BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang.
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari tentang mikroorganisme yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang, dan untuk meneliti apa saja yang terkandung didalam mikroorganisme. Dalam meneliti diperlukan teknik sterilisasi atau cara-cara khusus untuk mempelajarinya serta untuk bekerja pada skala laboratorium untuk meneliti sifat maupun karakteristiknya, tentu diperlukan adanya pengenalan-pengenalan alat yang berhubungan dengan penelitian untuk memudahkan dalam melakukan penelitian. Alat-alat yang digunakan dalam penelitian harus dalam keadaan steril atau bebas dari kuman, bakteri, virus, dan jamur. Perlu adanya pengetahuan tentang cara-cara atau teknik sterilisasi. Hal ini dilakukan karena alat-alat yang digunakan memiliki teknik sterilisasi yang berbeda (Dwidjoseputro, 2003). Medium pertumbuhan mikrobia adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrien yang diperlukan mikrobia untuk pertumbuhannya.Dengan menggunakan bahan medium pertumbuhan, aktivitas mikrobia dapat dipelajari dan dengan menggunakan medium tumbuh dapat dilakukan isolasi mikrobia menjadi biakan murni. Pada dasarnya bahan-bahan untuk pertumbuhan medium dapat dikelompokkan menjadi 3 kelompok yaitu bahan dasar yang meliputi air, agar yang bersifat tidak diuraikan oleh mikrobia, gelatin yang merupakan protein yang dapat diuraikan oleh mikrobia, dan silika gel yaitu bahan yang mengandung natrium silikat khusus untuk menumbuhkan mikrobia yang bersifat obligat autotrof, unsur-unsur nutrien yang dapat diambil dari bahan alam, meliputi karbohidrat, lemak dan asam-asam organik, sumber nitrogen yang mencakup pepton dan protein, garam-garam kimia (K, Na, Fe dan Mg), vitamin, dan sari buah, ekstrak sayuran dan susu. Serta bahan-bahan tambahan yaitu bahan yang sengaja ditambahkan ke dalam medium dengan tujuan tertentu seperti indikator maupun antibiotic (Schlegel, 1994).
1
Pada laboratorium mikrobiologi ada beberapa alat yang umum digunakan dan harus dikenal serta diketahui cara penggunaannya yaitu mikroskop, autoclave, laminar air bench (clean bench), bench), oven, inkubator, hot plate, kawat ose, tabung reaksi, cawan petri, erlenmeyer, magnetik stirer, dan berbagai peralatan lainnya baik yang berbahan kaca maupun bukan. Peralatan-peralatan tersebut dapat digunakan langsung selama proses praktikum berlangsung. Seperti halnya mikroskop, didalam praktikum pengenalan alat praktikan dapat langsung belajar mengetahui dan menggunakan bagian-bagian mikroskop untuk mengamati suatu preparat yang tersedia. Penggunaan alat-alat
tersebut dilakukan didalam
pengawasan asisten. 1.2 Tujuan percobaan
Adapun tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengenal jenis peralatan yang digunakan di laboratorium bioproses. bioproses. Mengetahui macam-macam media dan cara pembuatannya, mengenal beberapa cara sterilisasi, serta memperoleh alat dan media yang steril.
2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 pengenalan alat utama laboratorium.
Mikroskop adalah alat yang digunakan untuk mengamati benda-benda atau sel-sel yang berukuran sangat kecil dan tidak bisa dilihat dengan mata telanjang. mikroskop pertama kali ditemukan oleh Antony Van Leuwenhoek (1632-1723) yang berkebangsaan belanda, dengan mikroskop yang masing-masing terdiri atas lensa tunggal hasil gosokan rumah yang ditanam dalam kerangka kuningan dan perak. Kekuatan perbesaran tertinggi yang dapat dicapai hanyalah 200-300 kali. Mikroskop ini sedikit sekali persamaannya dengan mikroskop cahaya majemuk yang ada sekarang (Purba,1999). Mikroskop terdiri dari beberapa bagian yang memiliki fungsi tersendiri. Mikroskop pada prinsipnya terdiri dari dua lensa cembung, yaitu sebagai lensa okuler ( yang dekat dengan mata) dan lensa objektif yang dekat dengan benda atau objek. Baik objektif maupun okuler dirancang untuk pembesaran yang berbeda beda. Lensa objektif biasanya dipasang pada roda yang berputar, yang disebut dengan gagang putar. Setiap lensa objektif dapat diputar ke tempat yang sesuai dengan perbesaran yang diinginkan. Sistem lensa objektif memberikan perbesaran mula-mula dan menghasilkan bayangan nyata yang kemudian diproyeksikan ke atas lensa okuler. Bayangan nyata tadi diperbesar oleh lensa okuler untuk mengahasilkan bayangan maya yang kita lihat (Setiawan,2010). Mikroskop cahaya atau compound light microscope microscope merupakan jenis mikroskop yang memanfaatkan sinar lampu sebagai pengganti sinar matahari pada mikroskop optik konvensional. Lensa yang digunakan pada mikroskop cahaya tidak hanya lensa okuler, tetapi juga lensa objektic dan kondensor. Lensa okuler berfungsi untuk memperbesar tampilan objek mulai dari 2 hingga 25 kali. Sementara itu lensa objektif pada mikroskop cahaya berfungsi untuk membentuk bayangan objek. Adapun lensa kondensor berfungsi menciptakan pencahayaan yang membuat objek terlihat semakin jelas.
