LAPORAN PRAKTIKUM SEROLOGI “PENENTUAN JUMLAH LEUKOSIT”
Disusun Oleh : FATHIA NURHASANA 11 01 01 161 Kelas D Reguler Semester VI Kelompok III
SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI BHAKTI PERTIWI PALEMBANG 2014
PERCOBAAN VIII PENENTUAN JUMLAH SEL LEUKOSIT
1.1
Objek Praktikum Darah mencit putih jantan
1.2
1.3
Tujuan Praktikum
Untuk mengetahui jenis dan bentuk sel leukosit
Untuk menghitung jumlah sel leukosit pada darah mencit
Untuk mengetahui presentase masing-masing jenis sel leukosit Landasan Teori
1.3.1
Leukosit Sel darah putih, atau leukosit adalah sel yang membentuk komponen darah.
Sel darah putih ini berfungsi untuk membantu tubuh melawan berbagai penyakit infeksi sebagai bagian dari sistem kekebalan tubuh. Sel darah putih tidak berwarna, memiliki inti, dapat bergerak secara amoebeid, dan dapat menembus dinding kapiler/diapedesis. Dalam keadaan normalnya terkandung 4 x 10 9 hingga 11 x 10 9 sel darah putih di dalam seliter darah manusia dewasa yang sehat - sekitar 7000-25000 sel per tetes. Dalam setiap mm3 darah terdapat 6000 sampai 10000 (rata-rata 8000) sel darah putih. Dalam kasus leukemia, jumlahnya dapat meningkat hingga 50000 sel per tetes. Di dalam tubuh, leukosit tidak berasosiasi secara ketat dengan organ atau jaringan tertentu, mereka bekerja secara independen seperti organisme sel tunggal. Leukosit mampu bergerak secara bebas dan berinteraksi dan menangkap serpihan seluler, partikel asing, atau mikroorganisme penyusup. Selain itu, leukosit tidak bisa membelah diri atau bereproduksi dengan caranya sendiri, melainkan leukosit adalah produk dari sel punca hematopoietic pluripotent yang ada pada sumsum tulang.
1.3.2
Pembentukan Leukosit Sel – sel polimorfonuklear dan monosit dalam keadaan normal hanya dibentuk
didalam sumsum tulang, sedangkan sel - sel limfosit dan sel – sel plasma diproduksi dalam bermacam – macam organ limfoid termasuk limfe, limpa, tonsil, dan bermacam – macam sel – sel limfoid yang lain di dalam sumsum tulang, usus dan sebagainya. Sel – sel darah putih yang di bentuk di dalam sumsum tulang, terutama granulosit akan di simpan di dalam sumsum sampai mereka diperlukan di dalam sistem sirkulasi, kemudian bila kebutuhannya meningkat maka akan menyebabkan granulosit tersebut dilepaskan. Dalam keadaan normal granulosit yang bersirkulasi di dalam seluruh aliran darah kira - kira tiga kali dari jumlah granulosit yang di simpan dalam sumsum, jumlah ini sesuai dengan persediaan granulosit selama enam hari.
1.3.3
Jenis – Jenis Leukosit Ada lima jenis leukosit dalam sirkulasi darah, dibedakan berdasarkan ukuran
bentuk nukleus dan ada atau tidaknya granula sitoplasma.
a.
Agranulosit : leukosit yang tidak memiliki granula sitoplasma
Granulosit : leukosit yang memiliki granula sitoplasma
Agranulosit terdiri dari 2 jenis, yaitu monosit dan limfosit
Monosit Monosit adalah sel darah yang kasar.Konsentrasi sel monosit ini didalam
darah antara 5% sampai 10%. Sel monosit ini hanya berada dalam darah selama 24 jam saja, untuk selanjutnya bermigrasi ke berbagai jaringan, menetap disana dan berubah menjadi sel dengan sitoplasma yang lebih besar dan kerap kali berlekuk
lekuk, dengan diameter antara 16
–
20 mikron, nukleous bervariasi biasanya
berbentuk ginjal, kromatin tersusun dalam untaian dengan warna lembayung muda, sitoplasma banyak berwarna biru keabu – abuan. Monosit memiliki dua fungsi utama dalam sistem kekebalan yaitu menambah jumlah makrofag dan sel dendritik pada daerah yang normal serta merespon peradangan,. Monosit dapat bergerak cepat (sekitar 8-12 jam) kedaerah infeksi pada jaringan dan berdiferensiasi menjadi makrofag serta sel dendritik untuk mendapatkan respon imun.
