Tanggal Tanggal Praktikum Praktikum Prak Prakti tiku kum m 1.1 1.1 dan dan 1.2
10 Maret 2015 2015 METODE ASEPTIS DAN STERILISASI
PRELAB 1. Apa pentingn pentingnya ya metode aseptis aseptis dalam dalam dunia mikrobio mikrobiologi logi ? Jelaskan Jelaskan pula prinsip prinsip dasar metode aseptis.
Teknis Teknis atau metode aseptis sangat penting dalam dunia mikrobiologi karena teknik aseptis dapat meminimalisir kontaminasi terhadap kultur k ultur mikroorganisme yang diinginkan. Prinsip dasar digunakannya teknik aseptic ini adalah adanya banyak partikel debu yang mengandung mikroorganisme (bakteri atau spora) yang dapat masuk ke dalam cawan, mulut Erlenmeyer, atau dapat mengendap di area kerja. Pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan dapat mempengaruhi atau mengganggu hasil dari suatu percobaan yang telah dilakukan d ilakukan (Veransa, (Veransa, 2!!). 2. Apa tujuan tujuan pemanasan pemanasan dengan dengan api/bunsen api/bunsen pada pada teknik aseptis ? Jelaskan. Jelaskan.
"nti dari pemanasan dengan api adalah seluruh bakteri atau sel yang terdapat pada alat akan dimusnahkan. #al ini bertujuan untuk menghilangkan kontaminasi pada sampel ketika kita menggunakan alat tersebut. $amun metode ini kurang e%ekti% karena tidak bisa mengatasi kontaminasi dari udara atau gas (Puteri, 2!&). . Jelaska Jelaskan n tujuan tujuan dari sterilis sterilisasi. asi.
Tujuan dari sterilisasi adalah untuk membunuh mikroba yang dapat mengganggu proses percobaan. 'etode sterilisasi tergantung tergantung pada jenis prduk dan tipe umum dari mikroba yang muncul pada produk tersebut.emua proses sterilisasi dialidasi dengan menggunakan indikator biologi (*iological "ndicator) (Prakashan, 2+). !. "ebutk "ebutkan an metode metode sterili sterilisa sasi si untuk untuk ba#an ba#an yang yang tidak tidak ta#an ter# ter#ad adap ap panas panas Jelaskan
'etode sterilisasi yang tidak tahan terhadap panas ad alah !. -adiasi a. Nonionizing radiation radiation menggunakan sinar ultraiolet (/V) 2+2 nm. $onioni0ing radiation dapat diserap oleh beberapa material yang tidak tahan terhadap panas b. Ionizing radiation radiation menggunakan radiasi gamma yang terdiri dari gelombang elektromagnetik yang diproduksi dari disintegrasi nuklir (13o) dan radiasi korpskular yang terdiri dari elektron yang diproduksi dalam generator dan mempercepat untuk menaikkan leel energi. 2. 4iltrasi 5arutan serta gas yang tidak tahan terhadap panas dapat disterilisasi menggunakan metode %iltrasi. 4iltrat akan menangkap bakteri dan %ung, namun pada ultrafine filters ultrafine filters dapat dapat menangkap dan menyerap irus bahkan molekul yang lebih besar dibandingkan irus &. 6isi 6isin% n%ek ekttan 6isin%ektan dapat menghilangkan organisme ketika akan melakukan percobaan ataupun operasi. 7lkohol dalam desin%ektan dapat membunuh beberapa b akteri yang terdapat pada tangan (8ayser, 29).
?
5. $agaiman $agaimanaka aka# # %ara sterilis sterilisasi asi alat alat &spreader& &spreader& yang benar benar ?
