Introducción Al Laboratorio de Microbiología

INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA I TECNICAS DE OBSERVACIÓN OBSERVACIÓN DE BACTERIAS II

Juan Eduardo López Gómez, Rosa Angélica Miranda Sánchez, Geraldine Polo Peñae, !arolina Julieh "ergara

UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS HUMNAS LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL VII AREA MICROBIOLOGIA MONTERIA 2017

#$ INTRODUC INTRODUCCION CION::

El la%oraorio de micro%iolog&a es un lugar con'enienemene

ha%iliado donde se mane(an ) e*aminan microorganismos$ Ese ipo de ra%a(o de%e ser lle'ado a ca%o con una %uena écnica asépica, ) por ano se re+uiere un am%iene limpio ) ordenado$ !uando mane(amos cual+uier ipo de muesra de%emos e'iar +ue microorganismos a(enos a nuesros culi'os ) presenes en el am%iene se inroduzcan en ellos conaminándolos, o +ue los microorganismos de la muesra nos conaminen a nosoros$ Por ello ra%a(aremos siempre en condiciones de eserilidad$ En el la%oraorio de micro%iolog&a enconramos esas condiciones %ien en campanas de seguridad %iológica o %ien en la pro*imidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas$

Todos odos los !o"#d !o"#d$% $%$#& $#&'os 'os ()# s# ll# ll#*#& *#& + "+,o "+,o d#&'!o d#&'!o d#l l+,o!+ l+,o!+'o! 'o!$o $o d# %$"!o,$olo-.+ %$"!o,$olo-.+ d#,#& #s'+! #&%+!"+dos d#&'!o d#l "o&"#'o d# ,$os#-)!$d+d/ La %ioseg %iosegurid uridad ad ha sido sido deini deinida da por el Minis Miniseri erio o de Proec Proecció ción n Social Social como #l

"o&)&'o d# %#d$d+s !#*#&'$*+s d#s'$&+d+s + %+&'#&#! #l "o&'!ol d# 3+"'o!#s d# !$#s-o !$#s-o l+,o!+ l+,o!+l#s l#s !o"#d !o"#d#&' #&'#s #s d# +-#&'# +-#&'#ss ,$ol4,$ol4-$"o $"os s 3.s$"o 3.s$"oss o ().%$" ().%$"os os lo-!+&do l+ !#*#&"$4& d# $%+"'os &o"$*os +s#-)!+&do ()# #l d#s+!!ollo o !od)"'o 3$&+l d# d$"5os !o"#d$%$#&'os &o +'#&'#s "o&'!+ l+ s+l)d 6 s#-)!$d+d d# '!+,++do!#s d# l+ s+l)d +"$#&'#s *$s$'+&'#s 6 #l %#d$o +%,$#&'#/ (Manual  de cond conduct uctas as básic básicas as en biose biosegu gurid ridad ad.. Minist Ministeri erio o de Salud Salud.. 1997 1997). ).  Aun+ue los

microo microorga rganis nismos mos +ue se manipu manipulen len no sean sean consid considera erados dos paóge paógenos nos,, odos odos los culi'os de odos los microorganismos de%en ser mane(ados con precaución Por lo anerior es imporane cumplir con los siguienes re+uisios %ásicos•

Resringir la presencia de los microorganismos a sus recipienes ) medios de culi'o para e'iar el riesgo de conaminarse uno mismo o a un compañero$

•

E'iar +ue los microorganismos am%ienales .presenes en pile, ca%ello, aire, ropa, ec$/ conaminen nuesras muesras$

Por oro oro lado lado los seres seres 'i'os 'i'os presen presenan an 'aried 'ariedad ad en amaño amaño,, orma orma,, esruc esrucur ura, a, unción, ec$ !on relación al amaño ése 'ar&a, el o(o humano logra ideniicar o%(eos hasa de 011 micras, por lo +ue se hace necesario recurrir a insrumenos ópicos +ue aci acililie en n la o%se o%ser' r'ac ació ión n de o%(e o%(eo oss de meno menorr ama amaño ño,, ese ese ins insru rume men no o es el microscopio, +ue consise en (uegos de lenes +ue agrandan la imagen$ El microscopio se in'enó, hacia #2#1, por Galileo, seg3n los ialianos, o por Jansen, en opinión de los holandeses$ La pala%ra microscopio ue uilizada por primera 'ez por 