3
Mikroskop cahaya seperti halnya mikroskop konvensional, banyak digunakan untuk berbagai tujuan. Kelebihan dari mikroskop cahaya adalah peneliti tidak memerlukan ruang penuh sinar matahari untuk melihat melihat objek dengan jelas, sehingga penelitian objek kecil bisa dilakukan siang maupun malam dan di ruang terbuka maupun tertutup (Anneahira,2011).
2.2 Sterilisasi
Sterilisasi merupakan suatu proses untuk mematikan semua organisme yang terdapat pada suatu benda. Proses sterilisasi dapat dibedakan menjadi 3 macam, yaitu penggunaan panas (pemijaran dan udara panas); penyaringan; penggunaan bahan kimia (etilena oksida, asam perasetat, formaldehida dan glutaraldehida alkalin) (Hadioetomo, 1993). Ada banyak pilihan cara sterilisasi yang berbeda, namun yang penting adalah bagaimana menetapkan bahwa produk akhirnya dinyatakan sudah steril dan aman digunakan. Suatu produk dapat disterilkan melalui cara sterilisasi akhir (terminal sterilization) atau dengan cara aseptic (aseptic processing). Ada tiga cara utama yang umum dipakai dalam sterilisasi yaitu penggunaan panas, penggunaan bahan kimia dan penyaringan (filtrasi). Bila panas digunakan bersama-sama dengan uap air maka disebut sterilisasi panas lembab atau sterilisasi basah bila tanpa kelembaban maka disebut sterilisasi panas kering atau sterilisasi kering. Dipihak lain sterilisasi kimiawi dapat dilakukan dengan menggunakan gas atau radiasi (Hadioetomo. 1985).
Macam-macam sterilisasi yang dapat digunakan :
1. Sterilisasi panas dengan tekanan atau sterilisasi uap (autoklaf). Pada saat melakukan sterilisasi uap, kita sebenarnya memanfaatkan uap jenuh pada tekanan tertentu selama waktu dan suhu tertentu pada suatu objek, sehingga terjadi pelepasan energi selain uap yang mengakibatkan denaturasi atau koagulasi protein sel. Sterilisasi demikian merupakan sterilisasi paling efektif dan
4
ideal karena uap merupakan pembawa (carrier) energy tertanal paling efektif dan semua lapisan pelindung luar mikroorganisme dapat dilunakan, sehingga memungkinkan terjadinya koagulasi. Serta uap bersifat nontosik, mudah diperoleh dan relatife mudah dikontrol. Penggunaan autoklaf ini harus dengan suhu 121 oC selama 15 menit. Faktor-faktor yang mempengaruhi sterilisasi uap ada 3 yaitu : waktu, suhu dan kelembaban (Stefanus, 2006).
2. Sterilisasi panas kering (Oven) Proses sterilisasi panas kering terjadi melalui mekanisme konduksi panas. Panas akan diabsurpsi oleh permukaan luar alat yang disterilkan, lalu merambat ke bagian dalam permukaan sampai akhirnya suhu untuk sterilisasi tercapai. Sterilisasi panas kering biasanya digunakan untuk alat-alat atau bahan dengan uap tidak dapat penetrasi secara mudah atau untuk peralatan yang terbuat dari kaca. Pada sterilisasi panas kering, pembunuhan mikroorganisme terjadi melalui mikanisme oksidasi sampai-sampai terjadinya koagulasi protein sel. Karena panas dan kering kurang efektif dalam membunuh mikroba dari autoklaf, maka sterilisasi memerlukan temperature yang lebih tinggi dan waktu yang lebih panjang (Stefanus. 2006).
3. Sterilisasi Tyndallisasi. Metode ini berupa mendidihkan medium dengan uap dengan beberapa menit saja. Sehabis didiamkan satu hari, selama itu spora-spora sempat tumbuh menjadi bakteri vegetative. Maka medium tersebut dididihkan lagi selama beberapa menit. Akhirnya pada hari ketiga, medium tersebut dididihkan lagi, sekali lagi. Dengan jalan demikian ini diperoleh medium yang steril dan zat-zat organik yang terkandung didalamnya tidak mengalami banyak perubahan seperti halnya pada cara yang dilakukan oleh spallanzani (1729-1799) (Dwidjoseputro. 2003).
