industri kosmetik dan farmasi. Amilum adalah karbohidrat kompleks yang tidak larut dalam air, berwujud bubuk putih, tawar, dan tidak berbau. Amilum juga merupakan bahan utama yang dihasilkan oleh tumbuhan untuk menyimpan kelebihan glukosa dalam jangka panjang. Sumber amilum antara lain biji-bijian serealia (jagung, gandum, sorgum, beras), umbi (kentang), akar (singkong, ubi jalar, ganyong), dan bagian dalam batang tanaman sagu. Dalam proses pembuatannya, amilum harus dipisahkan dari komponen pengotor lain yang bercampur, yaitu serat, protein, gula, dan garam.
III.
ALAT DAN BAHAN Alat Labu Erlenmeyer Spatula Plastic wrap Cawan porselen Oven
Bahan Simplisia Hibisci sabdariffae flos Simplisia Syzygii aromatici flos Bahan baku amilum (beras) Aquadest Kloroform
3
Krus silika Tanur Blender Corong Gelas kimia Timbangan digital Rangkaian distilasi Stahl Rangkaian distilasi Azeotrop Kaca arloji Kain batis Mikroskop dan mikrometer IV.
Etanol Asam Klorida encer Kertas saring bebas abu Xilen Toluen Asam Kromat
METODOLOGI PERCOBAAN 1. Penetapan kadar abu total Krus yang digunakan untuk meletakkan simplisia dipanaskan diatas penangas kira-kira 30 menit sampai terlihat asap. Setelah itu, krus dimasukkan kedalam desikator selama 15 menit lalu ditimbang berat krus kosong dan dicatat beratnya. Simplisia yang akan ditetapkan kadar abunya ditimbang dikertas timbang. Setelah ditimbang, simplisia dimasukkan kedalam krus lalu dipanaskan diatas penangas dengan tutup terbuka sampai simplisia berwarna hitam. Krus ditutup menggunakan penutupnya kemudian dimasukkan ke tanur kira-kira seharian. Setelah ditanur, krus yang berisi simplisia dimasukkan kedalam desikator selama 15 menit lalu ditimbang beratnya dan dicatat. Simplisia beserta krusnya dimasukkan kembali ke tanur selama 1 jam, kemudian dimasukkan kedalam desikator selama 15 menit, lalu ditimbang beratnya dan dicatat. Langkah tersebut diulangi sampai didapat berat yang tetap. Setelah itu kadar abu total dapat dihitung dengan cara selisih dari bobot tetap dan bobot krus kosong dibagi bobot simplisia lalu dikali 100 %.
2. Penetapan kadar abu tidak larut asam Abu yang didapat dari penetapan kadar abu total ditambah beberapa ml HCl encer lalu dipanaskan kembali diatas penangas selama 5 menit setelah cairannya mendidih. Simplisia disaring
4
menggunakan kertas saring bebas abu. Filtrat yang didapat dibuang lalu abu dan kertas saringnya dimasukkan ke dalam krus untuk dipanaskan kembali diatas penangas sampai menjadi arang. Krus dimasukkan kembali ke dalam tanur kira-kira setengah hari. Setelah ditanur, krus yang berisi simplisia dimasukkan kedalam desikator selama 15 menit lalu ditimbang beratnya dan dicatat. Simplisia beserta krusnya dimasukkan kembali ke tanur selama 1 jam, kemudian dimasukkan kedalam desikator selama 15 menit, lalu ditimbang beratnya dan dicatat. Langkah tersebut diulangi sampai didapat berat yang tetap. Setelah itu kadar abu tidak larut asam dapat dihitung dengan cara selisih dari bobot tetap dan bobot krus kosong dibagi bobot simplisia lalu dikali 100 %.
