TEKNIK STERILISASI SECARA MIKROBIOLOGIS Fitri Ramdhana1, Hasrul Satria Nur 2,3 1. Program studi Farmasi, FMIPA, Universitas am!ung Mang"urat, #alan #end A $ani %m 3&, 'an(ar!aru, )*)13, Indonesia 2. Program studi 'iologi, FMIPA, Universitas Universit as am!ung Mang"urat, #alan #end A $ani $ani %m 3&, 'an(ar!aru, )*)13, Indonesia 3. a!oratorium a!orato rium Mi"ro!iologi, Mi"ro!iologi , FMIPA, FMIPA, Universitas Universi tas am!ung Mang"urat, #alan #end A $ani %m %m 3&, 'an(ar!aru, )*)13, Indonesia +mail - itriramdhana/gmail.0om itriramdhana/gmail.0om
Abstrak Steril Sterilisa isasi si adalah adalah roses roses mem!u mem!unuh nuh semua semua mi"roo mi"roorg rgani anisme sme terma termasu" su" sora sora !a"ter !a"terii ada ada !enda !enda ang ang telah telah dide"ontaminasi dengan teat. Sterilisasi ada ra"ti"um ini mengguna"an metode ua anas !asah oto"la4 dan metode anas "ering oven4. 5e"ni" asetis sangat !ereran untu" menghindar"an mi"roorganisme mi"roorganisme dari "ontaminan ang daat mengham!at ertum!uhan mi"ro!a Pemindah!ia"an se0ara asetis dila"u"an dari !ia"an menu(u media agar miring. Melalui ra"ti"um ini daat di"etahui tu(uan utama sterilisasi adalah 14 untu" men0egah inlasi ada manusia, manusia, he6an dan tum!uhan, tum!uhan, 24 untu" men0egah men0egah ma"anan ma"anan dan lainlain lainlain men(adi rusa", 34 untu" men0egah men0egah gangguan "ontaminasi terhada mi"roorganisme, 74 untu" men0egah "ontaminasi !ahan!ahan ang dia"ai. Selain itu, melalui ra"ti"um ini (uga di"etahui !ah6a te"ni" asetis memerhati"an !e!eraa hal aitu 14 leta" enger(aan, 24 "e!ersihan "e!ersihan temat temat enger(aan enger(aan,, 34 enggunaan enggunaan antiseti" antiseti",, 74 enanganan enanganan as"ae"e as"ae"er(aa r(aan, n, 84 enangana enanganan n eralatan, &4 en0egahan en0egahan "ontaminasi. )4 ersiaan ersiaan ang teat, 94 enggunaan enggunaan sarung tangan dan :4 :4 higienisitas.
Abstract Sterili;a Steril i;atio tion n is the ro ro0e 0ess ss o "il "illin ling g all mi0 mi0roo roorg rgani anisms sms in0 in0lud luding ing !a0 !a0ter terial ial so sores res on o!( o!(e0t e0tss tha thatt had !ee !een n de0ontaminated roerl. Sterili;ation in this la! using 6et steam auto0laving4 and dr heat method oven4. Aseti0 te0hni
1.