Monosit
struktur monosit dan perbandingannya dengan eritrosit
Limfosit Sel limfosit mempunyai ukuran yang kecil, merupakan sel lekosit kedua
terbanyak di dalam darah setelah neurotrofil yaitu antara 25% dan 35% dari jumlah seluruh lekosit. Mempunyai ciri – ciri sebagai berikut : diameter antara 8
–
10
mikron, nukleous bundar atau lonjong, berlekuk atau berbentuk seperti ginjal dengan kromatin kasar,sitoplasma sedikit, berwarna biru muda dan tanpa granula. Fungsi dari limfosit adalah membunuh dan memakan bakteri yang masuk kedalam jaringan tubuh.
Gambar Limfosit
Makrofag Makrofag berasal dari 2 kata yaitu macros yang berarti besar dan phagein yang
berarti makan, adalah sel darah putih didalam jaringan yang dihasilkan dari monosit. Makrofag berdiameter sekitar 21µ. Fungsinya adalah untuk phagocytose (menelan dan kemudian mencerna) selular, puing-puing dan pathogen baik sebagai sel mobile juga untuk merangsang limfosit dan sel imun lainnya dalam merespon pathogen.
Gambar Makrofag
b.
Granulosit Terdiri dari 3 jenis yaitu, neutrofil, eosinofil dan basofil dikelompokkan
berdasarkan warna granula sitoplasmanya
Neutrofil Sel neutrofil memiliki granula kecil berwarna merah muda, nukleus 3 - 4
lobus masing-masing lobus dihubungkan oleh benang kromatin halus. Merupakan sel leukosit pertama terbanyak didalam darah yaitu mencapai 60
–
65% dari total
leukosit. Bersifat fagositik dan sangat aktif, hingga dapat mencapai jaringan terinfeksi untuk menyerang virus dan bakteri.
Gambar Neutrofil
Eosinofil
Sel eosinofil memiliki granula besar dan kasar berwarna orange kemerahan, memiliki inti yang terbagi 2 lobus. Fungsi
:
fagositik lemah, jumlah meningkat saat terjadi alergi atau infeksi oleh parasit, berkurang saat stress ber-kepanjangan.
detoksikasi histamin yang dihasilkan sel mast dan jaringan yang luka saat inflamasi berlangsung
mengandung peroksidase dan fosfatase yaitu enzim yang menguraikan protein. Enzim ini mungkin terlibat dalam detoksifikasi bakteri.
Gambar Eusinofil
Basofil Mempunyai bentuk bulat, dan intinya sukar dilihat sebab tertutup oleh
granula. Granulanya sangat besar bulat,berwarna ungu tua, jumlahnya banyak tetapi letaknya tidak begitu rapat. Kadang – kadang vakuol tampak berwarna pucat dalam sitoplasma. Sel basofil didalam darah berjumlah 1% dari jumlah leukosit. Fungsi
:
Menghasilkan histamin untuk memicu aliran darah ke sekitar luka.
Menghasilkan heparin yaitu zat antikoagulan untuk mencegah gumpalan darah di pembuluh.
Gambar Basofil
1.3.4
Sediaan Apus Darah Untuk melihat struktur sel-sel darah dengan mikroskop cahaya pada umumnya
dibuat sediaan apus darah. Sediaan apus darah ini tidak hanya digunakan untuk mempelajari sel darah tapi juga digunakan untuk menghitung perbandingan jumlah masing-masing sel darah. Pembuatan preparat apus darah ini menggunakan suatu metode yang disebut metode oles (metode smear) yang merupakan suatu sediaan dengan jalan mengoles atau membuat selaput (film) dan substansi yang berupa cairan atau bukan cairan di atas gelas benda yang bersih dan bebas lemak untuk kemudian difiksasi, diwarnai dan ditutup dengan gelas penutup. Tiap – tiap perhitungan lekosit harus di kontrol dengan pemeriksaan sediaan hapusan darahnya. Penafsiran jumlah lekosit harus di lakukan pada daerah penghitung (counting
area)
yaitu
bagian
untuk
hapusan
tempat
eritrosit – erotrosit
terletak
berdampingan satu dengan yang lainnya, tetapi tidak saling bertumpukan. Bila didapatkan 20 – 30 leukosit perlapang pandang ini kira – kira sesuai dengan jumlah leukosit 5.000 Bila di dapatkan 30-40 lekosit perlapang pandang ini kira – kira sesuai dengan jumlah lekosit 7500, Bila di dapatkan 40 – 50 per lapang pandang ini sesuai dengan jumlah lekosit kiira – kira 10.000.
