Multiplikasi Tunas Dari Tunas in Vitro

LAPORAN PRAKTIKUM KULTUR JARINGAN TANAMAN

MULTIPLIKASI TUNAS DARI TUNAS IN VITRO (TANAMAN ANGGREK DAN KRISAN)

Disusun Oleh : Puji Hanani 4411413023

JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS NEGERI SEMARANG 2016

MULTIPLIKASI TUNAS DARI TUNAS IN VITRO (TANAMAN ANGGREK DAN KRISAN)

1. Tujuan  melatih ketrampilan mahasiswa dalam melakukan penggandaan tunas yang efektif dan efisien 2! Lan"a#an T$%&'  Prduksi !i!it melalui kultur jaringan memerlukan !e!erapa tahapan" yait multiplikasi tunas" inisiasi dan perkem!angan perakaran serta aklimatisasi" #$erg dan %heringtn 1&'4(. )erdasarkan jumlah kelipatan tunas dari setiap perid su!kultur" maka jumlah planlet yang dapat diprduksi per satuan waktu dapat diperkirakan. Pennel #1&'*( mem!erikan frmulasi untuk menghitung ptensi jumlah  planlet yang dapat dihasilkan se+ara teritis. Per!anyakan tanaman melalui kultur jaringan pada dasarnya merupakan  pem!uktian knsep ttiptensi sel. ,tiptensi merupakan suatu fenmena dimana sel tanaman mempunyai kemampuan untuk !eregenerasi menjadi tanaman utuh !ila ditum!uhkan pada lingkungan yang ++k #Pierik" 1&'*(. -enurut $unawan #1&&2( kultur jaringan adalah suatu metde untuk mengislasi !agian!agian tanaman seperti sel" prtplasma" jaringan" rgan serta menum!uhkannya dalam kndisi aseptik  sehingga !agian!agian terse!ut dapat memper!anyak diri dan !eregenerasi menjadi tanaman utuh kem!ali.  Pada prinsipnya kultur jaringan memerlukan tiga tahap utama. ,ahap pertama meliputi usahausaha untuk menjaga agar kultur yang ditum!uhkan dapat !erkem!ang dengan !aik dalam kndisi aseptik. ,ahap kedua adalah melakukan usaha agar dapat terjadi multiplikasi #penggandaan( prpagula dengan +epat" sehingga diperleh tanaman dalam jumlah !esar. ,ahap ketiga merupakan tahap persiapan pemindahan  planlet ke media tanam dalam pt/tanah #-urashige" 1&&*(. Perkem!angan teknik   per!anyakan kln melalui kultur in itr mengarah kepada ptimasi !e!erapa aspek   penting" yaitu gentipe dari sum!er !ahan tanaman yang digunakan media" meliputi kmpsisi media dan at pengatur pertum!uhan tanaman yang digunakan lingkungan tum!uh kultur dan fisilgi jaringan tanaman se!agai eksplan #attimena et al." 1&&2(. -enurut $unawan #1&&2( ke!erhasilan dalam penggunaan metde kultur   jaringan sangat !ergantung pada media yang digunakan. -edia kultur jaringan tanaman menyediakan tidak hanya unsurunsur hara makr dan mikr" tetapi juga

