MARCHA FITOQUÍMICA PRELIMINAR DE LA ESPECIE CONIUM MACULATUM L. (CICUT (CICU TA) *Chiappe, Andrea; Castañeda, Brian; Díaz, Jonnathan; Rodríguez, Diego & Romero, Juan Manuel Corporacin !ecnolgica de Bogot" Carrera #$ %o '( D ) (', Bogot" Colomia !ecnología en Regencia de +armacia *Docente asesora en la inestigacin
Resumen -sta inestigacin se diide en tres partes principales, principales, las cuales son esenciales en el proceso de una una marcha marcha .to/u .to/uimi imica ca preli prelimi minar nar conen conencio cional nal00 -1trac -1tracci cin, n, ident identi.c i.cac acin in 2 separa separaci cin n cromatogra.ca de los metaolitos secundarios -n la primera parte 3e1traccin de metaolitos4 se hizo el correspondiente secado 2 macerado de las partes a5reas de las planta 3ho6as 2 7ores4, por otro lado con el material seco se e1tra6eron el aceite esencial por el m5todo de arrastre por apor 2 el e1tracto etanlico con el m5todo 8o1hlet -l aceite esencial no se otuo -n la segunda parte se e9ectu la identi.cacin de metaolitos secundarios por medio de prueas especí.cas para cada grupo dependiendo de sus características /uímicas 2 estructurales :a preparacin de las muestras muestras se hizo con una disolucin de la goma en etanol 2 5ter de petrleo A cada muestra se le agrego agrego un reactio /ue determinaa determinaa la presencia presencia de un tipo de metaolito metaolito en particular 8e encontr la presencia de alcaloides en las raíces, ho6as, semillas 2 9rutos; presencia de +laonoides en la corteza 2 Cumarinas en los 9rutos, presencia de Carotenoides en las 7ores, presencia de compuestos parecidos a los cardiotnicos 3tremetona4 en las ho6as 2 presencia de esteroides esteroides 3estigmasterol 3estigmasterol 2
ltimo, >ltimo, se proaron arias arias mezclas de solentes 3polares 2 apolares4, a di9erentes proporciones para determinar cu"l de ellos ell os corría corría me6or me6or con con una muestr muestra a del e1trac e1tracto to et"nol et"nolico ico de la especi especie e egeta egetall ?Co ?Coni nium um Maculatum :@ en cromatogra9ía en capa .na 3!:C4 8e determin /ue el me6or solente 9ue la mezcla entre entre Acetato de sopropilo sopropilo 2 cloro9ormo cloro9ormo 3$0$4 Palabras claves: marcha .to/uimica, metaolitos secundarios, secundarios, muestra egetal, cromatogra9ía
en capa .na, cicuta, /uimiota1onomía /uimiota1onomía 2 partes a5reas Abstract
!his !his rese resear arch ch is dii diide ded d into into thre three e ma main in part parts, s, hic hich h are are es esse sent ntia iall in the the proc proces esss o9 a conen conentio tional nal preli prelimi mina nar2 r2 ph2toc ph2tochem hemica icall up 0 -1trac -1tractio tion, n, chroma chromatog tograp raphic hic separ separati ation on and identi.cation o9 secondar2 metaolites n the .rst part 3e1traction o9 metaolites4 and the corresponding macerated dried aerial parts o9 the plant 3leaes and 7oers4 , on the other hand ith the dr2 material as the essential oil is e1tracted 2 steam drie method and ethanol e1tract ith 8o1hlet method !he essential oil as not otained denti.cation o9 secondar2 metaolites as carried out 2 speci.c tests 9or each group depending on their chemical and structural 9eatures in the second hal9 !he sample preparation as done ith a solution o9 gum in ethanol and petroleum ether !o each sample as added a reagent hich determined the presence o9 a particular t2pe o9 metaolite !he presence o9 alaloids in the roots , leaes, seeds and 9ruits as 9ound ; +laonoids present in the corte1 and the 9ruits Coumarins , carotenoids present in the 7oers , presence o9 cardiac
Keywords:
plan lant
disp ispla2s a2s,