5
4. Sterilisasi dengan penyaringan (Filtrasi). Medium disaring dengan saringan porselin atau dengan tanah diatom. Dengan jalan ini, maka zat-zat organik tidak akan mengalami penguraian sama sekali. Hanya sayang, virus tak dapat terpisah dengan penyaringan semacam ini. Oleh karena itu, sehabis penyaringan, medium masih perlu dipanaskan dengan autoclave meskipun tidak selama 15 menit dengan teperatur 121 oC. penyaringan dapat dilakukan juga dengan saringan yang dibuat dari asbes. Saringan ini lebih murah dan lebih mudah penggunaannya daripada parselin. Saringan asbes dapat dibuang setelah dipakai, sedangkan saringan porselin terlalu mahal untuk dibuang dan terlalu sulit dibersihkan (Dwidjoseputro. 2005).
5. Sterilisasi radiasi a.
Ultraviolet Ultraviolet merupakan gelombang elektromagnetik dengan panjang gelombang 100-400 mm dengan efek optimal pada 254 nm. Sumbernya adalah lampu uap merkuri dengan daya tembus hanya 0,01-0,2 mm. ultraviolet digunakan untuk sterilisasi ruangan pada penggunaan aseptic.
b.
Jon Mekanisme
mengikutitori
tumbukan
yaitu
sinar
langsung
menghantam pusat kehidupan mikroba (kromosom) atau secara tidak langsung dengan sinar terlebih dahulu membentuk molekul dan mengubahnya menjadi bentuk radikatnya yang menyebabkan vterjadinya reaksi sekunder pada bagian molekul DNA mikroba. c.
Gamma Gamma bersumber dari Cu60 dan C s137 dengan aktivitas sebesar 50500 kilo curie serta memiliki daya tembus sangat tinggi. Dosis efektifitasnya
adalah
2,5
MRad.
Gamma
digunakan
untuk
mensterilkan alat-alat yang terbuat dari logam, kaet serta bahan sintesis seperti pulietilen (Hadioetomo,1985).
6
2.3 Autoclave
Autoclave adalah alat yang digunakan untuk sterilisasi dengan uap panas bertekanan. Alat ini terdiri atas suatu bejana yang tahan terhadap tekanan tinggi yang dilengkapi monometer, thermometer dan kleb. Sterilisasi dengan autoclave merupakan cara sterilisasi yang paling baik, jika dibandingkan dengan caracarasterilsasi lainnya (Hadioetomo, 1985).
Diagram autoclave vertical vertical :
1. Tombol pengatur waktu mundur (timer (timer ) 2. Katup pengeluaran uap 3. pengukur tekanan 4. klep pengaman 5. Tombol on-off 6. Termometer 7. Lempeng sumber panas 8. Aquades (H2O) 9. Sekrup pengaman 10. Batas penambahan air (Anonim,2010).
Cara penggunaan Autoclave :
1) Sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu banyaknya air dalam autoclave. J ika air kurang dari batas yang ditentukan, maka dapat ditambah air sampai bat as tersebut. Gunakan air hasil destilasi, untuk menghindari terbentuknya kerak dan karat. 2) Masukkan peralatan dan bahan. Jika mensterilisasi botol bertutup ulir, maka tutup harus dikendorkan. 3) Tutup autoclave dengan rapat lalu kencangkan baut pengaman agar tidak ada uap yang keluar dari bibir autoclave. Klep pengaman jangan dikencangkan terlebih dahulu. 4) Nyalakan autoclave, diatur timer dengan dengan waktu minimal 15 menit pada suhu o 121 C. 5) Tunggu sampai air mendidih sehingga uapnya memenuhi kompartemen autoclave dan terdesak keluar dari klep pengaman. Kemudian klep pengaman
7
ditutup (dikencangkan) dan tunggu sampai selesai. Penghitungan waktu 15 menit dimulai sejak tekanan mencapai 2 atm. 6) Jika alarm tanda selesai berbunyi, maka tunggu tekanan dalam kompartemen turun hingga hingga sama dengan tekanan udara di lingkungan lingkungan (jarum pada preisure gauge gauge menunjuk ke angka nol). Kemudian klep-klep pengaman dibuka dan keluarkan isi autoclave dengan hati-hati (Dahlia,2011).
8
BAB III METODELOGI PERCOBAAN
3.1 Waktu dan Tempat
Adapun waktu dan tempat pelaksanaan praktikum ini yaitu diadakan pada: Hari/tanggal : Jum’at-Sabtu/ Jum’at-Sabtu/ 8-9 November 2013 Waktu : Pukul 08.00-18.00 WIB Tempat : Laboratorium Bioproses Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknik, Univesitas Syiah Kuala.
