LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM MIKOLOGI PEMBUATAN MEDIA PDA (POTATO DEXTROSE AGAR)
Oleh : Jurusan Analis Kesehatan Semester V Disampaikan kepada : Dosen Pengampu Mata Kuliah Praktikum Mikologi
KEMENTERIAN KESEHATAN RI POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR DIII JURUSAN ANALIS KESEHATAN 2014
BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang
Di alam terdapat banyak cendawan dimana cendawan tersebut memiliki kemampuan untuk berkembang dan memperbanyak diri. Selain di alam, cendawan juga dapat kita kembangbiakkan dengan menggunakan media buatan agar tetap hidup sebagai koloni tunggal. Cendawan yang berperan sebagai koloni tunggal tersebut dapat dimanfaatkan secara lebih dibandingkan cendawan yang terdapat di alam. Cendawan (jamur) termasuk dalam phylum tallophyta. Sebagian besar hidup sebagai saprophytis dan sebagian kecil sebagai parasit pada tumbuhan, hewan,dan manusia. Fungi mempunyai dinding sel dan inti yang jelas. Dapat berupa sel tunggal misalnya ragi atau terdiri atas banyak sel. Ada yang terdiri atas banyak sel, bentuknya memanjang berupa filament yang disebut hype. Hype ini ada yang berseptum ada yang tidak. Bila hype ini terus tumbuh dan bercabang-cabang, terbentuklah tumbuhan yang disebut miselium. Miselium yang menonjol dari permukaan substrat disebut miselium aerial, miselium yang menembus kedalam substrat dan yang mengabsorpsi zat makanan disebut miselium vegetatif. Sebelum melakukan pengamatan terhadap jamur di laboratorium, telebih dahulu kita harus menumbuhkan atau membiakan jamur tersebut. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami atau dengan bantuan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui substrat yang disebut media. Untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrisi yang diisyaratkan oleh jamur dan juga macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada suatu substrat yang disebut medium. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroorganisme tersebut harus sesuai susunanya dengan kebutuhan jenis-jenis mikroorganisme yang bersangkutan. Beberapa mikroorganisme dapat hidup baik pada medium yang sangat sederhana yang hanya mengandung garam anargonik di tambah sumber karbon organik seperti gula. Sedangkan mikroorganime lainnya memerlukan suatu medium yang sangat kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah atau antibiotik. Setiap media memiliki fungsi yang spesifik untuk menumbuhkan jenis mikroba tertentu saja, tidak semua mikroba dapat ditumbuhkan dalam suatu media, karena ada pula kandungan zat penghambat dalam media, sehingga perlu disesuaikan dengan kebutuhan pemeriksaan yang akan dilakukan. Pengembangbiakan cendawan dilakukan dengan menanamkannya pada suatu media tertentu. Media tersebut dapat berupa media alami, semi alami (semi sintetik) maupun sintetik tergantung karakteristik cendawannya. Secara umum, cendawan dapat tumbuh dan berkembang pada suatu media yang memiliki kandungan nutrisi cukup sesuai kebutuhannya
dengan kisaran pH antara 5-6. Setiap media yang telah dibuat tidak selalu dapat menumbuhkan cendawan meskipun media tersebut mengandung nutrisi yang cukup dan memiliki pH antara 5-6 karena tiap cendawan membutuhkan nutrisi yang berbeda-beda. Selain itu, ada juga cendawan yang tidak dapat tumbuh dalam media buatan. Potato dextrose agar merupakan salah satu media yang baik di gunakan untuk membiakkan suatu mikroorganisme cendawan/fungi. Potato dextrose agar merupakan paduan yang sesuai untuk menumbuhkan biakan terutama fungi. (Winda, 2009) Berdasarkan hal-hal tersebut di atas maka praktikum yang berjudul “Pembuatan Media PDA (Potato Dextrose Agar) ini sangat diperlukan untuk meningkatkan keterampilan mahasiswa dalam pembuatan media yang akan digunakan sebagai media dasar dalam pemeriksaan-pemeriksaan mikologi selanjutnya. 1.2 Rumusan Masalah 1.2.1 Bagaimanakah prosedur pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA)? 1.2.2 Apa sajakah fungsi dan karakteristik dari media Potato Dextrose Agar (PDA)? 1.2.3 Apa sajakah hal-hal kritis yang perlu diperhatikan dalam pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA)? 1.3 Tujuan Penulisan 1.3.1 Untuk mengetahui prosedur pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA). 1.3.2 Untuk mengetahui fungsi dan karakteristik dari media Potato Dextrose Agar 1.3.3
(PDA). Untuk mengetahui hal-hal kritis yang perlu diperhatikan dalam pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA).