Gambar. Proses Pembuatan Sediaan Apus Darah Untuk menghtiung jumlah leukosit maka sediaan apus darah diwarnai dengan beberapa pewarna diantaranya adalah pewarna Giemsa, pewarna acid fast, pewarna garam, pewarnaan wright atau May Grunwald dll. Pada praktikum ini pewarna yang digunakan adalah pewarna Giemsa. Dasar dari pewarna Giemsa atau sering disebut juga pewarna Romanowski adalah penggunaan dua zat warna yang berbeda yaitu Azur B (Trimetiltionion) yang bersifat basa dan eosin y (tetrabromoflurescein) yang bersifat asam. Azur B akan mewarnai komponen sel yang bersifat asam seperti kromatin. DNA dan RNA. Sedangkan eosin y akan mewarnai komponen sel yang bersifat basa seperti granula eosinofil dan hemoglobin. Ikatan eosin y pada Azur B yang bergenerasi dapat menimbulkan warna ungu, dan keadaan ini
dikenal sebagai efek Romanowsky giemsa efek ini sangat nyata pada DNA tetapi tidak pada RNA sehingga menimbulkan kontras antara inti yang berwarna untuk sitoplasma yang berwarna biru. Metode pewarnaan giemsa ini banyak digunakan untuk mempelajari morfologi sel-sel darah, sel-sel lien, sel-sel sumsum dan juga untuk mengidentifikasi parasit-parasit darah misal Tripanosoma, psedopodia dan lain-lain dari golongan protozoa. Hasil pewarnaan dengan giemsa pada darah manusia akan memperlihatkan eritrosit berwarna merah muda, nukleolus leukosit berwarna ungu kebiru-biruan, sitoplasma leukosit berwarna sangat ungu muda, granula dari leukosit eosinofil berwarna ungu tua, granula dari lekosit neutrofil dan leukosit basofil berwarna ungu.
1.4
Waktu dan Tempat
1.5
Tempat
: Laboratorium Serologi STIFI Bhakti Pertiwi Palembang
Hari
: Sabtu
Tanggal
: 12 April 2014
Waktu
: 10.00 WIB s/d selesai
Alat dan Bahan Alat Alat yang digunakan dalam praktikum adalah :
Objek glass
Pipet Tetes
Gunting
Mikroskop
Alat penghitung (counter)
Bahan Bahan yang digunakan dalam praktikum adalah :
Pewarna Giemsa (1:20)
Methanol
Alkohol 70%
Air suling
Larutan NaCl fisiologis
Mencit Putih Jantan
1.6
Prosedur Kerja
Bersihkan ekor mencit dengan kapas yang dibasahi dengan alcohol 70%
Potong ekor mencit sepanjang 1cm, darah tetesan pertama dibuang dan satu tetes berikutnya diteteskan pada salah satu ujung dri objek glass
Ratakan dengan ujung objek glass yang lain dengan membentuk sudut 30º, lalu tarik dengan cepat dan tekanan yang sam, sehingga diperoleh lapisan darah yang rata (metode hapus darah)
Biarkan kering
Tetesi dengan methanol sehingga membasahi seluruh permukaan darah pada objek glass, biarkan selama 5 menit
Tambahkan satu tetes larutan Giemsa (1:20) biarkan selama 20 menit
Cuci dengan air suling, keringkan dan lihat dibawah mikroskop dengan pembesaran 1000 kali. Sel yang akan terlihat adalah sel neutrofil batang, neutrofil sekmen, monosit, limposit dan eusinofil
Hitung sel fagosit dengan total 100 sel, sehingga masing-masing jenis sel leukosit dapat ditentukan secara presentase
1.7
Pembahasan Pada percobaan kali ini dilakukan penentuan jumlah sel leukosit yang menggunakan
darah mencit putih jantan sebagai objeknya. Pertama-tama yang dilakukan adalah membersihkan ekor mencit dengan kapas yang telah dibasahi dengan alcohol 70%, lalu memotong ekor mencit dengan panjang 1cm dimana tetesan pertama dibuang dan tetesan selanjutnya diteteskan pada salah satu ujung dari objek glass. Kemudian dibuat sediaan apus darah, Sediaan apus darah ini dibuat tidak hanya untuk mempelajari sel darah tapi juga digunakan untuk menghitung perbandingan jumlah masing-masing sel darah. Pembuatan sediaan apus darah biasanya digunakan dua buah kaca sediaan yang sangat bersih terutama harus bebas lemak. Satu buah kaca sediaan bertindak sebagai tempat