3.2 Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan: -
Petridish
2 buah
-
Erlenmeyer
250 ml
-
Gelas Ukur
200 ml
-
Gelas Kimia
250 ml
-
Spatula
1 buah
-
Magnetic stirrer
1 buah
-
Kawat oase
1 buah
-
Kertas sampul
secukupnya
-
Kapas secukupnya
secukupnya
Bahan-bahan yang digunakan: a. Media padat I -
Agar-agar
-
Ekstrak pepaya
-
NaCl
-
Glukosa
-
Aquadest
b. Media padat II -
Agar-agar
9
-
NaCl
-
Glukosa
- Aquadest c. Media Cair -
Glukosa
-
NaCl
-
Ekstrak daging
-
Ragi
3.3 Prosedur kerja
1. Pembuatan Media Padat -
Disiapkan 2 buah gelas kimia untuk Media Nutrien Agar dan Papaya Dextrose Agar (PDA); Untuk PDA dicampurkan ekstrak pepaya 20 ml, glukosa 0,4 gr, agar-agar 6 gr, NaCl 0,3 gr, dan aquadest sebanyak 100 ml di dalam gelas kimia; Untuk NA dicampurkan aquadest 100 ml, glukosa 0,4 gr, agar-agar 3 gram, dan NaCl 0,3 gr didalam gelas kimia; Dimasukkan Magnetic stirer dalam campuran tersebut; Kemudian gelas kimia yang berisi campuran tersebut diletakkan di atas hot plate sampai campuran tersebut homogen;dan Selanjutnya,kedua media tersebut dituang masing-masing ke dalam cawan petri dan tabung reaksi, kemudian didinginkan. didinginkan.
2. Pembuatan Media Cair. -
Dicampurkan glukosa 0,4 gram, NaCl 0,5 gram, ekstrak daging 10 ml, dan aquadest sebanyak 10 ml ke dalam erlenmeyer. Kemudian dalam campuran tersebut ditambahkan ragi sebanyak 1 gram. Campuran diaduk menggunakan magnetic stirer di atas hot plate agar campuran homogen. Selanjutnya, media cair ini dituang kedalam cawan petri dan tabung reaksi.
3. Proses sterilisasi dengan autoclave -
Dicuci alat-alat yang akan digunakan dengan air panas atau sabun, baru kemudian dicuci dengan air mengalir. Petridish dan alat-alat yang akan digunakan dibungkus dibungkus dengan kertas sampul coklat.
10
-
Untuk Erlenmeyer dipakai sumbat dari kapas. Sumbat harus masuk 2 cm dalam tabung dan bagian luar harus padat sehingga dapat menahan dari debu dan kotoran-kotoran. - Dimasukkan dalam autoclave, autoclave, panaskan sampai suhu 121 oC, tekanan 15 psi selama 15 menit. 4. Proses Penanaman di Clean Bench -
Alat-alat yang telah diautoclave diautoclave dibuka dibuka sampulnya. Dituang media padat ke dalam petridish dan tabung reaksi. Ditunggu sampai agar-agar/ media padat mengeras. Diambil kawat oase, digoreskan pada media padat bentuk zig-zag untuk petridish dan ditusuk pada media padat untuk tabung reaksi. - Kemudian dituang media cair ke atas media padat yang telah digores dan ditusuk. - Dibiarkan petridish dan tabung reaksi tersebut di dalam clean bench selama 1x24 jam dan diamati.
11
3.4 Diagram Alir Pembuatan Media
Pencucian alat-alat Pembungkusan alat-alat
Pembuatan media padat
PDA
NA
NaCl 0,3 gram Glukosa 0,4 gram Agar-agar 6 gram Aquades 100 ml Ekstrak pepaya 20 ml
Nacl 0,3 gram Glukosa 0,4 gram Agar-agar 3 gram Aquades 100 ml
Proses autoclave Proses autoclave selesai Penuangan media padat Pelepasan sampul
Petridish dan tabung reaksi
Penuangan media cair ke atas media padat
Pengamatan
12
Pembuatan media cair
NaCl 0,5 gram Glukosa 0,4 gram Aquades 10 ml Ragi 1,5 gram Ektrak daging 10 ml Penggoresan/ penusukan kawat Oase
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Sterilisasi
Sterilisasi merupakan pembebasan sesuatu bahan dari mikroorganisme hidup atau stadium istirahatnya. Kalau suatu larutan biak steril atau yang sudah ditanam mikroba, tanpa dikehendaki dicemari oleh mikroorganisme disebut dengan kontaminasi. Sterilisasi dicapai dengan menggunakan pemanasan lembab, pemanasan kering, filtrasi, penyinaran atau bahan kimia ( Schlegel, 1994 ). Teknik sterilisasi yang paling pasti adalah penggunaan uap air disertai dengan tekanan, yang dilakukan dalam alat yang disebut autoklaf. Autoklaf memiliki suatu ruangan yang mampu menahan tekanan diatas 1 atm. Alat-alat atau bahan-bahan yang akan disterilkan, dimasukkan kedalam ruangan ini. Sete lah udara