3. Penetapan kadar abu larut air Abu yang didapat dari penetapan kadar abu total ditambah beberapa ml air lalu dipanaskan kembali diatas penangas selama 5 menit setelah cairannya mendidih. Simplisia disaring menggunakan kertas saring bebas abu. Filtrat yang didapat dibuang lalu abu dan kertas saringnya dimasukkan ke dalam krus untuk dipanaskan kembali diatas penangas sampai menjadi arang. Krus dimasukkan kembali ke dalam tanur kirakira setengah hari. Setelah ditanur, krus yang berisi simplisia dimasukkan kedalam desikator selama 15 menit lalu ditimbang beratnya dan dicatat. Simplisia beserta krusnya dimasukkan kembali ke tanur selama 1 jam, kemudian dimasukkan kedalam desikator selama 15 menit, lalu ditimbang beratnya dan dicatat. Langkah tersebut diulangi sampai didapat berat yang tetap. Setelah itu kadar abu larut air dapat dihitung dengan cara selisih dari bobot tetap abu total dan bobot tetap abu tidak larut air dibagi bobot simplisia lalu dikali 100 %.
4. Penetapan kadar sari larut air Simplisia yang telah ditimbang dimasukan ke dalam labu erlenmeyer berisi air-kloroform. Kemudian campuran simplisia
5
dikocok selama 6 jam dan dimaserasi selama 18 jam. Setelah didiamkan, simplisia disaring menggunakan kain batis dan filtratnya dipindahkan ke dalam cawan penguap yang telah ditimbang terlebih dahulu. Pelarut dibiarkan menguap dengan menggunakan waterbath sampai tersisa kerak pada cawan penguap. Cawan penguap lalu dioven selama 1 jam dan didesikator selama 15 menit kemudian ditimbang. Tahap tersebut diulang sampai didapat bobot tetap. Jika bobot sudah tetap, kadar sari larut air dihitung dari simplisia tersebut.
5. Penetapan kadar sari larut etanol Simplisia yang telah ditimbang dimasukan ke dalam labu erlenmeyer berisi etanol. Kemudian campuran simplisia dikocok selama 6 jam dan dimaserasi selama 18 jam. Setelah didiamkan, simplisia
disaring
menggunakan
kain
batis
dan
filtratnya
dipindahkan ke dalam cawan penguap yang telah ditimbang terlebih
dahulu.
Pelarut
dibiarkan
menguap
dengan
menggunakan waterbath sampai tersisa kerak pada cawan penguap. Cawan penguap lalu dioven selama 1 jam dan didesikator selama 15 menit kemudian ditimbang. Tahap tersebut diulang sampai didapat bobot tetap. Jika bobot sudah tetap, kadar sari larut etanol dihitung dari simplisia tersebut.
6. Penetapan kadar air simplisia Rangkaian alat distilasi azeotrop dipasang, labu bersumbat disimpan diatas penangas, masukkan batu didih ke dalam labu. Toluen dijenuhkan terlebih dahulu dengan air ( 200 ml toluena : 4 ml air ) dalam labu dengan pemanasan pada distilasi azeotrop. Volume air (a) dicatat setelah penjenuhan selesai. Setelah toluena jenuh, simplisia bunga rosella dimasukkan kedalam labu. Alat destilasi dihubungkan kembali dan dipanaskan sampai
6
volume air (b) pada tabung penerima tetap. Jumlah air yang terkandung pada simplisia adalah b-a.
7. Penetapan kadar minyak atsiri Serbuk simplisia cengkeh ditimbang dan dimasukkan ke dalam labu bundar. Selanjutnya ditambahkan akuades hingga semua serbuk simplisia terendam. Batu didih dimasukkan ke dalam labu tersebut. Akuades dimasukkan ke dalam tabung pengaman hingga ketinggian air pada tiga tabung sejajar. Xilen dimasukkan ke dalam tabung yang tersambung dengan tabung pengaman. Ditentukan
ketinggian
xilen
yang
ditambahkan.
Pemanas
dinyalakan dan perubahan ketinggian xilen diamati hingga tidak ada penambahan ketinggian volume xilen. Perubahan volume xilen dicatat dan ditentukan kadar minyak atsiri (%v/b) pada serbuk simplisia cengkeh.
8. Pembuatan dan karakterisasi amilum Beras dimasukkan kedalam blender dan ditambahkan sejumlah air
hingga
cukup
merendam
beras
secara
keseluruhan.
Kemudian, campuran beras dan air diblender hingga terbentuk bubur. Setelah itu, dilakukan penyaringan pada bubur beras tersebut menggunakan kain batis. Setelah semuanya tersaring, filtrat yang diperoleh ditetesi dengan lima tetes kloroform dan disimpan dilemari es selama kurang lebih satu hari. Jika terbentuk endapan, pisahkan endapan tersebut dari filtrat. Endapan tersebut dikeringkan dengan menggunakan hairdryer. Endapan yang telah kering disebut sebagai amilum beras (Amylum orizae) V.