kar!hidarat yang umumnya !erupa gula untuk menggantikan kar!n yang !iasanya didapat dari atmsfer melalui ftsintesis. etherell #1&'2( menam!ahkan satu atau dua ma+am itamin dan hrmn tanaman untuk merangsang terjadinya pertum!uhan dan atau pengaturan jenis pertum!uhan. %alah satu frmulasi yang sering dipakai se!agai media kultur adalah -urashige%kg #-%( yang ditemukan leh ,shi -urashige. rmulasi dasar mineral dari -% dapat digunakan untuk sejumlah !esar  spesies tanaman pada per!anyakan se+ara in itr #etherell" 1&'2(. Dalam per!anyakan tanaman melalui kultur jaringan dapat ditempuh melalui dua jalur" yaitu rgangenesis dan em!rigenesis smatik. 5alur em!rigenesis smatik di masa mendatang le!ih mendapat perhatian karena !i!it dapat !erasal dari satu sel smatik sehingga !i!it yang dihasilkan dapat le!ih !anyak di!andingkan melalui jalur rgangenesis. Disamping itu" sifat perakarannya sama dengan !i!it asal  !iji. 6at pengatur tum!uh terdiri dari glngan sitkinin dan auksin. 7uksin mempunyai peran ganda tergantung pada struktur kimia" knsentrasi" dan jaringan tanaman yang di!eri perlakuan. Pada umumnya auksin digunakan untuk menginduksi  pem!entukan kalus" kultur suspensi" dan akar" yaitu dengan mema+u pemanjangan dan pem!elahan sel di dalam jaringan kam!ium #Pierik" 1&'*(. 8ntuk mema+u  pem!entukan kalus em!rigenik dan struktur em!ri smatik seringkali auksin diperlukan dalam knsentrasi yang relatif tinggi. 6at pengatur tum!uh tanaman !erperan penting dalam mengntrl prses  !ilgi dalam jaringan tanaman #Daies" 1&&9 $a!a" 2009(. Perannya antara lain mengatur ke+epatan pertum!uhan dari masingmasing jaringan dan mengintegrasikan  !agian!agian terse!ut guna menghasilkan !entuk yang kita kenal se!agai tanaman. 7ktiitas at pengatur tum!uh di dalam pertum!uhan tergantung dari jenis" struktur  kimia" knsentrasi" gentipe tanaman serta fase fisilgi tanaman #%atyaathi et al., 2004 $erge" 1&&3Ddds dan !erts" 1&'2(. Dalam prses pem!entukan rgan seperti tunas atau akar ada interaksi antara at pengatur tum!uh eksgen yang ditam!ahkan ke dalam media dengan at pengatur tum!uh endgen yang diprduksi leh jaringan tanaman #inata" 1&'*(. Penam!ahan auksin atau sitkinin ke dalam media kultur dapat meningkatkan knsentrasi at pengatur tum!uh endgen di dalam sel" sehingga menjadi ;faktr pemi+u< dalam prses tum!uh dan perkem!angan  jaringan. 8ntuk mema+u pem!entukan tunas dapat dilakukan dengan memanipulasi dsis auksin dan sitkinin eksgen #Pnsapaya et al., 1&'&(. ! Ruu#an Ma#a*a+ 

)agaimana +ara melakukan penggandaan tunas tanaman anggrek dan krisan yang efektif dan efisien= ,! A*a- "an Ba+an  a! A*a-  >aminar 7ir lw ?a!inet #>7( yang dilengkapi lampu 8@ #ultra • ilet( )tl kultur #lume 100 ml( dan penutup • %kalpel" pinset dan +awan petri steril • >ampu spiritus • %prayer lume 900 ml • .! Ba+an  ,unas in itr anggrek dan krisan • -edia -% yang mengandung )7 dan A77 dengan per!andingan 7 • •

#Binetin *"9 ppm C A77 9 ppm( dan ) #Binetin 9 ppm C A77 9 ppm( %pirtus/alkhl

/! a&a K$&ja  1. -enyiapkan media -% ditam!ah 6P, dengan dua km!inasi" yaitu )7 #*"9 ppm

C 9 ppm( dan )7 #*"9 ppm C A77 *"9 ppm( 2. -engam!il satu +lump tunas yang telah ditum!uhkan dalam medium in vitro. 3. Be dalam setiap !tl kultur ditanam satu tunas dengan menggunakan piset" s+alpel yang steril ke medium kultur  4. -eletakkan !tl kultur di atas rak kutur didalam ruang inku!asi tertutup !ersuhu 24?29? dalam kndisi terang 24 jam

6! Ha#'* N%!