los componenes de la 4Accademia dei Lincei4 una sociedad cien&ica a la +ue perenec&a Galileo ) +ue pu%licaron un ra%a(o so%re la o%ser'ación microscópica del aspeco de una a%e(a$ Sin em%argo las primeras pu%licaciones imporanes en el campo de la microscopia aparecen en #221 ) #225 cuando Malpighi prue%a la eor&a de 6ar'e) so%re la circulación sangu&nea al o%ser'ar al microscopio los capilares sangu&neos ) 6oo7e pu%lica su o%ra Micrographia$  A mediados del siglo 8"99 un comerciane holandés, Leen:enhoe7, uilizando microscopios simples de a%ricación propia descri%ió por primera 'ez proozoos, %acerias, espermaozoides ) gló%ulos ro(os$ ;urane el siglo 8"999 el microscopio surió di'ersos adelanos mecánicos +ue aumenaron su esa%ilidad ) su acilidad de uso aun+ue no se desarrollaron me(oras ópicas$ Las me(oras más imporanes de la ópica surgieron en #<== cuando A%%e pu%lica su eor&a del microscopio ) por encargo de !arl >eiss me(ora la microscop&a de inmersión susiu)endo el agua por aceie de cedro lo +ue permie o%ener  aumenos de 0111A principios de los años ?1 se ha%ia alcanzado el limie eórico para los microscopios ópicos no consiguiendo esos, aumenos superiores a 5118 o #1118 sin em%argo e*isia un deseo cien&ico de o%ser'ar los dealles de esrucuras celulares . n3cleo, miochondria$$$ ec$/$  Al principio, el microscopio surgió como una lene +ue agranda la imagen .lupa/, lo +ue dio origen al microscopio ópico compueso, +ue consa de (uego de lenes .pare ópica/, sosenida por esrucuras meálicas .pare mecánica/$ Para o%ser'ar los o%(eos a ra'és del microscopio ópico compueso, es necesario colocarlos so%re una laminilla de 'idrio .Pora o%(eos/ ) generalmene se le coloca ora laminilla de 'idrio más delgada .!u%re o%(eos/@ en esa orma se o%iene la preparación microscópica@ la +ue puede durar poco iempo .preparación emporal/, o puede ser guardada .preparación permanene/, lo +ue nos da la clasiicación de preparaciones de acuerdo a su duración$ La ma)or&a de los microorganismos se encenran disri%uidos en una gran 'ariedad de há%ias ) se encuenran ormando po%laciones mi*as con oros microorganismos, los culi'os de esas mezclas se denominan culi'os mi*os$ La amplia disri%ución de los microorganismos puede ser demosrada e*poniendo medios de culi'os esériles al conaco con el medio am%iene ) dierenes supericies, en esos medios los

microorganismos crecen ormando colonias$ El aspeco de las colonias, el amaño, su color, ec$, permien dierenciar 'arios ipos de %acerias, aun+ue son propiedades mu) generales inluenciadas por las condiciones en +ue se realice el culi'o$

2/ M+'#!$+l#s 6 M8'odos 2/1/

M#'odolo-.+/ Se inició con la charla de %ioseguridad en donde se resala%a la imporancia de ener presene la peligrosidad de un agene +ue esá direcamene relacionado con el ipo de manipulación a la +ue es someido, para lo +ue se presenan las normas %ásicas de %ioseguridad en un la%oraorio de micro%iolog&a, como disciplina en el e(ercicio cien&ico$ Reiriéndose el docene en urno a +ue-

6a) +ue ra%a(ar con calma ) concenración

Es imprescindi%le en odo momeno el uso del e+uipo de proección personal EPP . ,+'+s -)+&'#s ol+$&+s -o!!o '++,o"+s/$

 Al iniciar ) inalizar la prácica, el esudiane se la'ará las manos con agua ) (a%ón

El lugar de ra%a(o siempre de%e esar limpio ) ordenado

Esá prohi%ido comer, %e%er ) umar en el la%oraorio

!ual+uier maerial +ue no se uilice en l realización de la prácica de%e esar aparado del lugar de ra%a(o

Los microorganismos de%en mane(arse siempre alrededor de la llama del mechero

o se de%e pipeear nunca con la %oca

Para deshacernos del maerial conaminado uilizaremos siempre los recipienes adecuados

Ba(o ning3n concepo de%e sacarse ninguna muesra conaminada del la%oraorio

 Aseg3rese de conocer el procedimieno anes de realizar  cual+uier e*perimeno, si iene dudas, no dude en consular a su insrucor

Codos los medios de culi'o de%en ser ransporados en posición 'erical ) almacenados en igual posición en sus respeci'os recepores

Codos los maeriales usados durane la prácica de%en ser  reornados a los lugares de donde ueron o%enidos

Mar+ue en orma legi%le los u%os ) ca(as de Peri +ue se 'a)an a usar$  Además de ser un compromiso, es una prioridad ener presene esas normas de %iseguridad$