DATA DAN PENGOLAHAN DATA 1.
Penetapan kadar abu total Berat krus kosong 1 = 35,6291 gram Berat krus kosong 2 = 34,2407 gram
7
Berat krus kosong 3 = 37,8598 gram Berat krus kosong 4 = 31,9048 gram Berat abu + krus 1 = 35,7273 gram Berat abu + krus 2 = 34,3569 gram Berat abu + krus 3 = 37,9651 gram Berat abu + krus 4 = 32,0011 gram Berat abu 1 = 35,7273 g - 35,6291 g = 0,0982 gram Berat abu 2 = 34,3569 g - 34,2407 g = 0,1162 gram Berat abu 3 = 37,9651 g - 37,8598 g = 0,1053 gram Berat abu 4 = 32,0011 g - 31,9048 g = 0,0963 gram Berat abu rata – rata = 0,104 gram Kadar abu total =
= = 5,2 %
2.
Penetapan kadar abu tidak larut asam
3.
Penetapan kadar abu larut air
4.
Penetapan kadar sari larut air Bobot simplisia yang digunakan = 2 g Volume etanol yang digunakan = 50 mL Volume filtrat yang diambil = 20 mL Kadar sari
Massa cawan Massa
setelah Bobot tetap
(gram)
pengeringan (gram)
(gram)
1
41,825
42,0473
0,222
2
64,771
65,0059
0,235
Bobot tetap rata-rata = 0,2285 gram Kadar sari larut etanol (%) =
8
= = 28,5625%
5.
Penetapan kadar sari larut etanol Bobot simplisia yang digunakan = 2 g Volume etanol yang digunakan = 50 mL Volume filtrat yang diambil = 20 mL Kadar sari
Massa cawan Massa
setelah Bobot tetap
(gram)
pengeringan (gram)
(gram)
1
41,6935
41,7807
0,0872
2
49,0586
49,1769
0,1183
Bobot tetap rata-rata = 0,10275 gram Kadar sari larut etanol (%) = = = 12,844%
6.
Penetapan kadar air simplisia Bobot simplisia yang digunakan = 2 g Volume air awal = 5,2 mL Volume air akhir = 6 mL Jumlah air pada simplisia = 6 mL – 5,2 mL = 0,8 mL Kadar air (%) = =
x 100 % x 100 %
= 40 %
7.
No 1 2
Penetapan kadar minyak atsiri
Jenis Pengamatan Jumlah simplisia bunga cengkeh Skala awal volume xilen
9
Hasil pengamatan 2 gram 0,11 mL
3
Volume xilen akhir (xilen + minyak atsiri) 0,3 mL
Kadar minyak atsiri = = = 9,5 %
8.
Pembuatan dan karakterisasi amilum Berat beras
= 100 gram
Berat cawan kosong
= 46,6686 gram
Berat cawan dan amilum
= 65,0741 gram
Berat amilum
= (65,0741 – 46,6686) gram = 16,4055 gram
Kadar amilum
= = = 16,4055 %
Pengamatan makroskopis : serbuk halus, bewarna putih, tidak berbau Pengamatan mikroskopis : polygonal, ukuran 2 – 10 µm, amilum tunggal dan majemuk, hilum tidak jelas,
kadang
terdapat
rekahan
ditengah. Perhitungan kalibrasi okuler micrometer : -
Skala okuler berhimpit pada 1 dan 2, skala okuler = 2 -1 = 1.
-
Skala kalibasi berhimpit pada 1 dan 2,5 , skala kalibrasi = 2,5-1 = 1,5.
-
Satu garis skala okuler memiliki ukuran 1,5 . 0,1 mm = 1 . x X = 0,15 mm
10
Ukuran amilum beras adalah 0,1 skala okuler, maka ukuran amilum adalah 0,1 x 0,15 mm = 0,015 mm = 15 µm
Gambar 3.1 Pengamatan Mikroskopik Amylum oryzae yang dibuat pada percobaan
VI.