1.4 Manfaat Penulisan 1.4.1 Manfaat Teoritis Hasil penulisan laporan ini diharapkan dapat menambah wawasan dan pengetahuan penulis serta pembaca dalam bidang mikologi. 1.4.2 Manfaat Praktis a. Mahasiswa mengetahui teknik pembuatan media dan reagensia yag diperlukan b.
dalam pemeriksaan sampel secara bakteriologis. Mahasiswa dapat membuat media dan reagensia yang digunakan dalam pemeriksaan bakteriologis.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tinjauan Tentang Mikologi dan Jamur a. Mikologi Mikologi berasal dari bahasa Yunani myces yang berarti jamur dan logos yang berarti ilmu. Menurut Alexopulus istilah mikologi kurang tepat. Istilah yang tepat adalah mycetology, karena myces berdasarkan tata bahasa Yunani adalah myceto. Pada tahun 1729, seorang ahli botani Italia bernama Pier Antonio Micheli menerbitkan hasil penelitian
mengenai fungi dalam NOVA PLANTARUM GENERA dan dia dianggap orang pertama yang meletakkan sains Mikologi (Alexopolus et al.,1996). Mikologi merupakan cabang ilmu pengetahuan yang mempelajari tentang jamur (fungi) - banyak orang juga menyebut cendawan. Kajian dalam mikologi antara lain meliputi taksonomi jamur, fisiologi jamur, bioteknologi jamur, dan budidaya jamur (mushroom culture). Seiring perkembangan zaman Mikologi terbagi menjadi beberapa cabang misalnya: Mikologi pangan, mikologi industri, mikologi pertanian, mikologi kesehatan b. Jamur Jamur merupakan organisme uniseluler atau multiseluler, dengan dinding sel mengandung kitin, eukariotik, tidak berklorofil. Jamur multiseluler tersusun atas rangkaian sel-sel yang membentuk benang dengan atau tanpa sekat melintang, disebut hifa. Hifa dapat berfungsi sebagai : penyerap makanan yang dilakukan oleh miselium (Kumpulan Hifa ). Dengan alat reproduksi, misalnya sporangium dan konidium Reproduksi jamur uniseluler secara : aseksual membentuk tunas, atau membentuk spora. Sedangkan seksual dengan membentuk spora askus / askuspora. Reproduksi jamur multiseluler secara aseksual dengan cara fragmentasi menghasilkan spora aseksual. Sedangkan reproduksi seksual dengan peleburan inti jantan dan betina, akhirnya membentuk spora askus atau spora basidium.Beberapa jenis Jamur hidup secara heterotrof dengan jalan menguraikan sampah organic ( saprofit ), ada juga yang “mengambil” senyawa organic dari tubuh mahkluk hidup lainnya (parasit ), ataupun hidup bersama dengan organisme lain (simbiosis). Dalam klasifikasi, kingdom Fungi dikelompokkan menjadi beberapa divisi yaitu : Zygomycota, Ascomycota, Basidiomycota dan Deuteromycota berdasarkan struktur tubuh dan cara reproduksinya. Jamur memiliki Ciri Khas yaitu merupakan organisme berbentuk talus, memiliki inti sejati (eukaryote), memiliki dinding kaku berasal dari kitin atau selulosa, tidak memiliki zat hijau daun dan bersifat kosmopolit. Ada tiga jenis jamur yang dikenal dalam bidang kesehatan yaitu Jamur Patogen (menimbulkan penyakit pada manusia), jamur Saproba (tidak menimbulkan penyakit pada manusi) dan jamur Opportunis. Jamur opportunis berada antara jamur pathogen dan jamur saproba. Jamur opportunis dapat menimbulkan penyakit walaupun dia tergolong pada jamur saproba. Jamur opportunis akan menimbulkan penyakit apa bila ada factor pendukung.
Jamur ada yang uniseluler (disebut khamir, ragi atau yeast) terpisah satu-satu atau memanjang/ berangkaian menyerupai benang "pseudohypae" dan ada yang multiseluler yang membentuk benang(filament) dinamai kapang. Koloni kapang mudah dibedakan dengan koloni khamir dan bakteri. Karena kapang umumnya tumbuh berupa benang-benang halus sementara khamir atau bakteri tampak berupa bulatan kental dengan permukaan licin, gelap atau kasar. Untuk membedakan koloni bakteri atau khamir perlu dilakukan pengamatan dengan mikroskop. Sifat –sifat Jamur dapat dibedakan berdasarkan ciri-ciri koloni yang tumbuh pada media dan ciri-ciri lainnya misalnya.