2/2/

R#"o&o"$%$#&'o d# Materiales y Equipos #& #l l+,o!+'o!$o d# %$"!o,$olo-.+/

E9UIOS Y MATERIALES •

Esco%illones de algodón eséril .copios esériles/

•

Pipeas

•

e'era

•

Reaci'os +u&micos

•

Pora D%(eos ) !u%re D%(eos

•

Papel impreso .periódico/ con lera pe+ueña

•

Ci(eras ) ho(a de aeiar nue'a

•

Papel ) lápiz

•

Lápiz de colores

•

Lana o algodón de colores

•

!orcho

•

Polen de lor

•

Pol'illo de ala de mariposa

•

Ja%ón ani%acerial

•

Rollo de papel secane .oallas de papel de cocina/

•

 Alcohol anisépico

•

Encendedor 

•

!ina pegane de papel

MATERIALES F!+s"o -o'#!o

FUNCIÓN Recipienes en general de plásico .am%ién pueden ser de 'idrio/, con apón ) un u%o ino ) do%lado, +ue se emplea para conener agua desilada o

M$"!os"o$o "o%)#s'o

o!'+ 6 "),!# o,#'os

As+ ,+"'#!$ol4-$"+

desionizada$ Se emplea para dar el 3limo en(uague al maerial de 'idrio después de la'ado, ) en la preparación de disoluciones$ Esos rascos nunca de%en conener oro ipo de l&+uidos$ El rasco sólo se a%re para rellenarlo$ El microscopio es un insrumeno ópico +ue ampliica la imagen de un o%(eo pe+ueño$ Es el insrumeno +ue más se usa en los la%oraorios +ue esudian los microorganismos$ Mediane un sisema de lenes ) uenes de iluminación se puede hacer 'isi%le un o%(eo microscópico$ Los microscopios pueden aumenar de #11 a cienos de miles de 'eces el amaño original n o!'+o,#'os es una ina placa de crisal so%re el cual se disponen o%(eos para su e*amen microscopico$ Sus dimensiones son de =5 mm * 05 mm ) esan disponi%les en ca(as de 51 unidades$ El o%(eo a o%ser'ar suele disponerse so%re ese areaco para después siuarse en el microscopio ) ser  o%ser'ado$ Cam%ien disponi%les cu%reo%(eos para cu%rir la muesra o%ser'ada$ n "),!#o,#'os es una ina ho(a de maerial ransparene de plana cuadrada$ Se coloca so%re un o%(eo +ue 'a a ser o%ser'ado %a(o microscopio, el cual se suele enconrar  so%re un porao%(eos$ ;isponi%les en disinos amaños .#<, 01, 00, 0F mm cuadrados/ ) se suminisran en ca(as de #11 unidades$ El +s+ ,+"'#!$ol4-$"+ o +s+ d# un insrumeno de l+'$&o es la%oraorio +ue consa de una %ase +ue puede esar hecha de plaino, acero, aluminio ) un ilameno +ue puede ser   de nicromo, ungseno o plaino +ue

ermina o en un ario de 5 mm o en puna$ Se emplea para ransporar, arrasrar, ras'asar inóculos .pe+ueño 'olumen +ue coniene microorganismos en suspensión/ desde la solución de ra%a(o am%ién llamada solución madreH al medio de culi'o .sólido o l&+uido/ o de un medio a oro .resiem%ra/$ Cam%ién sir'e para la realización de rois$

M#"5#!o d# +l"o5ol

A)'o"l+*#

Ho!&o

;+!!+s d# +&+#!o,$os

n %#"5#!o o ()#%+do! B)&s#& es un insrumeno uilizado en la%oraorios cien&icos para calenar o eserilizar  muesras o !#+"'$*os ().%$"os$ na de las uenes de calor más sencillas del la%oraorio ) es uilizado para o%ener  emperauras no mu) ele'adas$ n A)'o"l+*#, Aparao para eserilizar  por 'apor +ue consise en un recipiene cil&ndrico, de paredes resisenes@ meálicas, ) con cierre herméico auocla'e, en cu)o inerior, +ue coniene un l&+uido, generalmene agua, el o%(eo se somee a presiones ) emperauras ele'adas sin llegar a her'ir$ Regulación de la emperaura por ermosao hidráulico$ !irculación de aire por ur%o 'enilador$ Recino inerior en acero ino*$ A9S9 ?1F con alo(amieno para gu&as %ande(as$ Pueras de crisal emplado, correderas, de +uia ) pon$ Driicios de salida de 'apores$ Mue%le e*erior recu%iero en epo*i$ Recipienes +ue se usan para conseguir  una amósera li%re de o*&geno para el culi'o de microorganismos anaero%ios$

$#'+s +)'o%<'$"+s =%$"!o$#'+s> 6 )&'+s d# $#'+

Se uilizan para pipeear pe+ueñas canidades de l&+uidos$ Se uilizan con punas desecha%les de disino amaño ) color seg3n la micropipea$ E*isen cuaro amaños- de 1,5I0m@ de 0I01 m@ de 01I011 m ) de 011I#111 m$

l+"+s d# #'!$ recipienes para la preparación de medios de culi'o sólidos

I&"),+do!+ de l+,o!+'o!$o/ I&"),+do!+ .aparao Las $&"),+do!+s son esenciales para una gran canidad de ra%a(os e*perimenales en %iolog&a celular, la %$"!o,$olo-.+ ) en %iolog&a molecular  ) se uilizan para culi'os celulares, ano %acerianos como de células eucarioas$

B+?os s#!olo-$"os/ Mar&a o S#!ol4-$"o para B+?o de la%oraorio$ Los ,+?os de mar&a o ,+?os s#!ol4-$"os, son e+uipos uilizados generalmene en la%oraorios de +u&mica$ sualmene se uiliza un méodo %asado en conerir la emperaura uniorme a una susancia l&+uida o sólida$

C++s

d#

#'!$

#s'8!$l#s

"o& A-+! 