PEMBAHASAN Standardisasi
adalah
proses
atau
kegiatan
merumuskan
menetapkan menerapkan merevisi standar yang dilaksanakan secara tertib dan kerjasama semua pihak (SSN, 1998). Tujuan dari standardisasi adalah untuk menjamin keseragaman produk yang berujung pada tegaknya safety, efficacy, dan quality. Simplisia yang akan digunakan sebagai bahan baku obat harus memenuhi spesifikasi umum yang telah ditentukan yakni identitas, kemurnian, dan analisis senyawa kimia. Identitas adalah suatu ciri khas dari simplisia sehingga dapat dibedakan dengan jenis yang lain. Kemurnian adalah parameter yang dapat menentukan bahwa suatu simplisia bebas dari pengotor atau kontaminan. Analisis senyawa kimia adalah analisis dengan tujuan untuk mengetahui kandungan suatu senyawa yang terkandung didalam simplisia seperti flavonoid. Paramater untuk simplisia dibagi menjadi dua yakni parameter spesifik dan non spesifik. Parameter spesifik adalah parameter khas dari suatu simplisia untuk mengetahui identitas kimia seperti kadar minyak atsiri dan kadar flavonoid total. Sedangkan parameter non
11
spesifik adalah parameter yang diuji pada semua jenis simplisia seperti kadar air, kadar abu, dan susut pengeringan. Selain simplisia, ekstrak juga mempunyai suatu parameter yang harus terpenuhi. Parameter ekstrak umumnya sama dengan simplisia, namun ada beberapa perbedaan, yakni terdapat parameter penentuan bobot jenis dan residu pelarut pada ekstrak dan juga tidak ada parameter mikroskopik pada ekstrak. Untuk melakukan standardisasi simplisia, buku literatur yang dapat digunakan adalah Farmakope Herbal Indonesia (FHI), Materia Medika Indonesia (MMI), WHO, USP, AHP, Indian Pharmacopoeia (IP), dan lain-lainnya. 1. Penetapan kadar abu total, abu tidak larut asam, dan abu larut air Abu adalah bahan sisa (residu) berupa oksida logam yang berasal dari proses pemijaran atau oksidasi komponen anorganik suatu bahan. Contoh oksida logam adalah NaO, CaO, dan MgO. Tujuan dari penentuan kadar abu yakni untuk mengetahui kadar mineral, kemurnian, dan keberadaan kontaminan pada simplisia. Kadar abu total adalah kadar total residu (oksida logam) komponen anorganik yang mengalami pemijaran dalam bahan simplisia. Abu dibagi menjadi 2 macam yakni abu fisiologis dan abu nonfisiologis. Abu fisiologis merupakan oksida logam yang berasal dari mineral dalam tumbuhan dan abu nonfisiologis merupakan oksida logam yang berasal dari luar tumbuhan seperti silica yang berasal dari tanah. Setelah dilakukan penetapan kadar abu total, dilakukan penetapan kadar abu tidak larut asam dan kadar abu larut air. Kadar abu tidak larut asam ditujukan untuk mengetahui kadar abu nonfisiologis dan kadar abu larut air ditujukan untuk mengetahui kadar abu fisiologis. Kadar abu total tidak sama dengan penjumlahan dari kadar abu larut air dan kadar abu tidak larut asam. Penetapan kadar abu total dilakukan dengan memijarkan simplisia serbuk hingga terbentuk abu. Pemijaran dilakukan pada
12
suhu 4000-6000 C karena diatas suhu 6000 C, abu akan terdekomposisi. Abu yang dihasilkan kemudian ditimbang dan ditentukan kadar berdasarkan bobot awal simplisia. Sebagian abu ini kemudian dilarutkan dalam asam pada kondisi pendidihan dan dilakukan penyaringan untuk mendapatkan komponen yang tidak larut asam. Residu tersebut dikeringkan dan ditimbang pada bobot tetapnya. Sebagian abu yang lain dididihkan dalam air, disaring, dikeringkan lalu ditimbang bobot tetapnya. Bobot tetap adalah bobot yang dihasilkan dari penimbangan yang dilakukan berulang kali menghasilkan bobot yang sama atau dengan galat 0,05% (0,05 mg / gram simplisia). Berdasarkan standar yang ditetapkan FHI suplemen II, kadar abu total simplisia Hibisci sabdariffae flos tidak boleh lebih dari 7,9% dan kadar abu yang tidak larut dalam asam tidak lebih dari 1,9%. Hasil pengamatan menunjukkan kadar abu total simplisia Hibisci sabdariffae flos sebesar 5,2%, kadar abu tidak larut asam sebesar …..%, dan kadar abu larut air sebesar …..%. Kadar abu total simplisia bunga rosella telah memenuhi persyaratan yang telah ditentukan.
