LAPORAN PENELITIAN KIMIA SKRINING FITOKIMIA PADA EKSTRAK ETANOL TUMBUHAN
lli carr pa longifolia) longi folia) SANGKAREHO (C allica
OLEH: ETY PERMATA SARI ACC 114 006
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA JURUSAN PENDIDIKAN MIPA FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN UNIVERSITAS PALANGKA RAYA 2018
i
HALAMAN PERSETUJUAN
Judul
: SKRINING FITOKIMIA PADA EKSTRAK ETANOL TUMBUHAN SANGKAREHO (Callicarpa longifolia). longifolia).
Nama
: ETY PERMATA SARI
NIM
: ACC 114 006
Fakultas
: Keguruan dan Ilmu Pendidikan
Jurusan
: Pendidikan MIPA
Program Studi
: Pendidikan Kimia
Disetujui untuk Penelitian Kimia Dosen Mata Kuliah Penelitian Kimia Dosen
Wahyu Nugroho, S.Si, M.Si NIP. 19800331 200501 1 004
ii
LEMBAR PENGESAHAN
SKRINING FITOKIMIA PADA EKSTRAK ETANOL TUMBUHAN SANGKAREHO (Callicarpa (Callicarpa longifolia)
Nama
: ETY PERMATA SARI
NIM
: ACC 114 006
Fakultas
: Keguruan dan Ilmu Pendidikan
Jurusan
: Pendidikan MIPA
Program Studi
: Pendidikan Kimia
Menyetujui:
Ketua Program Studi
Dosen Pembimbing
Dr. Abdul Hadjranul Fatah, M.Si NIP. 19670307 199203 1 004
Wahyu Nugroho, S.Si, M.Si NIP. 19800331 200501 1 004
iii
ABSTRAK Ety Permata Sari. 2018. Skrining Fitokimia pada Ekstrak Etanol Tumbuhan Sangkareho
(Callicarpa longifolia).
Laporan
Penelitian
Kimia,
Program Studi Pendidikan Kimia, Jurusan Pendidikan MIPA, FKIP Universitas Palangka Raya. Dosen Pembimbing: Wahyu Nugroho, S.Si, M.Si
Kata Kunci: Callicarpa longifolia, skrining fitokimia, ekstrak etanol. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi senyawa metabolit se kunder pada ekstrak etanol daun, kulit kulit batang, batang, dan akar Tumbuhan Tumbuhan Sangkareho Sangkareho ( Callicarpa longifolia). longifolia). Yang diamati dalam penelitian ini adalah meneliti kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada daun, kulit batang Sangkareho dengan menggunakan ekstrak etanol. Ekstrak etanol diperoleh dengan cara daun, kulit batang, dan akar tumbuhan sangkareho sebanyak masing-masing 10 gram dimasukkan ke dalam botol gelap, kemudian ditambahkan 100 mL etanol, dimaserasi selama 3x24 jam pada suhu kamar, setelah itu disaring sehingga diperoleh filtrat, kemudian filtrat ditempatkan di udara terbuka untuk mendapatkan ekstrak pekatnya. 1 ml ekstrak etanol daun, kulit batang, dan akar tumbuhan sangkareho diambil dan ditambahkan dengan 1 mL n-heksana, dikocok-kocok hingga berbusa, dan didiamkan hingga terbentuk dua lapisan, yaitu lapisan etanol dan n-heksana. Kedua lapisan tersebut te rsebut kemudian dipisahkan untuk diuji kandungan senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalamnya. Lapisan etanol digunakan untuk mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder flavonoid, fenolat, dan saponin, sedangkan lapisan n-heksana digunakan untuk mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder steroid, terpenoid, dan alkaloid. Identifikasi metabolit sekunder (alkaloid, flavonoid, steroid, terpenoid dan fenolat) pada ekstrak etanol daun, kulit btang, dan akar tumbuhan sangkareho dilakukan uji warna dengan menggunakan berbagai pelarut sedangkan saponin hanya dikocok saja. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada daun Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longifolia) longifolia) teridentifikasi senyawa metabolit sekunder steroid, flavonoid, dan fenolat serta pada bagian kulit batang dan akar teridentifikasi senyawa metabolit sekunder steroid dan fenolat.
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena berkat dan karunia-N ya penulis dapat menyelesaikan laporan penelitian kimia dengan judul “Skrining Fitokimia Pada Ekstrak Etanol Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa ( Callicarpa longifolia)” longifolia)” yang dibuat untuk memenuhi syarat mata kuliah penelitian kimia. Selama menyelesaikan penelitian ini, penulis selalu dibimbing dan diarahkan oleh berbagai pihak terkait. Oleh karena itu, penulis menyampaikan terimakasih kepada : 1. Bapak Wahyu Nugroho, S.Si, M.Si selaku dosen pembimbing penelitian kimia, yang telah memberi arahan dan bimbingan selama penelitian. 2. Ibu Dra. Ruli Meiliawati, M.Pd selaku kepala laboratorium pendidikan kimia dan stafnya, yang telah mengizinkan penulis untuk menggunakan fasilitas laboratorium. 3. Serta semua pihak yang membantu dalam menyelesaikan penelitian ini yang tidak bisa disebutkan satu per satu. Penulis menyadari bahwa penelitian ini masih jauh dari kata sempurna. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun demi kesempurnaan penelitian ini. Akhirnya penulis berharap semoga penelitian ini dapat bermanfaat bagi kita semua. Amin.
Palangka Raya,
Januari 2018
Penulis
v
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL........................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN ........................................................................ ii LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. iii ABSTRAK ....................................................................................................... iv KATA PENGANTAR ..................................................................................... v DAFTAR ISI .................................................................................................... vi DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... viii DAFTAR TABEL ............................................................................................ x BAB 1 PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang ............................................................................... 1 1.2 Batasan Masalah............................................................................. 3 1.3 Rumusan Masalah .......................................................................... 3 1.4 Tujuan Penelitian ........................................................................... 3 1.5 Manfaat Penelitian ......................................................................... 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Gambaran Umum Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longifolia) ....................................................................................... 5 2.2 Klasifikasi Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) ........... 7 2.3 Kandungan dan Manfaat Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longifolia) ..................................................................................... 7 2.4 Ekstraksi ........................................................................................ 8 2.5 Skrining Fitokimia ......................................................................... 10 2.6 Senyawa Metabolit Sekunder ........................................................ 11 2.6.1 Steroid ................................................................................ 11 2.6.2 Terpenoid ............................................................................ 13 2.6.3 Flavonoid ............................................................................. 14 2.6.4 Fenolat .................................................................................. 15 2.6.5 Saponin ................................................................................. 16 2.6.6 Alkaloid ................................................................................ 17
vi
BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ........................................................ 18 3.2 Alat Penelitian ................................................................................ 18 3.3 Bahan Penelitian ............................................................................. 18 3.4 Prosedur Kerja 3.4.1 Pembuatan Sampel pada Daun, Kulit Batang, dan Akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) .................... 18 3.4.2 Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder (Skrining Fitokimia) pada Daun, Kulit Batang, dan Akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) Menggunakan Pelarut Etanol ......... 19
BAB 4 HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN 4.1 Data Hasil Pengamatan .................................................................. 23 4.2 Pembahasan 4.2.1 Penyiapan Sampel ................................................................ 24 4.2.2 Uji Fitokimia pada Daun, Kulit Batang, dan Akar Tanaman Sangkareho ........................................................... 25 4.2.2.1 Identifikasi Steroid ................................................... 25 4.2.2.2 Identifikasi Terpenoid .............................................. 27 4.2.2.3 Identifikasi Flavonoid .............................................. 28 4.2.2.4 Identifikasi Fenolat................................................... 29 4.2.2.5 Identifikasi Saponin ................................................. 31 4.2.2.6 Identifikasi Alkaloid ............................................... 32
BAB 5 PENUTUP 5.1 Kesimpulan..................................................................................... 35 5.2 Saran ............................................................................................... 35
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 36 LAMPIRAN ..................................................................................................... 40
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Akar Sangkareho ........................................................................... 6 Gambar 2. Batang Sangkareho ......................................................................... 6 Gambar 3. Daun Sangkareho ........................................................................... 6 Gambar 4. Buah Sangkareho............................................................................ 6 Gambar 5. Callicarpa longifolia ....................................................................... 6 Gambar 6. Tumbuhan Sangkareho ................................................................... 7 Gambar 7. Struktur dasar steroid ..................................................................... 12 Gambar 8. Struktur senyawa terpenoid dengan kaidah isopren ....................... 14 Gambar 9. Struktur Flavonoid ......................................................................... 15 Gambar 10. Contoh senyawa fenolat ............................................................... 15 Gambar 11. (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Sangkareho yang sudah dipotong kecil-kecil/dihaluskan .......................................... 19 Gambar 12. Proses penimbangan (a) daun; (b) kulti batang; (c) akar tumbuhan sangkareho.................................................................... 19 Gambar 13. Proses penyaringan sampel (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar tumbuhan sangkareho ...................................................... 20 Gambar 14. Filtrat (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar sangkareho ......... 20 Gambar 15. Proses pemekatan filtrat sampel di udara te rbuka ........................ 21 Gambar 16. Ekstak etanol (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar sangkareho + n-heksana saat dikocok .......................................... 21 Gambar 17. Ekstak etanol daun, kulit batang, dan akar sangkareho + n-heksana setelah didiamkan ........................................................ 21 Gambar 18. Identifikasi Steroid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Tumbuhan Sangkareho .................................................... 26 Gambar 19. Reaksi antara steroid dengan asam asetat anhidrat ...................... 26 Gambar 20. Reaksi terpenoid dengan pereaksi Liebermann-burchard ............ 27 Gambar 21. Identifikasi Terpenoid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar tumbuhan Sangkareho ..................................................... 28 Gambar 22. Identifikasi Flavonoid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Tumbuhan Sangkareho .................................................... 28
viii
Gambar 23. Mekanisme reaksi pembentukan garam flavilium ....................... 29 Gambar 24. Reaksi senyawa fenolat dengan larutan FeCl 3 ............................. 30 Gambar 25. Identifikasi Fenolat pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Tumbuhan Sangkareho .................................................... 30 Gambar 26. Reaksi pembentukan busa pada uji saponin ................................. 31 Gambar 27. Reaksi alkaloid dengan pereaksi Meyer ....................................... 32 Gambar 28. Identifikasi Alkaloid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar tumbuhan Sangkareho ...................................................... 33
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Hasil uji fitokimia terhadap daun, kulit batang, dan akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) ................................. 23
x
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia memiliki banyak flora yang tersebar di sel uruh bagian Indonesia. Tidak sedikit flora di Indonesia yang berpotensi sebagai obat herbal yang dapat menyembuhkan berbagai penyakit seperti kanker dan diabetes. Indonesia memiliki kekayaan alam yang sangat besar, di mana tumbuhan dengan berbagai spesies dapat ditemukan, mulai dari tumbuhan liar sampai tumbuhan langka sekalipun. Tidak sedikit pula tumbuhan-tumbuhan yang ada di hutan Indonesia memiliki khasiat yang ampuh untuk digunakan pada pengobatan tradisional. Obat-obat tradisional yang berasal dari berbagai tumbuhan ini umumnya digunakan oleh suku tertentu dan resepnya diwariskan secara turunmenurun. Setiap suku mempunyai resep obat tradisional yang berbeda-beda. Pulau Kalimantan termasuk daerah yang memiliki banyak tumbuhan yang berpotensi
sebagai
obat
herbal.