Pendahuluan
Ster terilisasi aitu roses mem!unuh semua mi"roorg mi"roorganism anismee termasu" termasu" sora !a"teri !a"teri ada !enda ang telah dide"ontaminasi dengan teat =1>. 5u(uan sterilisa sterilisasi si adalah adalah untu" memusnah memusnah"an "an semua semua !entu" !entu" "ehiduan "ehiduan mi"roorg mi"roorganism anismee atogen atogen termasu" termasu" sora, sora, ang mung"in telah ada ada eralatan "edo"teran dan era6atan ang dia"ai =2>. Sterilisasi dila"u"an di
dalam ra"ti"um mi"ro!iologi !ertu(uan agar se!elum mela"u"an ra"ti"um, alatalat ang diguna"an telah ter terster terilis ilisas asii agar agar tida tida" " ada ada mi"r i"ro!a o!a ang ang meng meng"o "ont ntam amin inas asii dala dalam m ra" ra"ti ti"u "um m ang ang a"an a"an dila"u"an, dila"u"an, "arena "arena a"an sangat sangat !erengar !erengaruh uh terhada terhada hasil ra"ti"um ang a"an di"er(a"an =3>. Pe"e Pe"er( r(aa aan n di la!o la!ora rato tori rium um mi"r mi"ro! o!io iolo logi gi sela selalu lu meng menggu guna na"a "an n te"n te"ni" i" ase aseti ti" " untu untu" " men0 men0eg egah ah
"ontaminasi mi"roorganisme dan men0egah "ontaminasi ruangan dan ersonil dengan mi"roorganisme =7>. 5e"ni" asetis diguna"an sean(ang "egiatan !erlangsung, !ai" alat, !ahan, ling"ungan se"itar mauun ra"ti"anna. 5e"ni" asetis sangat !ereran untu" menghindar"an mi"roorganisme dari "ontaminan ang daat mengham!at ertum!uhan mi"ro!a =8>. Mi"ro!a memili"i "ara"teristi" serta 0iri ang !er!eda dalam ersaratan ertum!uhanna. %ara"teristi" ersaratan ertum!uhan mi"ro!a inilah ang mene!a!"an !erma0amma0amna media enun(ang ertum!uhan mi"ro!a =&>. ?alam mela"u"an "egiatan terse!ut dierlu"an "eahlian dan "eteramilan "husus. Hal inilah ang melatar !ela"angi dila"sana"anna ra"ti"um ini.
.
Met!de Prakt"ku#
Ster"l"sas" den$an #et!de ua% %anas basah. @to"la diisi dengan air hingga dasar ang !erlu!ang lalu dileta"""an di atas tung"u "omor gas "emudian dinala"an. Mulut la!u erlenmeer ditutu raat dengan "ertas ang di dalamna terdaat media ang a"an disteril"an. Medium ang a"an disteril"an dimasu""an "e dalam oto"la, "emudian ditutu dengan mengeras"an se"runa. Pia engatur temat "eluar ua air di!iar"an teta ter!u"a hingga semua udara terdesa" "eluar "emudian ditutu hingga te"anan ua di dalam oto"la nai" samai 2 atm dan suhu 121 B, selama 183* menit. Setelah sterilisasi selesai, ditunggu auto"la hingga dingin se!elum di!u"a, dan "eran air un di!u"a se0ara erlahanlahan. Ster"l"sas" den$an #et!de ker"n$. Alatalat gelas ang a"an disterilisasi di!ung"us dengan "ertas !e"as lalu dimasu""an "e dalam oven. Pengaturan suhu oven adalah 1)*19* B selama 1,82 (am. Pe#"ndahb"akan secara ase%t"s. Al"ohol )* C disemrot"an ada alas temat !e"er(a dan ada tangan. 5a!ung rea"si !erisi "oloni dan media miring dileta""an ada tangan "iri. #arum ose di0elu"an ada al"ohol )* C lalu dii(ar"an hingga menala, dila"u"an se!ana" 3 "ali. Mulut ta!ung rea"si !erisi "oloni di!u"a dan dile6at"an ada ai, lalu "oloni diam!il dengan menemel"an (arum ose dan diadu" sedi"it ada "oloni, serta diindah"an "e media miring. Pemindahanna un (uga tida" (auh(auh dari !unsen. %aas ada ta!ung rea"si dileas, !aru ditanam"an o"ulan "e media miring dengan metode enggoresan ;ig;ag, setelah itu mulut ta!ung rea"si dile6at"an ada ai dan ditutu "em!ali.
&.