N)'!$'$*o

Se uiliza como agene geliicane para dar solidez a los medios de culi'o$ En el agar %aceriológico el componene dominane es un polisacárido +ue se o%iene de cieras algas marinas ) +ue presena la induda%le 'ena(a de +ue a e*cepción de algunos microorganismos marinos, no es uilizado como nuriene$ n gel de agar al #I0K se licua alrededor de los #11! ) se geliica alrededor de los F1!, dependiendo de su grado de pureza$

T),o d# #&s+6o

'),o d# #&s+6o Cu%o de crisal, cerrado por uno de sus e*remos, +ue se uiliza para hacer análisis +u&micos$

!risal 'iolea solución acuosa .#K/ Sulao de co%re .solución al 01K/ !uli'o de 7le%siella pneumoniae Solución salina isoónica ogur con culi'os pro%ioicos  Azul de meileno Cina china  Alcohol aceona Solución de saranina  Aceie de inmersión Puene de cloracion hp-NN:::$direcindusr)$esNprodN(pIselecaNproducI2O50
2/@/

Lineamienos generales para el uso del M$"!os"o$o Co%)#s'o/

Se indicó de pare del docene cada una delas pares del microscopio ) su unción, con lo cual no enraremos en dealle )a +ue se supone +ue se ienen el conocimieno pre'io so%re ese insrumeno de ra%a(o ) análisis de la%oraorio$

MICROSCOIO ARTES Y FUNCION: Se e*plicarán las pares ópicas ) mecánicas del microscopio

ARTE OTICA$ D%(ei'os, Dculares, ;iaragma ) condensadores

ARTES MECANICAS: El pie, La plaina, !arro, uñas o ganchos, el u%o, ornillos micromérico ) microméricos #$ Ba(e compleamene la plaina del microscopio$ 0$ 6aciendo uso del mecanismo del re'ól'er, colo+ue rene a la preparación el o%(ei'o de menor aumeno .seco dé%il #1 8/$ ?$ !olo+ue la preparación microscópica so%re la plaina su(eándola con las pinzas del carro ) cenre la preparación haciendo uso de los ornillos del carro$ F$ Regule la luz mediane el uso del mecanismo del diaragma$ 5$ 6aciendo uso del ornillo macromérico su%a al má*imo la preparación hasa +ue encuenre ope sin o%ser'ar por los oculares$ 2$ D%ser'ando a ra'és del ocular, accione el ornillo macromérico hasa +ue 'isualice la imagen en el campo microscópico$ =$ na 'ez enocada la imagen, aine el eno+ue microscópico, haciendo uso del ornillo micromérico$

<$ Si desea ma)or dealle, cam%ie de aumeno roando el mecanismo del re'ol'er a un o%(ei'o +ue le proporcione el aumeno deseado, corrigiendo el eno+ue de imagen mo'iendo el ornillo micromérico, ) graduando la inensidad de luz con el diaragma$ O$ ;espués de ha%er realizado la o%ser'ación, se limpian las lenes con papel limpia lenes, se coloca el o%(ei'o de menor aumeno en posición de eno+ue, se %a(a la plaina, se desconeca ) se apa$ El microscopio +ueda liso para la pró*ima o%ser'ación$

2/@/1 !#+!+"$o&#s %$"!os"4$"+s '#%o!+l#s/ Se realizaron los siguientes procedimientos de acuerdo con las muestras biológicas indicadas por el docente.

 TIPOS DE  TINCION

 TINCION SIMPLE

 mu es tr as !o gu rt ! s ar ro de nt al

" ac er #r ot is $ s ec ar lo ! % &a rl o ' '

Cubrir concolorante la preparación ! de&arlo actuar durante unminuto. La(arsua(emente con agua destilada para eliminar ele)ceso de colorante. ' Secaral aire !obser(aral microscopio conel ob&eti(o de inmersión *+,,)- empleando el aceite apropiado.

 Tcnica /ue permite obser(ar la mor#olog0a ! tama1o de las bacterias$ as0 como los tipos de agrupaciones /ue #orman.