thi thin
la2er a2er
Intr!ucc"#n La especie Conium Maculatum, Maculatum, se encuentra en extensas regiones de Europa, América, y norte de África; se encuentra comúnmente en zonas de un ambiente húmedo, la planta apetece de los suelos muy ricos en nitrógeno, por lo cual se puede encontrar en zonas zonas tales tales como alrededor alrededores es de establos, establos, cami ca mino noss tran transi sita tado doss por por el gana ganado do y el hombre Es una hierba perenne glabra
Re"n Subre"n D"$"s"#n C%ase Subc%ase Or!en Fam"%"a Sub&am"%"a 'ner Esec"e
!lantae "rachebionta "rachebionta #agnoliophyta #agnoliopsida $osidae Apiales Apiaceae Apioideae %onium Conium Maculatum :
Tabla No. 1 !a1onomía de la especie Conium
Maculatum :
Las caracter&sticas morfológicas son' un tallo hueco, en donde se obser(an pe)ue*as manchas esparcidas a lo largo del tallo, de color popular, con ho+as de forma triangular de tama*o pe)ue*o, (erdenegro, son blandas, di(ididas en ga+os el&pticos, puntiagudos y dentados de hasta - cm de largo y . cm de ancho La altura de la planta puede abarcar entre /,01 hasta 0,11 metro de alto "iene 2ores blancas pe)ue*as de forma o(oide, )ue se organizan en forma de sombrilla 34an Andrés, #5 et al, 01116
)u&mico frente a ciertas reacciones )u&micas estandarizadas Las reacciones )u&micas estandarizadas consisten en cambios )u&micos en algún grupo funcional de la estructura del metabolito, y desde luego, la formación de otro compuesto )u&mico )ue al generar cambio en la naturaleza y distribución de los enlaces, produce una manifestación sensible como cambio o perdida de color, o pro(oca la precipitación del nue(o compuesto o el desprendimiento de gas 3$odr&guez, /@6
Figura 1. Conium Maculatum : +uente0 Fetter 3#GG'4
Las caracter&sticas 7to)uimica de la planta son )ue esta constituida por alcaloides de piperidina' coniina 30propilpiperidina6, 8 metilconiina 3/metil0propilpiperidina6, conhidrine 0 3/hidroxipropil6 piperidina, pseudoconhidrine 3-hidroxipropil6 piperidina 3éstos est9n saturados piperidina alcaloides6 y %coniceine 30npropil piperidina/:6, uno parcialmente insaturado 3(er +ig #6 %onhydrinone y 8metil pseudoconhydrine 3%orsi et al, //6 :e igual manera presenta la presencia de arland, /?6 La marcha 7to)uimica preliminar se apoya en un tratamiento general de extracción y sucesi(as separaciones mediante sol(entes de diferentes polaridades con el 7n de agrupar en fracciones los metabolitos estructuralmente seme+antes y poder caracterizarlos por su comportamiento
Figura . Alcaloides presentes en la especie Conium
Maculatum : +uente0 Fetter 3#GG'4
Los alcaloides presentes en la planta presentan caracter&sticas toxicológicas, demuestran ser altamente tóxica para muchas especies de animales, incluido el ser humano, en donde se puede anotar )ue los s&ntomas obser(ados cuando es consumida las planta, de forma natural son' %on(ulsiones, disfagia, disnea, dilatación pupilar, y muerte por par9lisis respiratoria, y en recientes in(estigaciones se ha encontrado )ue algunos de los alcaloides presentes en la planta, tiene efectos teratogénicos en los te+idos de la piel 3Larsson, 011.6
I'age$ No. 1 Macerado 2 e/uipo 8o1hlet Figura !. -structura general de los esteroides
presentes en la especie Conium Maculatum : 3A Estigmasterol y =sitosterol6 +uente0 Raduloic et al 3#G$$4
Ide$#i(caci%$ secu$darios
de
'e#aboli#os
4e concentró la muestra hasta la obtención de una goma, esta se diluyó por un lado en etanol y por otro en éter de petróleo 4e cogió / mL de los extractos y se hicieron las correspondientes pruebas de identi7cación con los reacti(os indicados para cada metabolito 3!ala #6 !ara las pruebas de alcaloides se acidi7có el extracto et9nolico Figura ". -structura general de la !remetona