F%-%

K$-$&anan

1!

•

Hari mulai ter!entuk tunas !aru : !elum

• •

•

ter!entuk  5umlah tunas nrmal : 4 Pertam!ahan tinggi :  !elum !ertam!ah Pertam!ahan jumlah daun/

•

•

2!

•

!elum

 !ertam!ah -rflgi tunas: kun+up masih

Tanaan K&'#an

tunas:

ke+il"

!elum

ter!entuk daun !aru -edia agar padat Hari mulai ter!entuk tunas !aru : !elum

• •

•

ter!entuk  5umlah tunas nrmal : 4 Pertam!ahan tinggi :  !elum !ertam!ah Pertam!ahan jumlah daun/ tunas: !elum  !ertam!ah -rflgi tunas: kun+up

Tanaan An&$ 

masih ke+il" !elum ter!entuk daun !aru

3! P$.a+a#an ,eknik multiplikasi tunas merupakan teknik yang efisien untuk 

reprduksi tum!uhan. ,unas" !aik yang diperrleh dari tum!uhan yang hidup di kndisi alamiah maupun in itr dapat diinduksi untuk menggada dengan  perlakuan tertentu. Penggandaan tunas pada umumnya memerlukan 6P,. Bm!inasi antara sitkinin dengan auksin dapat mema+u mrfgenesis dalam pem!entukan tunas #li+k et al., 1&&3(. Pada tanaman inggu"  pem!entukan tunas adentif dari !atang dapat diperleh dengan menggunakan media -% C )7 1"9 mg/l C 2.4D 0"3 mg/l #>estari dan Husni" 1&&*(. ,unas adentif pada tanaman daun dewa diperleh dari kalus yang diinisiasi menggunakan media -% C 2.4D 0"1 mg/l C )7 0"1 mg/l C kinetin 2 mg/l kemudian dipindah ke media tanpa at pengatur tum!uh. 6at pengatur tum!uh 2.4D !erperan se!agai inisiasi kalus" dengan adanya )7 maka pem!entukan tunas adentif menjadi le!ih aktif #li+k et al., 1&&3(. 5enis at pengatur tum!uh yang !er!eda dari glngan yang sama seperti kinetin" eatin dan 2iP kadang di!utuhkan untuk mema+u mrfgenesis yang le!ih ptimal #$a!a" 2009(. Penggunaan at pengatur tum!uh di dalam kultur   jaringan tergantung pada tujuan atau arah pertum!uhan tanaman yang diinginkan. 6at pengatur tum!uh )7 #!enyl adenin( paling !anyak digunakan untuk mema+u penggandaan tunas karena mempunyai aktiitas yang kuat di!andingkan dengan kinetin #6aer dan -apes" l&'2(. )7 mempunyai struktur  dasar yang sama dengan kinetin tetapi le!ih efektif karena )7 mempunyai gugus !enil #$erge dan %heringtn" l&'4(. li+k et al. #1&&3( menyatakan  !ahwa pada umumnya tanaman memiliki respn yang le!ih !aik terhadap )7 di!andingkan terhadap kinetin dan 2iP sehingga )7 le!ih efektif untuk   prduksi tunas in vitro. Hasil yang diperleh yaitu tanaman anggrek dan krisan !elum menunjukkan pertum!uhan yang maksimal. )elum ter!entuk tunas !aru"  !elum ada pertam!ahan tinggi tunas dan !elum ada pertam!ahan jumlah daun/ tunas. Bemungkinan hal ini adalah kurangnya waktu yang di!erikan untuk  mengamati

pertum!uhan

tanaman

su!