dalam ruangan ini digantikan oleh uap air, maka ruangan ini ditutup rapat sehingga tekanannya akan meningkat yang juga akan diikuti oleh kenaikan suhunya. Dengan cara ini akan dicapai tekanan 1 ½ atm dan suhu . Dengan tekanan dan suhu seperti ini, dalam waktu 10-12 menit, semua bentuk hidup berikut spora akan dimatikan. Didalam autoklaf yang mensterilkan adalah panas basah, bukan tekanannya. Oleh karena itu setelah air dalam tangki mendidih dan mulai dibentuk uap air, maka uap air ini dialirkan kedalam ruang pensteril guna mendesak keluar semua udara didalmnya. Apabila masih ada udara yang tersisa, maka udara ini akan menambah tekanan didalam ruang pensteril yang akan mengganggu naiknya suhu dalam ruang tersebut ( Sujudi, 1993 ). Memformulasikan suatu medium atau bahan yang akan digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme didalamnya harus memperhatikan berbagai macam ketentuan, seperti jika kita ingin membuat medium untuk menumbuhkan mikroorganisme bersel tunggal, biasanya air sangat penting sebagai komponen utama protoplasmanya, serta untuk masuknya nutrien kedalam sel. Pembuatan medium agar padat digunakan agar-agar, gelatin, atau gel silika. Bahan agar yang utama adalah galaktan ( komplek karbohidrat yang diekstrak dari alga genus gelidium ). Agar akan larut atau cair pada suhu hampir dan akan cair apabila kurang dari 43 ( Hadioetomo,1993 ).
13
Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba (ragi) antara lain sebagai berikut :
Nutrisi. Dalam kegiatannya, ragi memerlukan penambahan nutrisi untuk pertumbuhan dan perkembangannya, yaitu unsur C dari senyawa karbohidrat, unsur N dan P dari senyawa protein, mineral dan vitamin ( Nurhidayat,2006 ).
Keasaman (pH). Kebanyakan mikroorganisme dapat tumbuh pada kisaran pH sebesar 3-4. Kebanyakan bakteri mempunyai pH optimum sekitar 6,5-7,5 ( Abubakar, 1994 ). Didalam fermentasi, ragi memerlukan media dengan suasana asam yaitu sekitar pH 4,8. Pengaturan pH nya dapat dilakukan dengan penambahan asam sulfat encer bila substrat fermentasinya bersifat alkalis dan penambahan natrium bikarbonat jika substratnya terlalu asam (Nurhidayat, 2006 ).
Suhu. Suhu merupakan salah satu faktor penting dalam mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme. Suhu dapat mempengaruhi mikroba dalam dua cara yang berlawanan, yaitu apabila suhu naik maka kecepatan metabolisme akan naik dan pertumbuhan dipercepat. Sebaliknya apabila suhu turun, maka kecepatan metabolisme akan turun dan pertumbuhan diperlambat. Dan yang kedua, apabila suhu naik dan turun secara drastis maka tingkat petumbuhan akan terhenti, komponen sel menjadi tidaka aktif dan rusak, sehingga sel-sel menjadi mati. Suhu optimum untuk pertumbuhan ragi pada umumnya adalah pada suhu 25 - 30 ( Nurhidayat,2006 ).
Oksigen. Fungsi utama oksigen adalah sebagai akseptor elektron terminal pada respirasi aerob. Pada peristiwa ini O2 direduksi menjadi air. Berdasarkan kebutuhan oksigen, mikroorganisme dapat dibedakan menjadi 3
14
kelompok, yaitu : mikroorganisme aerob obligat (tergantung pada oksigen), organisme anaerob obligat (hanya dapat hidup dalam lingkungan bebas oksigen), dan organisme anaerob fakultatif (dapat hidup dalam lingkunga ada atau tidak ada oksigen atau bersifat aerotoler an) (Schlegel,1994). 4.1.1
Media padat. Media padat digunakan untuk mempelajari koloni bakteri, dan paling
penting untuk mengasingkan mengasingkan mikroba untuk mendapatkan mendapatkan biakan murni (Gupte,1990). Untuk membuat media padat pada larutan biak cair ditambahkan bahan pemadat yang memberi konsistensi seperti selai pada larutan air. Dan hanya untuk keperluan tertentu masih digunakan gelatin, karena mudah mencair pada suhu 26-30 ( Schlegel,1994 ). Pada praktikum ini media padat yang digunakan ada 2 macam yaitu media padat nutrien agar (NA) dan agar-agar dengan ekstrak papaya (Papaya Dextrose Agar).
