LAPORAN PRAKTIKUM “PERSIAPAN MEDIA DAN STERILISASI”
OLEH : NAMA
: RITA ANGGREANI WIDIASTUTI
NIM
: D1C1 14 155
KELOMPOK
: IV
KELAS
: TPG-A 2014
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULT FAKULTAS AS TEKNOLOGI DAN INDUSTRI PERTANIAN PERTANIAN UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 201
I! PEND PENDAH AHUL ULUA UAN N I!1
L"#"$ %&'"(")*
Medium memiliki syarat harus steril, agar tidak ada kontaminan yang tumbuh, untuk itu penyiapan medium dan sterilisasi alat dan bahan yang akan digunakan harus disterilkan terlebih dahulu. Selain itu, medium harus memiliki kandun kandungan gan nutrien nutrientt dan zat-zat zat-zat yang yang sesuai sesuai dengan dengan jenis jenis dan tujuan tujuan medium medium tersebu tersebut. t. Nutrien Nutrien dalam dalam medium medium harus harus memenu memenuhi hi kebutu kebutuhan han dasar dasar makhlu makhluk k hidup, yang meliputi air, karbon, energi, nitrogen, mineral dan faktor tumbuh. Mikr Mikroo oorg rgan anism ismee dapa dapatt ditu ditumb mbuh uhka kan n dan dan dike dikemb mban angk gkan an pada pada suat suatu u substrat yang disebut medium. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembang mengembangbiakka biakkan n mikroorga mikroorganisme nisme tersebut tersebut harus sesuai susunanya susunanya dengan dengan kebu kebutu tuha han n
jeni jeniss-je jeni niss
mikr mikroo oorg rgan anis isme me
yang ang
bers bersan angk gkut utan an..
Bebe Bebera rapa pa
mikroo mikroorga rganis nisme me dapat dapat hidup hidup baik baik pada pada medium medium yang yang sangat sangat sederh sederhana ana yang yang hanya mengandung garam anargonik ditambah sumber karbon organik seperti gula. Sedangkan mikroorganime lainnya memerlukan suatu medium yang sangat kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah atau bahan-bahan kompleks lainnya. I!2
T+,+")
Tujua Tujuan n dari dari prakt praktik ikum um ini ini yaitu yaitu untu untuk k meny menyia iapk pkan an medi mediaa tumb tumbuh uh mikroorganisme yang steril.
II!
TINJAUAN PUSTAKA
Mikroorganisme harus dibiakkan di laboratorium pada bahan nutrien yang berperan penting untuk pertumbuhan dan perkembangbiakannya. Susunan bahan nutrien nutrien,, baik baik bahan bahan alami alami maupun maupun sinteti sintetik/b k/buat uatan, an, yang yang diperg diperguna unakan kan untuk untuk pertumbuhan dan perkembangan bakteri. Maam nutrien yang digunakan tergantung dari maam bakteri yang dibiakkan !"ani, !"ani, #$%%&. Medium merupakan suatu bahan yang terdiri atas ampuran zat makanan !nutrient & yang yang berf berfun ungs gsii sebag sebagai ai temp tempat at tumb tumbuh uh mikr mikrob obia ia.. Selai Selain n untu untuk k menu menumb mbuh uhka kan n
mikr mikrob obia ia,,
mediu edium m
dapa dapatt
digu diguna naka kan n
juga juga
untu untuk k
isol isolas asi, i,
memperbanyak, pengujian sifat'sifat fisiologi, dan perhitungan jumlah mikrobia !Tim (enyusun, #$%)&. Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari ampuran ampuran zat-zat makanan atau nutrisi nutrisi yang diperlukan diperlukan oleh mikroorgan mikroorganisme isme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi di dalam media berupa molekul-molekul keil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. *engan *engan media, pertumbuhan pertumbuhan dapat dilakukan dilakukan dengan dengan isolasi mikroorga mikroorganisme nisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Bahan dasar adalah air !+#& sebagai pelarut dari agar-agar !rumput laut& dimana agar-agar tersebut berfungsi sebagai pemadat media !Soni, #$%$ dalam Mirsadi, #$%&. (ersy (ersyara aratan tan yang yang haru haruss dipe dipenu nuhi hi dala dalam m peny penyiap iapan an medi medium um supay supayaa mikroo mikroorga rganis nisme me dapat dapat tumbuh tumbuh baik baik adalah adalah mengan mengandun dung g semua semua nutrisi nutrisi yang yang muda mudah h digu diguna naka kan n oleh oleh mikr mikrob oba, a, memp mempun unya yaii teka tekana nan n osmo osmose, se, tega tegang ngan an permukaan, dan p+ yang sesuai, tidak mengandung zat-zat penghambat dan steril !akhma0ati, #$%#&.
