Laporan Praktikum Struktur dan Fungsi Subseluler
Hari/tanggal Waktu P%P (sisten
: Senin, 10 Maret 2014 : 0!00"11!00 W#$ : S&ae'udin, Ssi, Msi : Syahrul Mustopa Pu)i *a+madani Mustika Mustik a We Weni ni -a Selenia .esi
PENENTUAN KADAR PROTEIN DENGAN METODE BRADFORD elompok 14 Herlani Tri i!hiastuti $ella Marisa .+ani Lut'i *
G"#$%&&#' 412001 41200
DEPARTEMEN BIOKIMIA FAKU(TAS MATEMATIKA DAN I(MU PENGETAHUAN A(AM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR %&$#
PENDAHU(UAN
Protein adala+ sen&a3a organik &ang ban&ak di)umpai kalam semua mak+luk +idup! Protein terdiri dari karbon, +&drogen, dan nitrogen dan umumn&a )uga mengandung sul'ur! Molekuln&a berkisar antara 000 +ingga )utaan! Satu molekul protein terdiri dari rantai pan)ang polipeptida! Polipeptida ini berasal dari asam! (sam amino &ang saling berikatan dengan urutan &ang k+as! #kantan tera tur &ang berurutan ini dinamakan struktur primer protein! Polipeptida dapat melipat atau menggulung &ang men&ebabkan timbuln&a struktur sekunder! Struktur tersier asam amino berbentuk tiga dimensi dari polipeptida &ang menggulung atau melipat ini! Struktur kuartener munul polipeptida &ang terlibat! Pemanasan dengan su+u diatas 50 06 atau pemberian asam basa+ kuat akan membuat protein ke+ilangan struktur tersiern&a &ang k+as! Hal ini )uga dapat menimbulkan koagulat &ang tak larut 7misaln&a pati+ telur8! Proses ini dapat membuat si'at +a&atin&a men)adi tidak akti'! Seiring meningkatn&a pH melebi+i kenetralan 7pH 8, lingkungan &ang semakin basa enderung menetralisasi gugus"gugus karboksil &ang asam dari protein! Seiring menurunn&a pH di ba3a+ kenetralan, lingkungan &ang semakin asam enderung menetralisasi gugus"gugus amino &ang basa lagi 7Susan 2008! Metode analisis protein dapat ditentukan dengan ara kuantitati' dan kualitati'! 9)i kualitati' dapat dilakukan untuk mengeta+ui keberadaan atau )enis protein dalam suatu ba+an, sedangkan u)i kuantitati' dapat dilakukan untuk mengeta+ui )umla+ kandungan protein dalam suatu ba+an! $eberapa )enis u)i &ang dilakukan pada protein di antaran&a adala+ 9)i in+idrin, semua asaam amino bereaksi dengan triketo+idrindena +idrat 7nin+idrin8 untuk membentuk alde+ida &ang lebi+ keil, dengan membebaskan karbon dioksida, ammonia, dan meng+asilkan 3arna biru -iolet 7untuk prolin dan +idroksiprolin di+asilkan 3arna kuning8! 9)i $iuret, u)i ini baik di gunakan untuk u) umuum ter+adap protein, karena u)i ini dapat mendeteksi ke+adiran ikatan peptida! 9)i ;entroprotein, reaksi ini men&ebabkan nitrasi dari inti ben
)umla+ &ang sama dengan u)i protein pada u)i Lo3r&! Metode Mikro")elda+l, prinsip metode )elda+l adal+ mula"mula ba+an atau butiran =n 7Lebo3it< et al 20028! >u)uan praktikum praktikum kali ini adala+ menentukan kadar protein dalam suatu sampel dengan metode $rad'ord dengan menggunakan instrumen spektro'otometer 20 . dan kur-a standar absorbansi!
METODE PRAKTIKUM a)tu !an Te*pat Pra)ti)u*
Praktikum ini dilakukan di Laboratorium $iokimia Lantai 5! Waktu praktikum &aitu +ari Senin, 10 Maret 2014 pukul 0!00 ? 11!00 W#$!
Alat !an Bahan
(lat"alat &ang digunakan dalam perobaan ini adala+ spetroni 20"., ku-et, labu takar, pipet tetes, pipet mo+r, tabung reaksi, dan gelas piala! $a+an" ba+an &ang digunakan pada praktikum ini antara lain reagen $rad'ord, sampel protein, $S( 7 Bovine Serum Albumin8, larutan a6l, dan a@uades!