4.1.2 Nutrien agar. Agar-agar merupakan isi media padat yang penting. Merupakan senyawa polisakarida dari rumput laut yang mencair pada suhu 80 sampai dan membeku pada suhu . Agar-agar tidak menyediakan zat-zat gizi untuk bakteri dan hanya bekerja sebagai zat padat ( Gupte,1990 ). NA dibuat dengan komposisi NaCl 0,3 gram, glukosa 0,4 gram, aga-agar 3 gram, dan aquadest 10 ml. Kemudian semua komposisi bahan-bahan tersebut dicampurkan didalam erlenmeyer lalu diaduk hingga homogen menggunakan magnetik stirrer diatas hot plate. Setelah campuran NA homogen dan mengental kemudian dituangkan kedalam cawan petri dan tabung reaksi. Kemudian ditunggu hingga dingin dan mengeras. 4.1.3
Agar-agar dengan ekstrak pepaya.
Agar-agar dengan ekstrak pepaya pembuatannya tidak jauh berbeda dengan nutrien agar (NA). Agar-agar dengan ekstrak pepaya dibuat dengan mencampurkan 20 ml ekstrak pepaya, NaCl 0,3 gram, glukosa 0,4 gram, agar-agar
15
6 gram dan aquadest 80 ml. Setelah dicampur, kemudian agar-agar diaduk hingga homogen mengguakan magnetik stirer sambil dipanaskan diatas hot plate. Setelah campuran homogen dam mengental, kemudian dituangkan kedalam cawan petri dan tabung reaksi. Agar-agar ditunggu hingga dingin dan mengeras. 4.1.4
Media cair.
Media cair digunakan sebagai media biakan yang disebarkan pada media padat. Media cair tidak cocok digunakan sebagai media sebagai pertumbuhan untuk mengasingkan mikroba atau untuk memperoleh biakan murni, juga tidak dapat digunakan mempelajari koloni bakteri (Gupte,1990). Media cair dibuat dengan mencampurkan 10 ml ekstrak daging, NaCl 0,5 gram, glukosa 0,4 gram, ragi 1,5 gram dan aquades 10 ml. Kemudian media cair ini diaduk hingga homogen menggunakan magneik stirrer di atas hot plate. Setelah homogen dan tidak terdapat gumpalan-gumpalan, media cair dituangkan ke dalam masing-masing media agar yang elah mengeras dan telah digores secara zig-zag menggunakan kawat oase yang telah dibakar terlebih dahulu supaya steril hingga merata. Pengamatan dilakukan selama 24 jam pada selang waktu tertentu.
(a)
(b)
Gambar 4.1 Perubahan yang terjadi pada media NA (a), dan media Papaya dextrose agar (b) setelah 22 jam. Pada cawan petri, Setelah 22 jam medium NA tanpa ektsrak pepaya tampak bahwa garis zig-zag nya semakin jelas, dan pinggiran media semakin menyusut serta volume media berkurang. Hal ini menandakan bahwa ragi tumbuh dengan baik. Sedangkan pada cawan petri agar dengan ekstrak pepaya, garis zigzag juga terlihat jelas, namun tidak seperti pada medium NA tanpa ekstrak pepaya. Dengan demikian, jamur (ragi) hanya dapat tumbuh sedikit, atau tidak dapat tumbuh dengan baik. Sedangkan media dalam tabung reaksi, setelah 22 jam pada media agar tanpa eksrtak pepaya, bekas tusukan semakin tampak jelas dan agar-agar seperti berongga-rongga dan erpotong-potong. Sedangkan pada medium dengan ekstrak
16
pepaya, setelah 22 jam bekas tusukan juga tampak jelas, akan tetapi agar-agar tidak tampak berongga-rongga atau terpotong-potong teperti pada medium NA tanpa ekstrak pepaya. Hal ini juga menunjukkan bahwa ragi ( saccharomyces ( saccharomyces cereisiae) cereisiae) tumbuh dengan baik pada medium agar tanpa ekstrak pepaya (NA). Sedangkan pada media agar dengan ekstrak pepaya ragi sukar tumbuh atau tidak tumbuh dengan baik. Faktor yang menyebabkan perbedaan tersebut adalah nutrisi yang ada pada kedua media. Media agar tanpa ekstrak pepaya (NA) lebih cocok bagi pertumbuhan ragi ( saccharomyces cereisiae), cereisiae), sehingga ragi mengkonsumsi dengan baik nutrisi yang ada pada media tersebut dibandingkan dengan agar ekstrak pepaya. Ekstrak pepaya mengandung senyawa karpain yang bersifat membunuh mikroba dan dan mengandung sedikit damar ( Soediroatmojo dan sutomo, 1988 ). Karpain merupakan suatu alkaloid yang diisolasi dari tanaman pepaya yang memiliki aktifitas anti mikroba ( labhsetwar, 1997 ). Serta senyawa alfa-Dmannosidase dan n-asetil-beta glukosaminidase (diisolasi dari getah) menghambat pertumbuhan khamir. Oleh karena hal tersebut, maka ragi ( saccharomyces cerevisiae) cerevisiae) tidak dapat tumbuh dengan baik pada media agar dengan ekstrak pepaya. Kandungan yang ada pada ekstrak pepaya menyebabkan ragi ( saccharomyces saccharomyces cerevisiae) cerevisiae) tidak mendapat nutrisi yang baik bagi pertumbuhannya. 4.2