Kebanyakan
tumbuhan-tumbuhan
yang
dipergunakan sebagai obat herbal merupakan obat yang telah digunakan secara turun temurun, dari generasi ke generasi. Pengobatan tradisional merupakan upaya penyembuhan terhadap penyakit yang
dilakukan
berdasarkan
kepercayaan
turun-temurun,
baik
dengan
menggunakan bahan alami yang tersedia dan diyakini mempunyai khasiat dapat menyembuhkan maupun melalui perantara seseorang (dukun) yang diakui mempunyai kekuatan tertentu di dalam dirinya untuk menghilangkan penyakit walaupun pengobatan modern telah dikenal yaitu adanya puskesmas pembantu di kedua desa tersebut, namun hingga sekarang pengobatan tradisional masih tetap dipertahankan (Setyowati, 2010). Salah satu tumbuhan yang sering digunakan dalam pengobatan tradisional adalah Tumbuhan Sangkareho. Tumbuhan yang memiliki nama ilmiah Callicarpa longifolia ini di daerah lain memiliki berbagai macam sebutan, antara lain dalam bahasa Dayak Tunjung disebut “kerehau”, bahasa Dayak Lundayeh disebut “ kutau buda”, dan dalam bahasa Dayak Uma’ Lung disebut “ucung ace”. Di dunia, Callicarpa longifolia dikenal dengan nama Long-leaved Callicarpa. Tumbuhan ini
1
telah banyak digunakan sebagai obat herbal. Kegunaannya antara lain pada bagian daun sebagai obat luka luar, bedak basah, racun ikan, dan untuk diminumkan ke ibu yang baru melahirkan agar cepat sembuh; bagian akar digunakan untuk obat masuk angin dan bengkak; serta bagian kulit batang sebagai obat pasca melahirkan yang digunakan oleh masyarakat Desa Tanjung Soke dan Gerunggung. Proses kimia yang terjadi hanya pada spesies tertentu memberikan produk yang berlainan sesuai dengan spesiesnya. Reaksi yang demikian nampaknya tidak merupakan proses yang terpenting bagi eksistensi suatu organisme, karena itu disebut proses metabolisme sekunder. Produk-produk metabolisme sekunder ini disebut metabolit sekunder, misalnya senyawa terpen, alkaloid, senyawa fenolat, dan lain-lain. Meskipun tidak sangat penting bagi eksistensi suatu makhluk hidup, metabolit sekunder sering berperan pada kelangsungan hidup suatu spesies dalam perjuangan menghadapi spesies-spesies lain, misalnya sebagai zat pertahanan dan zat penarik bagi lawan jenisnya. Tujuan pembentukan metabolit sekunder tetap merupakan misteri. Beberapa ahli percaya bahwa senyawa metabolit sekunder adalah produk detoksifikasi dari timbunan metabolit beracun yang tidak dapat dibuang oleh organisme tersebut. Pendapat ini sesuai dengan kenyataan bahwa tumbuhan lebih banyak memproduksi metabolit sekunder daripada binatang karena binatang mempunyai sistem yang canggih untuk proses pembuangan metabolit beracun mereka, misalnya liver dan ginjal. Tumbuhan terpaksa melakukan perubahan atau perombakan agar menjadi senyawa lain yang dapat disimpan dalam ruang-ruang dalam sel. Beberapa golongan metabolit sekunder utama adalah terpena dan terpenoid, poliketida, fenilpropanoid, flavonoid dan stilbenoid dan alkaloid. Metode yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder adalah skrining fitokimia. Dalam Buku Ajar Fitokimia oleh Kristanti (2008) dituliskan bahwa dalam penelitian-penelitian internasional terbaru tentang kimia bahan alam, skrining fitokimia sudah ditinggalkan, tetapi cara ini tetap merupakan langkah awal yang dapat membantu untuk memberikan gambaran tentang golongan senyawa yang terkandung dalam tanaman yang sedang diteliti.
2
Bagian tanaman yang paling sering digunakan dalam identifikasi senyawa metabolit sekunder adalah daun, karena daun merupakan bagian yang paling mudah didapat. Oleh karena itu, perlu dilakukan identifikasi senyawa metabolit sekunder secara menyeluruh, dalam artian bahwa tidak hanya pada bagian daun, tetapi juga pada bagian kulit batang dan akar karena pada tumbuhan sangkareho tidak hanya bagian daunnya saja yang digunakan oleh masyarakat tetapi juga kulit batang dan akarnya. Berkaitan
dengan
uraian-uraian
di
atas
peneliti
tertarik
untuk
mengidentifikasi kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada daun, kulit batang, dan akar tumbuhan sangkareho untuk memenuhi mata kuliah penelitian kimia dengan judul penelitian “Sk rining Fitokimia pada Ekstrak Etanol Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia )”.
1.2 Batasan Masalah
Masalah dalam penelitian ini dibatasi pada mengidentifikasi kandungan golongan senyawa metabolit sekunder pada ekstrak etanol daun, kulit batang, dan akar Tumbuhan sangkareho (Callicarpa longifolia).
1.3 Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian di atas maka permasalahan yang muncul yaitu golongan senyawa metabolit sekunder apa saja yang terdapat pada daun, kulit batang, dan akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia)?
1.4 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder pada ekstrak etanol daun, kulit batang, dan akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia).
3
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat yang diharapkan dapat diperoleh melalui hasil penelitian ini adalah dapat menjadi dasar atau metode, teknik pemisahan, identifikasi komponen metabolit sekunder pada daun, kulit batang, dan akar tanaman sangkareho.
4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Gambaran Umum Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longi folia)
Salah satu genus tumbuhan yang banyak digunakan sebagai obat-obatan tradisional adalah genus Callicarpa. Ada sekitar 20 jenis spesies yang telah digunakan secara etnobotani dan etnomedikal. Beberapa spesies Callicarpa telah dilaporkan berpotensi sebagai antikanker (Jones dan Kinghorn, 2009, dalam Erwin, 2015). Callicarpa longifolia adalah salah satu jenis Callicarpa yang sering digunakan masyarakat Kalimantan. Callicarpa longifolia merupakan salah satu spesies dari beautyberry. Callicarpa longifolia atau disebut juga dengan sangkareho atau kerehau merupakan tanaman sejenis semak/perdu yang dapat tumbuh hingga 6 m dengan diameter batang 11 cm. Daun tumbuh secara berhadapan, seluruh permukaan daun dan batangnya yang tegak lurus ditutupi oleh bulu-bulu halus. Bunga berwarna putih hingga merah muda kebiruan dengan diameter 2 mm. Bunganya dapat mekar dari bulan Juni sampai Agustus, namun dalam budidaya rumah kaca ia mungkin mekar di lain waktu juga. Buah sangkareho berwana putih dengan diameter 2 mm. Sangkareho hidup di daerah iklim tropis dengan habitat di hutan dipterocarpae dengan ketinggian hingga 400 m dpl. Tanaman ini juga seri ng ditemukan di tepi sungai, lereng bukit, daerah padang pasir, dan daerah batuan. Menurut Falah, Sangkareho (Callicarpa longifolia) merupakan tumbuhan obat dengan tempat tumbuh yaitu di pekarangan. Callicarpa longifolia juga banyak terdapat di daerah tropis Asia dan Australia, di mana di Kalimantan terdapat di seluruh pulau. Callicarpa longifolia merupakan satu-satunya yang memiliki mahkota putih dari semua spesies Callicarpa Australia. Callicarpa longifolia disebut juga sebagai “long-leaved Callicarpa” atau “Callicarpa berdaun panjang. Bagian daun dan kulit batang digunakan untuk obat pasca melahirkan, serta bagian akar digunakan untuk obat masuk angin dan bengkak. Bagian-bagian tumbuhan sangkareho (Callicarpa longifolia) dapat dilihat pada gambar berikut.