'enggunakan metode sterilisasi %isik atau pembakaran menggunakan Bunsen menggunakan Bunsen burner dan dan pembakar spiritus. 3aranya adalah dengan mencelupkan spreader ke dalam alkohol kemudian dibakar. terilisasi ini dapat dilakukan selama senyawa kimia yang akan disterilkan tidak akan berubah atau terurai pada temperatur atau tekanan tinggi (":bal, 2!2). !. 7sept 7septis is 6ir 6irii dan 5in 5ingk gkung ungan an '. Jelaska Jelaskan n bagaimana bagaimana %ara metode aseptis aseptis dan sterilisasi sterilisasi dengan dengan menggunak menggunakan an ba#an kimia. "ebutkan %onto# ba#an kimia yang dapat digunakan. !. Ethylene Oxide (C 2H4O) digunakan untuk sterilisasi dengan suhu rendah (2 1o3). 2. Aldehid/Formaledhida (CHOH) dapat digunakan untuk sterilisasi gas dan %ungsi utamanya digunakan untuk disin%ektan &. Alkohol dapat digunakan untuk un tuk sterilisasi. 7lkohol 7lkohol secara e%ekti% dapat dap at membunuh bakteri dan jamur ;. Fenol dapat digunakan untuk melawan spora dan irus 9. Halogen (Cl2,I2 dan halogen lainnya) klorin dan iodine dapat digunakan seabgai disin%ektan yang dapat membunuh spora dan mikroba 6. Oxydant Oxydant (O!on, (O!on, Hidrogen Hidrogen "erokida, "erokida, "otai#m "otai#m "ermanga "ermanganat) nat) <. $#r%aktan (8ayser, 29). (. $agaimanaka# $agaimanaka# %ara sterilisasi sterilisasi alat &%a)an petri& petri& yang benar ? Jelaskan
3awan petri dapat disterilisasi pada oen. =en b er%ungsi sebagai alat sterilisasi dengan prinsip panas kering. 3awan petri dimasukkan ke dalam oen kemudian diberikan suhu 1!+o3 selama setengah jam sampai & jam. =en biasanya digunakan untuk peralatan gelas seperti cawan petri dan pipet ukur (":bal, 2!2).
Para* Asisten
+ama,
&IA'A A*I
7lkohol <>
6isemprotkan ke meja kerja
6ibersihkan dengan tissue
7lkohol disemprotkan ke telapak tangan
6igosokkan merata di kedua telapak tangan dan punggung tangan
#asil
2. 3ara 3ara pengg penggun unaa aan n auto autokl kla% a% 7lat yang akan disterilkan 6imasukkan ke plastic dan keranjang autokla%
7utokla% dibuka
7utokla% diisi a:uades hingga tanda batas
7utokla% ditutup dan ulir dikencangkan
8lep dibuka
6itekan tombol ?=$@
6itunggu hingga mendidih dan mengeluarkan bunyi
8lep udara ditutup dan ditunggu tekanan ! atm dalam !9 menit 7utokla% dimatikan dengan tekan tombol ?=44@ 6itunggu tekanan turun hingga atm 8lep 6ibuka /lir dikencangkan dan tutup dibuka 8eranjang autokla% dikeluarkan #asil A+A*I$A O$E&-
!. 7sep 7septi tiss 6iri 6iri dan dan 5ing 5ingkun kunga gan n /ntu /ntuk k asep asepti tiss diri diri dan lingk lingkun ungan gan digun digunak akan an alko alkoho holl <>. <>. 7lkoh lkohol ol <> ber%ungsi sebagai desin%ektan yang bertujuan untuk membunuh bakteri dan mikr mikroo oorg rgani anism smee lain lain yang yang mung mungki kin n bera berada da di seki sekita tarr lingk lingkung ungan an yang yang dapat dapat mengontaminas mengontaminasii biakan bakteri yang akan diamati. 5angkah pertama pertama yang harus dilakukan dilakukan adalah menyemprotk menyemprotkan an alkohol <> pada permukaan permukaan meja kerja yang yang akan digunakan untuk praktikum, etlah itu dilap atau dibersihkan dengan tissue. 8emudian setelah bersih alkohol disemprotkan pada telapak tangan secukupnya dan digosokkan merata di kedua telapak tangan dan punggung tangan. 7septis diri dan lingkungan telah selesai dilakukan dan praktikan siap untuk melakukan praktikum. 2. 