Koloni ragi Ciri-ciri : basah, kental, tidak memiliki miselium,berkembang biak secara seksual (Askosfora) dan aseksual (blastosfora). Contoh: Saccharomyces sp, Blastomyces dermatis
Koloni menyerupai ragi Ciri-ciri : basah, kental, memiliki peseudomiselium, tidak memiliki askospora, berkembang biak secara aseksual dengan tunas dan blatosfora. Contoh : Candida albicans
Koloni berfilamen Ciri-ciri: Makroskopis tampak berbentuk seperti beludru, wool, kapas, dan katun. Sementara secara mikroskopis penuh miselium berwarna Contoh: Aspergillus sp
Sifat Hifa/Miselium Warna:
Putih
kuning
sampai
jingga
(penicillium)
;
hijau,
biru,
sampai
hitam( aspergillus); putih, abu- abu, sampai coklat (Sporothicum asbencty)
Septasi Hifa bersepta (memiliki sekat). Contoh : Aspergillus Hifa tidak bersepta atau di sebut juga "seonitic hifa" (tidak bersekat). Contoh: Rhizopus sp
Percabangan Membentuk sudut tajam (Aspergillus), dan membentuk sudut tegak lurus (Psycomycetes)
Sifat spora Jenis : seksual dan aseksual Bentuk : bulat, lonjong, bulan sabit,
Warna : -Putih sampai kuning : Penicillium - Hijau sampai biru : Aspergillus - Coklat sampai hitam :homodendrum Ukuran : - Kecil (mikroskopis) :uniseluler - Besar (makroskopis) : kadang-kadang berseptum 2.2 Tinjauan Umum tentang Media Sebelum melakukan pengamatan terhadap jamur di laboratorium, telebih dahulu kita harus menumbuhkan atau membiakan jamur tersebut. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami atau dengan bantuan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui substrat yang disebut media. Medium pertumbuhan (disingkat medium) adalah tempat untuk menumbuhkan mikroba. Mikroba memerlukan nutrisi untuk memenuhi kebutuhan energi dan untuk bahan pembangun sel, untuk sintesa protoplasma dan bagian-bagian sel lain. Setiap mikroba mempunyai sifat fisiologi tertentu, sehingga memerlukan nutrisi tertentu pula. Setiap unsur nutrisi mempunyai peran tersendiri dalam fisiologi sel. Unsur tersebut diberikan ke dalam medium sebagai kation garam anorganik yang jumlahnya berbeda-beda tergantung pada keperluannya. Beberapa golongan mikroba misalnya diatomae dan alga tertentu memerlukan silika (Si) yang biasanya diberikan dalam bentuk silikat untuk menyusun dinding sel. Fungsi dan kebutuhan natrium (Na) untuk beberapa jasad belum diketahui jumlahnya. Natrium dalam kadar yang agak tinggi diperlukan oleh bakteri tertentu yang hidup di laut, algae hijau biru, dan bakteri fotosintetik. Natrium tersebut tidak dapat digantikan oleh kation monovalen yang lain (Sumarsih, 2003). Jasad hidup dapat menggunakan makanannya dalam bentuk padat maupun cair (larutan). Jasad yang dapat menggunakan makanan dalam bentuk padat tergolong tipe holozoik, sedangkan yang menggunakan makanan dalam bentuk cair tergolong tipe holofitik. Jasad holofitik dapat pula menggunakan makanan dalam bentuk padat, tetapi makanan tersebut harus dicernakan lebih dulu di luar sel dengan pertolongan enzim ekstra seluler. Pencernaan di luar sel ini dikenal sebagai extracorporeal digestion. Pertumbuhan mikroba sangat dipengaruhi oleh faktor media tumbuh dan nutrisi untuk pertumbuhannya. Media tumbuh yang baik dan sesuai dengan sifat dan fisiologis dari mikroba tersebut akan menghasilkan biakan mikroba yang baik. Begitu pula dengan nutrisi untuk perkembangan mikroba tersebut, apabila diberikan nutrisi yang cukup dan memadai
maka pertumbuhan dan perkembangan mikroba akan baik juga. Agar mikroba dapat tumbuh dengan baik dalam suatu medium, maka harus dipenuhi syarat–syarat antara lain: 1. Medium harus megandung semua nurtisi yang mudah digunakan oleh mikroba. 2. Medium harus mempunyai tekanan osmose , tegangan permukaan, dan pH yang sesuai. 3. Medium tidak mengandung zat – zat penghambat. 4. Medium harus steril. (Singleton dan Sainsbury, 2006) Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya.
Bahan-bahan media pertumbuhan
1. Bahan dasar
air (H2O) sebagai pelarut agar (dari rumput laut) yang berfungsi untuk pemadat media. Agar sulit didegradasi
oleh mikroorganisme pada umumnya dan mencair pada suhu 450C. Gelatin juga memiliki fungsi yang sama seperti agar. Gelatin adalah polimer asam amino yang diproduksi dari kolagen. Kekurangannnya adalah lebih banyak jenis
mikroba yang mampu menguraikannya dibanding agar. Silica gel, yaitu bahan yang mengandung natrium silikat. Fungsinya juga sebagai pemadat media. Silica gel khusus digunakan untuk memadatkan media bagi mikroorganisme autotrof obligat.