5
Gambar1. Akar Sangkareho
Gambar 2. Batang Sangkareho
Gambar 3. Daun Sangkareho
Gambar 4. Buah Sangkareho
Gambar 5. Callicarpa longifolia (Sumber: http:/www.asianplant.net/Lamiaceae/Callicarpa_longifolia.htm) Callicarpa longifolia memiliki hubungan erat dengan Callicarpa brevistyla dan Callicarpa candicans dalam hal daun lamina yang sama-sama berada di dasar, peduncung utama lebih pendek dari pada petioles dan indumentum pada cabang dan cabang rambut stellate-dendriform Akan tetapi, Callicarpa longifolia dapat dengan mudah dibedakan dengan corolla yang berwarna putih, di luar pubescent;
6
daun berkarat-coklat atau ferruginous-tomentose di bawahnya; ovarium berbulu di bagian atas dan buah berwarna putih saat matang. Callicarpa longifolia juga bersekutu dengan Callicarpa macrophylla dalam hal memiliki indumentum pada cabang, batang rambut stewata-dendriform, dan buah yang berwarna putih saat matang.
2.2 Klasifikasi Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longi folia)
Klasifikasi Tumbuhan Sangkareho
Kingdom
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Sub Divisi
: Angiospermae
Class
: Dicotyledoneae
Ordo
: Lamiales
Famili
: Lamiaceae
Genus
: Callicarpa
Spesies
: Callicarpa longifolia Lamk.
Gambar 6. Tumbuhan Sangkareho Sumber: Ibrahim, 2016
2.3 Kandungan dan Manfaat Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longi folia)
Tumbuhan Sangkareho adalah tumbuhan perdu yang relatif masih mudah ditemukan di Pulau Kalimantan. Untuk daerah Kalimantan Tengah, populasi tumbuhan sangkareho ini kabarnya banyak terdapat di Kabupaten Murung Raya. Tumbuhan sangkareho juga terdapat di Kabupaten Muara Teweh, meskipun populasinya tidak begitu banyak. Tumbuhan sangkareho ini juga digunakan sebagai obat tradisional oleh masyarakat suku Dayak Tunjung di Kalimantan Timur. Suku Dayak Tunjung menyebut tumbuhan sangkareho ini dengan “ kerehau”. Masyarakat memanfaatkan tumbuhan sangkareho dalam kehidupan seharihari, di mana bagian daun digunakan sebagai obat luka luar, bedak basah, obat diare, obat malaria, racun ikan, dan obat setel ah melahirkan; bagian akar digunakan untuk obat pasca melahirkan; dan bagian akar digunakan untuk obat masuk angin dan bengkak; dan bagian kulit batang digunakan untuk obat pasca melahirkan.
7
Salah satu cara yang digunakan oleh masyarakat Muara Teweh dalam memanfaatkan tanaman ini adalah dengan menghaluskan bagian daun sangkareho dengan cara ditumbuk lalu dibuat jamu atau untalan untuk penyembuhan luka pasca melahirkan. Cara lain yang digunakan untuk mengobati luka yang sudah lama adalah dengan menumbuk daun sampai halus lalu ditempelkan pada luka. Selain itu, masyarakat Dayak Benuaq juga menggunakan kulit kayu tanaman ini dengan cara dikupas dan direbus untuk obat pasca melahirkan. Identifikasi senyawa metabolit sekunder pada daun sangkareho telah dilakukan oleh Erwin pada tahun 2015. Hasil uji fitokimia yang dilakukan Erwin dinyatakan bahwa terdapat beberapa jenis metabolit sekunder pada ekstrak kasar etanol yaitu alkaloid, fenolat, flavonoid dan steroid, sedangkan pada fraksi nheksana terdapat alkaloid, flavonoid dan steroid dan pada fraksi etil asetat terdapat alkaloid, fenolat dan flavonoid. Supomo (2016) juga menyimpulkan bahwa golongan senyawa kimia metabolit sekunder simplisia dan ekstrak daun kerehau (sangkareho) mengandung senyawa flavonoid, tanin, saponin, dan terpenoid. Akan tetapi, kandungan kimia pada kulit batang dan akarnya belum diketahui dan sejauh ini belum ada penelitian tentang itu, maka dari itu peneliti ingin meneliti kandungan yang ada pada tumbuhan sangkareho baik pada bagian daun, kulit batang, dan akarnya. Peneliti ingin meneliti kandungan kimia yang terdapat pada tumbuhan sangkareho agar dapat digunakan dalam medis dan kehidupan masyarakat.
2.4 Ekstraksi
Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan substansi atau komponen kimia dari campurannya dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Metode ekstraksi yang dipilih untuk digunakan dalam suatu penelitian fitokimia tentu sangat bergantung pada tekstur dan kandungan air bahan tumbuhan yang diekstraksi dan pada jenis senyawa yang akan diisolasi. Pada umumnya yang perlu dilakukan dalam mengekstraksi adalah “membunuh” jar ingan tumbuhan untuk mencegah terjadinya oksidasi atau hidrolisis oleh enzim. Di samping itu, metode ekstraksi berguna untuk melarutkan senyawa-senyawa yang terdapat dalam jaringan tanaman ke dalam pelarut yang dipakai untuk proses ekstraksi tersebut (Kristanti, 2008).
8
Beberapa metode yang digunakan dalam ekstraksi bahan alam adalah maserasi. Maserasi adalah suatu metode ekstraksi yang dilakukan dengan jalan membiarkan padatan terendam dalam suatu pelarut. Proses perendaman dalam usaha mengekstraksi suatu substansi dari bahan alam ini bisa dilakukan tanpa pemanasan (pada temperatur kamar), dengan pemanasan atau bahkan pada suhu pendidihan. Sesudah disaring, residu dapat diekstraksi kembali menggunakan pelarut yang baru. Pelarut yang baru dalam hal ini bukan mesti berarti berbeda zat dengan pelarut yang terdahulu tetapi bisa pelarut dari z at yang sama. Proses ini bisa diulang beberapa kali menurut kebutuhan. Salah satu keuntungan metode maserasi adalah cepat, terutama jika maserasi dilakukan pada suhu didih pelarut. Meskipun demikian, metode ini tidak selalu efektif dan efisien. Waktu rendam bahan dalam pelarut bervariasi antara 1530 menit tetapi juga kadang-kadang bisa sampai 24 jam. Jumlah pelarut yang diperlukan juga cukup besar, berkisar antara 10-20 kali jumlah sampel. Metode ekstraksi ini melibatkan pelarut dengan peningkatan kepolaran melalui dari non polar seperti heksan hingga pelarut yang lebih polar seperti metanol atau etanol untuk memastikan bahwa senyawa dengan berbagai polaritas dapat diekstraksi. Pemilihan pelarut dalam proses maserasi memberikan efektifitas yang tinggi dalam memperhatikan kelarutan suatu senyawa dalam pelarut tersebut. Dalam penelitian ini digunakan pelarut polar, yaitu etanol. Etanol merupakan senyawa organik yang tersusun dari unsur-unsur karbon, hidrogen, dan oksigen. Etanol disebut juga etil alkohol dengan rumus kimia C 2H5OH atau CH3CH2OH dengan titik didihnya 78,4° C. Etanol memiliki sifat tidak berwarna, volatil dan dapat bercampur dengan air . Etanol bersifat miscible terhadap air dan dengan kebanyakan larutan organik, termasuk larutan non-polar seperti aliphatic hydrocarbons. Lebih jauh lagi penggunaan etanol digunakan sebagai solvent untuk melarutkan obat-obatan, penguat rasa, dan zat warna yang tidak mudah larut dalam air. Bila bahan non-polar dilarutkan dalam etanol, dapat ditambahkan air untuk membuat larutan yang kebanyakan air. Gugus OH dalam etanol membantu melarutkan molekul polar dan ion-ion dan gugus alkilnya CH 3CH2- dapat mengikat bahan non-polar. Dengan demikian etanol dapat melarutkan baik non maupun polar (Aziz, 2009).
9
2.5 Skrining Fitokimia
Fitokimia merupakan suatu ilmu yang memberikan sumbangan sangat b esar dalam perkembangan ilmu kimia organik. Telah banyak diketahui bahwa perkembangan ilmu kimia organik pada hakekatnya seiring dengan usaha penelitian terhadap senyawa-senyawa bahan alam yang tentu melibatkan berbagai metode yang banyak dibahas pada ilmu fitokimia. Penelitian senyawa organik bahan alam telah berkembang pesat dengan pengkajian yang lebih luas. Skrining fitokimia merupakan tahap pendahuluan dalam penelitian fitokimia. Secara umum dapat dikatakan bahwa metodenya sebagian besar merupakan reaksi pengujian warna ( spot test) dengan suatu pereaksi warna. Metode yang digunakan pada skrining fitokimia seharusnya memenuhi beberapa kriteria berikut; sederhana, cepat, hanya membutuhkan peralatan sederhana, khas untuk satu golongan senyawa, dan memiliki batas limit deteksi yang cukup lebar (dapat mendeteksi keberadaan senyawa meski dalam konsentrasi yang cukup kecil). Menurut Harborne (1987), idealnya, untuk analisis fitokimia, harus digunakan jaringan tumbuhan segar. Beberapa menit setelah dikumpulkan, bahan tuumbuhan itu harus dicemplungkan ke dalam alkohol mendidih. Kadang-kadang, tumbuhan yang ditelaah tidak tersedia dan bahan mungkin harus disediakan oleh seorang pengumpul yang tinggal di benua lain. Dalam hal demikian, jaringan yang diambil segar harus disimpan kering di dalam kantung plastik, dan biasanya akan tetap dalam keadaan baik untuk dianalisis setelah beberapa hari dalam perjalanan dengan pos udara. Cara lain, tumbuhan dapat dikeringkan sebelum diekstraksi. Bila ini dilakukan, pengeringan tersebut harus dilakukan dalam keadaan terawasi untuk mencegah terjadinya perubahan kimia yang terlalu banyak. Bahan harus dikeringkan secepat-cepatnya, tanpa menggunakan suhu tinggi, lebih baik dengan aliran udara yang baik. Setelah betul-betul kering, tumbuhan dapat disimpan untuk jangka waktu lama sebelum digunakan untuk analisis. Dan memang demikia nlah,
10
analisis flavonoid, alkaloid, kuinon, dan terpenoid telah dilakukan dengan berhasil pada herbarium yang telah disimpan bertahun-tahun.