3ara 3ara Peng Penggun gunaa aan n 7ut 7utok okla la% % ebe ebelum lum mest mester eril ilkan kan alat alat,, terl terlebi ebih h dahu dahulu lu disi disiap apka kan n alat alat gelas gelas yang yang akan akan disterilisasi yaitu cawan petri, Erlenmeyer, pipet ukur, dan tabung reaksi serta gelas beaker yang berisi tip. /ntuk mensterilisasi tabung reaksi dan Erlenmeyer serta gelas beaker yang berisi tip, dibuat penutup dari kapas steril yang bertujuan untuk menghindari cairan yang berada di dalam autokla% ketika sterilisasi masuk ke dalam tabung reaksi dan Erlenmeyer. Pastikan kapas penutup tergulung sempurna dan tidak mudah rusak saat penutup dibuka. 8apas penutup harus menutup alat gelas hingga tidak tidak ada udara udara yang yang masuk masuk ditanda ditandaii dengan dengan bunyi bunyi ?bulb@ ?bulb@ ketika ketika melepas melepaskan kan gulungan kapas. 8emudian mulut tabung yang telah diberi kapas tersebut dibungkus menggunakan kertas payung. /ntuk membungkus, perhatikan bagian dalam dan luar kert kertas as.. Pada Pada permu permukaa kaan n kert kertas as yang yang agak agak kasa kasarr dile dileta takka kkan n di bagi bagian an dalam dalam sedangkan permukaan kertas yang halus di bagian luar. "tu bertujuan untuk mencegah masuknya a:uades di dalam autokla% selama sterilisasi. etelah dibungkus rapat lalu diikat dengan menggunakan karet pentil atau karet yang elastic dan tidak leleh ketika dipanaskan. 8emudian untuk pipet ukur atau pipet olume dibungkus dengan plastic PE yang tidak mudah leleh ketika terkena panas dan ikat kedua ujungnya dengan karet. karet. 8emudi 8emudian an pada cawan cawan petri petri menggun menggunaka akan n kertas kertas payung payung dan dibungk dibungkus. us. Pastik Pastikan an posisi posisinya nya dibali dibalik k agar agar tidak tidak ada uap air yang yang masuk masuk selama selama steril sterilisa isasi. si. etelah dibungkus rapat lalu diikat rapat menggunakan karet. etelah semua siap, bungkus semua alat a lat menggunakan menggunak an palstik PE dan pastikan tidak ada udara yang ada dalam plastic kemudian plastic diikat dengan karet dan masukkan pada keranjang autokla%. 7utokl 7utokla% a% sendir sendirii ber%un ber%ungsi gsi sebagai sebagai alat alat steril sterilisa isasi si panas panas dengan dengan suhu suhu !2!o3 selama !9 menit. 7utokla% dibuka dan diisi a:uades hingga tanda batas. 7utokla% ditu ditutu tup p dan ulir ulir dike dikenca ncang ngkan kan untu untuk k menc mencega egah h uap uap air air kelua keluarr dari dari auto autokl kla% a%.. 8emudian klep dibuka setelah itu ditekan tombol ?=$@. 6itunggu hingga mendidih dan autokl autokla% a% mengel mengeluar uarkan kan bunyi. bunyi. 8emudi 8emudian an klep klep udara udara ditutu ditutup p dan ditung ditunggu gu 8emudia 8em udian n untuk unt uk menste men steril rilisa isasi si jarum jar um ose, ose , spreade spr eader r dan mikro mi kropip pipet et tidak tid ak perlu per lu tekanannya tekanannya menjadi ! atm selama !9 menit. menit. Tekanan Tekanan dapat dilihat pada bagian atas menggunakan autokla%.etelah /ntuk mensterilisasi dan spreader penutup autokla%. itu autokla% jarum dapat ose dimatikan dan digunakan ditunggu alkohol hingga <> dan *unsen. *unse n. 'ulamula 'ulamul a diambil diamb il alkohol <> secukupnya secuku pnya pada beaker gelas dan tekanannya turun menjadi atm. 8emudian setelah tekanannya atm, klep dibuka dicelupkan jarum ose hinggalalu ujung besautokla% ose tercelup seluruhnya. dinyalakan dan ulirnya dikencangkan tutup dibuka. 