Lab Oratorio Nmero Mas Probable NMP en Alimentos Usando Fluorocult LMX

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AGAR PLATE COUNT(APC)

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LABORATORIO CONTROL AMBIENTAL

Modelo de Mejora Continua

ANALISIS MI CROBIOLOGICO CROBIOLOGICO

PROTOCOLO PARA ANALISIS DE NMP EN ALIMENTOS

•

OBJETIVO

Describir la metodología para la determinación de coliformes totales y fecales en muest alimentos. •

ALCANCE Este procedimiento es aplicable a diferentes tipos de matrices (Líquidos y sólidos).

•

DESCRIPCIÓN Principio

En este ensayo de laboratorio se analizará muestras de alimentos, con la finalidad de deter

qué tipo de microorganismos logran crecer en los diferentes medios de cultivo emplead laboratorio.

En los análisis microbiológicos convencionales el ensayo para determinar coliformes tot

fecales puede llevar a necesitar un gran número de diferentes baterías de medios de cult

están basados en diferentes etapas como la prueba presuntiva, prueba confirmativa y lueg

Master yourdiagnostico. semester with Scribd & The New York Times

de medios de cultivo sólidos todo este análisis puede tomar unos 5 días para logr  Read Free Foron 30this Days Sign up to vote title 

 Useful  Not useful Cancel anytime. Fluorocult®, descrito inicialmente por (Manafi y Kneifel 1989). Caldo Fluorocult® LMX con Special offer for students: Only $4.99/month. buffer fosfatos para garantizar un alto rango de crecimiento para coliformes totales.

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Figura 1. Posibles resultados del caldo Fluorocult® LMX. El primer tubo es el caldo sin ningún tipo de crecimiento, el segundo tubo presenta turbiedad debido al crecimiento bacteriano, Coliformes fecales: el tercer tubo con coloración azul-verdoso con anillo generado por el reactivo de Kovacs mas la fluorescencia bajo luz UV, Coliformes totales: los dos últimos tubos, presencia de color azul-verdoso pero ausencia del anillo indol y fluorescencia bajo luz UV.

You're(g/Litro) Reading a Preview Composición del caldo Fluorocoult® Unlock full access with a free trial.

Triptosa 5; Cloruro de sodio 5; sorbitol 1; triptófano 1; Fosfato acido de potasio 2,7;

acido monopotasico 2; sales Download de lauril sulfato de Trial potasio 0,1; 5-bromo-4-cloro-3-indo With Free galatopiranoxido (X-GAL) 0,08; -methyllumbelliferyl-β-D-glucuronide (MUG) 0,05; 1-isopro D-1-tio-galactopyranoside (IPTG) 0,1.

Preparación del medio de cultivo

17 g en unwith (1) litro de agua destilada. Caliente para disolver completamente. Auto Master yourSuspenda semester Scribd  Read Free Foron 30this Days Sign up to vote title por 15 minutos a 121 °C.  & The New York Times Useful Not useful   Special offer for students: Only pH: 6,8$4.99/month. ± 0,2 a 25 °C

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Shigella flexneri ATCC 12022

-

-

Salmonella typhimurium ATCC 14028

-

-

Aeromonas hydrophila ATCC 7966

-

-

Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145

+

-

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Almacenamiento y toma de muestras

Se comienza el examen microbiológico máximo 24 h después de su recolección. Si se sabe q

resultado puede ser usado para una acción legal analizar la muestra antes de 6 h, mantenié refrigerada a 4 °C y con cadena de custodia.

Procedimiento

Se agrupan los tubos de fermentación en hileras de tres o cinco tubos en una gradilla. Con

de muestra y/o diluciones de la misma. El número y el volumen de los tubos de mu

seleccionados dependen de la cantidad y de las características de la muestra que se v estudiar, se agita vigorosamente la m uestra y las diluciones.

Evaluación experimental

You're Reading a Preview Unlock full access with a free trial.

Incubación: 18-24 horas a 36 ± 1 °C en ambiente aerobio. Si se incuba a temperatura amb

Download With Free Trial (+20 a +25 ° C) el tiempo de incubación es prolongado a 48 horas. Coliformes totales: el color del c aldo cambia a azul-verdoso.