2.6 Senyawa Metabolit Sekunder
Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa kimia yang umumnya mempunyai kemampuan bioaktifitas dan berfungsi sebagai pelindung tumbuhan dari gangguan hama penyakit untuk tumbuhan tersebut atau lingkungan. Senyawa metabolit sekunder digunakan sebagai zat warna, racun, aroma makanan, dan obat tradisional pada kehidupan sehari-hari. Meskipun tidak sangat penting bagi eksistensi suatu individu, metabolit sekunder sering berperan pada kelangsungan hidup suatu spesies dalam perjuangan menghadapi spesies-spesies lain, misalnya sebagai zat pertahanan dan zat penarik bagi lawan jenisnya. Beberapa ahli percaya bahwa senyawa metabolit sekunder adalah produk detoksifikasi dari timbunan metabolit beracun yang tidak dapat dibuang oleh organisme tersebut. Pendapat ini sesuai dengan kenyataan bahwa tumbuhan lebih banyak memproduksi metabolit sekunder daripada binatang karena binatang mempunyai sistem yang canggih untuk proses pembuangan metabolit beracun mereka, seperti melalui liver dan ginjal. Macam-macam senyawa metabolit sekunder yang ada dalam tumbuhan dapat berupa steroid, terpenoid, flavonoid, fenolat, saponin, al kaloid, dan lain-lain.
2.6.1 Steroid
Steroid adalah kelompok senyawa bahan alam yang kebanyakan strukturnya terdiri
atas
17
atom
karbon
dengan
membentuk
struktur
dasar
1,2-
siklopentenoperhidrofenantren. Steroid terdiri dari beberapa kelompok senyawa yang pengelompokkannya didasarkan pada efek fisiologis yang ditimbulkan. Ditinjau dari segi struktur, perbedaan antara berbagai kelompok ini ditentukan oleh jenis substituen R 1, R 2, dan R 3 yang terikat pada kerangka dasar sedangkan perbedaan antara senyawa yang satu dengan senyawa yang lain dari sat u kelompok ditentukan oleh panjangnya rantai karbon substituen, gugus fungsi yang terdapat pada substituen, jumlah dan posisi gugus fungsi oksigen dan ikatan rangkap pada kerangka dasar. Kelompok-kelompok tersebut adalah sebagai berikut.
11
1. Sterol Sebenarnya nama sterol dipakai khusus untuk steroid yang memilki gugus hidroksi, tetapi karena praktis semua steroid tumbuhan berupa alkohol dengan gugus hidroksi pada posisi C-3 , maka semuanya disebut Sterol. Selain dalam bentuk bebasnya, sterol juga sering dijumpai sebagai glikosida atau sebagai ester dengan asam lemak. Glikosida sterol sering disebut sterolin. 2. Asam empedu 3. Hormon kelamin 4. Hormon adrenokortikoid 5. Aglikon kardiak Aglikon kardiak dan bentuk glikosidanya lebih dikenal sebagaai glikosida jantung atau kardenolida. Tumbuhan yang mengandung senyawa ini telah digunakan sejak zaman prasejarah sebagai racun. Glikosida ini mempunyai efek kardiotonik yang khas. Keberadaan senyawa ini dalam tumbuhan mungkin memberi perlindungan kepada tumbuhan dari gangguan beberapa serangga tertentu. 6. Sapogenin Sapogenin dan bentuk glikosidanya yang dikenal sebagai saponin. Glikosilasi biasanya terjadi pada posisi C-3. Saponin adalah senyawa yang dapat menimbulkan busa jika dikocok dalam air (karena sifatnya yang menyerupai sabun, maka dinamakan saponin. Pada konsentrasi yang rendah, saponin dapat menyebabkan hemolisis sel darah merah. Dalam bentuk larutan yang sangat encer, saponin sangat beracun untuk ikan. (Kristanti, 2008)
12 11 13
17 16
2
10
3
5 4
1,2-siklopentenoperhidrofenantren
9
8
14
15
7 6
Kerangka dasar karbon steroid dan sistem penomoran
Gambar 7. Struktur dasar steroid
12
2.6.2 Terpenoid
Terpenoid adalah kelompok senyawa metabolit sekunder yang terbesar, dilihat dari jumlah senyawa maupun variasi kerangka dasar s trukturnya. Terpenoid ditemukan berlimpah dalam tanaman tingkat tinggi, meskipun demikian, dari penelitian diketahui bahwa jamur, organisme laut, dan serangga juga menghasilkan terpenoid. Selain dalam bentuk bebasnya, terpenoid di alam juga dijumpai dalam bentuk glikosida, glikosil ester, dan iridoid. Terpenoid j uga merupakan komponen utama penyusun minyak atsiri. (Kristanti, 2008) Terpenoid atau isoprenoid merupakan senyawa bahan alam yang mempunyai struktur dasar disusun oleh struktur isoprena yang saling bergabung dan mengalami modifikasi sehingga mengandung gugus fungsi dan terkadang juga terjadi siklisasi menghasilkan struktur siklik alifatik. Terpenoid merupakan kelompok terbesar senyawa bahan alam dengan jumlah senyawa lebih dari 30.000 senyawa. (Raharjo, 2013) Senyawa terpenoid tersusun atas karbon-karbon dengan jumlah kelipatan lima. Diketahui juga bahwa sebagian besar terpenoid mempunyai kerangka karbon yang dibangun oleh dua atau lebih unit C 5 yang disebut unit isopren. Disebut unit isopren karena kerangka karbon C 5 ini sama seperti senyawa isopren. Dari beberapa struktur senyawa terpenoid yang telah berhasil diidentifikasi, dapat diketahui bahwa unit-unit isopren tersebut saling berkaitan secara teratur di mana “kepala” dari unit yang satu berikatan dengan “ ekor” dari unit yang lain. Keteraturan mengenai struktur terpenoid tersebut dirumuskan dalam suatu aturan yang disebut kaidah isopren. Kaidah ini menyatakan bahwa struktur molekul terpenoid dibangun oleh dua atau lebih unit isopren yang saling berikatan “kepala-ke-ekor”. Kaidah ini merupakan ciri khas senyawa golongan terpenoid sehingga dapat digunakan sebagai hipotesis dalam menentukan/menetapkan struktur suatu senyawa terpenoid. Kaidah isopren tersebut dapat dilihat pada beberapa contoh senyawa terpenoid berikut ini:
13
mirsen
bisabolen
manool
Gambar 8. Struktur senyawa terpenoid
2.6.3 Flavonoid
Flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang ditemukan di alam. Flavonoid di alam juga sering ditemukan dalam bentuk glikosidanya. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu, biru, dan sebagian zat warna kuning yang terdapat dalam tanaman. Sebagai pigmen bunga, flavonoid jelas berperan dalam menarik serangga untuk membantu proses penyerbukan. Beberapa kemungkinan fungsi flavonoid yang lain bagi tumbuhan adalah sebagai zat pengatur tumbuh, pengatur proses fotosintesis, sebagai zat antimikroba, antivirus, dan antiinsektisida. Beberapa flavonoid sengaja dihasilkan oleh jaringan tumbuhan sebagai respons terhadap infeksi atau luka yang kemudian berfungsi menghambat fungi menyerangnya. Flavonoid telah dikenal sebagai produk hasil alam dengan efek yang menguntungkan bagi kesehatan jauh sebelum senyawa tersebut dapat diisolasi sebagai senyawa yang efektif. Flavonoid pertama kali ditemukan oleh pemenang Nobel, Albert Szent Gyorgyi, pada tahun 1930. Sejauh ini lebih dari 4.000 jenis flavonoid telah diidentifikasi. Flavonoid ditemukan pada berbagai tanaman serta terdistribusi pada bagian-bagian seperti buah, daun, biji, akar, kulit kayu, batang, dan bunga. Flavonoid mempunyai kerangka dasar karbon yang terdiri atas 15 atom karbon yang membentuk susunan C 6-C3-C6. Susunan ini dapat menghasilkan tiga jenis struktur, yaitu 1,3-diarilpropan atau flavonoid, 1,2-diarilpropan atau isoflavonoid, dan 1,1-diarilpropan atau neoflavonoid.
14
Gambar 9. Struktur Flavonoid. 2.6.4 Fenolat
Senyawa fenolat adalah senyawa yang memiliki satu atau lebih gugus hidroksil yang menempel di cincin aromatik. Terkait dengan senyawa fenolat, seringkali terjadi kerancuan pada pengertian istilah ‘polifenol’. Istilah polifenol kadang disalahartikan sebagai bentuk polimerisasi senyawa fenolat, padahal polifenol hanya merupakan satu senyawa yang memiliki lebih dari satu gugus fenol (Andarwulan, 2012).