Medi Mediaa dapa dapatt digo digolo long ngka kan n berd berdas asark arkan an bent bentuk uk,, susu susuna nan n kimi kimia, a, dan dan fungsinya. Berdasarkan bentuk atau konsistensinya media terdiri dari media padat ! solid solid medium& medium& berbentuk berbentuk padat, tidak mengandung mengandung agen air, media media air ! liquid medium& medium& berbentuk air, media ini dapat berupa bahan organik alamiah !yang dibuat dari kentang, 0ortel&, atau dapat juga berupa bahan anorganik !misal silia gel& gel&,, dan dan medi mediaa semi semi pada padatt ! semi semi solid medium&, medium&, medi mediaa pada padatt yang yang dapa dapatt diairkan, apabila dalam keadaan panas berbentuk air, sedangkan dalam keadaan dingin berbentuk padat, misalnya media agar !Tim (enyusun, #$%)&. Medi Mediaa 1MB2 1MB2 ! Eosin ! Eosin Methylen Blue Agar & mempunyai mempunyai keistime0aan keistime0aan meng engandung
lakt aktosa
dan
berfu rfungsi
untuk
memilih lih
mikroba
yang ang
memferm memferment entasik asikan an laktos laktosaa seperti seperti staphyl staphyloo oou uss aureus, aureus, (. aerugen aerugenosa osa dan salmonella. salmonella. Mikroba Mikroba yang memfermentasik memfermentasikan an laktosa akan menghasilka menghasilkan n koloni koloni dengan inti ber0arna gelap dengan kilap logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninyan tidak ber0arna !+asto0o, %33# dalam Bashar, #$%&.
III! METODOLOGI PRAKTIKUM !1! !1! T&./"# ./"# ") ") W" W"(#+
(raktikum dilaksanakan di 4aboratorium 2groteknologi 5nit 6itopatologi, 6akultas (ertanian pada hari Selasa, Mei #$%7 pukul %.$$-%8.$$ 9:T2. 9:T2. !2! !2! %"" %"") ) ") ") A'"# '"#
Bahan yang digunakan dalam praktikum ini yaitu media sintesis 1MB2, auades, Nutrient Broth, Broth, agar, %8; skim milk , pepto epton, n, Na - M&" EM%A Menimbang media sintesis 1MB2 sebanyak %?.@8 g. • Memasukkan media 1MB2 kedalam gelas kimia %$$$ ml. • Menambahkan auades sebanyak 8$$ ml. • Menghomogenkan ampuran media tersebut menggunakan magnetic •
-
stirrer , setelah itu memasukkan ampuran kedalam botol Schoot . Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclae menggunakan Autoclae.. • M&#& #& +, /$ /$#& #&'# '#( Menimbang Nutrient Menimbang Nutrient Broth sebanyak Broth sebanyak ).8 g. • Menimbang agar sebanyak 8 g, lalu menambahkan %8; skim %8; skim milk . • Menampur bahan-bahan tersebut kedalam gelas kimia %$$$ ml, lalu •
•
-
menambahkan auades sebanyak 8$$ ml. Menghomogenkan ampuran media tersebut menggunakan magnetic
stirrer , setelah itu memasukkan ampuran kedalam botol Schoot . Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclae menggunakan Autoclae.. • M&#& NA Menimbang media sintesis Nutrient sintesis Nutrient Broth sebanyak Broth sebanyak ).8 g. • Menimbang agar sebanyak %$ gr. • Menampur Nutrient Menampur Nutrient Broth dan Broth dan agar dalam gelas kimia %$$$ ml. •
• •
-
-
stirrer , setelah itu memasukkan ampuran kedalam botol Schoot . Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclae menggunakan Autoclae.. • M&" &" +, +, "&$ "&$ ") ") ")" ")"&$ &$ Menimbang pepton #.$ gA Na
•
A Bromthymol blue %; blue %; .$ g. Menampur bahan-bahan tersebut kedalam gelas kimia %$$$ ml lalu
•
menambahkan auades sebanyak 8$$ ml. Menghomogenkan ampuran media tersebut menggunakan magnetic