8eranjang8emudian autokla% dikeluarkan *unsen dan ujung dibakar diatas api *unsen hingga kemudian dan alatalat yangose akan digunakan untuk praktikum telah berwarna siap untukmerah digunakan. #ati dicelupkan kembali pada alkohol. 8emudian diulangi lagi membakar ujung ose pada hati dalam mengeluarkan alat karena mungkin suhu keranjang masih sedikit panas. *unsen dan lakukan langkah yang sama sebanyak & kali. 3ara sterilisasi spreader pada dasarnya sama dengan sterilisasi jarum ose. Perbedaannya adalah spreader dipanaskan hingga keluar asap karena spreader terbuat dari bahan kaca. 8emudian untuk sterilisasi mikropipet mikropipet menggunakan menggunakan alkohol alkohol <> dengan disemprotka disemprotkan n secukupnya secukupnya dan dilap dilap satu arah menggunakan tissue. 'ikropipet ber%ungsi sebagai alat untuk mengambil cairan atau media sebanyak ,! ml hingga ! ml. Tergantung pada warna tip yang digunakan. 7pabila kita menggunakan tip berwarna biru maka olume larutan yang diambil adalah ! ml, sedangkan tip berwarna kuning olumenya ,! ml.
PEMBAHASAN
1. Jika anda mendapatkan stok kultur murni dari laboratorium mikrobiologi- #al apa saja yang #arus diper#atikan agar stok kultur tidak terkontaminasi ? Jelaskan
!. #igienis 6ibersihkan seluruh permukaan dan biakan dihindarkan dari udara luar • dan debu Peralatan dicuci dengan desin%ektan yang sesuai • 2. Tempa Tempatt peny penyimp impanan anan yang yang aman aman &. 6ileta 6iletakkan kkan pada pada lemar lemarii pendi pendingi ngin n ;. 'enjag 'enjagaa kebers kebersiha ihan n dan kese kesehat hatan an diri diri 9. 'emeriksa 'emeriksa setiap setiap barang barang yang masuk ke laborat laboratorium orium 1. 'enutu 'enutup p setiap setiap biakan biakan atau barang barang yang digunak digunakan an sesuai sesuai dengan prosed prosedur ur (Aibowo, 2!!).
2. Mengap Mengapa a media media yang yang akan akan digun digunak akan an #arus #arus dis dister terili ilisa sasi si terleb terlebi# i# da#ul da#ulu? u? $agaimana %ara sterilisasi media? Jelaskan
7gar medium pertumbuhan hanya bisa ditumbuhi oleh bakteri yang diinginkan dan bebas dari kontaminasi bakteri yang lain. 3ara untuk sterilisasi media media yaitu !. terilisa terilisasi si 3ara 3ara 8ering 8ering (Tidak (Tidak menggunakan menggunakan air air atau atau uap air) air) a. Pem Pembak bakaran b. -adiasi gelombang pendek (/ltraiolet, sinar al%a, dan sinar beta) c. Pemanas Pemanasan an dalam dalam oen oen dengan dengan suhu suhu sekita sekitarr !o3 d. Pending Pendingina inan n pada pada suhu suhu diba dibawah wah o3 sehingga bakteri menjadi inakti% 2. terilisa terilisasi si 3ara 3ara *asah *asah ('enggun ('enggunakan akan air air atau atau uap air) a. Perebus Perebusan an denga dengan n air mendid mendidih ih dengan dengan suhu suhu ! !o3 b. Penggunaan 0at kimia seperti desin%ektan, alkohol dan antibiotic c. Pemanasan Pemanasan dengan dengan menggunaka menggunakan n tekanan tekanan uap air pada pada autokla% autokla% dengan suhu o !2! 3 menggunakan tekanan ! 7tm selama !9 menit &. Past Pasteu euri risa sassi Pemanasan dengan suhu 1o3 selama & menit atau pemanasan <o3 selama !9 menit. #asil pasteurisasi kemudian ditutup agar bakteri tidak berkembang biak dan tidak tidak terkon terkontam tamina inasi si oleh oleh bakteri bakteri lain. lain. Proses Proses pemanas pemanasan an berlan berlangsu gsung ng selama & kali secara berturutturut (8armana, 2+).