Gambar 10. Contoh senyawa fenolat.
Senyawa fenolat merupakan senyawa yang banyak ditemukan pada tumbuhan. Senyawa fenolat di alam terdapat sangat luas, mempunyai variasi struktur yang luas, mudah ditemukan di semua tanaman, daun, bunga, dan buah. Ribuan senyawa fenolat alam telah diketahui strukturnya, antara lain flavonoid, fenol monosiklik sederhana, fenil propanoid, polifenol (lignin, melanin, tanin), dan kuinon fenolat. Banyak senyawa fenolat alami mengandung sekurang-kurangnya
satu
gugus hidroksil dan lebih banyak yang membentuk senyawa eter, ester atau glikosida daripada senyawa bebasnya. Senyawa ester atau eter fenol tersebut memiliki kelarutan yang lebih besar dalam air daripada senyawa fenol dan senyawa
15
glikosidanya. Senyawa fenolat memiliki aktivitas biologik yang beraneka ragam dan banyak digunakan dalam reaksi enzimatik oksidasi kopling sebagai substrat donor H. Reaksi oksidasi kopling, selain membutuhkan suatu oksidator juga memerlukan adanya suatu senyawa yang dapat mendonorkan H. Senyawa fenolat merupakan contoh ideal dari senyawa yang mudah mendonorkan atom H.
2.6.5 Saponin
Saponin berasal dari kata Latin yaitu ‘sapo’ yang berarti mengandung busa stabil bila dilarutkan dalam air. Kemampuan busa dari saponin disebabkan oleh kombinasi dari sapogenin yang bersifat hidrofobik (larut dalam lemak) dan bagian rantai gula yang bersifat hidrofilik (larut dalam air) (Naoumkina et al., 2010). Saponin adalah glikosida triterpena dan sterol, telah terdeteksi dalam lebih dari 90 suku tumbuhan. Glikosida saponin adalah glikosida yang aglikonnya berupa sapogenin. Saponin tersebar luas di antara tanaman tinggi, keberadan saponin sangat mudah ditandai dengan pembentukan larutan koloidal dengan air yang apabila dikocok. Secara umum saponin merupakan bentuk glikosida yang memiliki aglikon berupa steroid dan triterpen. Triterpen merupakan jenis senyawa bahan alam yang memiliki 6 monoterpen atau memiliki jumlah atom karbon sebanyak 30. Dari aglikonnya saponin dapat bagi menjadi dua yaitu saponin dengan steroid dan saponin dengan triterpen. Saponin adalah jenis glikosida yang banyak ditemukan dalam tumbuhan. Saponin memiliki karakteristik berupa buih. Sehingga ketika direaksikan dengan air dan dikocok maka akan terbentuk buih yang dapat bertahan lama. Saponin mudah larut dalam air dan tidak larut dalam eter. Saponin memberikan rasa pahit pada bahan pangan nabati.Sumber utama saponin adalah biji-bijian khususnya kedele. Saponin dapat menghambat pertumbuhan kanker kolon dan membantu kadar kolesterol menjadi normal. Tergantung pada jenis bahan makanan yang dikonsumsi, seharinya dapat mengkonsumsi saponin sebesar 10-200 mg.
16
Sifat-sifat Saponin Saponin memiliki sifat sebagai berikut : 1) Mempunyai rasa pahit 2) Dalam larutan air membentuk busa yang stabil 3) Menghemolisa eritrosit 4) Merupakan racun kuat untuk ikan dan amfibi 5) Membentuk persenyawaan dengan kolesterol dan hidroksi steroid lainnya 6) Sulit untuk dimurnikan dan diidentifikasi 7) Berat molekul relatif tinggi, dan analisis hanya menghasilkan formula empiris yang mendekati.
2.6.6 Alkaloid
Alkaloid adalah suatu golongan senyawa organik yang terbanyak ditemukan di alam. Hampir seluruh alkaloid berasal dari tumbuh-tumbuhan dan tersebar luas dalam berbagai jenis tumbuhan. Sampai saat ini lebih dari 5000 senyawa alkaloid yang telah ditemukan dan hampir semua alkaloid yang ditemukan di alam mempunyai keaktifan fisiologis tertentu. Alkaloid dapat ditemukan dalam berbagai bagian tumbuhan, tetapi sering kali kadar alkaloid dalam jaringan tumbuhan ini kurang dari 1%. Alkaloid dapat dipisahkan dari sebagian besar komponen tumbuhan yang lain berdasarkan sifat basanya. Oleh karena itu, senyawa golongan ini sering diisolasi dalam bentuk garamnya dengan HCl atau H2SO4. Garam ini atau alkaloid bebasnya berbentuk padat kristal yang tidak berwarna. Banyak alkaloid yang bersifat optis aktif dan biasanya hanya satu isomer optik yang dijumpai di alam, meskipun dikenal juga campuran rasemat alkaloid (Kristanti, 2008).
17
BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Pendidikan Kimia Universitas Palangka Raya. Adapun alasan pemilihan tempat ini adalah bahwa peneliti merupakan Mahasiswa Program Studi Pendidikan Kimia, Jurusan MIPA, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan sehingga dapat memudahkan akses dalam melakukan penelitian.
3.2 Alat Penelitian
Peralatan yang digunakan pada penelitian ini antara lain botol gelap, gunting, sendok, neraca analitik, corong, gelas ukur 100 mL, gelas kimia 100 mL, kertas saring, spatula, rak tabung reaksi, tabung reaksi, pipet te tes, pipet ukur 1 mL + karet penghisap, keranjang, plat tetes, aluminium foil, tisu, karet gelang, dan lakban.
3.3 Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini antara lain daun, kulit batang, dan akar tumbuhan sangkareho, etanol, n-heksana, pereaksi Meyer, asam klorida pekat (HCl), asam asetat anhidrida ((CH3CO)2O), besi (III) klorida (FeCl3), serbuk magnesium (Mg), dan asam sulfat pekat (H 2SO4).
3.4 Prosedur Kerja 3.4.1 Pembuatan Sampel pada Daun, Kulit Batang, dan Akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longi folia)
(1) Sampel dibersihkan lalu dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. (2) Sampel dipotong kecil-kecil/dihaluskan. (3) Sampel siap digunakan untuk proses maserasi.
18
(b)
(a)
(c)
Gambar 11. (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Sangkareho yang sudah dipotong kecil-kecil/dihaluskan
3.4.2 Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder (Skrining Fitokimia) pada Daun, Kulit Batang, dan Akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) Menggunakan Pelarut Etanol
a. Pembuatan Ekstrak Daun, Kulit Batang, dan Akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia)
(1) Sampel ditimbang sebanyak 10 gram dan dimasukkan ke dalam botol gelap, lalu ditambah pelarut etanol sebanyak 100 ml.
(a)
(b)
(c)
Gambar 12. Proses penimbangan (a) daun; (b) kulti batang; (c) akar tumbuhan sangkareho
19
(2) Sampel harus terendam semua dan dimaserasi selama 3x 24 jam. (3) Sampel yang sudah siap, disaring untuk memisahkan kotoran yang ada pada sampel.
(a)
(b)
(c)
Gambar 13. Proses penyaringan sampel (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar tumbuhan sangkareho (4) Filtrat hasil penyaringan dipekatkan dengan cara ditempatkan di udara terbuka (dengan ditutup menggunakan kain di atas tempat sampel agar ti dak terpapar matahari langsung) hingga pelarut menguap sehingga didapatkan ekstrak kering/kental.
(a)
(b)
(c)
Gambar 14. Filtrat (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar sangkareho
20
Gambar 15. Proses pemekatan filtrat sampel di udara terbuka (5) 1 ml ekstrak sampel diambil dan ditambahkan dengan 1 mL n-heksana, dikocok-kocok hingga berbusa.
(a)
(b)
(c)
Gambar 16. Ekstak etanol (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar sangkareho + n-heksana saat dikocok (6) Didiamkan hingga terbentuk dua lapisan.
Gambar 17. Ekstak etanol daun, kulit batang, dan akar sangkareho + n-heksana DAUN
AKAR
KULIT BATANG
setelah didiamkan
(7) Masing-masing lapisan dipisahkan untuk dapat digunakan pada perlakuan selanjutnya.
21
1. Identifikasi Terpenoid dan Steroid
Lapisan n-heksana dimasukkan ke dalam 2
lubang
plat tetes
masing-masing 3 tetes, dibiarkan sampai kering, dan ditambahkan 3 tetes asam sulfat pekat (H2SO4) ke dalam satu lubang
sedangkan lubang yang lain
ditambahkan satu tetes asam asetat anhidrida dan satu tetes asam sulfat pekat. Terbentuknya warna biru atau hijau menandakan adanya steroid (pada saat penambahan asam asetat anhidrida dan asam sulfat) dan jika terbentuk warna merah atau merah ungu menandakan adanya terpenoid (pada saat penambahan asam sulfat pekat).
2. Identifikasi Flavonoid
Diambil 3 tetes lapisan etanol, dimasukkan ke dalam lubang plat tetes, ditambahkan serbuk logam Mg dan 3 tetes HCl pekat. Terbentuknya warna orange sampai merah menunjukkan uji positif untuk uji flavonoid.
3. Identifikasi Fenolat
Diambil 3 tetes lapisan etanol, dimasukkan ke dalam lubang plat tetes kemudian ditambahkan besi (III) klorida (FeCl3). Jika terbentuk warna biru, hijau, merah, ungu, dan hitam yang kuat menandakan positif adanya senyawa fenolat.