E. coli: el color del caldo cambia a azul verdoso fluorescente bajo luz UV (366 nm). Reacción usando el reactivo de Kovacs, se observa un anillo rojizo.

COMPLETAwith Scribd Master yourPRUEBA semester  Read Free Foron 30this Days Sign up to vote title  & The New York Times Useful Not useful  sobre el control de ca Para establecer la presencia de bacterias coliformes  y obtener datos Cancel anytime.

Special offer for students: $4.99/month. se Only usa la prueba completa sobre por lo menos el 10% de los tubos positivos confirmados.

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Se siembra asépticamente una placa de agar LES Endo o agar MacConkey por cada tu

Medio verde Brillante Lactosa Bilis que ha Producido gas; se realiza la operación lo antes p tas la detección del gas.

Se siembran las cajas de forma que asegure la existencia de algunas colonias aisladas, sepa por al menos 0,5 cm. Se incuban las cajas invertidas a 35 °C ± 0,5 °C durante 24 h ± 2 h. Las colonias que se desarrollan en el agar LES Endo pueden definirse como típicas (rosas

oscuras con un brillo verde metálico superficial) o atípicas (rosas, rojas, blancas o incolor brillo) a las 24 h de incubación.

Las colonias típicas de la fermentación de la lactosa desarrolladas sobre el agar MacConke rojas y pueden estar rodeadas por una zona opaca de precipitado biliar.

Se toma de cada caja una o más colonias típicas bien definidas o, si no existen, dos o más

las que se consideran como probablemente formadas por microorganismos del grupo coli

y se las pasa a un tubo de fermentación con medio de lauril triptosa y a uno con ag

You're Reading Preview inclinado (este último no es necesario si se trataa de muestras de agua potable). Unlock full access with a free trial.

Si es necesario, utilice una lupa para colonias a fin de conseguir un aumento optimo a la h tomarlas de las cajas de agar LES Endo o afar MacConkey. Download With Free Trial

Cuando se transfiera las colonias, se eligen las que estén bien aisladas y se toca apen

superficie con una aguja esterilizada a la llama, enfriada al aire para evitar en lo posible el p de transferir un cultivo mixto.

incuban los tuboswith con el medio secundario (medio liquido de lauril triptosa con tubos du Master yourSesemester Scribd  Forsion 30 Days Sign this de fermentación invertidos) a 35 °C ± 0,5 °C duranteRead 24 up hFree ±to2vote h; no setitle producegas e & The New York Times periodo se prolonga la incubación hasta 48 h ± 3 h.  Useful  Not useful Special offer for students: Only $4.99/month.

Cancel anytime.

Se estudian microscópicamente las preparaciones teñidas con Gram y obtenidas en los cu

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CÁLCULO Y REGISTRO DEL NMP

Para calcular la densidad de coliformes, se calcula en términos del número más probable (N En la tabla se contempla Límites de confianza del 95% para cada valor del NMP.

La tabla ilustra los valores de NMP para combinaciones de resultados positivos y neg

cuando se estudian volúmenes de cinco muestras de 10 ml, 1 ml, y 0,1 ml. En caso de q

series de diluciones decimales sean distintas de las de la tabla, se seleccionan los valores de

de la tabla por la combinación de tubos positivos, calculando de acuerdo con la sigu fórmula:

Valor del NMP X

10

= NMP / 100 ml

Mayor volumen estudiado

Cuando se utilice más de tres diluciones en series de diluciones decimales, solo se tomar

resultados de tres de ellas para calcular el NMP. Para seleccionar las tres diluciones por u

en la determinación del índice del NMP, se escoge la dilución más alta con resultado po

You're Reading a Preview entre las cinco estudiadas (no hay dilución menor que haya dado un resultado negativo) y la siguientes diluciones más altas.

Unlock full access with a free trial.

