DETERMINACION DE LIPIDOS EN ALIMENTOS UTILIZANDO EL METODO DE BLIGH-DYER OBJETIVO
Determinar Los Lipidos Existentes del maní y la soya, Utilizando El Metodo De Bligh-Dyer.
FUNDAMENTO TEÓRICO Es una una form forma a de extr extrac acci ción ón que que supe superra las las difi dificu cult ltad ades es plante planteada adas. s. Utiliz Utiliza a un sistema sistema monofá monofásico sico (en este este cas caso o una única única fase fase líquid líquida) a) form formad ado o por por una una me mezcl zcla a de cloro clorofor formo mo,, metanol y agua en relación 1:2:0,8 (en volumen) que rápida y efectivamente disuelve los lípidos. El extracto es luego diluido con un volumen de cloroformo y agua, para formar un sistema de dos fases líquidas. Cualquier contaminante será rápidamente particionado a la fase superior (acuosa), dejando a los lípidos libres de contaminantes en la fase inferior (clorofórmica). La ley de partición establece que si a un sistema de dos fases líquidas (inmiscibles o muy poco miscibles) se le agrega una cantidad de un tercer componente, soluble en ambas fases, éste se distribuirá de acuerdo a su solubilidad en cada una de ellas. Esta ley indica que las concentraciones logradas en cada fase constituyen una constante, la constante de partición: [A1] Kd =
[A2]
donde [A1] corresponde a la concentración de la sustancia A en la fase 1 (orgánica) y [A 2] a su concentración en la fase 2 (acuosa).
MATERIALES Y REACTIVOS Materiales
Tubos de 250 x 25mm. (capacidad = 70 ml)
Tubos de 150 x 15mm, (capacidad = 30 ml) con tapa rosca protegida internamente con teflón o PVC.
Agitador rotativo para tubos.
Centrifuga de baja rotación.
Reactivos
Metanol p. a.
Cloroformo p. a.
Sulfato de sodio anhidro.
Solución de sulfato de sodio 1,5% en agua.
PROCEDIMIENTO
Cuando se trata de productos con tenores de grasa encima de 20 % (leche integral en polvo, extracto hidrosoluble de soya, maní, semillas, etc.) pesar hasta 2,0 a 2,5g de muestra.
Para productos con porcentajes menores de 20% pesar entre 3,0 a 3,5g de muestra (es esencial que las muestras estén completamente molidas).
MANÍ
SOYA
Transferir las cantidades pesadas para tubos de ensayo con roscas de 70 ml.
Adicionar exactamente 10 ml de cloroformo, 20 ml de metanol 8 ml de agua destilada.
Tapar herméticamente. Los volúmenes de solvente que fueron adicionados (10; 20; 8) corresponden a una relación en volumen de 1: 2: 0,8 – cloroformo, metanol y agua.
En esta proporción los tres solventes coexisten en una solución homogénea.
Colocar los tubos en el agitador rotatorio por 30 minutos.
Adicionar 10 ml de cloroformo y 10 ml de solución de sulfato de sodio 1,5%.
Tapar y agitar por más 2 minutos. Adicionar 10 ml de cloroformo y 10 ml de solución de sulfato de sodio 1.5%.
Tapar y agitar por más de 2 minutos.
La adición de más cloroformo y más agua muda la proporción para 2: 2: 1,8 causando la separación total del cloroformo que carga los lípidos (capa inferior, por tanto todos los lípidos de la muestra quedan disueltos en 20 ml de cloroformo)
Dejar separar las capas de forma natural ó centrifugar a 1000 rpm por 2 minutos para acelerar la separación.
Retirar la capa inferior (cloroformo) entre 13 y 15 ml y colocarlos en un tubo de 30 ml.
Adicionar aproximadamente 1,0g de sulfato de sodio anhidro.
Tapar y agitar para remover los retos de agua que irremediablemente son arrastrados durante el pipeteado.
Filtrar rápidamente en un embudo pequeño usando papel filtro, la solución debe quedar limpia cualitativo.
Medir exactamente 5 ml del filtrado y colocarlos en un Bécquer de 50 ml previamente tarado.
Colocar el Bécquer en una estufa a 100ºC hasta evaporar el solvente (15 a 20 min).
Enfriar en desecador y pesar.
CÁLCULOS:
P = peso de los lípidos (en gramos) contenidos en 5 ml G = gramos de la muestra.
Cuando las muestras contienen agua encima de 10% a la relación de solventes 1: 2: 0,8 debe ser realizada considerando el agua contenida en la muestra. Por tanto es necesario conocer la humedad de la muestra. •
MUESTRA a: maní
Peso de la muestra = 2.0408g Peso de matraz solo = 61.5130g Peso matraz + peso se lípidos = 62.2141g Peso de los lípidos (en gramos) contenidos en 5 ml = 0.7011g
•
MUESTRA b: soya Peso de la muestra = 2.0082g Peso de matraz solo = 95.0129g Peso matraz + peso se lípidos = 96.6076g Peso de los lípidos (en gramos) contenidos en 5 ml = 1.5947g
CONCLUSIONES
La adición de cloroformo y agua en una proporción de 2:2:1.8 causa la separación total del cloroformo
que
carga los lípidos.
Los aceites que se obtienen por presión o bien por extracción con disolventes, aun poseen impurezas, que se separan por una serie de tratamientos de purificación, como destilación y filtración del mismo.
Cuando las muestras contienen agua encima del 10% a la relación
de
solventes
1:2:0.8
debe
ser
realizado
considerando el agua contenida en la muestra. Por tanto es necesario conocer la humedad de la muestra.
2. BIBLIOGRAFIA
1986, TEARSON. D; TECNICAS DE LABORATORIO PARA EL ANALISIS DE LOS ALIMENTOS, EDITTORIAL ACRIBIA, ZARAGOZA-ESPAÑA.
JEAN-CLAUDE CHEFTE; INTRODUCCION A LA BIOQUIMICA Y TECNOLOGIA DE LOS ALIMENTOS; EDIT. ACRIBIA; VOLUMEN I; ZARAGOZA-ESPAÑA.
LA CIENCIA DE LOS ALIMENTOS, NORMAN N. POTTER, 1º EDICIÓN 1973, EDITORIAL EDUX S.A. 1978, MÉXICO D.F.
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