TITULACIÓN DE AMINOÁCIDOS : Como se muestra en la estructura anterior, un aminoácido presenta en su molécula, como mínimo, un grupo α-amino y un grupo α-carboxilo. Estos grupos
pueden protonarse o desprotonarse, dependiendo del pH del medio: El grupo α -carboxilo se desprotona a un pH alrededor de 2 (en este valor de pH, el grupo amino se encuentra protonado). El grupo α -amino se desprotona a un pH alrededor de 9.
Para conocer con certeza el valor del pH al cual se desprotonan los dos grupos de un aminoácido, se utilizan los valores de las constantes de equilibrio para la ionización de la molécula, esto es, la pK a respectiva para cada grupo. Así, el pH al cual se desprotona el grupo α-carboxilo es el valor de la pK a, (o pK 1), y el pH al cual se desprotona el grupo α-amino es el valor de la pK a2 (o pK2). Algunos aminoácidos presentan grupos ionizables en su cadena lateral R, como el -OH en la tirosina, el -COOH en el ácido glutámico, el -NH2 en la lisina y el -SH en la cisteína; en estos casos, el pH al cual se desprotonan los grupos corresponde al valor de la pKR. Siete de los veinte aminoácidos tienen las cadenas laterales fácilmente ionizables. (ver Anexo 1: tabla 4: aminoácidos). (Quesada 2007). Los valores de las pK de un aminoácido pueden determinarse a partir de una curva de titulación ácido-base. En una titulación ácido-base, se adiciona ácido (o base) a un volumen determinado de una solución de concentración conocida de base (o ácido). La curva de titulación se construye al graficar el pH de la solución resultante después de cada adición (en el eje de las ordenadas) vs los ml agregados de ácido o de base. (Quesada 2007). Para el desarrollo del presente informe se realizó la titulación a tres (3) aminoácidos con el propósito de comprobar el carácter anfotérico de los aminoácidos y determinar mediante curvas de titulación; los valores de pK de los grupos ionizables y se halló el punto isoélectrico de los aminoácidos. (Quesada 2007). METODOLOGÍA
En un vaso de precipitados de 150 ml, se depositaron 50 ml de la solución de aminoácido (0,1 M). Para la medición del pH se requirió de un pHmetro del cuel se calibró y determinó el pH inicial de la solución (aminoácido). Para la titulación se empleó una bureta y como titulante se utilizó ácido clorhídrico (HCl) (0.198 N). Desde la bureta se adicionó cada vez 1 ml del ácido a la solución del aminoácido y se determinó el pH por cada adición. El procedimiento se continuó con la adición del ácido hasta que se alcanzó un pH 1,5 aproximadamente. Los datos se registraron en computador y luego se diseñó la gráfica de los registros obtenidos. Cada grupo de laboratorio realizó la titulación con un aminoácido diferente. Por lo que se realizó la titulación a 3 aminoácidos Lisina, Glicina y ácido. A partir de las curvas de titulación determinó los valores de pK y se calculó los puntos isoeléctricos. Nota: El procedimiento para cada una de las soluciones a titular se requería de realizar una
titulación duplicado. Sin embargo los resultados de la primera fueron satisfactorios por lo que se obvió realizar el duplicado.