stirrer , setelah itu memasukkan ampuran kedalam botol Schoot . Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclae menggunakan Autoclae.. • M&" PDA Menimbang media sintesis Potato sintesis Potato Dextrosa Broth Broth sebanyak sebanyak %# g. • Menimbang agar sebanyak 8 g. • Menampur Potato Potato Dextrosa Broth dan Broth dan agar dalam gelas kimia %$$$ •
• •
-
Menambahkan auades sebanyak %$$$ ml. Menghomogenkan ampuran media tersebut menggunakan magnetic
ml. Menambahkan auades sebanyak 8$$ ml. Menghomogenkan ampuran media tersebut menggunakan magnetic
stirrer , setelah itu memasukkan ampuran kedalam botol Schoot . Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclae menggunakan Autoclae.. • M&" +, +, ". ".'''# #( Menimbang Nutrient Menimbang Nutrient Broth sebanyak Broth sebanyak ).8 g. • Menimbang agar sebanyak 8 g lalu menambahkan %8; pati. • Menampur bahan-bahan tersebut kedalam gelas kimia %$$$ ml lalu •
•
•
menambahkan auades sebanyka 8$$ ml. Menghomogenkan ampuran media tersebut menggunakan magnetic stirrer , setelah itu memasukkan ampuran kedalam botol Schoot . Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclae menggunakan Autoclae..
IV!
HASIL DAN PE PEM%AHASAN
4!1! H"3'
A : .&" +, /$#&'#( % : .&" NA C : .&" PDA D : .&" EM%A E : .&" +, ".''#( F : +, "&$ ") ")"&$
4!2! 4!2! P&. P&." ""3 "3") ")
Medi Medium um
meru merupa paka kan n
baha bahan n
yang ang
digu diguna naka kan n
untu untuk k
menu menumb mbuh uhka kan n
mikroo mikroorga rganis nisme me di atas atau atau di dalamny dalamnya, a, medium medium tersebu tersebutt harus harus memenu memenuhi hi syarat-syarat, antara lain adalah harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba, harus mempunyai tekanan osmosis, tegangan permukaan dan p+ yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan ditumbuhkan, tidak mengandung zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba, harus berada dalam keadaan steril sebelum digunakan, agar mikroba yang di tumbuhkan dapat tumbuh tumbuh dengan dengan baik. baik. Medium Medium juga juga merupa merupakan kan makana makanan n atau ampur ampuran an dari dari beberapa bahan makanan yang disiapkan untuk untuk pertumbuhan mikroorganisme. mikroorganisme. (raktikum ini menggunakan media uji 1MB2 ! Eosin ! Eosin Methylen Blue Agar &. &. Medi Mediaa 1MB2 1MB2 ! 1osi 1osin n Meth Methy ylen len Blue Blue 2gar gar & memp mempun uny yai keis keisti time me0a 0aan an meng engandung
lakt aktosa
dan
berfu rfungsi
untuk
memilih lih
mikroba
yang ang
memferm memferment entasik asikan an laktos laktosaa sepert sepertii Staphylococcus aureus, aureus , P! P! aerugenosa dan Salmonella. Salmonella. Mikroba yang memfermentasikan laktosa akan menghasilkan koloni dengan inti ber0arna gelap dengan kilap logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat dapat tumb tumbuh uh kolo koloni niny nyaa tida tidak k ber0a ber0arn rna. a. 2dany danyaa eosi eosin n dan dan meth methyl ylen en blue blue memban membantu tu mempert mempertajam ajam perbed perbedaan aan tersebu tersebut. t. 2gar 2gar 1MB !leine !leine&& merupa merupakan kan media padat yang dapat digunakan untuk menentukan jenis bakteri oli dengan memberi memberikan kan hasil hasil positi positiff dalam dalam tabung tabung.. 1MB yang yang menggu menggunak nakan an eosin eosin dan metilen blue sebagai indikator memberikan perbedaan yang nyata antara koloni yang meragikan laktosa dan yang tidak. Medium tersebut mengandung sukrosa karena kemempuan bakteri koli yang lebih epat meragikan sukrosa daripada laktosa.