Pengamatan menggunakan mikroskop
Pada praktikum “Pengenalan alat-alat alat -alat utama laboratorium” ini, sampel yang digunakan untuk diamati pada mikroskop adalah limbah rumah tangga. Limbah rumah tangga yang digunakan berupa air bekas cuci piring. Mikroskop yang digunakan pada praktikum ini adalah mikroskop mikroskop cahaya medan terang. Mikroskop cahaya medan terang adalah salah satu jenis mikroskop yang bekerja berdasarkan prinsip dimana cahaya yang masuk melalui lensa akan diteruskan tanpa mengalami perubahan indeks refraksi sehingga menghasilkan suatu medan disekitar mikroskop yang terlihat terang sedangkan objek yang kita amati akan terlihat lebih gelap (Sri Mulyani, Mul yani, 2009). Pengamatan dengan mikroskop digunakan perbesaran 4 ×, 10 ×, dan 40 × . Dengan perbesaran 4 ×, mikroba yang diamati tidak terlalu terlihat dan hanya seperti titik-titik kecil. Tetapi mikroba semakin terlihat jelas dengan perbesaran 10 ×, dan 40 ×. Pada sampel air bekas cuci piring, terlihat surfaktan ( busa sabun)
17
bergerak mengalir dan mikroba m ikroba tampak berukuran kecil dengan gerakann ya yang begitu cepat. Pada air bekas cuci piring pir ing biasanya bersarang bakteri Escheria Coli ( E. E. Coli) Coli) dan bakteri Salmonella. Salmonella. Bakteri tersebut berasal dari bekas sisa-sisa makanan yang menempel pada piring ataupun berasal dari spons pencuci piring yang digunakan. Berdasarkan referensi dan hasil pengamatan yang dilakukan, dapat diambil hipotesis bahwa mikroba yang terlihat melalui mikroskop adalah bakteri Escheria bakteri Escheria Coli ( Coli ( E. E. Coli) Coli) ataupun bakteri Salmonella.
18
BAB V KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan, dapat diambil kesimpulan antara lain : 1. Sebelum alat-alat digunakan, penting dilakukannya proses sterilisasi yaitu untuk membebaskan peralatan dan media yang digunakan dari semua mikroorganisme agar tidak terjadi kontaminasi. 2. Jenis sterilisasi yang digunakan pada praktikum ini adalah sterilisasi menggunakan uap panas (autoklaf). 3. Pada pembuatan media padat, agar-agar digunakan untuk memadatkan medium dan untuk mengasingkan mikroba agar mendapat biakan murni. 4. Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba antara lain: nutrisi, keasaman (pH), suhu, dan oksigen. 5. Pada media padat NA tanpa ekstrak pepaya, ragi tumbuh dengan baik karena cukup mendapat nutrisi dari media NA tersebut. Sedangkan media padat NA dengan ekstrak pepaya, pertumbuhan ragi tidak begitu baik, karena ragi ( saccharomyces cerevisiae ) kurang mengkonsumsi nutrisi yang ada pada media ini. 6. Ekstrak pepaya pada media agar mengandung suatu senyawa karpain yang memiliki aktifitas anti mikroba, sehingga ragi pada pada media ini tidak tumbuh dengan baik. 7. Komponen-komponen penyusun media padat (agar-agar) terdiri dari agaragar sebagai pemadat, glukosa sebagai sumber sumber makanan dan energi, NaCl NaCl sebagai katalis dan untuk menjaga kestabilan, serta air sebagai pelarutnya sebagai sumber oksigen bagi mikroba, dan untuk masuknya nutrien ke dalam sel. 8. Mikroskop yang digunakan pada praktikum pengenalan alat adalah mikroskop medan terang, dan sampel yang diamati adalah limbah rumah tangga berupa air bekas cuci piring. 9. Jenis bakteri yang diamati melalui mikroskop medan terang ini diduga adalah bakteri E. bakteri E. Coli atau Coli atau Salmonella, karena biasanya bakteri ini banyak bersarang pada air bekas cuci piring.