. Mengapa Mengapa sterilis sterilisasi asi dengan dengan su#u su#u tinggi tinggi tidak %o%ok digunak digunakan an untuk untuk sterilas sterilasii larutan itamin dan metode sterilisasi sterilisasi apaka# yang %o%ok? Jelaskan alasan anda
8arena 0at pengatur tubuh seperti seperti itamin dan antibiotic antibiotic mudah terpengaruh terpengaruh oleh panas. =leh karena itu diperlukan metode sterilisasi yang tidak menggunakan panas. 'etode sterilisasi yang digunakan adalah menggunakan sterilisasi %iltrasi %iltrasi (4ilter). (4ilter). terilisasi %ilter %ilter atau atau %iltra %iltrasi si membran membranee adalah adalah melewa melewatka tkan n laruta larutan n (mengg (menggunak unakan an air steril steril di dalam dalam lamina laminarr air flow flow cabinet cabinet ) melalu melaluii membr membrane ane yang yang telah telah dister disterili ilisas sasi. i. /kuran /kuran pori pori membrane membrane adalah ,;9Bm atau ,22 Bm di bawah tekanan rendah ke dalam wadah steril. steril. !. $agaimana 'etode %iltrasi tidaksterilisasi membutuhkan suhu suatu bahan. 8arena itulah teknik sterilisas i jarum oseuntuk yangmensterilasi benar ? metode ini cocok untuk untuk sterilisasi sterilisasi itamin Culiarti, Culiarti, 2! . !. 6ice 6icelu lupk pkan an pada pada alk alkoho oholl <9> <9> 2. 6ibakar 6ibakar meng mengguna gunakan kan *unsen *unsen hingga hingga berwa berwarna rna merah merah &. 8emudi 8emudian an dicelu dicelupkan pkan kemba kembali li ke dalam dalam alkohol alkohol ;. 6ibakar 6ibakar kembali kembali menggunak menggunakan an *unsen *unsen hingga hingga jarum jarum berwarna berwarna merah. merah. 9. /langi langkahnya langkahnya sebanyak sebanyak 2 kali (8usnadi (8usnadi dkk, 2!2).
5. $agaimana teknik penggunaan pipet mikro yang benar ? Apaka# pipet mikro tersebut perlu di sterlilisasi sterlilisasi terlebi# da#ulu? Jelaskan ja)aban anda.
a. ebe ebelu lum m dig digun unak akan an Thumb Knob ditekan Knob ditekan berkalikali untuk memastikan lancarnya mikropipet. b. 'asukkan tip bersih kedalam nozzle atau nozzle atau ujung mikropipet c. Tekan Thumb Knob sampai Knob sampai hambatan pertama atau first atau first stop jangan stop jangan ditekan lebih dalam lagi d. 'asukka 'asukkan n tip ke ke dalam dalam caira cairan n sedalam sedalam &;m &;mm m e. Tahan Tahan pipet pipet ke dalam dalam posisi posisi ertical ertical kemudi kemudian an lepaskan lepaskan tekanan tekanan darithumb darithumb knob maka knob maka cairan akan masuk ke dalam tip %. Pindahk Pindahkan an ujung ujung tip tip ke tempat tempat penam penampun pung g yang diing diingink inkan an g. Tekan thumb knob sampai knob sampai hambatan kedua atau second atau second stop atau stop atau tekan semaksimal mungkin maka semua cairannya akan keluar dari ujung tip h. 7pabila 7pabila ingin ingin melepas melepas tip, tekan tekan salah salah satu satu tombol tombol yang ber%ung ber%ungsi si untuk untuk melepaskan tip dari mikropipet (Aidhy, 2!).
'. Apabila tidak tersedia pipet mikro- alat apa yang akan saudara siapkan untuk mengambil sampel kultur %air- se%ara aseptis ?