Prose!ur Per+o,aan Pe*,uatan larutan- Seban&ak tabung disiapkan dan diisi dengan
larutan standar $S( dan a6l dengan perbadingan 0:100, 10:A0, 20:0, B0:0, 50:50, dan 100:0 dalam satuan Cl! emudian masing"masing tabung ditamba+kan reagen $ra'ord sebesar 5 Cl, kemudian dikook perla+an dan didiamkan selama 5 menit sampai 1 )am! Pen.u)uran a,sor,ansi- >abung pertama 70:1008 di)adikan sebagai
larutan blanko dan sisan&a di)adikan sampel perobaan! Masing"masing tabung diukur absorbansin&a menggunakan pan)ang gelombang 5A5 nm!
HASI( DAN PEMBAHASAN
>abel 1 ur-a standar $S( >abung onsentrasi 7mg/ml8 1 0 2 0,1 B 0,2 4 0,B 5 0,5 1 6onto+ per+itungan :
(bsorbansi terkoreksi 0 0,1BB 0,0 0,BB5 0,44 0,AB
>abung 2 D1!M1 E D2!M2 0,01 ml! 1 mg/ml E 0,1 ml! M 2 M2 E0,1 mg/ml 1.5 1 Absorbansi
f(x) = 0.86x + 0.13 R² = 0.75
0.5 0 0
0.2 0.4 0.6 0.8
1
1.2
Konsentrasi (mg /ml)
ambar 1 ur-a standar $S(
>abel 2 onsentrasi protein sampel Sampel 1 2 6onto+ per+itungan :
onsentrasi 7mg/ml8 0,441 0,420B
onsentrasi dari persamaan garis E a G b 0,514 E 0,5 G 0,1B1 ; E 0,441 mg/ml
(bsorbansi 0,514 0,4A1
Metode $rad'ord iala+ suatu metode &ang dapat digunakan untuk menganalisis kandungan protein di dalam suatu larutan dengan menggunakan
tersusun atas larutan 100 mg Coomassie Brilliant Blue "250 dalam 50 ml etanol A5I dan 100 ml 5I 73/-8 asam 'os'at dienerkan +ingga -olume 1 L dengan a@uades! Sebelum digunakan ampuran pen&usun reagen tersebut disaring ole+
kertas saring 3+atman nomor satu dan disimpan dalam botol amber 7gelap8 pada su+u ruang agar tidak terbentuk endapan, reagen akan stabil setela+ beberapa minggu pen&impanan dan bisa digunakan 7 Suada 20118! Hasil perobaan menun)ukkan ketidakstabilan nilai absorbansi &ang didapat, +al ini dapat dili+at dari tabel dan gra'ik &ang ada! ilai absorbansi &ang diperole+ bersi'at 'luktuati', &aitu pada tabung pertama dan kedua nilai absorbansin&a meningkat, namun pada tabung ketiga nilai absorbansi sangat menurun dari 0,0 men)adi 0,BB5! emudian setela+ itu nilai absorbansi naik kembali! Se+arusn&a seiring bertamba+n&a konsentrasi sampel maka nilai absorbansi pun akan meningkat! etidak sesuaian tersebut dapat disebabkan karena adan&a kesala+an saat mengook larutan se+ingga kurang +omogen, selain itu )uga dapat disebabkan karena larutan sampel terlalu lama didiamkan se+ingga dapat men&ebabkan reagen tidak stabil lagi dan mempengaru+i nilai absorban! Penamba+an a6l ber'ungsi sebagai pelarut &ang akan diukur! %ika a6l &ang ditamba+kan ke dalam larutan Bovine Serum Albumin 7$S(8 semakin ban&ak maka protein &ang terlarut akan semaki ban&ak pula! Hal ini mengakibatkan pengompleksan antara protein dan
SIMPU(AN
Metode $rad'ord merupakan metode &ang e'ekti' digunakan dalam penentuan kadar protein pada larutan standar Bovine Serum Albumin 7$S(8 dengan
3arna
Coomassie
Brilliant
Blue
"250! Metode $rad'ord
menggunakan kur-a standar +ubunga antara nilai absorbansi dengan konsetrasi sampel dalam mg/ml! ilai absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi sampel! Semakin ban&ak penamba+an a6l dalam $S( maka semakin keil nilai absorbansi!
DAFTAR PUSTAKA
$intang M!2010! Biokimia teknik Penelitian. %akarta 7#.8: rlangga! $rad'ord MM!1A! ( rapid and sensiti-e met+od 'or t+e @uantitation o' mirogram @uantities o' protein utili
Siswoyo TA. 2006. Eec of so!i"# c$%o&i!e o' $e&#% &oe&ies of 30 * &oei' iso%e! f&o# #e%i',o see!. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan. 17(3)- 214220. Suada #! 2011! ee'ekti-an ekstrak biota laut Aglaophenia ter+adap akti-itas en