Mater"a%es * mt!s
Metab%"t secun!ar"
Prueba +u,m"ca
React"$s
E-tract
Ma#erial vege#al
%arotenoide s
4alDosDi
04F. B-C
Extracto etéreo
Esteroides y $eacti(o de Lieberman G trterpenoid Lieberman urchard es urchard
Extracto etéreo
%loruro <érrico
%loruro <érrico /C
Extracto et9nolico
Acetato de !lomo
Acetato de !lomo /1C
Extracto et9nolico
4e obtu(ieron (arias muestras (egetales de las partes aéreas 32ores y ho+as6 de la especie Conium Maculatum : en una zona cerca a %hi)uin)uir9, oyac9 Estas se en(ol(ieron en papel periódico y se de+aron a la exposición del sol por dos semanas en donde se torno completamente seca
"aninos
Ob#e$ci%$ de acei#e ese$cial
Las muestras (egetales secas se pusieron en un balón de dos bocas de /11 mL, se utilizo la técnica de arrastre por (apor, se uso agua para la producción de (apor, se recogió el aceite obtenido en un enlermeyer de /11 mL
4hinoda
%l /1C y #g
Extracto et9nolico
Leucoantoci anidas
%l /1C
Extracto et9nolico
Huinonas
%omportami ento ante acido y donador de electrones
Iinc, %l J K 38aF .1C6
Extracto et9nolico
4aponinas
Espuma
Agua
%ardiotónic os
Antrona
$eacti(o de #olish
Ob#e$ci%$ de e&#rac#os e#a$%licos.
!re(iamente se macero una muestra (egetal seca con etanol al @BC por 0. horas !or otro lado, en el laboratorio se cogió la muestra seca y se puso en un balón de /11 mL, se agregó Etanol absoluto, se monto el e)uipo 4oxhlet y se calentó hasta obtener el correspondiente extracto
Extracto et9nolico
>elatina4al
Extracto et9nolico Extracto et9nolico
$eacti(o de Antrona 4olución #etalónica 08 de 4es)uiterpe idroxamat %lorhidrato nlactonas o férrico de hidroxilamin a, F 08 #etalónico 4olución #etalonica 08 de idroxamat %lorhidrato o férrico de %umarinas hidroxilamin a, F 08 #etalónico $eacti(o de Erlich Erlich $eacti(o de Malser Malser $eacti(o de #ayer #ayer $eacti(o de Alcaloides :ragendorN :ragendorN $eacti(o de 4chleiber 4chleiber $eacti(o de Oagner Oagner Tabla . Reactios 2 tipo de e1tracto #olish
Extracto et9nolico
Extracto et9nolico
Extracto et9nolico
Extracto etanólico Extracto 9cido Extracto 9cido Extracto 9cido Extracto 9cido Extracto 9cido
utilizado en las prueas cualitatias de identi.cacin )e*araci%$ e$ Cro'a#ogra+,a e$ ca*a ($a -TLC
4e prepararon 0 mL de tres mezclas de diferentes sol(entes' éter de petróleo'etanol 3@'P6; %loroformo'acetato de 5sopropilo 3/'/6 y tolueno'etanol 3P'@6 4e saturó la c9mara 3(aso de precipitados6 por 01 minutos y se de+ó correr la fase mó(il en una placa de cromatograf&a de Alúmina 4e agregó Mainillina a cada una de las tres placas 3+igura $(4 y se calentaron en una plancha de calentamiento hasta su correspondiente re(elado Resu%ta!s * !"scus"#n Ob#e$ci%$ del acei#e ese$cial
!ara el método de extracción por arrastre con (apor no se obtu(ieron resultados, debido a )ue la cantidad de aceite esencial obtenida fue nula La extracción del aceite esencial de una muestra (egetal de la especie Conium
Maculatum : 3%icuta6 mostro un rendimiento igual a cero Esto pudo ser debido a )ue la cantidad de aceite esencial depende de la cantidad de material (egetal, para nuestro caso la cantidad fue de - g, lo )ue limitaba las posibilidades de obtener un rendimiento considerable, cabe resaltar )ue esta es una des(enta+a )ue presenta este monta+e en particular, debido a )ue el balón utilizado no es su7cientemente grande como para almacenar una cantidad representati(a de material (egetal 4in embargo, podemos resaltar )ue el arrastre con (apor de agua es útil