 TINCION NE23TI43

Colocar una pe/ue1a gota de tinta c5ina en el e)tremo de un portaob&eto

Distribuir la mezcla a lo a nc5o del portaob&eto '

desplazar poco a poco el segundo portaob&eto a lo largo delprimero para 5aceruna capa %na de la mezcla. ' de&ar secaral aire. ' Obser(ar al microscopio *+,,6-

E. coli.$ 7lebsiella pneumoniae

 TINCION DE 283M

3pli/ue una capadelgada delespcimen en el portaob&etos$ d&elo secaró #0&elo 9ameando concalor

C:bralo con cristal (ioleta durante + minuto$ l;(elo con agua. '

3pli/ue solución !odada durante + minuto$ l;(elo con agua Cuidadosamentedecolore la laminillaconalco5ol< acetona 5asta /ue elcolorazul se torne en celeste claro ' 3pli/ue solución de sa#raninaporun minuto$ l;(elo con agua$ secando la laminilla con papel %ltro

'

Las bacterias gram positi(as se ti1en de color azul (ioleta. Las bacterias gram negati(as se ti1en de color rosado.

 TINCION SELECTI43

Para tinción de capsulas.

 Tome una asada del culti(o ! 5aga un e)tendido ' ' '

D&elo secar al aire *no se debe calentarSumr&alo enla ca&a de coloración con cristal (ioleta *+=- por <>minutos La(e la placa en laca&a consoluciónde sul#ato de cobre al ,= ' Sa/ue la placa de la ca&a!d&ela secaral aire enposición (ertical ' Obser(econob&eti( ode inmersió n

Stap5!lococcus aureus$ 7lebsiella pneumoniae

En la tinción simple se realizó con dos .0/, muesras una de )ogur ) una de sarro denal$

•

Se agregó una goa de solución salina so%re la placa de pora o%(eos$   Luego se omó la muesra de sarro inroduciendo el mondadienes enre los

•

dienes, se homogenizo ) se realizó el e*endido$ ;espués se realizó la i(ación, cual se realiza con calor pasándolo o lameándolo

•

con el mechero$

• • •

Luego se realiza la inción con azul de meileno$ Se la'a con agua desilada secar al aire li%re$ Se realiza microscopia con el o%(ei'o F8, agregando aceie de inmersión endiendo al o%(ei'o de #118$

NOTA: los mismos pasos se realizan con el )ogur$

En la T$&"$4& N#-+'$*+  se uilizó$

na goa de ina china o irosina$

En la misma goa se inroduce le%siella sp$

Luego se hace un arrasrado con el porao%(eo

Se hace la microscopia al F8 endiene a #118$ En la T$&"$4& S#l#"'$*+ .le%siella sp/ • • •

Se aplica so%re la placa una goa de solución salina Luego se aplica 7le%siella sp$ En ese paso se omie la i(ación$

• • • •

Luego se iñe con crisal 'iolea Se de(a por 0 minuos Luego se la'a con sulao de ! .co%re/ al 01K$ Secar ) se hace la microscopia al F8 endiene a #118$

@/ RESULTADOS Y DISCUSIÓN/ Tinción simple Sarro El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. Al hacer la observación del frotis de sarro se pudieron ver reejadas en el microscopio !""#$, c%lulas bacterianas como cocos, bacilos, diplococos, espiro&uetas y cocobacilos. 'ara ello se utilizó la forma de tinción simple.

 (o)urt

'ara hacer la microscop*a con la muestra de yo)urt se utilizó la tinción simple en la cual se observa a !""# bacterias como estreptococos y lactobacilos las cuales se reejan en la ima)en. Es importante saber &ue en el yo)urt se encuentran presentes bacterias dado &ue, %stas utilizan como fuente de ener)*a la lactosa o az+car de la leche, liberando ácido láctico como producto de desecho, lo &ue provoca un incremento de acidez &ue hace a su vez &ue los productos de la leche se precipiten, formando un )el. a mayor acidez p/0$, tambi%n evita la proliferación de otras bacterias pató)enas. Encontramos en %ste tipo de tinción &ue se debe amear la muestra, esto se da con el propósito de 1jarla.

/ REGUNTAS DE CONSULTA 1/ C)
permie magniicar la imagen, lo cual depende

de la calidad de los lenes del o%(eo ) del ocular$ Cano el ocular como el o%(ei'o poseen un poder de aumeno deerminado$ El aumeno oal de la imagen o%ser'ada e+ui'ale a muliplicar el aumeno del lene del ocular por el aumeno del lene del o%(ei'o$

❖  Poder

de peneración o proundidad del oco- Es la propiedad +ue iene el

microscopio de permiir o%ser'ar 'arios planos del preparado con una misma posición de eno+ue$ ❖ Poder de deinición- Es la capacidad del microscopio de permiir o%ser'ar  imágenes claras de conornos n&idos ano en el cenro como en la perieria del campo 'isual$ ❖ Poder de resolución- !apacidad +ue orece el microscopio de permiir disinguir 0 punos ad)acenes o pró*imos, cu)a disancia enre s& es an pe+ueña +ue los hace parecer como uno solo ane el o(o humano$