N2 ! Nutrient Agar & digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri. N2 dibuat dengan komposisi agar-agar yang sudah dipadatkan sehingga N2 juga bisa disebu disebutt dengan dengan nutrien nutrientt padat padat yang yang diguna digunakan kan untuk untuk menumb menumbuhk uhkan an bakteri bakteri.. Medium N2 adalah salah satu medium padat yang memiliki komposisi yaitu agaragar yang telah dipanaskan dan menair dengan suhu 38 C<. N2 lebih bersifat umum sehingga mikroba banyak tumbuh pada media ini. (*2 ! Potato Dextrose Agar & digunakan untuk menumbuhkan fungi atau jamur. (*2 merupakan salah satu media biakan karena kaya akan nutrisi yang dibutu dibutuhka hkan n oleh oleh mikrob mikrobaa untuk untuk hidup. hidup. Nutris Nutrisii yang yang diberi diberikan kan media media untuk untuk mikrob mikrobaa berupa berupa karboh karbohidr idrat at !pati& !pati& dari dari kentan kentang, g, glukos glukosaa dari dari dekstro dekstrosa sa atau atau fruk frukto tosa sa serta serta kand kandun unga gan n air dalam dalam agar agar.. *alam *alam pemb pembuat uatan an (*2 (*2 diset disetiap iap prosesnya harus selalu steril, baik alat-alat yang digunakan untuk proses pembuatan haruslah steril. tangan, dalam proses ini tangan harus disterilkan oleh alkohol sebelum melakukan pembuatan (*2 ini. Tujuannya yaitu agar (*2 yang dibuat tidak ditumbuhi mikroorganisme yang tidak diinginkan. Media biakan adalah media steril untuk menumbuhkan mikroorganisme. *alam pembuatan (*2, peranan agar-agar sebagai media tempat tumbuh dari jamur. Sedangkan kentang yang mengandung karbohidrat berperan untuk memberikan energi bagi mikroorganisme. 5ji
amil amilol olit itik ik
dikh ikhusu ususkan skan
pada pada
pengu enguji jian an
bakt bakter erii
amil amilol olit itik ik..
Mikroo Mikroorg rgani anisme sme yang yang bersif bersifat at amilol amiloliti itik k dapat dapat memeah memeah pati pati !amilu !amilum& m& yang yang terdapat terdapat dalam makanan menjadi senya0a yang lebih sederhana, sederhana, terutama dalam bentuk glukosa. =emampuan untuk menghidrolisis amilum menjadi glukosa, malt maltos osaa dan dan deks dekstr trin in kare karena na memp mempuny unyai ai enzim enzim amila amilase. se. 6ung 6ungsi si uji uji posi positi tif f
hidrolisis amilum pada bakteri ditandai dengan tampaknya area jernih di sekitar pertumbuhan bakteri yang digoreskan. 6ungi atau a tau bakteri memproduksi D-amilase D-a milase sehingga mampu menguraikan amilum dengan eksoenzim amilolitik ters ebut amat luas antara mikroorganisme. 5ji proteolitik diujikan pada bakteri proteolitik yaitu enzim pemeah protein yang diproduksi didalam sel kemudian dilepaskan keluar dari sel tetapi tidak semua mempunyai enzim protease ekstraselular. Pengujian secara kualitatif
dilakukan dengan cara mengamati zona bening yang berada di sekitar koloni bakteri, kemudian membagi diameter zona bening dengan dengan diamet diameter er kolon kolonii bakter bakteri. i. Hasil Hasil bagi bagi diamet diameter er terseb tersebut ut dinyat dinyatak akan an sebaga sebagaii aktit aktitas as prote protease ase secara secara relat relatif if.. Aktivi Aktivitas tas bakteri proteolitik proteolitik juga dapat diketahui diketahui secara kuantitatif dengan menggunakan menggunakan spektrofotometer spektrofotometer pada panjang panjang gelombang ultra violet 2! nm. Panjang gelombang tersebut tersebut dapat ditangkap ditangkap dan dipantulkan dipantu lkan kembali oleh asam amino suatu protein berdasarkan gugus gugus arom aromati atik k teruta terutama ma asam asam amino amino tirosi tirosin, n, tripto triptofan fan dan fenilalanin. "elebihan "elebihan metode metode ini yaitu sederhana, mudah serta serta tidak memerlukan penambahan reagen tertentu. #ji aerob dan anaerob, energi diperoleh melalui fosforilase oksida oksidatif tif tetapi tetapi dalam dalam prose prosesny snya a bis bisa a menggu menggunak nakan an oksig oksigen en sebagai aseptor elektron terakhir $respirasi aerob% atau senya&a anorganik lain $respirasi anaerob%. Pada mikroorganisme aerob, oksi oksige gen n digu diguna naka kan n seba sebaga gaii asep asepto torr elek elektr tron on tera terakh khir ir,, tida tidak k