4. Identifikasi Saponin
Diambil 3 tetes lapisan etanol, dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian dikocok kuat-kuat, bila terbentuk busa yang permanen selama ±15 menit menandakan positif adanya saponin.
5. Identifikasi Alkaloid
Lapisan n-heksana diambil 3 tetes, dimasukkan ke dalam l ubang plat tetes kemudian ditambahkan 2 tetes pereaksi Meyer. Jika terdapat alkaloid akan terbentuk endapan putih, hasil ini menunjukkan positif adanya senyawa alkaloid.
22
BAB 4 HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
4.1 DATA HASIL PENGAMATAN
Kandungan metabolit sekunder dari Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longifolia) diidentifikasi melalui uji fitokimia. Uji fitokimia ini mel iputi uji steroid, terpenoid, flavonoid, fenolat, saponin, dan alkaloid. Uji fitokimia merupakan suatu tahap seleksi awal guna mendeteksi golongan senyawa kimia yang terdapat pada tumbuhan. Metode ini merupakan salah satu dari beberapa pendekatan yang lazim digunakan unutk mencari komponen senyawa kimia tumbuhan yang memiliki aktivitas biologis. Berdasarkan hasil uji fitokimia yang telah dilakukan terhadap ekstrak etanol dari Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia), yaitu pada bagian daun, kulit batang, dan akar diketahui jenis senyawa metabolit sekunder yang dapat dilihat pada Tabel 1 berikut.
Tabel 1. Hasil uji fitokimia terhadap daun, kulit batang, dan akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longi folia) Hasil Pengujian Skrining Jenis Senyawa
Fitokimia pada Bagian Tumbuhan Sangkareho
Identifikasi
Daun
Steroid Terpenoid Flavonoid
Lapisan n-heksana + asam asetat anhidrat + asam sulfat Lapisan n-heksana + asam sulfat Lapisan etanol + serbuk logam Mg + HCl
Kulit Batang
Akar
++++
++
+
-
-
-
+++
-
-
Fenolat
Lapisan etanol + FeCl3
++++
++
+++
Saponin
Lapisan etanol (dikocok kuat-kuat)
-
-
-
-
-
-
Alkaloid
Lapisan n-heksana + Pereaksi Meyer
23
4.2 PEMBAHASAN 4.2.1 Penyiapan Sampel
Daun, akar, dan kulit batang dari tanaman sangkareho disortasi dan dibersihkan untuk memisahkan kotoran-kotoran atau bahan asing lainnya. Selanjutnya dilakukan pengeringan dengan cara diangin-anginkan. Pengeringan bertujuan untuk mengurangi kadar air dan menghentikan reaksi enzimatik yang dapat menyebabkan pengurangan mutu atau kerusakan pada sampel. Pengeringan tidak dilakukan di bawah sinar matahari karena untuk mengurangi kemungkinan penguapan dan rusaknya kandungan senyawa kimia pada tanaman. Bagian-bagian tanaman yang telah kering dilakukan maserasi dengan menggunakan pelarut etanol untu mendapatkan ekstrak etanol. Pemilihan etanol sebagai pelarut didasarkan pada beberapa pertimbangan, diantaranya etanol memiliki kemampuan melarutkan ekstrak yang besar, beda kerapatan yang signifikan sehingga mudah memisahkan zat yang akan dilarutkan, tidak bersifat racun, tidak eksplosif bila bercampur dengan udara, tidak korosif, dan mudah didapatkan. Pembuatan ekstrak etanol pada daun, akar, dan kulit batang tanaman sangkareho dimulai dengan ditimbang masing-masing 10 gram sampel dan ditambahkan 100 ml pelarut etanol, lalu dimasukkan ke dalam botol gelap. Botol tersebut ditutup rapat menggunakan aluminium foil dan didiamkan selama 3 x 24 jam. Botol ditutup dengan rapat agar tidak terkena cahaya yang dapat menyebabkan ekstrak menjadi rusak jika terkena cahaya. Setelah didiamkan, masing-masing rendaman daun, akar, dan kulit batang disaring untuk mendapatkan filtratnya. Filtrat yang diperoleh antara lain 69 ml untuk daun, 79 ml untuk akar, dan 71 ml untuk kulit batang. Filtar-filtrat tersebut selanjutnya diuapkan di udara terbuka. Penguapan ini bertujuan untuk mendapatkan ekstrak kental dari sampel tersebut dengan cara yang sederhana. Ekstrak kering/kental yang diperoleh, diambil 1 ml dan ditambahkan 1 ml n-heksana. Campuran tersebut dikocok dan didiamkan. Penambahan n-heksana pada ekstrak etanol dilakukan agar senyawa yang bersifat nonpolar pada ekstrak dapat terlarut dalam n-heksana dan senyawa polar dapat terlarut dalam etanol sehingga senyawa polar maupun nonpolar dapat diidentifikasi. Prinsip yang mendasari adalah “like dissolve like”. Dua lapisan yang
24
terbentuk (lapisan etanol dan n-heksana) dari proses pendiaman dipisahkan untuk digunakan pada identifikasi metabolit sekunder.
4.2.2 Uji Fitokimia pada Daun, Kulit Batang, dan Akar Tanaman Sangkareho.
Skrining fitokimia merupakan tahap pendahuluan dalam penelitian fitokimia. Secara umum dapat dikatakan bahwa metodenya sebagian besar merupakan reaksi pengujian warna dengan suatu pereaksi. Uji fitokimia dalam penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa yang terdapat pada sampel daun, kulit batang, dan akar tanaman sangkareho (Callicarpa longifolia). Metode uji fitokimia ini dilakukan karena metodenya yang sederhana, cepat, dan hanya memerlukan peralatan yang sederhana. Senyawa metabolit sekunder merupakan senyawa kimia yang umumnya mempunyai kemampuan bioaktifitas dan berfungsi sebagai pelindung tumbuhan dari gangguan hama penyakit untuk tumbuhan tersebut atau lingkungan. Senyawa metabolit sekunder digunakan sebagai zat warna, racun, aroma makanan, dan obat tradisional pada kehidupan sehari-hari. Senyawa metabolit sekunder yang diidentifikasi pada penelitian ini adalah steroid, terpenoid, flavonoid, fenolat, saponin, dan al kaloid.
4.2.2.1 Identifikasi Steroid
Pengujian kandungan terpenoid dan steroid pada sampel daun, kulit batang, dan akar dari Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) dilakukan dengan menambahkan ekstrak sampel (lapisan n-heksana) dengan pereaksi LiebermanBurchard yaitu campuran asam asetat anhidrat dengan asam sulfat pekat dengan perbandingan 2:1. Senyawa steroid merupakan senyawa organik yang memiliki sifat nonpolar, oleh karena itu digunakan lapisan n-heksana sehingga steroid dapat larut dalam pelarut nonpolar seperti n-heksana. Berdasarkan hasil skrining fitokimia, daun, kulit batang, dan akar dari Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) positif mengandung steroid. Hal ini ditunjukkan dengan terbentuknya larutan berwarna hijau, dapat dilihat pada berikut.
25
(a)
(c)
(b)
Gambar 18. Identifikasi Steroid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Tumbuhan Sangkareho Reaksi yang terjadi antara larutan dengan pereaksi menyebabkan terjadinya oksidasi melalui pembentukan ikatan rangkap terkonjugasi pada golongan senyawa steroid ini sehingga mengakibatkan terjadinya perubahan warna pada larutan.
Penambahan asam asetat anhidrat pada larutan sampel menghasilkan senyawa kompleks asetil steroid melalui reaksi asetilasi. Berikut ini adalah reaksi antara steroid dengan asam asetat anhidrat melalui reaksi asetilasi. Reaksi yang terjadi : O CH3
Gugus steroid
OH
C O
+
CH3
- CH3COOH
C
O
Steroid
O
C
senyawa kompleks O
CH3
asetil steroid
Gambar 19. Reaksi antara steroid dengan asam asetat anhidrat.
Penambahan H2SO4 pekat bertujuan untuk mendekstruksi kompleks asetil steroid. H2SO4 pekat lebih bersifat reaktif jika bereaksi dengan steroid dibandingkan dengan asam asetat anhidrat. Hal ini dikarenakan kemampuan H 2SO4 yang lebih mudah masuk mengatasi efek sterik yang besar dari molekul steroid sehingga senyawa kompleks yang dihasilkan lebih stabil dari kompleks asetil steroid.
26
4.2.2.2 Identifikasi Terpenoid
Pengujian kandungan terpenoid dan steroid pada sampel daun, kulit batang, dan akar dari Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) dilakukan dengan menambahkan ekstrak sampel (lapisan n-heksana) dengan asam sulfat (H 2SO4). Reaksi
positif
pada
identifikasi
senyawa
terpenoid
ditunjukkan
dengan
terbentuknya warna merah atau merah ungu. Perubahan warna ini dikarenakan terjadinya oksidasi pada golongan senyawa terpenoid melalui pembentukan ikatan rangkap terkonjugasi. Prinsip reaksi dalam uji terpenoid adalah kondensasi atau pelepasan H 2O dan penggabungan karbokation serta menyebabkan adisi elektrofilik diikuti dengan pelepasan hidrogen. Gugus hidrogen beserta el ektron dilepas sehingga mengalami perpanjangan konjugasi yang memperlihatkan adanya cincin coklat (Siadi K, 2012).
Gambar 20. Reaksi terpenoid dengan pereaksi Lie bermann-burchard. Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa daun, kulit batang, dan akar dari Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) tidak mengandung terpenoid yang ditunjukkan dengan tidak terbentuknya warna merah atau ungu setelah larutan ditambahkan pereaksi.