2/ o!()# #s $%o!'+&'# )'$l$+! #l %$"!os"o$o #& #l #s')d$o d# l+ ,$olo-.+ Es imporane uilizar el microscopio )a +ue con él se pueden o%ser'ar cosas +ue a simple 'isa no podemos como lo son %acerias, microorganismos, células, e(idos ec$ Lo +ue 'a a permiir el esudio de esas a proundidad, es sin duda un elemeno indispensa%le en cual+uier la%oraorio a la hora de deerminar esrucuras %iológicas, ) comporamienos en los microorganismos$

@/ 9)8 !#l+"$4& #$s'# #&'!# #l od#! d# +)%#&'o d# los o,#'$*os 6 #l
/ El$()# o!()# #& l+ %#d$d+ #& ()# +)%#&'+ #l o,#'$*o d$s%$&)6# #l &%#!o d# +l+s d# %+!$os+ 6 -!+&os d# ol#& o,s#!*+dos/ Esa disminución se da precisamene por la relación in'ersamene proporcional +ue e*ise enre el campo de 'isión ) el aumeno del o%(ei'o, es decir +ue a medida +ue aumenemos los o%(ei'os endremos un menor campo de 'isión por lo cual 'eremos en menos proporción en los granos de polen$ Polen$

/ C)
 / Co&s)l'# los '$os d# %$"!os"o$os 6 s)s "+!+"'#!.s'$"+s !$&"$+l#s/ ❖ Microscopio

Simple- Es el +ue uiliza sólo una lene, es decir, es una lupa, su aumeno

depende del ipo de lene ) la graduación +ue esa posea, pero el aumeno +ue se puede lograr con ese microscopio para poder o%ser'ar o%(eos pe+ueños es mu) poco$ ❖ Microscopio pico- Ese ipo de microscopio es

e'olución del anerior, en él ha) 'arias

lenes superpuesas +ue se encuenran graduadas ) colocadas de al manera +ue el aumeno de amaño al 'er los o%(eos puede superar las dos mil 'eces el amaño real del o%(eo$ ❖ Microscopio

!ompueso- Es el microscopio más com3n$ Se uiliza para aumenar las

imágenes de o%(eos +ue no son 'isi%les a simple 'isa$ Su méodo de iluminación es luz 'isi%le ) por lo ano el aumeno es limiado$ ❖  Microscopios

Elecrónicos- Esos ienen un aumeno mucho ma)or +ue odos los

microscopios ópicos, pues esos microscopios elecrónicos pueden llegar a aumenar el amaño de un o%(eo, hasa un millón de 'eces .o más/, llegando a ener una resolución de 1$# nanómeros$ ❖ Microscopio

;igial- Es como un microscopio ópico radicional solamene +ue ahora

rae incorporado un disposii'o de acoplamieno ) carga en la cámara +ue se uiliza para 'isualizar muesras ) espec&menes de una orma más amplia ) cómoda a ra'és de un monior o panalla de compuadora$ ❖ Microscopio

de Tluorescencia- En ese ipo, la lene +ue com3nmene es de 'idrio es

remplazada por lenes de cuarzo, mienras +ue la iluminación es eecuada por medio de lámparas de mercurio, no uiliza ilros ) se o%ser'a usando placas oográicas$

 7/ o!()# l+ $%+-#& ++!#"# $&*#!'$d+ #& #l %$"!os"o$o "o%)#s'o Se 'en al re'és de%ido a +ue el o%(ei'o o el ocular del microscopio ac3a como un espe(o, ) am%ién de%ido al aumeno del o%(ei'o +ue se usa para 'er las cosas más grandes de su amaño normal, ) a lo largo de las lenes +ue componen el microscopio, se encuenran algunas con orma con'e*a$ <$ !ie res e(emplos de impacos posii'os ) negai'os de los microorganismos$ 9mpacos posii'os de los microorganismos-

❖  Algunos

Laco%acillus orman pare de la lora inesinal ) am%ién son 3iles para

producir )ogur$ ❖ Las

E$!oli ransgénicas pueden producir muchas proe&nas %enéicas para el hom%re

!omo por e(emplo hormonas pep&dicas$ ❖ Algunas

%acerias enri+uecen el suelo, por eso dicen +ue ienen unción geo+u&mica$

9mpacos negai'os de los microorganismos❖ La ma)or&a son alamene noci'as

para los seres 'i'os$

❖ Producen o*inas +ue pueden maar a los demás organismos$ ❖ Su

capacidad muagenica ane un ani%ióico, permie +ue se 'uel'an resisenes a los

ani%ióicos$ O$ UVué caracer&sicas les permien a los microorganismos ener una amplia disri%uciónW ❖ Los microorganismos se encuenran en odas pares, son ransporados por la corriene