2. Nutrisi atau zat makanan Media harus mengandung unsur-unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel yaitu berupa unsur makro seperti C, H, O, N, P; unsur mikro seperti Fe, Mg dan unsur pelikan/trace element. Sumber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senyawa organik atau anorganik sesuai dengan sifat mikrobanya. Jasad heterotrof memerlukan sumber karbon organik antara lain dari karbohidrat, lemak, protein dan asam organik. Sumber nitrogen mencakup asam amino, protein atau senyawa bernitrogen lain. Sejumlah mikroba dapat menggunakan sumber N anorganik seperti urea. Vitamin-vitamin.
3. Bahan tambahan Bahan-bahan tambahan yaitu bahan yang ditambahkan ke medium dengan tujuan tertentu, misalnya phenol red (indikator asam basa) ditambahkan untuk indikator perubahan pH akibat produksi asam organik hasil metabolisme. Antibiotik ditambahkan untuk menghambat pertumbuhan mikroba nontarget/kontaminan. 4. Bahan yang sering digunakan dalam pembuatan media Agar, agar dapat diperoleh dalam bentuk batangan, granula atau bubuk dan terbuat dari beberapa jenis rumput laut. Kegunaannya adalah sebagai pemadat (gelling) yang pertama kali digunakan oleh Fraw & Walther Hesse untuk membuat media. Jika dicampur dengan air dingin, agar tidak akan larut. Untuk melarutkannya harus diasuk dan dipanasi, pencairan dan pemadatan berkali-kali atau sterilisasi yang terlalu lama dapat menurunkan kekuatan agar, terutama pada pH yang asam. Peptone, peptone adalah produk hidrolisis protein hewani atau nabati seperti otot, liver, darah, susu, casein, lactalbumin, gelatin dan kedelai. Komposisinya tergantung pada bahan asalnya dan bagaimana cara memperolehnya. Meat extract. Meat extract mengandung basa organik terbuat dari otak, limpa, plasenta dan daging sapi. Yeast extract. Yeast extract terbuat dari ragi pengembang roti atau pembuat alkohol. Yeast extract mengandung asam amino yang lengkap & vitamin (B complex). Karbohidrat. Karbohidrat ditambahkan untuk memperkaya pembentukan asam amino dan gas dari karbohidrat. Jenis karbohidrat yang umumnya digunkan dalam amilum, glukosa, fruktosa, galaktosa, sukrosa, manitol, dll. Konsentrasi yang ditambahkan untuk analisis fermentasi adalah 0,5-1%.
Macam-Macam Media Pertumbuhan
1. Medium berdasarkan sifat fisik Medium padat yaitu media yang mengandung agar 15% sehingga setelah dingin media menjadi padat. Medium setengah padat yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4%sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semisolid dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami percampuran sempurna jika tergoyang. Misalnya bakteri yang tumbuh pada media NfB (Nitrogen freeBromthymol Blue) semisolid akan membentuk cincin
hijau kebiruan dibawah permukaan media, jika media ini cair maka cincin ini dapat dengan mudah hancur. Semisolid juga bertujuan untuk mencegah/menekan difusi oksigen, misalnya pada media Nitrate Broth, kondisi anaerob atau sedikit oksigen meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini juga diharuskan tumbuh merata diseluruh media. Medium cair yaitu media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah NB (Nutrient Broth), LB (Lactose Broth). 2. Medium berdasarkan komposisi Medium sintesis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan takarannya secara pasti, misalnya Glucose Agar, Mac Conkey Agar. Medium semi sintesis yaitu media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti, misanya PDA (Potato Dextrose Agar) yang mengandung agar, dekstrosa dan ekstrak kentang. Untuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara detail tentang komposisi senyawa penyusunnya. Medium non sintesis yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic Extract. 3. Medium berdasarkan tujuan Media untuk isolasi Media ini mengandung semua senyawa esensial untuk pertumbuhan mikroba, misalnya Nutrient Broth, Blood Agar. Media selektif/penghambat Media yang selain mengandung nutrisi juga ditambah suatu zat tertentu sehingga media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Contohnya adalah Luria Bertani medium yang ditambah Amphisilin untuk merangsang E.coli resisten antibotik dan menghambat kontaminan yang peka, Ampiciline. Salt broth yang ditambah NaCl 4% untuk membunuh Streptococcus agalactiae yang toleran terhadap garam. Media diperkaya (enrichment) Media diperkaya adalah media yang mengandung komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks seperti darah, serum, kuning telur. Media diperkaya juga bersifat selektif untuk mikroba tertentu. Bakteri yang ditumbuhkan dalam media ini tidak hanya membutuhkan nutrisi sederhana untuk