19
DAFTAR PUSTAKA
Anneahira. 2011. http://www.anneahira.com/macam-macam-mikroskop24645.html . (diakses pada tanggal 15 oktober 2013) Anonim. 2010. http://www.scribd.com. http://www.scribd.com. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Dasar. (diakses pada tanggal 29 November 2010 pukul 03.00 WIB) Ar, Abubakar.1994. Mikrobiologi Abubakar.1994. Mikrobiologi Teknik . Unsyiah: Banda Aceh Dahlia,Amy.2011. Dahlia,Amy.2011. Amy Dahlia wordpress.com. Nama, Fungsi, dan Cara Kerja Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi.html. (diakses pada tanggal 11 desember 2013) Dwidjoseputro ,D. ,D. 2005. 2005. Dasar-dasar Mikrobiologi. Djambatan: Jakarta Gupte, satish. 1990. Mikrobiologi 1990. Mikrobiologi Dasar . Binarupa Aksara : Jakarta Hadioetomo, Ratna Sari. Sari. 1985. 1985 . Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek . Gramedia: Jakarta Hadioetomo, Ratna Sari. 1993. Pengetahuan 1993. Pengetahuan Mikrobiologi Industri Industri.. Erlangga : Jakarta Lukas, Stefanus. 2006. Farmasi 2006. Farmasi Steril. Andi :Yogyakarta Mulyani, Sri. 2009, Artikel Jenis-jenis Mikroskop. (diakses pada tanggal 5 Desember 2011) Nurhidayat,dkk. 2006. 2006. Mikrobiologi Mikrobiologi Industri. Industri. Andi : Yogyakarta
Purba, M dkk. 1993. Kimia. Kimia. Erlangga : Jakarta Schlegel, H.G. 1994. 1994. Mikrobiologi Umum. Gadjah Mada University Press : Yogyakarta Setiawan, Doni. 2010. Penuntun 2010. Penuntun Mikrobiologi Umum I . Fakultas MIPA Universitas Sriwijaya : Indralaya Sujudi. 1993. Buku 1993. Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran. Kedokteran. Binarupa Aksara : Jakarta
20
LAMPIRAN A DATA HASIL PENGAMATAN
Tabel A.1 Perubahan yang terjadi pada medium NA tanpa ekstrak pepaya dan medium NA dengan ekstrak pepaya pepaya di dalam cawan petri.
No
( jam )
1
0
2
4
3
19
4
Perubahan yang terjadi
Waktu
22
NA
Papaya Dextrose Agar
Setelah digores secara zigzag dengan ose, medium belum menunjukkan perubahan Garis zig-zag sudah mulai terlihat jelas, namun jamur belum terlihat pertumbuhannya Garis zig-zag sudah mulai terlihat jelas, medium sudah menyusut, dan jamur sudah tumbuh
Setelah digores secara zigzag dengan ose, medium belum menunjukkan perubahan Garis zig-zag belum terlihat jelas, dan jamur belum menunjukkan pertumbuhannya Garis zig-zag sudah mulai terlihat, medium mulai t menyusut, dan jamur sudah mulai tumbuh Garis zig-zag sudah lebih terlihat jelas, pinggiran medium semakin terlihat menyusut, volume medium berkurang, dan jamur tumbuh.
Garis zig-zag semakin terlihat jelas, pinggiran medium semakin menyusut, volume medium bekurang, dan jamur tumbuh.
21
Tabel A.2 Perubahan yang terjadi pada medium NA tanpa ekstrak pepaya dan medium NA dengan ekstrak pepaya pepaya di dalam tabung reaksi
No
1
2
3
4
Perubahan yang terjadi
Waktu ( jam )
NA
Papaya Dextrose Agar
0
Setelah ditusuk dengan kawat ose, medium belum menunjukkan perubahan, dan jamur belum tumbuh
Setelah ditusuk dengan kawat ose, medium belum menunjukkan perubahan, dan jamur belum tumbuh
4
Bekas tusukan sudah mulai tampak, medium cair masih berada di permukaan
19
Bekas tusukan sudah tampak jelas, medium agar (NA) mulai tampak beronggarongga
22
Bekas tusukan semakin tampak jelas, medium agar (NA) sudah beronggarongga, dan terlihat seperti terpotong-potong.
22
Bekas tusukan sudah mulai tampak, medium cair sudah mulai turun dan terlihat jelas Bekas tusukan semakin terlihat jelas, medium sudah turun dari permukaan, dan terlihat jelas Bekas tusukan terlihat jelas, medium cair terlihat jelas dan sedikit turun dari permukaan.
LAMPIRAN B GAMBAR Tabel B.1 Perubahan yang terjadi pada media dalam cawan petri Perubahan yang terjadi No
Waktu ( jam )
1
0
2
4
3
19
4
22
Nutrien Agar
23
Papaya Dextrose Agar
Tabel B.2 Perubahan yang terjadi pada media dalam tabung reaksi Perubahan yang terjadi No
Waktu ( jam )
1
0
2
4
3
19
4
22
Nutrien Agar
Papaya Dextrose Agar
24
Tabel B.3 Pengamatan sampel air bekas cuci piring menggunakan mikroskop. Pembesaran 4x
Pembesaran 10x
25
Pembesaran 40x