'enggunakan pipet ukur dimana pada ujung pipet ukur tersebut dipasangkan alat untuk menyedot larutan yang dapat dipasang pada pangkal pipet ukur. Pipet ukur sendiri memiliki skala ! mm. 8emudian karet yang digunakan untuk menyedot larutan adalah rubber bulb. 8aret dari rubber bulb merupakan karet yang resisten dengan bahan kimia. 7pabila mengambil sampel kultur cair menggunakan pipet ukur yang sebelumnya telah disterilisasi, disterilisasi, maka kultur cair tidak terkontaminasi oleh bakteri atau mikroorganisme yang lain (Aidhy (Aidhy,, 2!).
(. Apa perbedaan antara estruksi dan "terilisasi. Jelaskan 6ekstruksi disebut juga sebagai sterilisasi kotor, destruksi destruksi merupakan suatu cara untuk merusak atau menghancurkan bakteri hasil penelitian yang sudah tidak digunakan agar tdak berbahaya bagi lingkungan. 6estruksi dilakukan setelah melakukan penelitian sedang kan sterilisasi dilakukan ketika sebelum penelitian yang ber%ungsi untuk mencegah kontaminasi bakteri atau mikroba yang dapat mengganggu pengamatan pada bakteri yang dibiakkan. terilisasi membutuhkan waktu yang lebih singkat dibandingkan dengan destruksi (-ochmawati, 2!).
KESIMPULAN
terilisasi merupakan proses destruksi atau penghilangan mikroba yang hidup. =byek yang terbebas dar kehidupan mikroba disebut steril. terilisasi adalah hal yang penting dalam
melakukan aktiitas laboratorium terutama yang melibatkan mikroba. 8arena pada umumnya percobaan dilakukan menggunakan kultur murni. yarat bekerja dengan kultur murni adalah media nutrient serta tempat untuk pertumbuhan harus steril dan peralatannya juga harus steril. 7pabil 7pabilaa steril sterilisa isasi si tidak tidak dilakuk dilakukan, an, maka maka mikro mikroba ba kontami kontaminan nan akan tumbuh tumbuh dan hasil hasil yang yang diperoleh dari percobaan menggunakan kultur murni akan menyimpang. Tuju Tujuan an dari dari prak prakti tiku kum m ini ini adal adalah ah untuk untuk mema memaham hamii prin prinsi sip p ster steril ilis isas asi, i, mamp mampu u mempersiapkan alat dan bahan yang akan disterilisasi dengan autokla%, serta mampu melakukan sterilisasi alat, media mikroorganisme, dan bahan yang digunakan dalam uji mikrobiologi dengan menggunakan autokla%.
Komponen Penilaian LKP: Jenis Penilaian Penilaian
Pre lab dan iagram Alir og $ook ata asil Pengamatan Pemba#asan Aktiitas di laboratorium laboratorium TOTAL
dan
Nilai Maksim al #$ #$ %$ #$ #$$
Nilai yang ipe!ole"
Kompe&ensi Ma"asis'a an Nilai Maksimal Tiap Kompe&ensi No Kompe&ensi Bisa Tiak 1. Mampu me melakukan ta ta#apan pe persiapan al alat dan media sebelum sterilisasi , Membuat sumbatan tabung reaksi dan erlenmeyer Memb Membun ungk gkus us %a)a %a)an n petr petrii- tabu tabung ng reaksi dan erlenmeyer •
•
•
2.
Mem Memasu asukka kkan glas glass s ware ware plastik untuk disterilisasi disterilisasi
ke
dala dalam m
Mampu menggunakan autokla* dengan baik dan benar , Membuka dan menutup klep pengaman Memeriksa ketersediaan air distilat •
• •
Menyalakan / mematikan autokla*
Menentukan )aktu sterilisasi / destruksi Mampu me melakukan se setiap tta a#apan me metode aseptis aseptis diri dan lingku lingkungan ngan sebelum dan sesuda# sesuda# melakukan melakukan kerja kerja di laborator laboratorium ium mikrobiologi , Melakukan aseptis diri •
.
• • •
Melakukan aseptis lingkungan kerja Melakukan aseptis alat kerja TOTAL
#$