RESULTADOS Tabla No 1 . Titulación de aminoácido: Lisina. Volumen HCl (ml)
pH
26,1
8,415
52
1,846
0
10,334
27
8,193
53
1,819
1
10,269
28,1
7,981
54
1,788
2
10,2
29
7,322
55
1,759
3
10,144
30
5,183
56
1,73
4,3
10,075
31
3,36
57
1,706
5
10,035
32
3,128
58
1,677
6
9,964
33
2,963
59
1,652
7
9,89
34,1
2,842
60
1,632
8
9,822
35
2,73
61
1,603
9,1
9,747
36
2,623
62
1,584
10,1
9,684
37,1
63,1
1,561
11,1
9,617
38
2,492
64
1,541
12,1
9,554
39,1
2,423
65,1
1,522
13,1
9,489
40
2,367
66
1,505
15
9,367
41
2,309
67,1
1,488
16
9,306
42
2,265
68
1,472
17,1
9,237
43
2,206
69,1
1,454
18,1
9,162
44
2,16
70
1,441
19,1
9,099
45
2,118
71
1,427
20
9,03
46
2,07
72
1,412
21
8,951
47
2,039
73
1,399
22
8,863
48,1
1,992
74
1,383
23
8,766
49
1,957
75
1,372
24
8,662
50
1,922
25
8,536
51
1,876
2,56
Observación : Aunque el pH necesario para el procedimiento se alcanzó al llegar a los 62 ml de
adición del ácido; se continuó con el proceso con el objetivo de verificar el mínimo pH obtenido al alcanzar los 75 ml del ácido titulante
12
10
8
6
4
2
0 0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tabla No 2 . Titulación de aminoácido: Glisina. 23
9,58
48
2,29
24
9,49
49
2,23
12,43
25
9,42
50
2,19
1
12,4
26
9,33
51
2,14
2
12,34
27
9,21
52
2,09
3
12,28
28
9,11
53
2,05
4
12,19
29
8,96
54
2
5
12,07
30
8,82
55
1,96
6
11,94
31
8,6
56
1,92
7
11,72
32
8,26
57
1,88
8
11,43
33
7,57
58
1,84
9
11,11
34
4,23
59
1,8
10
10,91
35
3,63
60
1,77
11
10,69
36
3,38
61
1,73
12
10,53
37
3,2
62
1,7
13
10,42
38
3,05
63
1,67
14
10,31
39
2,93
64
1,64
15
10,22
40
2,83
65
1,61
16
10,13
41
2,75
66
1,59
17
10,04
42
2,67
67
1,56
18
9,98
43
2,59
68
1,54
19
9,95
44
2,52
69
1,52
20
9,8
45
2,46
70
1,49
21
9,73
46
2,4
71
1,47
22
9,65
47
2,34
72
1,45
Volumen HCl (ml)
pH
0
pH 14
12
10
8
6
4
2
0 0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tabla No 3 . Titulación aminoácido: ácido glutámico Volumen HCl (ml)
pH
23
9.373
48
3.879
0
12.270
24
9.286
49
3.803
1
12.217
25
9.197
50
3.728
2
12.140
26
9.094
51
3.649
3
12.057
27
8.976
52
3.565
4
11.948
28
8.841
53
3.477
5
11.806
29
8.648
54
3.381
6
11.617
30
8.396
55
3.280
7
11.315
31
7.876
56
3.185
8
10.988
32
6.135
57
3.088
9
10.722
33
5.518
58
2.997
10
10.539
34
5.224
59
2.908
11
10.392
35
5.029
60
2.821
12
10.269
36
4.877
61
2.745
13
10.166
37
4.752
62
2.674
14
10.077
38
4.650
63
2.604
15
9.985
39
4.560
64
2.537
16
9.907
40
4.473
65
2.481
17
9.930
41
4.394
66
2.427
18
9.753
42
4.318
67
2.371
19
9.679
43
4.241
68
2.322
20
9.604
44
4.168
69
2.273
21
9.529
45
4.099
70
2.224
22
9.454
46
4.026
71
2.183
47
3.954
72
2.141
73
2.101
83
1.776
93
1.562
74
2.059
84
1.750
94
1.546
75
2.025
85
1.726
95
1.530
76
1.975
86
1.702
96
1.515
77
1.959
87
1.676
97
1.500
78
1.920
88
1.654
98
1.481
79
1.888
89
1.636
99
1.469
80
1.859
90
1.617
100
1.458
81
1.828
91
1.599
82
1.800
92
1.580
pH 14.000 12.000 10.000 8.000 pH
6.000 4.000 2.000 0 0
20
40
60
80
100
120
DISCUSIÓN
Los puntos en la curva de titulación en los cuales no se produce un cambio de pH, a pesar del aumento en la concentración, indican los valores de pK. En estos puntos el aminoácido tiene su mayor capacidad amortiguadora. Asimismo, en la curva de titulación es posible indicar el punto isoeléctrico, valor de pH en el que la carga neta del aminoácido es cero. En este punto, pequeños cambios en la concentración de equivalentes ácidos o básicos en la solución ocasionan cambios bruscos de pH; por tanto, el aminoácido no tiene capacidad amortiguadora. Esta característica de los aminoácidos de ceder o aceptar protones (comportarse como ácidos o bases, de acuerdo con el pH en que se encuentren) hace que se denominen sustancias
anfóteros. Los péptidos y las proteínas, por estar integrados por aminoácidos, también son anfóteros. CONCLUSIONES
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ANEXOS
anfóteros. Los péptidos y las proteínas, por estar integrados por aminoácidos, también son anfóteros. CONCLUSIONES
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ANEXOS