'as"l dan Pe#bahasan
5u(uan utama sterilisasi adalah 14 untu" men0egah inlasi ada manusia, he6an dan tum!uhan, 24 untu" men0egah ma"anan dan lainlain men(adi rusa", 34 untu" men0egah gangguan "ontaminasi terhada mi"roorganisme, 74 untu" men0egah "ontaminasi !ahan!ahan ang dia"ai =)>. Sterilisasi "ering merua"an sterilisasi dengan udara anas =9>. Alat ang diguna"an adalah oven. Bara ini umum dila"u"an untu" mensteril"an eralatan gelas seerti 0a6an etri, ta!ung rea"si, dan alatalat gelas lainna. Prinsi "er(a dari alat ini le!ih sederhana aitu intu oven di!u"a dan semua alatalat ang a"an disteril"an disusun rai =:>. Setelah itu intu oven ditutu, suhu diseting ada ang"a 1&*19*B selama 1 2 (am. %euntungan dari emanasan "ering adalah tida" adana ua air ang mem!asahi !ahan atau alat ang disteril"an =1*>. Sterilisasi !asah atau sterilisasi anas lem!a! daat ditera"an dengan 0ara emanasan mengguna"an ua air dengan te"ananauto"la4 ada suhu ang tinggi =11>. Sterilisasi !asah ini !iasana diguna"an ada alat alat ang tida" tahan anas, ada sterilisasi !asah ini mengguna"an suhu 121 B selama 183* menit ada auto"la =12>. Proses emindahan mi"ro!a se0ara aseti" sangat mem!utuh"an "etelitian ang tinggi. 5e"ni" asetis ditu(u"an untu" men(aga sterilitas "eti"a menangani eng"ulturan mi"roorganisme untu" men0egah "ontaminasi terhada "ultur mi"roorganisme ang diingin"an. ?asar enggunaan te"ni" aseti" adalah adana !ana" arti"el ang mengandung mi"roorganisme ang mung"in daat masu" "e dalam alat la!oratorium atau mengenda di area "er(a. Pertum!uhan mi"ro!a ini tida" diingin"an dan daat memengaruhi atau mengganggu hasil dari suatu er0o!aan. Penggunaan tehni" aseti" meminimalisir arti"el ang diguna"an terhada agen engontaminasi =13>. Ada !e!eraa aturan umum ang harus dierhati"an dalam tehni" asetis, aitu ertama leta" me(a "er(a, se!ai"na (auh dari sesuatu ang daat men0ita"an aliran udara, misalna tida" ada (endela ang ter!u"a, tida" de"at dengan intu ang selalu di!u"atutu dan (auh dari lalulintas orang lain. %edua, "e!ersihan me(a "er(a, harus !ersih dari "otoran dan !enda!enda ang tida" a"an diguna"an. %otoran sering"ali sulit di!ersih"an ada sudutsudut ruang. %etiga, antiseti", mengusa me(a "er(a dengan antiseti" atau sena6a em!ersih lain se!elum diguna"an. ?i se!agian !esar la!oratorium umumna mengguna"an etanol )*C untu" mem!ersih"anna. Sedia"an etanol ada osisi selalu de"at dengan me(a =17>.
%eemat, selesai !e"er(a, se!ai"na me(a "er(a di"osong"an dari eralatan dan !ersih"an lagi. Semua eralatan ang diguna"an harus steril. Se!ai"na semua eralatan ang telah disterilisasi di!eri la!el. #i"a menemu"an alat ang seertina telah disterilisai tai masih ragu terhada sterilitasna ma"a se!ai"na (angan diguna"an. 'ung"us eralatan !ai" alat steril se"ali a"ai atau !u"an =17>. %elima, engaturan eralatan, alatalat di me(a "er(a diatur sedemi"ian rua sehingga meminimalisir ergera"an tangan. Alatalat ang !iasana diguna"an dengan tangan "anan (arum ino"ulum, iller, iet4 leta""an dise!elah "anan !egitu (uga se!ali"na ra" ta!ung, 0a6an etri, erlenmeer4 ter"e0uali untu" tangan "idal. ?i !agian tengah me(a "er(a disedia"an ruang laang untu" !e"er(a. %eenam, mem!a"ar mulut atau !agian tei dari suatu alat, ini daat mem!unuh mi"roorganisme ang menemel =18>. %etu(uh, ersiaan ang matang, segala eralatan dan !ahan ang di!utuh"an telah disia"an seenuhna. Semua !ahan dan alat untu" rosedur tertentu telah diersia"an di me(a "er(a. #angan samai meninggal"an me(a "er(a untu" mengam!il sesuatu ang terlua atau tertinggal. Perhitung"an semua ang dierlu"an !eserta 0adanganna. %edelaan, mema"ai sarung tangan dan ganti se0ara !er"ala. Sarung tangan mem!antu melindungi dari tumahan !ia"an atau !ahan "imia !er!ahaa. 5ida" mengguna"an sarung tangan dirasa tida" !ermasalah (i"a materi dan !a"teri ang diteliti diasti"an tida" !er!ahaa. %esem!ilan, men0u0i tangan se!elum dan sesudah !e"er(a. Bu0i tangan dengan desine"tan atau sa!un !ila tida" ada desine"tan. Bu0i tangan daat mem!ilas mi"roorganisme ang ada di tangan =18.>
(.