berkembang biak, tetapi membutuhkan komponen kompleks, misalnya Blood Tellurite Agar, Bile Agar, Serum Agar, dll. Media untuk peremajaan kultur Media umum atau spesifik yang digunakan untuk peremajaan kultur. Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesifik. Media ini digunakan unutk mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu mikroba. Contohnya adalah Koser’s Citrate medium, yang digunakan untuk menguji kemampuan menggunakan asam sitrat sebagai sumber karbon. Media untuk karakterisasi bakteri Media yang digunakan untuk mengetahui kemempuan spesifik suatu mikroba. Kadang-kadang indikator ditambahkan untuk menunjukkan adanya perubahan kimia. Contohnya adalah Nitrate Broth, Lactose Broth, Arginine Agar. Media diferensial Media ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroba dari campurannya berdasar karakter spesifik yang ditunjukkan pada media diferensial, misalnya TSIA (Triple Sugar Iron Agar) yang mampu memilih Enterobacteria berdasarkan bentuk, warna, ukuran koloni dan perubahan warna media di sekeliling koloni. 2.3 Media Potato Detrose Agar (PDA) Potato dextrose agar merupakan salah satu media yang baik digunakan untuk membiakkan suatu mikroorganisme, baik itu berupa cendawan/fungsi, bakteri, maupun sel mahluk hidup. Media PDA merupakan jenis media biakan dan memiliki bentuk/ konsistensi padat (solid). Potato dextrose agar merupakan paduan yang sesuai untuk menumbuhkan biakan (Winda, 2009). Media potato dextrose agar (PDA) berfungsi sebagai media kapang (jamur) dan khamir. Selain itu PDA digunakan untuk enumerasi yeast dan kapang dalam suatu sampel atau produk makanan. PDA mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri. Komposisinya PDA berupa kentang (4 g/L (berasal dari 200 gr kentang)), dektrose (15 g/L) dan aquades 1L. Secara lebih rinci karakteristik media PDA terdiri dari : a. Komposisi Media PDA (Potato Dextrose Agar) -
Potato extract
: 40,0 gram
-
Dextrose
: 20,0 gram
-
Agar
: 15,0 gram Gambar 1. Bubuk Media PDA
b. Fungsi dari Komposisi Media PDA (Potato Dextrose Agar) -
Potato extract Potato extract atau ekstrak kentang merupakan sumber karbohidrat atau makanan bagi biakan pada media PDA (Potato Dextrose Agar).
-
Dextrose Dextrose atau gugusan gula baik itu monosakarida maupun polisakarida merupakan penambah nutrisi bagi biakan pada media PDA (Potato Dextrose Agar).
-
Agar Agar merupakan bahan media/tempat tumbuh bagi biakan yang baik, karena mengandung cukup air.
c. Fungsi Media PDA (Potato Dextrose Agar) di Mikrobiologi Dalam mikrobiologi media PDA (Potato Dextrose Agar) digunakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan kapang. Dapat juga digunakan untuk enumerasi yeast dan kapang dalam suatu sampel atau produk makanan. PDA mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri. 2.4 Antibiotik Antibiotik berasal dari bahasa latin yang terdiri dari anti = lawan, bios = hidup. Adalah zat-zat yang dihasilkan oleh mikroba terutama fungi dan bakteri tanah, yang dapat menghambat
pertumbuhan
atau
membasmi
mikroba
jenis
lain,
sedangkan
toksisitasnya(racun) terhadap manusia relatif kecil. Antibiotik pertama kali ditemukan oleh sarjana Inggris Dr.Alexander Flemming yaitu antibiotik Penisilin pada tahun 1982 di London. Tetapi penemuan ini baru dikembangkan dan digunakan dalam terapi pada tahun 1941 oleh Dr. Florey. Kemudian banyak zat dengan khasiat antibiotik diisolir oleh penyelidik-penyelidik lain diseluruh dunia, namun toksisitasnya hanya beberapa saja yang dapat digunakan sebagai obat. Antibiotik juga dapat dibuat secara sintetis, atau semi sintetis.