tetes darah yang hendak diperiksa dan ynag lain bertindak sebagai alat untuk meratakan tetes darah agar didapatkan lapisan tipis darah (kaca perata). Darah yang digunakan adalah darah mencit putih jantan. Darah diratakan dengan salah satu ujung sisi pendek kaca perata diletakan miring dengan sudut kira- kira 30º tepat didepan tetes darah menyebar sepanjang sisi pendek kaca perata, maka dengan mempertahankan sudutnya, kaca perata digerakan secara cepat sehingga terbentuklah selapis tipis darah diatas kaca sediaan. Setelah sediaan darah dikeringkan, dilakukan proses fiksasi dengan pelarut methanol. Tujuannya adalah untuk membunuh sel-sel pada sediaan darah tersebut tanpa mengubah posisi (struktur) organel yang ada di dalamnya. Tujuan lainnya adalah untuk menghentikan proses metabolisme secara cepat, mencegah kerusakan jaringan, mengawetkan komponenkomponen sitologis dan histologis, mengawetkan keadaan sebenarnya, dan mengeraskan. Kemudian menggunakan pewarna giemsa. Pewarna Giemsa sebagai pewarna yang umum digunakan dalam pembuatan sediaan apus, agar sediaan terlihat lebih jelas. Pewarna ini sering disebut juga pewarna Romanowski. Metode pewarnaan ini banyak dipakai untuk mempelajari morfologi darah, sel-sel sumsum dan juga untuk identifikasi parasit-parasit darah misalnya dari jenis protozoa. Giemsa ini memberikan warna biru. Kemudian cuci sediaan darah dengan air suling,untuk menghilangkan pewarna yang ada dalam darah, lalu keringkan dan lihat dibawah mikroskop dengan pembesaran 1000 kali. Hasil pewarnaan dengan giemsa pada
darah manusia
akan
memperlihatkan eritrosit
berwarna merah muda, nukleolus leukosit berwarna ungu kebiru-biruan, sitoplasma leukosit berwarna sangat ungu muda, granula dari leukosit eosinofil berwarna ungu tua, granula dari leukosit neutrofil dan lekosit basofil berwarna ungu. Setelah itu hitung sel fagosit sehingga masing-masing jenis sel leukosit dapat ditentukan secara presentase.
1.8
Kesimpulan
Sediaan apus darah ini tidak hanya digunakan untuk mempelajari sel darah tapi juga digunakan untuk menghitung perbandingan jumlah masing-masing sel darah
proses fiksasi dilakukan menggunakan pelarut methanol. Tujuannya adalah untuk membunuh sel-sel pada sediaan darah tersebut tanpa mengubah posisi (struktur) organel yang ada di dalamnya, tujuan lainnya adalah untuk menghentikan proses metabolisme secara cepat, mencegah kerusakan jaringan, mengawetkan komponen-
komponen sitologis dan histologist, mengawetkan keadaan sebenarnya, dan mengeraskan
Pada praktikum ini digunakan pewarna giemsa. Metode pewarnaan ini banyak dipakai untuk mempelajari morfologi darah, sel-sel sumsum dan juga untuk identifikasi parasit-parasit darah misalnya dari jenis protozoa. Giemsa ini memberikan warna biru.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. Leukosit. http://digilib.unimus.ac.id/files/disk1/139/jtptunimus-gdl-rizqipujis-69173-babii.pdf Arista,2010.PreparatApusDarah.http://digilib.unimus.ac.id/files/disk1/107/jtptunimus-gdlaristakurn-5312-2-bab2.pdf. Diakses pada Kamis, 6 Juni 2013 Pukul 10.00 WIB Pearce, E.,2004. Anatomi dan fisiologi manusia untuk paramedis. Gramedia pustaka utama.jakarta Yullyanalis, 2013. Hitung Jenis Leukosit (Differential Count) Dan Evaluasi Hapusan Darah Tepi
(Hdt).
http://yullyanalis.wordpress.com/2013/06/28/hitung-jenis-leukosit-
differential-count-dan-evaluasi-hapusan-darah-tepi-hdt/. Diakses 28 Juni 2013