Kes"#%ulan
Prinsip dasar sterilisasi peralatan dan bahan yang umum digunakan di laboratorium mikrobiologi didasarkan pada jenis alat dan jenis media yang akan digunakan. Teknik aseptik dan prosedur penggunaan peralatan didasarkan pada jenis biakan dan media biakan yang akan digunakan. Sterilisasi dengan metode kering (dry hot
air) dilakukan menggunakan otoklaf dan uap panas basah (moist wet heat) dilakukan menggunakan oven suhu tinggi.
)a*tar Acuan =1>
I. S. Arie. Penggunaan Alat Sterilisasi Air Minum ?engan Mengguna"an Ultra Diolet UD4 ?alam s"ala Rumah 5angga. #urnal Penelitian. 224 19 2&. =2> +. B. S. Bhan, M. #. Pel0;ar, R.?. Reid. Mi0ro!iolog. M0 Era6 Hill. Ne6 $or". 2**9. . 2992:*. =3> B. Helena, N. 'arnes, #. Sue. 'iolog 8th +d.. orth Pu!lisher In0. Ne6 $or". 2**&. . 127 12). =7> ?6id(osautro. Alat a!oraturium. Ea(ah Mada Universit Press. $oga"arta. 2**7. . 9193. =8> #. F. Anderson. Ine0tious !ut Nonathogeni0 Isolate o 'orrelia !urgdoreri. #. Blini0al Mi0ro!iolog. 29 2**:4. 2&:32&::. =&> %hasani. Prosedur alatalat %imia. i!ert. $oga"arta. 2**2. . 878&.
=)>
R.M. Atlas. Hand!oo" @ Mi0ro!iologi0al Media 8th +dition. BRB Press. USA. 1:9&. . 37737&. =9> M. 5. Madigan, #.M. Martin"o. 2***. 'iolog o Mi0roorganisms. Prenti0e Hall. Ne6 #erse. . 3*13*3. =:> R. F. S. @ram, #. H. Paul. 'iolog iving Sstem. Elen0oe ?ivision M0 Millan Boman. aterille. 2*11. . &8&). =1*> Pan(i, et al 1::8. Metode Pada 'e!eraa Ma0am 'ahan Pem!a6a Ino"ulum. #urnal Penelitian 'iote"nologi Per"e!unan Dol 2 14 1218. 'ogorPusat Penelitian 'iote"nologi Per"e!unan. =11> E. H. S0hlegel. Mi"ro!iologi Umum. Ea(ah Mada Universit Press. $oga"arta. 2**). . 787). =12> Suted(o. Mi"ro!iologi 5anah. Rine"a Bita. #a"arta. 1::1. . 1)19. =13> #. Par"er. Hand!oo" 'ro0" 'iolog o Mi0roorganism. M0 Era6 Hill. Ne6 $or". 2**9. . 22:238. =17> M. Ma0hmud. 5e"ni" Penimanan dan Pemeliharaan Mi"ro!a. 'alai Penelitian 'iote"nologi 5anaman Pangan. 'ogor. 2**9. . 12*121. =18> . Bara. Aseti0 5e0hni