Aktivitas antibiotik umumnya dinyatakan dalam satuan berat (mg) kecuali yang belum sempurna pemurniannya dan terdiri dari campuran beberapa macam zat, atau karena belum diketahui struktur kimianya, aktivitasnya dinyatakan dalam satuan internasional = Internasional Unit (IU). Mekanisme kerja Antibiotik adalah sebagai berikut. 1. Menghambat sintesa dinding sel. 2. Menghambat sintesa membrane sel. 3. Mengahmbat sintesa protein sel. 4. Menghambat pembentukan asam-asam inti (DNA dan RNA). Antibiotik dapat digolongkan berdasarkan aktivitasnya, seperti : 1. Zat-zat dengan aktivitas sempit (narrow spektrum) Zat aktif yang berkhasiat hanya pada satu jenis atau beberapa jenis bakteri saja (bakteri gram positif saja atau bakteri gram negative saja). 2. Zat-zat dengan aktrivitas luas (broad spektrum) Zat aktif yang berkhasiat untuk semua jenis bakteri, mau yang gram negative ataupun gram positif. Penggolongan antibiotik secara umum meliputi: 1. Golongan Penisilin
6. Golongan Makrolida
2. Golongan Sefalosporin
7. Golongan Rifampicin & Asam Ausidat
3. Golongan Aminoglikosida
8. Golongan Lain-lain
4. Golongan Kloramfenikol
9. Golongan Polipeptida
5. Golongan Tetrasiklin BAB III METODE PRATIKUM 3.1 Waktu dan Tempat 3.1.1 Waktu Pratikum dilaksankan pada Rabu, 17 September 2014 3.1.2 Tempat Pelaksanaan praktikum mikologi ini, dilaksanakan di Laboratorium Virologi Jurusan Analis Kesehatan Politekik Kesehatan Denpasar. 3.2 Metode Praktikum
Metode yang digunakan adalah pembuatan media secara langsung berdasarkan prinsip penimbangan, pelarutan dan sterilisasi. 3.3 Alat Bahan & Reagen a. Alat-alat 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
Timbangan analitik Gelas Arloji Kertas timbang Beaker glass Pengaduk Gelas ukur Erlenmeyer Pemanas listrik Penyangga kaki tiga
10. Penahan 11. Pipet Pasteur 12. Petridisk steril 13. Auotoclave 14. Api spiritus 15. Incubator 16. Pipet ukur 17. Mortar dan pastle
b. Bahan 1. Media PDA (Potato Dextrose Agar) (Oxoid-CM0139) 2. Antibiotik Chlorampenicol 500 mg 3. Aquadest 4. Kertas pH/pH meter 5. NaOH 0,01 N 6. HCl 0,01 N 7. Kapas berlemak 8. Tissue 9. Aluminium foil 10. Benang pulung 3.4 Cara Kerja 1. Semua Alat Pelindung Diri digunakan dengan baik, benar, dan lengkap. 2. Disiapkan semua alat-alat dan bahan-bahan yang akan digunakan 3. Dipastikan semua alat dan bahan dalam keadaan siap digunakan. 4. Ditimbang serbuk media PDA (Potato Dextrose Agar) sebanyak 7,8 gram. 5. Dipindahkan serbuk media PDA (Potato Dextrose Agar) ke beaker glass, lalu ditambahkan aquadest dengan volume 200 ml, dipindahkan ke Erlenmeyer. 6. Dihomegenkan larutan dengan bantuan pemanasan dan pengadukan. 7. Pelarutan tidak boleh dilakukan sampai mendidih(pelarutan harus sempurna sehingga tidak ada kristal yang bersisa. 8. Dicek pH larutan sesuai petunjuk media (pH = 5,6 ± 0,2) pada suhu 25oC 9. Diperhatikan pengecekan suhu larutan saat pengecekan pH media. 10. Ditambah NaOH 0,01 N jika pH larutan kurang basa dan ditambahkan HCl 0,01 N ika pH larutan kurang asam. 11. Disterilisasi ±121oC (1 atm); ± 15 menit 12. Dikeluarkan larutan dari autoclave, saat suhu rendah (20oC) dan tekanan telah turun (dilihat indikator autoclave). 13. Dibiarkan larutan hingga suhu
±50oC
lalu
ditambahkan
antibiotik
chlorampenicol 500mg (sebelumnya antibiotik chlorampenicol 500mg telah dilarutkan dengan 10 mL aquadest, dan tiap 100 mL PDA = 1 mL suspensi chlorampenicol). 14. Dihomogenkan larutan yang telah ditambahkan antibiotik chlorampenicol (dapat dibantu pemanasan, suhu ≤70oC). 15. Dituang ke petridisk steril yang telah disediakan. 16. Dibiarkan media pada petridisk membeku dengan sempurna. 17. Dimasukkan media ke incubator (±37oC), ±24 jam untuk uji kualitas media, dengan posisi petridisk steril terbalik. 18. Disimpan pada suhu 4oC – 8oC untuk menyimpan media.
Perhitungan Penimbangan Bubuk Media 1. Penimbangan Media PDA Diketahui : V1 = 1000 mL; V2 = 200 mL W1 = 39 gram Ditanya : W2 = …..? Jawab :
1000 mL 200 mL = 39 gram W2
W 2=
M2
7800 mLgram 1000 mL = 7,8 gram
Jadi, bubuk media PDA yang ditimbang adalah 7,8 gram
2. Volume antibiotik yang ditambahkan pada 200 mL larutan media Ketentuan : 100mL PDA = 1 mL antibiotic 100 mL 200 mL = 1 mL Vantibiotik 2
200 mL .1mL 100mL
Vantibiotik 2=
Vantibiotik 2=2 mL
Jadi , volume antibiotik yang ditambahkan pada media yaitu 2 mL
BAB IV
HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
4.1 HASIL PENGAMATAN a. Gambar Hasil Pengamatan
KETERANGAN Serbuk media PDA yang telah
GAMBAR
ditimbang sebanyak 7,8 gram ditambahkan aquadest sebanyak 200 ml untuk melarutkan bubuk media. Kemudian dihomogenkan.