para extraer sustancias (ol9tiles, tales como los aceites esenciales, los cuales no son m9s )ue una mezcla comple+a de hidrocarburos, terpenos, alcoholes, compuestos carbonilicos, aldeh&dos arom9ticos y fenoles Estos se encuentran almacenados en las gl9ndulas, conductos, sacos o reser(orios dentro del (egetal, por lo cual Flaya et al 3011P6 recomienda desmenuzar bien la materia (egetal para )ue estos reser(orios )ueden expuestos a la acción del (apor de agua El (apor por presión entra en contacto con las células de las diferentes partes de la planta y las rompe liberando la esencia y atrap9ndola en las gotas del (apor )ue luego se condensar9
4e obtu(ieron 0- mL de extracto etanólico a partir de /1 g de muestra (egetal seca Esta fue de+ada /- d&as en periódico con exposición continua al sol para eliminar la humedad y luego fue puesta en un recipiente de (idrio con etF al @BC de pureza por dos d&as m9s La cantidad de extracto obtenido a tra(és del método 4oxhlet fue de -1 mL En el procedimiento )ue tardo aproximadamente una hora se produ+eron cinco sifones, los cuales son detallados en la tabla / N.mer !e% s"&#n / 0
T"em (m"n) /@ 01
P . -
P P .
Tabla !. Duracin de tiempo entre si9ones
Este procedimiento consiste en la extracción de metabolitos presentes en las plantas Las muestras (egetales se colocan en la camisa de nuestro monta+e, donde al hacer ebullir el disol(ente, en este caso etanol, pasa a la parte superior o refrigerante, donde se condensa y cae gota a gota sobre el cartucho %ontinuando as& hasta )ue se genera el sifón o (olumen m9ximo )ue pueda almacenar el brazo de sifón donde todo el etanol )ue se encontraba con la mezcla de las sustancias absorbidas cae al balón a tra(és de un ori7cio )ue tiene el brazo con la extracción ya hecha Los resultados detallados en la !ala ( demuestran )ue se obtu(ieron un gran número de sifones a la hora de hacer este procedimiento y podr&amos asumir )ue se obtu(o un buen rendimiento de extracto etanólico sin necesitar mayor cantidad de sol(ente, siendo de esta manera un método económico Adem9s, siendo una extracción de tipo exhausti(a 34Doog 011/6, esta puede destilar, condensar y (ol(er a pasar a tra(és de la fase acuosa de forma autom9tica y continua, generando as&, un proceso )ue e)ui(ale a (arios centenares de extracciones con un e)uipo )ue pr9cticamente no re)uiere atención y con un tiempo de duración de menos de una hora "odo el proceso permite una mayor sol(atación de los metabolitos Esta técnica tiene el incon(eniente de )ue puede causar da*o a los compuestos termol9biles, debido a )ue se debe calentar constantemente el extracto para llegar al punto de ebullición del sol(ente usado 34atya+it et al6 4egún 4Doog 3011/6 es importante determinar )ue las sustancias iónicas y los compuestos org9nicos polares est9n en mayor proporción en la fase acuosa y )ue los compuestos org9nicos apolares est9n en la fase org9nica !or lo cual en esta técnica no se extraen compuestos apolares tales como terpenos y en general aceites esenciales, debido en parte a la naturaleza polar del sol(ente y a )ue cuando se usan sol(entes apolares estos se pegan a las paredes del monta+e 3Malc9rcel /BB6