27
(a)
(b)
(c)
Gambar 21. Identifikasi Terpenoid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar tumbuhan Sangkareho
4.2.2.3 Identifikasi Flavonoid
Identifikasi senyawa flavonoid dilakukan dengan menambahkan lapisan etanol dengan sedikit serbuk logam magnesium (Mg) serta 3 tetes asam klorida pekat (HCl). Positif adanya flavonoid ditandai dengan terbentuknya warna orange sampai merah. Berdasarkan hasil skrining fitokimia yang telah dilakukan, daun dari Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) positif mengandung flavonoid yang ditunjukkan dengan adanya perubahan warna larutan menjadi orange (lihat Gambar 4.5a), sedangkan pada akar dan kulit batangnya menunjukkan hasil uji negatif atau tidak menunjukkan adanya perubahan warna menjadi orange sampai merah setelah ditambah pereaksi.
(a)
(b)
(c)
Gambar 22. Identifikasi Flavonoid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Tumbuhan Sangkareho Pada proses penambahan serbuk Mg dan HCl pekat pada lapisan etanol, terjadi reaksi eksoterm. Reaksi eksoterm adalah reaksi yang melepaskan panas yang
28
ditandai dengan terbentuknya gelembung-gelembung gas dan pelepasan kalor pada permukaan tabung reaksi. Gelembung gas yang terbentuk ini adalah gas H 2. Reaksi yang terjadi : Mg
+
Mg2+ + 2Cl- + H2
2HCl
Penambahan Mg dan HCl juga berfungsi untuk mereduksi inti benzopiron yang terdapat pada struktur flavonoid sehingga terbentuk perubahan warna me njadi merah atau jingga. Perubahan warna ini juga menandakan bahwa sa at penambahan logam Mg dan HCl terbentuk garam flavilium, di mana terbentuknya garam flavilium ini berarti bahwa pada ekstrak tumbuhan tersebut mengandung senyawa flavonoid. Dalam penelitian ini ditunjukkan dengan perubahan warna larutan menjadi orange. Reaksi yang terjadi seperti gambar berikut.
Gambar 23. Mekanisme reaksi pembentukan garam flavilium.
4.2.2.4 Identifikasi Fenolat
Pengujian terhadap senyawa metabolit sekunder fenolat dilakukan dengan menambahkan beberapa tetes larutan FeCl3 pada lapisan etanol. Uji positif terhadap fenolat ditandai dengan terbentuknya warna biru, hijau, merah, ungu, dan hitam yang kuat. Fenolat merupakan kelompok senyawa aromatik dengan gugus fungsi hidroksil. Oleh karena itu, pada pengujian senyawa fenolat digunakan larutan
29
FeCl3, di mana larutan ini berfungsi untuk mengetahui adanya gugus hidroksil pada larutan sampel. Salah satu sifat fenolat adalah cenderung asam, artinya dapat melepaskan ion H+ dari gugus hidroksilnya. Pengeluaran ion tersebut yang menjadikan terdapatnya anion fenoksida C 6H5O- yang dapat dilarutkan dalam air. Ketika ditambahkan FeCl3, kation dari FeCl3 akan bersifat elektrofil, yang akan menyerang ion yang mengandung elektron lebih banyak yaitu O -, sehingga terbentuklah senyawa yang berwarna dengan berbagai warna dari fenol, dalam hasil penelitian ini ditunjukkan dengan munculnya warna hijau pada larutan yang diuji. Berikut ini adalah reaksi yang terjadi antara senyawa fenolat dengan larutan FeCl3.
Gambar 24. Reaksi senyawa fenolat dengan larutan FeCl 3. Hasil pengamatan menunjukkan bahwa daun, kulit batang, dan akar dari Tumbuhan Sangkareho mengandung senyawa fenolat. Identifikasi fenolat pada daun sangkareho menunjukkan perubahan warna yang kuat, di mana hal ini berarti bahwa senyawa fenolat reaktif terhadap pereaksi yang ditambahkan (lihat Gambar 4.8a), sedangkan pada kulit batang berarti cukup reaktif dan pada akar berarti bereaksi lemah terhadap pereaksi.
(a)
(b)
(c)
Gambar 25. Identifikasi Fenolat pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar Tumbuhan Sangkareho
30
4.2.2.5 Identifikasi Saponin
Senyawa saponin diidentifikasi dengan cara mengkocok kuat-kuat lapisan etanol. Positif adanya saponin ditandai dengan adanya busa yang tidak hilang selama +/- 15 menit. Pada masa lalu senyawa saponin digunakan sebagai racun pada anak panah karena sifatnya yang sangat toksik. Sifat senyawa saponin yang menyebabkan haemolisis (lisis sel darah merah) dengan meningkatkan permeabilitas memberan plasma inilah yang menjadikan senyawa saponin sangat toksik. Selain sifatnya yang sangat toksik, senyawa saponin juga memiliki sifat fisik seperti surfaktan. Hal ini menyebabkan senyawa saponin dengan konsentrasi yang rendah tetap dapat membentuk busa ketika bereaksi. Saponin pada umumnya berada dalam bentuk glikosida sehingga cenderung bersifat polar (Harbone, 1987). Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang dapat menimbulkan busa jika dikocok dalam air. Hal tersebut te rjadi karena saponin memiliki gugus polar dan non polar yang akan membentuk misel. Pada saat misel terbentuk maka gugus polar akan menghadap ke luar dan gugus nonpolar menghadap ke dalam dan keadaan inilah yang tampak seperti busa. Timbulnya busa menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya. Reaksi pembentukan busa pada uji saponin ditunjukkan pada reaksi berikut.
Gambar 26. Reaksi pembentukan busa pada uji saponin.
Hasil skrining fitokimia dalam penelitian ini menunjukkan bahwa daun, kulit batang, dan akar dari Tumbuhan Sangkareho ( Callicarpa longifolia) menghasilkan uji negatif atau tidak mengandung saponin. Hasil ini tidak sesuai
31
dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Supomo (2016), di mana dalam penelitiannya dinyatakan bahwa pada bagian daun sangkareho terdapat saponin. Kemungkinan yang dapat terjadi sehingga hasil ini tidak sesuai dengan penelitian Supomo adalah bahwa sampel yang diekstrak jumlahnya sedikit dan ekstrak yang digunakan saat pencampuran dengan larutan n-heksana volumenya terlalu sedikit sehingga saat lapisan dipisahkan dan dikocok tidak menunjukkan adanya busa ( hasil uji negatif).
4.2.2.6 Identifikasi Alkaloid
Uji alkaloid dilakukan dengan cara menambahkan lapisan n-heksana dengan pereaksi Meyer. Jika terdapat alkaloid akan terbentuk endapan putih, hasil ini menunjukkan positif adanya senyawa alkaloid. Alasan digunakan lapisan n-heksana adalah untuk melarutkan ikatan glikosida, karena n-heksana bersifat nonpolar, maka dapat melarutkan senyawa nonnpolar seperti glikosida. Pereaksi Meyer dibuat dengan cara mereaksikan larutan HgCl 2 dengan KI, di mana reaksi ini menghasilkan endapan merah HgI 2 atau merkurium(II) iodida. Jika kalium iodida yang ditambahkan berlebih maka akan terbentuk kalium tetraiodomerkurat(II). Alkaloid mengandung atom nitrogen yang mempunyai pasangan elektron bebas sehingga dapat digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan ion logam. Pada uji alkaloid dengan pereaksi Meyer, diperkirakan nitrogen pada alkaloid akan bereaksi dengan ion logam K+ dari kalium tetraiodomerkurat(II) membentuk kompleks kalium-alkaloid yang mengendap.
Gambar 27. Reaksi alkaloid dengan pereaksi Meyer.
32
Hasil skrining fitokimia dalam penelitian ini, diketahui bahwa pada akar, kulit batang, dan daun pada tumbuhan sangkareho ( Callicarpa longifolia) tidak terdapat senyawa alkaloid (uji negatif), yang ditandai dengan tidak terbentuknya endapan berwarna putih, tetapi berwarna coklat.