Media PDA dipanaskan dengan kompor listrik untuk melarutkan serbuk-serbuk media. Pemanasan tidak boleh sampai mendidih.
Media PDA ditambahkan antibiotik chlorampenicol sebanyak 2 ml (perbandingan
media: antibiotic= 100 ml: 1 ml). Setelah sebelumnya media disterilisasi dengan autoclave pada suhu ± 121 ° C (1 atm) ± 15 menit.
Media yang telah disterilisasi dan ditambah antibiotic . Dituang ke dalam petridisk, kemudian dibiarkan membeku. Disimpan
pada suhu 4-8 ° C untuk menyimpan media. Media disimpan dalam posisi terbalik.
4.2 PEMBAHASAN
a. Pembuatan Media Potato Detrose Agar (PDA)
Dari pratikum yang telah dilaksanakan telah pada hari Rabu, 17
September 2014, dibuat media Potato Detrose Agar (PDA). Pembuatan media PDA pada praktikum ini menggunakan bubuk media sintetis merk OXOID dengan prinsip pembuatan melalui melalui tahapan penimbangan, pelarutan dan terakhir sterilisasi.
Dalam praktikum ini dilakukan pembuatan media PDA (Potato Dextrose
Agar). Media PDA berfungsi untuk membiakan dan menumbuhkan jamur. Dalam pembuatan media PDA ada beberapa tahap antara lain sebagai berikut.
Penimbangan, penimbangan bubuk media harus tepat agar konsentrasi
media yang terlarut dalam aquadest dalam jumlah yang tepat dan media dapat memadat dengan baik. Dimana pada praktikum kali ini bubuk media digunakan bubuk media PDA merk OXOID dan ditimbang sebanyak 7,8 g.
Pelarutan, media yang telah tadi dilarutkan dengan 200 ml auadest yang
ditakar secara tepat menggunakan gelas ukur. Media dilarutkan dengan bantuan pemanasan dan pengadukan, pemanasan diperluka supaya agar yang terkandung pada media dapat mengembang dan pada akhirnya nanti dapat memadat, pemanasan tidak boleh sampai mendidih agar nutrisi-nutrisi media tidak pecah dan rusak. Pemanasan yang sempurna di tandai dengan terlarunya semua serbuk dan tidak ada sisa kristal. Adapun perubahan warna ang terlihat saat pemanasan adalah dari warna kuning keruh berubah menjadi kuning bening. PH larutan di ukur, pH yang sesuai dengan rekomendasi yang tertera pada etiket yang diberikan oleh pabrikan untuk media PDA adalah 5,6 ± 0,2 pada suhu 25ºC. Jika pH kurang asam maka ditambahkan larutan asam yaitu HCL 0,01 N dan jika media kurang basa maka di tambahkan larutan basa NaOH
0,01 N. dalam praktikum kali ini tidak terjadi penyimpangan pH pada media yang dibuat sehingga penambahan larutan asam maupun basa tidak dilakukan.
Erlenmeyer kemudian di tutup dengan kapas berlemak agar saat
sterilisasi berlangsung media tidak menguap keluar dan untuk mengindari kontaminasi dari luar. Media disterilisasi dengan autoklaf selama 15 menit dengan susu 121ºC. setelah sterilisasi media di tambahkan dengan antibiotic chlorampenicol dengan perbandingan 100 ml PDA = 1 ml suspensi antibiotik dan penambahan ini di lakukan saat suhu media kira-kira 50ºC, agar fungsi antibiotik tidak terhambat. Karena dibuat media PDA dengan volume 200 ml maka antibiotik yang diperlukan adalah 2 ml. Fungsi dari penambaha antibiotik adalah untuk menghambat pertumbuhan bakteri agar jamur dapat tumbuh dengan baik, karena tujuan dari pembuatan media PDA ini sendiri adalah untuk menumbuhkan jamur, sehingga kemungkinan ikut tumbuhnya bakteri pada media diminimalisir dengan penambahan antibiotik ini. Media kemudian di tuang pada petridisk dengan volume 15- 25 ml dengan ketebalan media pada petridisk kira-kira 0.5 cm. Ditunggu media agar mengeras atau memadat sempurna dan terakhir simpan media pada suhu 4ºC-8ºC pada posisi petridisk terbalik untuk menghindari tetesan-tetesan embun dari uap air ke media yang dapat mengontaminasi media.
b. Fungsi dan Karakteristik Media Potato Dextrose Agar (PDA) Media Potato Dextrose Agar (PDA) memiliki fungsi secara umum untuk
menjadi media pertumbuhan atau pembiakan mikroorganisme jenis jamur. Karakteristik media PDA ini sendiri dapat dilihat dari jenis, konsistensi, warna, sifat media, dan pH, serta ciri khusus lainnya.