Aun)ue al principio fue m9s lenta la generación de los sifones, por la espera de )ue el etanol llegara a su punto de ebullición, esta se (ol(ió m9s constante a medida )ue pasaba el tiempo El inter(alo de tiempo del primer sifón fue de /@ minutos, el del segundo de 01 minutos, el tercero y cuarto de P minutos y el )uinto de . minutos Esta secuencia nos da a entender )ue el procedimiento a(anza a inter(alos grandes al momento de iniciar y )ue luego estos (an siendo m9s cercanos, siendo a su (ez m9s contantes las descargas del sifón, hecho )ue es normal entre - y 01 minutos 38ú*ez 011B6 El aumento de número de sifones y reducción del tiempo de contacto entre el material y el sol(ente conlle(a a )ue pueda haber una disminución de los metabolitos presentes en cada descarga !or lo cual no hay seguridad de )ue por el número de sifones obtenidos se hayan extra&do en su totalidad los metabolitos de la planta Ide$#i(caci%$ secu$darios
de
Metab%"t secun!ar" Carten"!es
4alDosDi
Resu%t a! Q
Tan"ns
%loruro férrico
/
Acetato de plomo >elatina G sal
/
4hinoda
/
Leucoantiocia nidinas
/
F%a$n"!es
Qu"nnas (Cmrtam" ent ante ac"! * !na!r !e e%ectrnes)
Prueba
Me#aboli#os
%l J
K
/
/
8aF .1C
Q
San"nas
Espuma
Car!"t#n"cs
Antrona
Q
Obser$ac "nes
#olish
Q
idroxamato férrico idroxamato férrico Erlich
Ses+u"teren %actnas Cumar"nas
/ /
Malser
/
#ayer
/
:ragendorN
/
4chleiber
/
Oagner
/
Lieberman urchard
0
A%ca%"!es
Ester"!es
/
(erdosa %loración (ioleta 8o hubo reacción 8o hubo reacción 8o hubo reacción 8o hubo reacción 8o hubo reacción 8o hubo reacción 8o hubo reacción 8o hubo reacción
Tab%a 12 Resultados otenidos a partir de las prueas de identi.cacin de la marcha .to/uimica preliminar
!ara el an9lisis de taninos en la cicuta los resultados fueron negati(os en las tres diferentes pruebas realizadas, según Malderrama 301106 este tipo de compuestos en la familia Apiaceae se encuentra en plantas forestales y de corteza abundante, la especie Conium Maculatum : no posee un (olumen de tallo o corteza abundante por lo )ue la presencia de este tipo de metabolitos )ueda descartada
-
OH
HO +
Fe (OR)
FeCl3
+
O
O
HO
CO 2
+
-
-
-
-
-
-
-
R CO NH R CO NH R``
HO
OH
HO
-
-
CO 2 OH
HO
CO 2
-
CO 2
-
Figura 2. =ruea de la gelatina < sal
En la identi7cación de 4aponinas, no se produ+o ninguna espuma al agregar los reacti(os correspondientes, 4egún "und&as 30116 las saponinas en la familia Apiaceae se encuentran solo en algunos casos, comúnmente en las especie !hysospermum (ercillatu, de la cicuta no hay un reporte sobre la presencia de este tipo de compuestos Aun)ue bibliogr97camente no se reporta la presencia de %arotenoides en la %onium #aculatum L podemos suponer )ue algunas 2ores fueron a*adidas a nuestra muestra, y por consiguiente a nuestro extracto Los %arotenoides son compuestos )ue pueden actuar como pigmentos en las 2ores, d9ndoles su color caracter&stico !odemos inferir en la idea de )ue la presencia positi(a de estos se debe al an9lisis indirecto de las 2ores de esta planta, las cuales tienen un color amarillo La presencia de )uinonas en medio b9sico fue positi(a, aun)ue en la literatura no se encuentra caracterizaciones )ue hablen sobre su contenido en este tipo de plantas o familia OH
+ 2H /n
3HCl O
OH
-
OH
+
2-
-
puente de hidrogeno
OH
OH -
- -
-
O
HO
-
R CO NH R CO NH R``
+
n
++
OH
OH
Figura 3. Comportamiento ante acido 2 donador de
=ruea del cloruro 95rrico -
HO
HO
O
+
O
(Ac)2 Pb
-
Pb-O-R + 2H3C-CO 2H OH
OH
n
n
Figura . =ruea del acetato de plomo
electrones
Los resultados de las pruebas para la detección de
pruebas realizadas, sin embargo, en la literatura no se reporta presencia de estos metabolitos en las ho+as de la Conium Maculatum : OH H
OH
H
OH
H
OH
H
OH
OH
+
OH OH
H2#O $
OH
O OH
O O
O
Figura 11. =ruea de Molish O
O
+
!g/ 2HCl
+
!gCl 2
O
O
Figura 4. =ruea de 8hinoda
Los resultados para las %umarinas fueron negati(os en las diferentes pruebas 4egún Larsson 3011.6 en la Conium Maculatum : se ha e(idenciado la presencia de furano %umarinas lineales, pero su lugar de bios&ntesis y acumulación no ha sido bien identi7cado 4e dice )ue su concentración se da primordialmente en las frutas