dipe diperl rluk ukan an
reduk eduksi si
seny senya& a&a a
inte interrmedi mediat ator or
sepe sepert rtii
dala dalam m
fermen fermentas tasi. i. Hasiln Hasilnya ya senya& senya&a's a'seny enya&a a&a inter intermed mediet iet terseb tersebut ut dapat dapat dioksi dioksidas dasii sempur sempurna na menja menjadi di karbo karbon n dioksi dioksida da dan air. air. (etabolisme anaerob, elektron yang dibebaskan melalui reaksi oksida oksidasi si ditran ditransfe sferr melalu melaluii serang serangka kaian ian transf transfer er elektr elektron on dan energi dihasilkan melalui fosforilase oksidatif. )etak perbedaan antara respirasi aerob dana anaerob yaitu respirasi anaerob yang berper berperan an sebaga sebagaii asepto aseptorr elektr elektron on terakh terakhir ir adalah adalah senya& senya&a a anorganik, bukan oksigen. (eran utama nutrien adalah sebagai sumber energi, bahan pembangun sel, dan sebagai aseptor elektron dalam reaksi bioenergetik !reaksi yang menghasilkan energi&. energi&. leh karenanya karenanya bahan makanan makanan yang diperlukan diperlukan terdiri dari air, sumber ener energi gi,, sumbe sumberr karb karbon on,, sumb sumber er asept aseptor or elek elektr tron on,, sumbe sumberr mine mineral ral,, fakto faktor r pertumbuhan, dan nitrogen. Selain itu, seara umum nutrien dalam media pembenihan harus mengandung seluruh elemen yang penting untuk sintesis biologik organisme baru.
V!
PENUTUP
5!1! 5!1! K& K&3 3./ ./+' +'") ")
Medi Medium um
meru merupa paka kan n
baha bahan n
yang ang
digu diguna naka kan n
untu untuk k
menu menumb mbuh uhka kan n
mikroorganisme di atas atau di dalamnya. Media juga merupakan makanan atau ampur ampuran an dari dari beberap beberapaa bahan bahan makana makanan n yang yang disiap disiapkan kan untuk untuk pertum pertumbuh buhan an mikroorganisme. Media Media 1MB2 1MB2 ! 1osin 1osin Methy Methylen len Blue Blue 2gar & mempun mempunyai yai keistim keistime0aa e0aan n meng engandung
lakt aktosa
dan
berfu rfungsi
untuk
memilih lih
mikroba
yang ang
memferm memferment entasik asikan an laktosa laktosa.. 2gar 2gar 1MB !leine !leine&& merupa merupakan kan media media padat padat yang yang dapat digunakan untuk menentukan jenis bakteri oli dengan memberikan hasil positif dalam tabung. 5!2! S"$")
(raktikum (raktikum ini seharusnya seharusnya dilakukan dengan benar karena praktikum praktikum ini berkaitan satu sama lain dengan praktikum selanjutnya.
DAFTAR PUSTAKA
Bashar, "azhid. #$%. Pembuatan EMBA dan M"A. M"A . http>//yazhid#?bashar.blogspot.o.id/#$%/$)/pembuatan-emba-danmaE%).html.. *i akses tanggal ) Mei #$%7. maE%).html Mirsadi, Mirsadi, 4uky. 4uky. #$%. #$%. #aporan Praktikum Mikrobiologi Mikrobiologi Pertanian. Pertanian . 5niersitas Sebelas Maret. Surakarta. akhma0ati, 2nna. #$%#. Penyiapan #$%#. Penyiapan Media Mikroorganisme Mikroorganisme.. 5niersitas Negeri "ogyakart "ogyakarta. a. "ogyakart "ogyakarta. a. Tim (enyusun. #$%). Petun$uk Praktikum M!%! Mikrobiologi Pertanian. Pertanian . 5niersitas Sebelas Maret. Surakarta. "ani.
#$%%. Media Pertumbuhan Mikroba. Mikroba. http>//unsa@.blogspot.o.id/#$%%/$7/media-pertumbuhan-mikroba.html.. http>//unsa@.blogspot.o.id/#$%%/$7/media-pertumbuhan-mikroba.html *i akses tanggal ) Mei #$%7.
LAMPIRAN