Berdasarkan jenis wadah tempat dibentuknya media PDA termasuk
media plate, dimana media ini memiliki kosistensi padat, dan secara visual memiliki warna kuning tipis. Media PDA bersifat selektif untuk menumbuhkan jamursepeti ragi. Media ini memiliki pH sedikit asam dimana media PDA ini stabil digunakan pada pH 5,6 ± 0,2 pada suhu ruang 250C. Media PDA memiliki karakteristik khusus dibandingkan media lainnya dari segi ahan penyusunnya, dimana dalam pembuatan media PDA ini diberikan bahan tambahan bahan berupa antibiotik sebagai bahan antibakteri, sehingga jamur yang hendak ditumbuhkan dapat tumbuh dengan baik di dalam mdia tanpa adanya gangguan dari bakteri. c. Nilai Kritis Pembuatan Media
Nilai-nilai kritis dalam pembuatan madia ini antara lain : 1. Penimbangan bubuk media harus sesuai dengan volume yang akan dibuat, maka dari itu dapat dibantu dengan perhitungan. 2. Pelarutan media jangan sampai mendidih karena dapat merusak komposisi media, khususnya kandungan gula (laktosa), merubah pH media, dan membuat media susah memadat. 3. Pengecekan pH media harus pada suhu 25 C agar tidak merusak indikator pH yang digunakan. 4. Proses sterilisasi harus tepat suhu, waktu dan tekanan pada autoklaf agar media yang dibuat terhindar dari kerusakan dan kontaminasi yang tidak diinginkan. 5. Proses pengerjaan harus cepat dan tepat, khususnya saat media akan dituang ke petridisk, agar media tidak memadat sebelum dipindahkan ke petridisk. 6. Penuangan media ke petri disk harus pada kondisi steril yaitu melalui proses fiksasi. 7. Sebelum diinkubasi atau disimpan dpastikan media sudah memadat terlebih dahulu, karena proses inkubasi maupun penyimpanan media akan dilakukan dalam posisi petridisk terbalik. 8. Media diinkubasi selama ± 24 jam, dengan posisi petridisk terbalik, untuk menyediakan sirkulasi udara yang baik untuk pertumbuhan bakteri, dan agar uap air yang berkondensasi menjadi tetesan air tidak jatuh ke permukaan media dan menyebabkan kontaminasi. 9. Media yang sudah jadi harus disimpan pada lemari pendingin pada suhu 2 0-80C dalam posisi petridisk terbalik untuk menjaga kualitas media tetap baik sebelum digunakan. 10. Setiap tahapan pembuatan media PDA ini perlu diperhatikan benar sterilitas saat bekerja, agar kemungkinan terjadinya kontaminasi bakteri pada media dapat dihindari. Sehinga jamur yang akan dikultur pada media ini nantinya dapt tumbuh sempurna tanpa gangguan mikroorganisme lain seperti bakteri.
BAB V PENUTUP
5.1 SIMPULAN Dari praktikum yang telah dilaksanakan dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut : 1. Media PDA (Potato Dextrose Agar ) dapat dibuat seara langsung dengan berdasarkan pada prinsip penimbangan yang tepat, pelarutan, serta sterilisasi. dalam pembuatan media PDA juga menggunakan bahan tambahan yaitu antibiotik sebagai antibakteri. Dalam praktikum ini dibuat 200 ml larutan media PDA dengan melarutkan 7,8 g bubuk media PDA merk OXOID. 2. Media PDA (Potato Dextrose Agar ) merupakan media berkonsistensi padat berwarna kuning pias (kuning tipis). Media ini bersifat selektif
yang
digunakan untuk media kultur atau pembiakan jenis-jenis jamur. 3. Nilai kritis yang perlu diperhatikan dalam pembuatan media PDA ini antara lain penimbangan, pelarutan, pengecekan pH, proses sterilisasi, proses pengerjaan harus steril, penuangan media ke petridisk, proses inkubasi, dan penyimpanan media yang telah jadi. 5.2 SARAN Dalam pembuatan media dan reagensia untuk pemeriksaan mikrobiologi hendaknya prinsip pembuatan dan suasana aseptis tetap diperhatikan. Selain itu jenis media yang dibuat harus disesuakan dengan jenis pemeriksaan yang dilakukan agar sesuai dengan fungsi dari media itu sendiri.
DAFTAR PUSTAKA
Kawuri, R., Y. Ramona dan I. B. G. Darmayasa. 2007. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Farmasi. Jurusan Biologi F. MIPA UNUD : Bukit Jimbaran
Pelczar, M.J. dan Chan, E. C. S., 1988. Dasar-dasar Mikrobiologi Jilid 1. Jakarta:UI Press
Singleton dan Sainsbury, 2006. Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd Edition. John Wiley and Sons Inc. Sussex, England.
Sumarsih, S., 2003. Mikrobiologi Dasar. Universitas Pembangunan Nasional Veteran, Yogyakarta.
Supardi, dan Sukamto. 1999. Mikrobiologi Dalam Pengolahan Dan Keamanan Produk Pangan. Bandung : Penerbit Alumni.