La identi7cación de esteroides fue positi(a mediante la reacción de Liebermanurchard El cambio a color (erde fue inmediato, después de pasados - minutos se siguió la misma tendencia 4egún $adulo(ic et al 301//6 los esteroides predominantes )ue se encuentran en la especie Conium Maculatum : son el estigmasterol 3stigmasta-,00dien P=ol6 y el =sitosterol 3estigmast-enP=ol6 Las estructuras de estos compuestos pueden ser detallados en la +igura ( 4egún $odr&guez 3/6 el mecanismo de reacción para esta prueba no ha sido descubierto -
-
HgCl 2 + 2% -------2 Cl + Hg% 2
CH3 +
O H3C
H2N
+
OH
PRC%P%'A*O ROO N" OH
-
Hg% 2 + % ------- Hg% $
O
CH2
2-
CO!P&O * CO&OR PAR*O
H3C H3C CH2
H3C OH O
+
Fe
3+
+
HCl
Hg
O
N
O
-
O
3
Figura 5. =ruea del Iidro1amato 95rrico
NH2%
Hg CO&OR A!AR%&&O %N'N#O Figura 1. Reaccin general para la identi.cacin de
alcaloides
Figura 16. =ruea de -rlich
Los resultados para los metabolitos de tipo cardiotónico fueron positi(os en las dos
La cicuta es una planta )ue est9 compuesta mayoritariamente por alcaloides Los resultados para este tipo de metabolito secundario fueron negati(os en todas las diferentes pruebas efectuadas
se detallan los diferentes alcaloides reportados en la cicuta se puede detallar como este postulado no se cumple en nuestro caso en particular, debido a )ue la mayor&a de estos compuestos son alcaloides (erdaderos, )ue si pueden ser f9cilmente detectados por las pruebas de reconocimiento !ara determinar las posibles causas de estos falsos negati(os se tu(ieron )ue mirar otras caracter&sticas y aspectos de la planta Entre ellos, la concentración de estos alcaloides en las diferentes partes de la planta 3cabe resaltar )ue en nuestros experimentos solo se usaron las ho+as y alguna )ue otra 2or6 y la concentración de metabolitos secundarios dependiendo del tiempo (egetati(o o de crecimiento de la planta La especie %onium #aculatum presenta la presencia del alcaloide coniina, este compuesto según >onzales 301/16 se encuentra presente en las semillas, con lo )ue podemos con7rmar )ue el resultado negati(o es (erdadero al solo usar las ho+as para el an9lisis Metter 3011.6 reporta )ue cuando se hacen las pruebas en las ra&ces y las puntas de los brotes de plantas +ó(enes estas indican resultados positi(os; en las plantas m9s maduras estas reacciones positi(as tienden a desaparecer, como en nuestro caso Las reacciones positi(as se muestran en las frutas sólo por conductos secretores %orsi y iasci 3/B6 sugieren )ue la Conium Maculatum : es similar a otros miembros de la familia Apiaceae, )ue tiene conductos secretores en órganos (egetati(os y frutas Las concentraciones y las proporciones relati(as de los diferentes alcaloides en la Conium Maculatum : parecen depender de diferentes factores 3temperatura, humedad, tiempo y la edad de los la planta6 3Metter, 011.6 Las fases de 2oración, polinización y fertilización muestran un cambio brusco en la distribución de alcaloides La yconiceina es el componente alcaloide predominante durante la época de llu(ias y la coniina predomina durante el per&odo seco El contenido de yconiceina disminuye y el contenido de coniina aumenta notablemente durante la fase de maduración de la fruta 3