de aire desde la supericie de la ierra hasa el conaco con la amósera$ ❖ Se localizan desde las pares más proundas de los océanos hasa las pares más alas

de las monañas$ ❖ Se

encuenran en los suelos ériles .por+ue proporcionan nirógeno ./ ) ransorman

la maeria orgánica/$ ❖ Son

arrasrados por arro)os ) r&os para ser deposiados en algunos lugares como-

lagos, lagunas, eseros$ ❖ Se

localizan en los desechos humanos, si esas son arrasradas por aguas se inecan

) causan enermedades$ ❖ A%undan donde se encuenra mucho alimeno, humedad ❖ Los

) una emperaura propicia$

microorganismos 'i'en en las mismas condiciones am%ienales +ue las personas

por lo +ue esamos rodeados de micro%ios, por e(emplo en el aire, en el alimeno, en la supericie de nuesros cuerpos, en las pares inerna ) oriicios corporales, nariz, %oca, esóago, o&do, ec$

❖ Aorunadamene

la gran ma)or&a de los micro%ios son inocuos para las pares sanas,

además de poseer deensas conra ellos

F$# ACTIVIDAD COMLEMENTARIA #$ !onsular la unción de los maeriales de la%oraorio mencionados en la prácica X# adiciona a+uellos +ue no ueron colocados en el lisado ) realiza los es+uemas correspondienes$ ?$ Señala en el siguiene di%u(o al menos #1 de los errores +ue se comeen en ese la%oraorio ) e*plica cual es el error ) +ué se de%er hacer para corregirlo

 Ane odo el orden ) el cumplimieno de las normas de %ioseguridad priman ane un área para ra%a(o o la%or seguro$

REGUNTAS COMLEMENTARIAS #$ Vué dierencias e*ise enre un desinecane ) un anisépico  Anisépicos ) desinecanes son producos +u&micos uilizados para maar o limiar el crecimieno de %acerias, 'irus ) oros agenes paógenos /  Es recuene +ue am%os érminos se uilicen de orma indisina pero en el ám%io de las ciencias de la salud ienen una imporane dierencia- los anisépicos son los desinados a un uso so%re e(ido 'i'o ) los desinecanes son uilizados so%re o%(eos ineres$ .hps-NNcuriosoando$comNdierenciaIanisepicoI)Idesinecane/

0$ En +ué consise el proceso de eserilización ) la imporancia de ese$ Es la eliminación complea de oda orma de 'ida micro%iana de o%(eos inanimados, inclu)endo esporas$ Puede conseguirse a ra'és de méodos &sicos, +u&micos o gaseosos$ !a%e desacar +ue la eserilización, es el resulado de un PRD!ESD ) no solo

la e*posición al agene eserilizane$  de ning3n modo de%e conce%irse como un méodo de e*posición a un agene micro%icida$ .hps-NNezzes%lac7$:ordpress$comN01#1N1=N15N5FN/

?$ E*pli+ue la imporancia de la paseurización de la leche La imporancia esá en la pre'ención del derimeno de la calidad, la leche no procesada o leche %ronca coniene dierenes microorganismos +ue pueden acidiicarla, corarla, ) , peor a3n, represenar un peligro para la salud de +uien la consume$ .;r$ Jes3s Al%ero Vuezada Gallo, Proesor in'esigador, 9ngenier&a de Alimenos, ni'ersidad 9%eroamericana, !iudad de Mé*ico/

F$ U+ué diiculades se endr&a si no se adiciona la saranina al inal de la inciónW Es un colorante de contraste (la safranina) solo puede teñir a las células vegetativas (decoloradas por el agua), por tal razón si no se adiciona este reactivo al final de la tinción no se puede identificar las células de tipo vegetal. (http://www.ugr.es/~poif/po!"ac/p"!iii/p"!iii!#!esporas.ht)

5$ E*pli+ue el undameno de la inción negai'a realizada en la prácica$ UVué ipo de inormación se o%ieneW El i n de rodear ) delinear las %acerias no eñidas u oros maeriales %iológicos$ ilizan dierenes méodos de inción negai'a para e'aluar esrucuras indi'iduales, an pe+ueñas como las 'es&culas sinápicas e incluso de gran amaño, como los microorganismos unicelulares$ Ese méodo es mu) 3il, aun+ue esá limiado por la presencia de un ondo oscuro +ue no permiirá la correca ideniicación de orma n&ida ) deallada de los componenes de dichas esrucuras En micro%iolog&a, la inción negai'a proporciona un resulado presuni'o de la presencia de !r)pococcus neoormans,

microorganismo

causane

de

meningiis

en

pacienes

con

inmunosupresión, siendo la écnica más uilizada para poner de manii eso su cápsula$ .hp-NN:::$medigraphic$comNpdsNin'disNirI01#FNir#F#%$pd /