(a)
(b)
(c)
Gambar 28. Identifikasi Alkaloid pada (a) daun; (b) kulit batang; dan (c) akar tumbuhan Sangkareho Sebagai pembanding dalam penelitian ini, maka dibahas pula mengenai penelitian lain yang membahas tentang isolasi dan identifikasi senyawa metabolit sekunder dari spesies lain pada genus Callicarpa yang memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder mirip dengan kandungan pada tumbuhan sangkareho (Callicarpa longifolia). Hasil penelitian dari disertasi tentang isolasi senyawa metabolit sekunder dari kulit batang Callicarpa arborea Roxb yang dilakukan oleh M. Amin (2016) menyatakan bahwa pada tumbuhan ini didapatkan golongan senyawa steroid yaitu stigmasterol tersubstitusi sebanyak 70,025 mg berupa amorf putih dari fraksi nheksana, golongan senyawa triterpenoid yaitu senyawa betulin seban yak 11,560 mg berupa amorf putih dari fraksi diklholometana, dan golongan senyawa lakton yaitu senyawa 2,2-dimetil-4,5-α-laktobenzopirin sebanyak 10,750 mg berupa amorf kuning dari fraksi etil asetat. Dengan adanya hasil tersebut, dapat dikatakan bahwa pada tumbuhan ini terdapat senyawa metabolit sekunder yaitu senyawa steroid, triterpenoid, dan lakton. Jika kulit batang Callicarpa arborea Roxb dibandingkan dengan kulit batang tumbuhan sangkareho (Callicarpa longifolia), maka keduanya memiliki satu senyawa metabolit sekunder yang sama, yaitu steroid
33
Selain Callicarpa arborea Roxb, ada pula spesies lain yaitu Callicarpa dichotoma. Callicarpa dichotoma atau lebih dikenal dengan nama Bedi-bedi ini adalah tumbuhan yang memiliki ciri buah berwarna ungu dari ketiak daun baru, buah biasanya berada disepanjang dahan disetiap ketiak daun baru, dan tumbuh dengan tinggi 1 hingga 2 meter. Dalam penelitian Fransiscus Sihombing, dkk yang berjudul Potensi Tumbuhan Beracun Sebagai Bahan Biopestisida di Cagar Alam Dolok Saut dinyatakan bahwa pada hasil skrining fitokimia diketahui bahwa senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada daun Callicarpa dichotoma adalah senyawa alkaloid, flavonoid, dan saponin, di mana hasil uji menunjukkan tanda dua positif (++) atau cukup reaktif terhadap pereaksi. Berdasarkan penelitiannya tersebut, dinyatakan bahwa tumbuhan bedi-bedi termasuk tumbuhan beracun dan dapat digunakan sebagai bahan biopestisida. Hal yang dapat kita ketahui dari penelitian yang telah dilakukan dan berbagai literatur yang ada adalah bahwa tumbuhan genus Callicarpa banyak mengandung senyawa metabolit sekunder yang dapat berguna dalam kehidupan sehari-hari, seperti penggunaannya sebagai bahan obat tradisional yang sampai sekarang
masih
digunakan
oleh
masyarakat
untuk
mencegah
menyembuhkan berbagai penyakit bahkan sebagai bahan biopestisida.
34
ataupun
BAB 5 PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa pada daun Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) teridentifikasi senyawa metabolit sekunder steroid, flavonoid, dan fenolat serta pada bagian kulit batang dan akar teridentifikasi senyawa metabolit sekunder steroid dan fenolat.
5.2 Saran
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, disarankan untuk penelitian selanjutnya untuk menggunakan pelarut yang berbeda saat ekstraksi atau menggunakan cara ekstraksi yang berbeda selain maserasi. Selain itu, diharapkan pula untuk dilakukan penelitian lebih lanjut seperti uji antioksidan pada kulit batang dan akar Tumbuhan Sangkareho (Callicarpa longifolia) ini.
35
DAFTAR PUSTAKA
Amin, M. 2016. Kajian Metabolit Sekunder dari Kulit Batang Callicarpa Arborea Roxb dan Uji Bioaktifitas. Padang: Program Pascasarjana Fakultas MIPA Universitas Andalas. Andarwulan, Nuri dan Faradilla, RH Fitri. 2012. Senyawa Fenolat pada Beberapa Sayuran Indigenous dari Indonesia. Bogor: South East Asian Food and Agricultural Science and Technology (SEAFAST) Center, Institut Pertanian Bogor. Anonim. 2017. Callicarpa longifolia Lam., Encycl. 1 (1783). http:/www.asianplant.net/Lamiaceae/Callicarpa_longifolia.htm (Diakses pada tanggal 13 Desember 2017 pukul 19.29 WIB. Aziz, Tamzil, dkk. 2009. Pengaruh Pelarut Heksana Dan Etanol, Volume Pelarut, dan Waktu Ekstraksi terhadap Hasil Ekstraksi Minyak Kopi. Sumatra Selatan: Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas Sriwijaya. Jurnal Teknik Kimia, No. 1, Vol. 2 16, Januari 2009. Condrad, Denada Anggelia. 2017. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan DPPH pada Ekstrak Etanol Daun Taya (Nauclea orientalis). Palangka Raya: Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UPR. Erwin, dkk. 2015. Phytochemical Test, Tokxicity and Antioxidant Activity Leaves Kerehau (Callicarpa longifolia Lam.) With DPPH Method . Samarinda: Jurusan Kimia FMIPA Universitas Mulawarman. Falah, Faiqotul, dkk. 2013. Keanekaragaman Jenis dan Pemanfaatan Tumbuhan Berkhasiat Obat oleh Masyarakat Sekitar Hutan Lindung Gunung Beratus, Kalimantan
Timur .
Kalimantan
Timur:
Balai
Penelitian
Teknologi
Konservasi Sumberdaya Alam. Jurnal Penelitian Hutan dan Konservasi Alam Vol. 10 No. 1, April 2013: 1-18.
Fessenden. 1999. Kimia Organik . Jakarta: Erlangga.
Harborne, J. B, 1987. Metode Fitokimia Pennuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB: Bandung.
36
Hariana, A.H. 2004. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya . Penebar Swadaya: Jakarta dalam Takoy, D.M, dkk. 2013. Tumbuhan Berkhasiat Obat Suku Dayak Seberuang di Kawasan Hutan Desa Ensabang Kecamatan Sepauk Kabupaten Sintang . Universitas Tanjungpura. Pontianak. Jurnal Protobiont vol. 2 (3), hal 122-128.
Harley, RM.; Atkins, S.; Budantsev, AL.; Cantino, P.D.; Conn, BJ.; Grayer, R.; Harley, MM.; de Kok, R.; Krestovskaja, T.; Morales, R.; Paton, AJ.; Ryding, O.; Upson, T. Labiatae. In: Kadereit, JW.,editor. 2004. Flowering Plants,
Dicotyledons:
Lamiales,
except
Acanthaceae,
including
Avicenniaceae,The Families and Genera of Vascular Plants. New York: Springer, Halaman 478.
Ibrahim. 2016. Inventarisasi Tumbuhan Obat Tradisional Suku Dayak Bakumpai di Kecamatan Murung Kabupaten Murung Raya. Palangka Raya: Institut Agama Islam Negeri Palangka Raya.
Jones, P.W and Kinghorn, A.D. 2009. Biologically Active Natural Products Of The Genus Callicarpa, Curr Bioact Compd , 4(1): 15 – 32.
Karmilasanti dan Supartini. 2011. Keanekaragaman Jenis Tumbuhan Obat dan Pemanfaatannya di Kawasan Tane' Olen Desa Setulang Malinau, Kalimantan Timur . Samarinda: Balai Besar Penelitian Dipterokarpa. Jurnal Penelitian Dipterokarpa Vol.5 No.1, Juni 2011.
Kristanti, A.N. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya: Airlangga University Press.
Markham. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid . Bandung: ITB Press.
Munir, Ahmad Abid. 1982. A Taxonomic Revision of The Genus Callicarpa L. (Verbenaceae)* in Australia. Australia Selatan: Australia.
37
Naoumkina, M., Modolo, L.V., Huhman, D.V.,Urbanczyk-Wochniak, E., Tang, Y. 2010. Genomic and Coexpression Analyses Predict Multiple Gene Involved Triterpene Saponin Biosynthesis in Medicago truncatula (C)(W) Plant Cell , 22:3: 850-66 dalam Bogoriani, Ni Wayan. 2015. Disertasi Saponin Daun Andong (Cordyline terminalis Kunth) Menurunkan Kolesterol Plasma dengan Meningkatkan Ekskresi Kolesterol dan Asam Empedu Feses pada Tikus Wistar serta Membentuk Kompleks dengan Kolesterol secara In Vitro. Denpasar: Program Pascasarjana Universitas Udayana.
Nova, Clementia. 2016. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Sirih Lengkung (Piper aduncum L.). Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Oswald, T. T. 1995. Tumbuhan Obat Bagi Pecinta Alam Catakan II. Jakarta: Penerbit Bhratara Niaga Media.
Prashant, dkk. 2011. Phytochemical Screening and Extraction. Internationale Pharmaceutica Sciencia. 1(1): 1-9.
Raharjo, TJ. 2013. Kimia Hasil Alam. Jogjakarta: Pustaka Pelajar.
Robinson, T. 1991. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi Edisi ke-6 a.b Kosasih Padmawinata. Bandung: Penerbit ITB.
Sari, Lensiana. 2015. Mengidentifikasi Senyawa Metabolit Sekunder pada Batang dan Akar Pcaing Tawar (Chellocostus specuosus) dengan Menggunakan Pelarut Kloroform dan Etanol. Palangka Raya: Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UPR.
Setyowati, F.M. 2010. Artikel Etnofarmakologi dan Pemakaian Tanaman Obat Suku Dayak Tunjung di Kalimantan Timur . Media Litbang Kesehatan Volume XX Nomor 3.
38
Setyowati, Widiastuti Agustina Eko, dkk. 2014. Skrining Fitokimia dan Identifikasi Komponen Utama Ekstrak Metanol Kulit Durian (Durio zibethinus Murr.) Varietas Petruk . Surakarta: Prodi Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Sebelas Maret.
Siadi. K. 2012. Ekstrak Bungkil Biji Jarak Pagar (Jatropa curcas) Sebagai Biopestisida yang Efektif dengan Penambahan Larutan NaCl . Jurnal Mipa 35(2): 77-83.
Sidauruk, Yuliana Marito. 2017. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan DPPH pada Ekstrak Metanol Daun Taya (Nauclea orientalis). Palangka Raya: Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UPR.
Sihombing, Fanciscus, dkk. 2015. Potensi Tumbuhan Beracun sebagai Bahan Biopestisida di Cagar Alam Dolok Saut. Medan: Program Studi Kehutanan, Fakultas Kehutanan, Universitas Sumatera Utara.
Supomo, dkk. 2016. Karakterisasi dan Skrining Fitokimia Daun Kerehau (Callicarpa Longifolia Lamk.). Samarinda: Bidang Farmakognosi Akademi Farmasi Samarinda.
39