alcaloide, con pe)ue*as cantidades de conhidrina Metter 3011.6 nos dice )ue la mayor&a de las plantas de la familia Apiaceae producen diferentes aceites (ol9tiles en los te+idos claramente delimitados de los frutos 4e sabe )ue la especie Conium Maculatum : produce y contiene alcaloides de piperidina pero la s&ntesis y los sitios de acumulación aún no se han identi7cado de manera ine)u&(oca !or tanto, no se puede establecer la (erdadera presencia de estos en las ho+as de la planta %abe resaltar )ue se dice )ue estos compuestos se encuentran mayoritariamente en los aceites esenciales López et al 3/6 reporta )ue el contenido promedio de alcaloides en las ho+as (a de un 1,-C a un /,-C Al igual se puede resaltar malos procedimientos al efectuar las pruebas de identi7cación, o sobrecalentamiento del extracto, lo cual da*a los metabolitos secundarios termol9biles T/c$icas cro'a#ogra(cas de se*araci%$ S%$ente a%ar (A) Ster de petróleo %loroformo
S%$ente %ar (P) Etanol Acetato de 5sopropilo Etanol
Prrc"#n (A3P) @'P /'/
"olueno P'@ Tabla ". Mezcla de solentes 3apolares 2
polares4 2 proporciones utilizadas en la pr"ctica
La selección de cloroformo 3apolarTpolar6 y acetato de isopropilo 3polar6 en una proporción /'/, como fase mó(il, permitió una me+or separación de cada uno de los compuestos presentes en el extracto etanólico de la %onium #aculatum 3+igura $(6, hecho )ue al ser comparado con la fase mó(il sugerida por $odr&guez 3/@6 es aproximado, ya )ue en la literatura sugiere como fase mó(il cloroformo y etanol o hexanocloroformo y :ietilamina al 11-C en una proporción P'@ cuando la fase estacionaria es una placa de alúmina, con el ob+eti(o de separar alcaloides )ue es el blanco de la in(estigación de la planta Al obser(ar las proporciones )ue se sugieren, la fracción polar es mayor )ue la apolar, siendo en este punto donde se clari7ca la razón por la cual la separación no fue optima; ya )ue la proporción escogida en la pr9ctica fue de /'/ :e otro lado, aerheim4(endsen recomienda )ue para separar los alcaloides de la cicuta por cromatograf&a se debe
emplear como sol(ente %loroformoetanol absoluto y amonio 0-C 3/B'0'06 con platos de silica gel acti(a 4tahl 3011@6 recomienda el uso de acetona, dietil éter y amonio concentrado 3-1'-1'P6 y silica gel para la separación de los alcaloides de la cicuta y la identi7cación de la arecolina Ahora bien, la mayor&a de metabolitos encontrados en la cicuta son alcaloides piperidinicos, los cuales pueden ser identi7cados con la mezcla de sol(entes descrita anteriormente 3ui, /@6 Los alcaloides piperidinicos pueden ser resueltos en "L% de silica gel eluido con cloroformo y etanol 3@'P6 y (isualizados con el reacti(o de :ragendorN La >amma %oniceina 3+igura #6 puede ser determinada en presencia de otras piperidinas por reacción con nitroprusiato de sodio 3ui, /@6 Al no ser óptimamente separados los compuestos presentes en el extracto etanólico, se creó un con2icto entre cada uno de los compuestos, puesto )ue est9n superpuestos creando impedimentos )ue di7cultan la reacción, por lo cual al momento de ser re(elados con (ainillina9cido fosfórico, re(elador indicado para cetonas, no mostro la coloración )ue cita el autor como positi(a, )ue es rosa, las cuales si se encuentran en los esteroides, compuestos presentes en la especie Conium Maculatum : 3estigmasterol 3stigmasta-,00dienP=ol6 y el =sitosterol 3estigmast-enP=ol66 Los re(eladores adecuados para la identi7cación de alcaloides son' :isolución de yodoplatinico en yoduro de potasio, o reacti(o de :ragendorN o permanganato de potasiobicarbonato de sodio, para tal ob+eti(o !or lo cual no fue posible identi7car los alcaloides, metabolitos )ue m9s se encuentran en la planta
et"nolico 2 la tinta china en las di9erentes mezclad de solentes $ ter de petrleo0-tanol 3K0(4; # Cloro9ormo0Acetato de sopropilo 3$0$4 2 ( !olueno0-tanol 3(0K4