En la tabla se muestran las combinaciones de tubos positivos más probables. Si apa

Download With Free Trial

combinaciones poco probables con una frecuencia superior al 1 %, hay que pensar que la t

es inadecuada o que no se ha cumplido por completo el supuesto estadístico en que se b cálculo del NMP.

ml = No. De tubos positivos Master yourNMP/100 semester with Scribd  Raíz de los ml de muestra en los tubos negativos X ml de en todos Read Free Foron 30this Days Sign up tomuestra vote title los tubos  & The New York Times Useful Not useful   Cancel anytime.

Special offer for students: Only $4.99/month. Aunque los cálculos del NMP se facilitan para su uso en la prueba de coliformes, tambié

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Limites de confianza del 95 % (aproximad Combinación de positivos

0-0-0 0-0-1 0-1-0 0-2-0 1-0-0 1-0-1 1-1-0 1-1-1 1-2-0 2-0-0 2-0-1 2-1-0 2-1-1 2-2-0 2-3-0 3-0-0 3-0-1 3-1-0 3-1-1 3-2-0 3-2-1 4-0-0 4-0-1 4-1-0 4-1-1 4-1-2 4-2-0 4-2-1 4-3-0 4-3-1 4-4-0 5-0-0 5-0-1 5-0-2 5-1-0 5-1-1 5-1-2 5-2-0 5-2-1 5-2-2 Special offer for students: Only $4.99/month. 5-3-0 5-3-1

NMP/100 ml

<2 2 2 4

Superior

Inferior

1,0 1,0 1,0

10 10 13

2 1,0 4 1,0 4 1,0 6 2,0 6 2,0 4 1,0 7 2,0 7 2,0 9 3,0 9 3,0 12 5,0 8 3,0 11 4,0 11 4,0 14 6,0 14 6,0 17 7,0 13 5,0 You're Reading a Preview 17 7,0 17 7,0 Unlock full access with a free trial. 21 9,0 26 12 22 9 Download 26 With Free Trial 12 27 12 33 15 34 16 23 9 30 10 40 20 30 10 50 20 60 30 Read Free Foron 30this Days Sign up to title 50 20vote 70 30  Useful  Not useful Cancel 90 40 anytime. 80 30 110 40

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11 15 15 18 18 17 20 21 24 25 29 24 29 29 35 35 40 38 45 46 55 63 56 65 67 77 80 86 110 140 120 150 180 170  210 250 250 300



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INFORME DE ENSAYO

En el informe de ensayo se debe especificar el método usado, la temperatura seleccionada

resultados obtenidos. También se deben mencionar todos los detalles de las operacion

especificados en esta norma, o considerados como opcionales, junto con los detall cualesquier incidente que puedan haber influido en los re sultados.

En el informe de ensayo se debe incluir toda la información necesaria para la identific completa de la muestra.

REFERENCIA -

NTC 4939:2001, Calidad de agua. Enumeración de coliformes y Escherichia coli . Técnic tubos de fermentación.

-

Manafi, M., Kneifel, W. 1989. Ein kombiniertes Chromogen-Fluorogen- Medium

simultanen Nachweis der Coliformengrupe und von E. coli in Wasser. – Zbl. Hygien Unweltmedizin. 189; p 225-234.

You're Reading a Preview

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Merk Microbiology ManualUnlock 12 th Edition full access with a free trial.

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DIAGRAMA DE FLUJO

Diluciones de las muestras (si es necesario)

Inoculacion en caldo Fluorocoult en volumenes de 10, 1, 0,1 ml

You're Reading a Preview Incubación: 18-24 horas a 36 ± 1 °C en aerobio. Unlockambiente full access with a free trial.

A temperatura ambiente (+20 a +25 ° C) Download Free Trial porWith 48 horas.

Master yourElsemester with Scribd color del caldo cambia a azulverdoso, se interpreta como & The New York Times Coliformes Special offer for students: Only $4.99/month.

totales

El color del caldo cambia a azu verdoso fluorescente bajo  luz U Read Free For 30 Days Sign up to vote on this title (366 nm). Reacción indolusand Useful  useful se obser reactivo el deNot Kovacs, Cancel anytime. un anillo rojizo, se interpreta presencia de E. coli

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