2. Penetapan kadar sari yang larut dalam air dan etanol Penetapan kadar sari merupakan metode kuantitatif untuk mengetahui jumlah kandungan senyawa dalam simplisia yang dapat tersari dalam pelarut tertentu. Penetapan kadar sari juga memiliki tujuan untuk mengetahui pelarut yang dapat digunakan untuk ekstraksi yang paling efektif dan efisien. Menurut WHO terdapat 2 cara yang dapat digunakan untuk penentuan kadar sari yakni maserasi (cara dingin) dan refluks (cara panas). Menurut Farmakope Herbal Indonesia, penentuan kadar sari hanya dapat ditentukan dengan metode maserasi. Maserasi adalah metode penetapan kadar sari dengan cara merendam simplisia dalam cairan penyari, dikocok selama 6 jam, dan didiamkan selama 18 jam. Sedangkan refluks
13
adalah metode penyarian dengan cara pemanasan pelarut untuk mempercepat proses tanpa mengurangi volume pelarut karena ketika pelarut menguap akan didinginkan kembali oleh kondensor dan kembali menjadi bentuk cair. Cairan penyari yang diperbolehkan menurut Farmakope Herbal Indonesia air, etanol, dan campuran air dan etanol. Percobaan yang dilakukan adalah penentuan kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol. Penentuan kadar sari dilakukan dengan metode maserasi yakni direndam dengan air dan direndam dengan etanol. Pada penentuan kadar sari larut air, ditambahkan kloroform dengan perbandingan air : kloroform = 1000 : 2,5. Tujuan penambahan kloroform adalah untuk mencegah pertumbuhan mikroba karena air merupakan media yang baik untuk pertumbuhan mikroba.
Campuran
air
dan
kloroform
dibuat
dengan
cara
menambahkan air 900 mL pada 2,5 mL kloroform lalu digenapkan dengan air sampai 1000mL. Pada percobaan ini diperoleh hasil kadar sari larut air adalah 28,5625% dan kadar sari larut etanol adalah 12,844%. Berdasarkan FHI suplemen II, persyaratan kadar sari larut air Hibisci sabdariffae flos adalah tidak kurang dari 15,5% dan kadar sari larut etanol tidak kurang dari 16,3%. Kadar sari larut air yang diperoleh dari percobaan telah memenuhi persyaratan, sedangkan kadar sari larut etanol belum memenuhi persyaratan, hal ini dikarenakan etanol yang menguap, pada saat pengocokan banyak etanol yang keluar dari wadah yang mengurangi volume etanol, dan terdapat simplisia bunga rosella yang menempel pada dinding sehingga tidak terendam etanol.
3. Penetapan kadar air simplisia Tujuan penetapan kadar air adalah untuk menentukan jumlah air yang terdapat dalam simplisia, karena jika jumlahnya melebihi kadar maksimal yang diperbolehkan, maka simplisia tersebut akan
14
menjadi media yang baik untuk petumbuhan mikroba. Menurut Materia Medika Indonesia, kadar air maksimal yang diperbolehkan terkandung dalam simplisia adalah 10% sedangkan kadar air yang boleh terkandung dalam ekstrak adalah 15-25%. Kadar air berbeda dengan susut pengeringan. Kadar air adalah jumlah air yang terkandung dalam simplisia dibandingkan dengan massa simplisianya, sedangkan susut pengeringan adalah semua kandungan
dalam
simplisia
yang
dapat
menguap
setelah
dikeringkan. Jadi kadar air akan lebih kecil nilainya dari susut pengeringan karena yang dihitung hanya air saja. Penetapan kadar air dapat digunakan tiga cara yakni destilasi azeotrop, gravimetri, dan metode Karl Fischer. Destilasi azeotrop adalah destilasi dengan menggunakan senyawa azeotrop yakni gabungan 2 senyawa yang sulit dipisahkan dan memiliki titik didih yang lebih rendah atau lebih tinggi dibanding senyawa-senyawa penyusunnya. Karena senyawa azeotrop memiliki titik didih rendah, maka penguapan akan terjadi lebih cepat. Azeotrop dibagi menjadi 2 macam, yakni azeotrop positif dan azeotrop negative adalah senyawa azeotrop yang memiliki titik didih yang lebih tinggi dibanding senyawa-senyawa penyusunnya dan azeotrop negative adalah senyawa azeotrop yang memiliki titik didih yang lebih rendah dibanding
senyawa-senyawa
penyusunnya.