2$ 9n'esigue ora écnica de inción seleci'a +ue permia o%ser'ar esas esrucuras %acerianas$

T$&"$4& d# $#5lJN##ls#& La inción de >iehlIeelsen es la écnica com3nmene usada en el diagnósico ruinario de u%erculosis$00,0? Es una écnica rápida, ácil ) de %a(o coso,0F lo +ue permie +ue se pueda realizar en casi cual+uier la%oraorio cl&nico$ Esa inción permie dierenciar a las %acerias en dos grupos- a+uellos +ue son capaces de resisir la decoloración con alcoholIácido ) a+uellos +ue no lo son$05 La sensi%ilidad de esa inción para idenii car %acilos ácidoIalcohol resisenes es del =FK$

T$&"$4& d# K!$-5'  La inción de Yrigh es una écnica +ue se emplea generalmene para la dierenciación de elemenos celulares de la sangre ) es clasii cada como una inción policromáica, dado +ue puede eñir compuesos ácidos o %ásicos presenes en una célula$01 Tue desarrollada por el paólogo James 6omer Yrigh en #O10 a parir de la modii cación de la )a e*isene inción de Romano:s7), uilizada para dierenciar  elemenos ormes de la sangre$0#

T$&"$4& d# +)l +l-od4& d# l+"'o3#&ol  El e*amen microscópico es de gran imporancia en micolog&a para la o%ser'ación de las dierenes especies de hongos de inerés cl&nico$ Se de%en uilizar inciones +ue logren preser'ar la inegridad de las esrucuras 3ngicas$#< Para la correca idenii cación de hongos de inerés cl&nico, )a sea con i nes de diagnósico o esudios a*onómicos, es necesario o%ser'ar las esrucuras 3ngicas con una ala calidad ) conrase@ para ello se uilizan di'ersos compuesos +u&micos +ue permian la inción enre la pared ) el cioplasma de las células 3ngicas$?# .hp-NN:::$medigraphic$comNpdsNin'disNirI01#FNir#F#%$pd /

=$ Realiza una lisa de %acerias +ue sineicen cápsulas$ Los limos•

Leuconostoc mesenteroides ransorma la sacarosa en de*rano, por un lado es

un conaminane e*remadamene moleso en el proceso de a%ricación de az3car  donde la a%undane espuma de los l&+uidos conaminados le 'alió el apodo de

4%aceria del deso'e de las ranas4 .'ea en ese clip el aspeco de un auenico deso'e de rana/ ) por el oro la %ase de la a%ricación de dos producos de alo 'alor agregado- susiuo del plasma sangu&neo ) gel para separaciones cromaográicas$ •

Streptococcus salivarium 6 Streptococcus mutans ransorma la sacarosa

en l#*+&os .polirucosa/, esos se i(an en los dienes ) consiu)en la %ase para •

la producción de ácidos +ue a'orecen las caries denales$ Los limos manienen en grupos a las %acerias . Zooglea) o %ien en pel&culas supericiales como en Acetobacter aceti su%sp$ xylinum, en ese caso el produco e*creado es celulosa +uien da la consisencia correosa +ue la lle'ó a ser  conocida como 4 %6"od#!%+ +"#'$4

CONCLUSIÓN El maerial de la%oraorio es esencial denro del área de micro%iolog&a, no solo de manera cl&nica sino am%ién en alimenos, indusrial ) am%ienal$ a +ue las prue%as para la ideniicación de %acerias, écnica de recuena de %acerias, la o%ser'ación de los microorganismos, culi'o de %acerias, prue%as de micolog&a, 'irológica, genéica %aceriana, écnicas serológicas, pueden 'ariar en el proceso, pero %ásicamene se uiliza el mismo maerial ) e+uipo, por eso es imporane conocer las caracer&sicas ) la écnica de mane(o adecuado para cada insrumeno empleado en el la%oraorio$ Es de suma imporancia conocer las écnicas de eserilización para e'iar la conaminación de agenes e*ernos a las prue%as realizadas, as& como e'iar +ue el personal se inecado por un microorganismo paógeno por eso es necesario +ue el maerial enga un proceso de limpieza procesamieno, manenimieno, super'isión de programas para la eserilización, carga de aparaos eserilizados, conrol de almacena(e de ar&culos procesados, disri%ución de ar&culos procesados, suminisro de ar&culos esériles, conrol de ar&culos contaminados ! descontaminación.

B$,l$o-!+3$+

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hp-NN:::$%iologia$edu$arN%aceriasNmicro<$hm hp-NN:::$higiene$edu$u)NceaN011
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hp-NN:::$medigraphic$comNpdsNin'disNirI01#FNir#F#%$pd 

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hp-NN:::$ugr$esNpomiNpomI%acNp%IiiiNp%IiiiI?Iesporas$hm

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