Al obser(ar la fase mó(il utilizada 3Alúmina6 se puede decir )ue no es la adecuada para la separación de compuestos )ue contienen un grupo Amina 3alcaloides6 ya )ue debido a )ue según UA# esta es útil para la separación de compuestos apolares tales como hidrocarburos, haluros de al)uilo, éteres, aldeh&dos y cetonas :e esta manera la literatura recomienda )ue para la separación de compuestos aminados se debe usar la 4ilicegel como fase estacionaria ya )ue retiene con m9s fuerza sustancias m9s polares Este proceso se da debido a las interacciones intermoleculares de tipo dipolodipolo o enlaces de hidrogeno entre el soluto y el adsorbente, de este modo a medida )ue corre la fase mó(il (a arrastrando al compuesto y este (a siendo retenido por dichas interacciones con la fase estacionaria, en este caso la alúmina, cada metabolito o sustancia tiene un tiempo de retención especi7co %abe resaltar )ue nuestro extracto etanólico no estaba bien concentrado, es decir, no ten&a una cantidad su7ciente de metabolitos secundarios como para hacer una corrida e7caz Esta (ariable pudo ser la )ue m9s in7rió en los resultados poco concluyentes de la pr9ctica 8o obstante, se pudo e(idenciar )ue si hubo una corrida en las placas, pero )ue estas no estaban resultas de forma tal )ue pudieran dar una correcta separación e identi7cación del compuesto en particular Cnc%us"nes 4e realizó una marcha 7to)uimica preliminar )ue comprendió tres etapas' extracción, identi7cación y separación cromatograf&a de los metabolitos secundarios de las partes aéreas de la especie Conium Maculatum :, ante esto se concluyó lo siguiente'
Fig ura 1!. Recorrido de la muestra del e1tracto
4e pudo determinar )ue el me+or método para la obtención de extracto etanólico es el método de soxhlet, ya )ue es una técnica exhausti(a )ue re)uiere poca cantidad de reacti(o, menos tiempo para la extracción y genera un rendimiento notable
La extracción de aceites esenciales por arrastre con (apor de agua demostró ser una técnica )ue se (e afectada por dos factores en general' la cantidad de muestra (egetal y la trituración de la misma
4e determinó mediante pruebas positi(as y especi7cas )ue la composición de metabolitos secundarios en las ho+as de la especie Conium Maculatum : es la siguiente' %arotenoides 3en las 2ores6, cardiotónicos, )uinonas y esteroides Aun)ue la literatura no +usti7ca la presencia de estos metabolitos 3excepto los esteroides6
4e determinó )ue la presencia de los diferentes metabolitos secundarios 3en especial alcaloides6 reportados por la literatura no se encuentran en su totalidad en las ho+as, si no )ue esto depende de los sitios de bios&ntesis y acumulación Al igual también son factores importantes el clima, la temperatura, la humedad y en particular el tiempo de crecimiento Aun)ue se reporta )ue la cicuta tiene gran cantidad de alcaloides en su composición, cabe aclarar )ue las reacciones positi(as de identi7cación tienden a desaparecer al madurar la planta 4e logró determinar a partir de las pruebas espec&7cas de identi7cación y la literatura la )uimiotaxonom&a general de la especie Conium Maculatum :, en la )ue se encuentra' !resencia de alcaloides en las ra&ces, ho+as, semillas y frutos; presencia de
fase estacionaria son el estigmasterol 3stigmasta-,00dienP=ol6 y el = sitosterol 3estigmast-enP=ol66, debido en parte al grupo cetona presente en su estructura, )ue según la literatura corre con el tipo de sol(entes y fase estacionaria utilizados
Al no tener una separación adecuada de los metabolitos en la placa cromatogra7ca no se puede establecer una identi7cación clara de los compuestos hallados en la cicuta
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