Gravimetri
adalah
metode penentuan kadar air dengan cara penguapan dengan pemanasan pada suhu 1050C lalu bobot ditimbang sampai bobot tetap. Metode ini kurang efektif karena terdapat juga senyawa lain yang dapat menguap dengan pemanasan seperti minyak atsiri. Jika metode gravimetri akan digunakan, maka simplisia tidak boleh mengandung senyawa yang akan menguap dengan pemanasan. Karl Fischer adalah metode penentuan kadar air dengan titrasi menggunakan pereaksi Karl Fischer yang terdiri atas sulfur oksida, I2, methanol dan piridin. Metode Karl Fischer jarang digunakan karena reagen yang digunakan berbahaya dan simplisia yang
15
digunakan harus terbebas dari kandungan yang dapat bereaksi dengan reagen Karl Fischer. Pada
destilasi
azeotrop,
senyawa
azeotrop
yang
dapat
digunakan adalah toluena, xilen dan benzene. Senyawa azeotrop yang akan digunakan harus dijenuhkan terlebih dahulu agar senyawa
tersebut
tidak
menyerap
air
dari
simplisia.
Cara
menjenuhkan senyawa azeotrop dapat dilakukan dengan 2 cara yakni destilasi dan ekstraksi cair-cair. Ekstraksi cair-cair jarang digunakan karena prinsipnya partisi sehingga kejenuhan dari senyawanya sulit untuk diketahui. Penentuan kadar air pada percobaan ini dilakukan dengan metode azeotrop karena terdapatnya beberapa kekurangan pada metode gravimetric dan metode Karl Fischer. Senyawa azeotrop yang digunakan adalah toluena karena memiliki titik didih yang rendah dan tidak bercampur dengan air. Sebelum digunakan, toluena harus dijenuhkan terlebih dahulu. Penjenuhan toluen ini bertujuan
agar
air
dari
sampel
atau
simplisia
yang
telah
terkondensasi tidak diikat oleh toluen, apabila toluen belum dijenuhkan maka air dalam simplisia dapat terikat dan kadar air yang terukur akan berkurang. Kejenuhan dari toluen dapat dilihat dengan cara menambahkan air ke dalam bejana, jika air yang ditambahkan volumenya tidak berkurang berarti toluen sudah terjenuhkan. Pada saat pemanasan, air akan menguap dan terkondensasi lalu berada pada bagian bawah karena bobot jenis air (1 g/mL) lebih besar daripada toluen (0,87 g/mL). Jumlah air yang terkondensasi adalah jumlah dari air sisa penjenuhan toluena dan air dari simplisia. Sehingga jumlah air yang terkandung dalam simplisia adalah hasil pengurangan dari jumlah total dengan air sisa dari penjenuhan toluena. Pada hasil penentuan kadar air simplisia Hibisci sabdariffae flos, diperoleh jumlah air yang terkondensasi dari simplisia adalah 0,8 ml dari 2 gram simplisia. Dari hasil perhitungan kadar air, diperoleh
16
kadar air pada simplisia adalah 40 % (v/b). Menurut MMI, kadar air dalam simplisia tidak boleh lebih dari 10%. Hasil yang diperoleh ini tidak memenuhi syarat yang diperbolehkan. Pada saat percobaan, penjenuhan toluena tidak dilakukan sampai volume air yang ditambahkan pada toluena tetap karena keterbatasan waktu, jadi kemungkinan kadar air dalam simplisia ada yang terikat dengan toluena. Namun ada kemungkinan juga bahwa kadar air yang besar pada simplisia bunga rosella berasal dari alat (tabung kondensor) yang masih menyimpan air karena sebelum digunakan untuk percobaan, alat tersebut masih menyimpan air pada dindingnya dan tidak dikeringkan terlebih dahulu.