kultur dan

tanaman

terse!ut

memerlukan waktu yang lama untuk tum!uh. 4! S'5u*an 1. -edia yang digunakan untuk multiplikasi atau su!kultur tanaman anggrek 

dan krisan yaitu media -% yang ditam!ahkan dengan 6P, kinetin dan

 A77 2. )elum terjadi pertum!uhan tanaman anggrek maupun tanaman krisan karena tanaman memerlukan waktu yang lama untuk mem!entuk tunas yang !aru. ! Da7-a& Pu#-aa Daies" P.5. 1&&9. ,he Plant hrmne their nature" ++uren+e and fun+tin. En Dais #ed(. Plant Hrmne and ,heir le in Plant $rwth Deelpment. Drdre+ht -artinus Aijhff Pul!lisher  $a!a" @.P. 2009. Plant $rwth egulatr. En A. ,rigian and D.5 $ray #eds.(. Plant ,issue ?ulture and Deelpment. ?? Press. >ndn. P. '*100 $erge" F.. 1&&3. Plant Prpagatin !y ,issue ?ulture. Part 1 ,h ,e+hnlgy FGegeti+. Fngland. P. 131$erge" F. and P.D. %heringtn. 1&'4. Plant Prpagatin !y ,issue ?ulture. 7nd!k and Dire+try f ?mmer+ial >a!ratries. FGegeti+. Fngland. '0& p 10! La5'&an a.jawa!an pertanyaan : 1. di dalam per+!aan ini tidak dilakukan sterilisasi eksplan karena eksplan yang diam!il dari tunas in itr yang sudah dikulturkan. 2. media yang digunakan menggunakan 6P, )7 dan A77 karena keduanya termasuk  dalam hrmn sitkinin dan auksin. Penggunaan sitkinin dan auksin dalam satu media dapat mema+u prliferasi tunas karena adanya pengaruh sinergisme antara at  pengatur tum!uh terse!ut #,hrpe" 1&'* Daies" 1&&9(. ?nthnya pada tanaman !at langka pulasari # Alyxia stellata( km!inasi )7 dan A77 menghasilkan tunas le!ih !anyak #>estari dan -ariska" 1&&2(" tanaman krisan menggunakan km!inasi )7 1 mg/l C $73 mg/l diperleh faktr multiplikasi tunas tertinggi #Barim et al., 2003(" dan tanaman tangguh menggunakan kinetin 3 mg/l C E77 10 mg/l #>estari et  al., 1&&&(. 3.6P, yang menunjukkan hasil ter!aik yaitu 7 dengan knsentrasi Binetin *"9 ppm dan A77 9 ppm. karena tanaman le!ih ++k pada 6P, terse!ut. 4.su! kultur dilakukan untuk memper!anyak tunas agar hasil yang diinginkan !anyak  dan memperleh hasil yang diinginkan 9. ada. ,unas yang a!nrmal pada hasil yaitu tunas anggrek karena media yang digunakan men+ari/ kntam.

 !. >ampiran +ara pem!uatan -edium : 1! M$.ua- La&u-an #-% 8PT 'n$-'n "an NAA

• • • •

-enim!ang se!anyak 0"1 gram A77 dan 0"1 gr )7P atau kinetin -elarutkan dalam 100 ml akuades masingmasing stk 6P, dalam erlenmeyer  8ntuk 6P, Binetin ditam!ahkan H?> 10I %eddangkan 6P, A77 ditam!ahkan A7OH 10I

2! M$.ua- M$"'u A (M$"'u MS "an K'n$-'n 39/ 55 : NAA / 55) -engam!il se!anyak *"9 ml 6P, kinetin yang telah di!uat dan 9 ml •

 A77 yang telah di!uat -edia -% di+ampurkan dengan larutan terse!ut. • ! M$.ua- M$"'u (M$"'u MS "an K'n$-'n 39/ 55 : NAA 39/ 55) -engam!il se!anyak *"9 ml 6P, kinetin yang telah di!uat dan *"9 ml • •

 A77 yang telah di!uat -edia -% di+ampurkan dengan larutan terse!ut.