4. Penetapan kadar minyak atsiri Minyak atsiri adalah metabolit sekunder pada tumbuhan yang bersifat mudah menguap. Penentuan kadar minyak atsiri adalah untuk mengetahui seberapa banyak minyak atsiri yang terkandung dalam tumbuhan tertentu. Minyak atsiri dapat dipisahkan dari tanaman melalui metode destilasi Stahl. Prinsip dari destilasi Stahl adalah terpisahnya minyak atsiri dari simplisia dengan penguapan dan terbentuk destilat air pada kondensor yang akan mengalami kondensasi menjadi air kembali. Minyak atsiri yang menguap akan mengalami kondensasi menjadi bentuk cair lagi dan terpisah ke tabung yang berbeda. Pada percobaan, simplisia bunga cengkeh yang telah ditimbang di masukan ke dalam labu bundar berserta batu didih. Penambahan batu didih ini berfungsi untuk mengurangi adanya bumping. Penentuan kadar minyak atsiri dilakukan dengan metode distilasi Stahl dengan prinsip steam distillation. Pada destilasi ini digunakan xilen yang berfungsi untuk mengikat minyak atsiri agar memudahkan dalam pengukuran karena memiliki kemampuan untuk mengikat minyak atsiri. Pada dasarnya, beberapa jenis minyak atsiri ada yang memiliki berat jenis sama dengan air sehingga penambahan xilen ini
17
bertujuan untuk mencegah tercampurnya minyak atsiri dengan air yang akan membentuk emulsi. Penentuan kadar minyak atsiri ini didasarkan pada penambahan volume xilen akibat pengikatan minyak atsiri. Air dan xilen dimasukan ke dalam bejana berhubungan sehingga didapat permukaan sejajar dan xilen dapat terukur pada dengan skala yang terdapat pada tabung bejana. Jumlah minyak atsiri yang terkandung dalam simplisia adalah jumlah total minyak atsiri-xilen dikurangin jumlah awal xilen yang digunakan. Menurut European Pharmacopoeia, kadar minyak atsiri pada Syzygii aromatici flos tidak boleh kurang dari 15% (v/b). Dari hasil percobaan, kadar minyak atsiri yang diperoleh adalah 9,5% (v/b). Kadar minyak atsiri hasil percobaan tidak memenuhi syarat yang telah ditentukan, hal ini dikarenakan percobaan hanya dilakukan sekitar 3 jam sehingga ada kemungkinan masih ada minyak atsiri yang belum terdestilasi dan ada kemungkinan juga minyak atsiri yang didapat menguap karena tabung penampung minyak atsiri terbuka sedangkan minyak atsiri memiliki sifat mudah menguap.
5. Pembuatan dan karakterisasi amilum Amilum adalah senyawa hasil fotosintesis berupa polisakarida yang tidak larut dalam air serta mengandung amilosa dan amilopektin. Penetapan kadar amilum bertujuan untuk mengetahui seberapa banyak amilum yang terkandung dalam suatu tumbuhan. Tepung berbeda dengan amilum, karena tepung hanya mengalami proses penggilingan menjadi serbuk yang masih mengandung senyawa lain didalamnya. Sedangkan amilum, setelah dihaluskan, mengalami proses filtrasi untuk memisahkan amilum tersebut dari senyawa lain. Terdapat perbedaan antara amilosa dan amilopektin. Amilosa terdiri dari 250-300 unit D-glukosa yang terikat dengan ikatan α-1,4 glikosidik sehingga molekulnya merupakan rantai lurus, larut dalam air panas, dan bereaksi dengan iodin menghasilkan warna biru.
18
Sedangkan amilopektin tidak larut dalam air, bereaksi dengan iodin menghasilkan warna merah keunguan, dan terdiri atas molekul Dglukosa yang sebagian besar mempunyai ikatan 1,6-glikosidik dan 20-26 ikatan 1,4-glikosidik di mana adanya molekul 1,6-glikosidik ini menyebabkan rantai bercabang. Amilum yang dibuat dalam percobaan adalah Amylum oryzae. Pembuatan amilum dilakukan dengan cara menambahkan air pada beras,
di
haluskan
menggunakan
blender,
lalu
disaring
menggunakan kain batis. Filtrat hasil penyaringan didiamkan selama beberapa hari dalam lemari pendingin agar amilum mengendap karena amilum tidak larut dalam air dingin serta untuk mencegah dari pertumbuhan mikroba. Penambahan air pada proses menghaluskan beras bertujuan untuk melarutkan senyawa-senyawa lain, sehingga senyawa selain amilum dapat dipisahkan dengan amilum setelah mengendap. Ampas yang didapat dari filtrasi adalah dinding sel yang telah rusak serta protein yang tidak larut dalam air. Amilum yang diperoleh kemudian dikeringkan dalam keadaan terbuka di suhu ruangan untuk menghilangkan kadar airnya. Amilum yang belum mengering sepenuhnya berbentuk gumpalan-gumpalan besar berwarna putih, namun setelah dikeringkan dan dihaluskan, amilum berbentuk serbuk halus berwarna putih. Pengeringan amilum tidak dapat dilakukan dengan pemanasan, karena amilum akan menjadi lengket. Hal ini disebabkan karena amilum akan pecah pada suhu gelatinasinya. Pada percobaan, diperoleh
amilum beras sebesar 16,045%.
Analisis makroskopik menunjukan bahwa amilum berbentuk serbuk halus, berwarna putih, dan tidak berbau. Sedangkan analisis mikroskopik amilum menunjukkan amilum berbentuk polygonal, berukuran 2-10 µm, butir pati tunggal dan majemuk, lamela tidak terlihat jelas, hilum tidak terlihat jelas, kadang terdapat rekahan ditengah butir pati. Pemerian pati beras menurut Farmakope Indonesia edisi IV adalah serbuk halus, berwarna putih dengan
19
mikroskopik butir bersegi banyak ukuran 2 – 5 µm, tunggal atau majemuk bentuk bulat telur ukuran 10-20 µm, hilus ditengah tidak terlihat jelas, tidak ada lamela konsentris. Pemerian Amylum oryzae hasil percobaan sesuai dengan pemerian pada FI IV, dan pengamatan mikroskopik pada percobaan terdapat perbedaan pada ukuran serta keberadaan lamela.
VII. KESIMPULAN 1.
Kadar abu total simplisia Hibisci sabdariffae flos hasil percobaan adalah 5,2%, kadar abu tidak larut asam simplisia Hibisci sabdariffae flos adalah …% , kadar abu larut air simplisia Hibisci sabdariffae flos adalah …%.
2.
Kadar sari larut air dari simplisia Hibisci sabdariffae flos adalah 528,5625% dan kadar sari larut etanol dari simplisia Hibisci sabdariffae flos adalah 12,844%.
3.
Kadar air yang diperoleh pada simplisia Hibisci sabdariffae flos adalah 40 % (v/b)
4.
Kadar minyak atsiri yang diperoleh pada simplisia Syzygii aromatic flos adalah 9,5% (v/b)
5.
Kadar amilum dalam beras (Amylum oryzae) adalah 16,4055% dengan pemerian serbuk halus, warna putih, tidak berbau. Amilum yang teramati secara mikroskopis berbentuk polygonal, berukuran 2-10 µm, butir pati tunggal dan majemuk, lamela tidak terlihat jelas, hilum tidak terlihat jelas, kadang terdapat rekahan ditengah butir pati.
VIII. DAFTAR PUSTAKA Cahyono, B., dan Suzery, M.2011. Aspek Praktis Metode Pemisahan Bahan Alam Organik. Semarang : Badan Penerbit Universitas Diponegoro. Halaman 15-20.
20
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman `107-109. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2011. Farmakope Herbal Indonesia Suplemen II. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 63-66, 104. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 108. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1989. Materia Medika Indonesia Jilid V. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 179. Komisi Farmakope Eropa. 2005. European Pharmacopoeia 5.0. Uppsala : Dewan Eropa. Halaman 1334. Kusmardiyani,
Siti.
Tanpa
tahun.
Analisis
Makroskopik
dan
Mikroskopik Simplisia Versi 22SK004. Bandung: Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung. Halaman 190-200.
21
