International Journal of Kimia Anorganik Volume 2010 (2010), Pasal ID 975756, 7 halaman DOI: 10.1155/2010/975756 Pasal Penelitian Reaksi dari Senyawa organologam antikanker Rutenium, [(6-p-simen) Ru (ATSC) Cl] PF6 dengan Human Serum Albumin Floyd A. Beck Ilmu Divisi, College Lyon, 2300 Highland Road, Batesville, AR 72501, USA Diterima 8 September 2009; Diterima 6 November 2009 Akademik Editor: Ralph Stephen
Copyright © 2010 Floyd Beck A.. Ini adalah sebuah artikel akses terbuka didistribusikan di bawah Creative Commons A ttribution License, yang memungkinkan tidak dibatasi penggunaan, distribusi, dan reproduksi dalam media apapun, asalkan karya asli benar dikutip.
Abstrak Reaksi dari [(6-p-simen) Ru (ATSC) Cl] PF6 (ATSC = 9-anthraldehyde thiosemicarbazone) dengan albumin serum manusia diselidiki pada temperatur yang berbeda menggunakan fluorescence dan spektrofotometri inframerah. K mengikat konstan,, untuk reaksi tersebut menggunakan beberapa metode yang berbeda. Menggunakan persamaan Stern-Volmer dimodifikasi, K ditetapkan menjadi 9,09 × 104,12.1 × 104, dan 13,1 × 104 M-1 pada 293 K, 298 K, dan 308 K, masing-masing. Sebuah analisis termodinamika menunjukkan bahwa reaksi spontan dengan? G yang negatif. Entalpi reaksi H = 16,5 kJ mol-1 dan entropi reaksi S = 152 Jmol-1K-1. Nilai H dan S menunjukkan bahwa kekuatan hidrofobik yang dominan dalam modus interaksi dan bahwa proses ini sebagian besar didorong entropi.
1. Pengantar kompleks Rutenium berbagai jenis aktif dipelajari sebagai metallodrugs seperti yang diyakini memiliki toksisitas rendah dan selektivitas yang baik untuk tumor [1]. Baru-baru ini, dua ruthenium-(III) kompleks juga telah berhasil menyelesaikan tahap I uji klinis, yaitu, Nami-A [2-5] (Nami-A, (ImH) [trans-Ru (III) Cl4Im (Me2SO)]; im = imidazol), dan KP1019, indazolium [tetrachlorobis (1H-indazole) ruthenate (III)] trans-[6-8]. Kinetika senyawa organologam menunjukkan pertukaran ligan yang berbeda dalam solusi
untuk kompleks koordinasi, serta motif struktural novel dan ruthenium organologam (II) kompleks-aren (dari jenis [( 6-aren) Ru (LL) Cl] +, LL = ligan ) juga sedang menarik minat meningkat sebagai senyawa antikanker [9, 10]. Kompleks seperti [(aren) Ru (en) Cl] + bahkan aktif dalam baris sel cisplatin-tahan [9]. Sementara diyakini bahwa DNA merupakan target utama kompleks ini, karena replikasi DNA merupakan bagian integral dari perkembangan penyakit ini, ada juga pengakuan bahwa aktivitas biologis yang diamati tidak selalu terkait dengan kemampuan mereka DNA-mengikat. Sebagai akibatnya, investigasi yang berusaha untuk meneliti interaksi dengan protein serum dan seluler mulai dilakukan [11-14]. Sebagai protein ekstraseluler utama dari sistem peredaran darah, serum albumin manusia (HSA), berfungsi sebagai pengangkut utama obat-obatan serta senyawa endogen seperti asam lemak karena dapat mengikat senyawa ini reversibel ke [, 15 16] ASM. Telah ditunjukkan bahwa distribusi, konsentrasi bebas, dan metabolisme berbagai obat dapat diubah secara signifikan sebagai akibat dari mengikat mereka untuk ASM. ASM juga sering meningkatkan kelarutan obat hidrofobik jelas dalam plasma. Sejak ASM berfungsi sebagai pembawa transportasi untuk obat, penting untuk mempelajari potensi interaksi obat dengan protein ini. Pengetahuan tentang mekanisme interaksi antara obat dan protein plasma adalah sangat penting bagi pemahaman tentang farmakodinamik dan farmakokinetik suatu obat atau prospek obat. Banyak protein assay interaksi dirancang di sekitar perubahan intensitas dan atau posisi chromophores utama protein pada konjugasi dengan zat lain. quenching Fluoresensi dan FTIR merupakan alat yang kuat dan metode penting untuk mempelajari interaksi molekul kecil dengan protein. Keduanya relatif mudah digunakan dan mampu merasakan konsentrasi kecil dari reaktan. Selain kedua teknik yang mampu mendeteksi perubahan lingkungan protein, perubahan khususnya di fl uoresensi tryptophan atau perubahan dalam pita amida saya absorbansi yang disebabkan oleh perubahan struktur protein. Komunikasi ini menggambarkan sifat interaksi antara sebuah kompleks rutenium organologam, [(6-psimen) Ru (thiosemicarbazone anthraldehyde) Cl] PF6, 1 (Gambar 1) dan ASM. 975756.fig.001 Gambar 1: Struktur [(6-p-simen) Ru (thiosemicarbazone anthraldehyde) Cl] PF6, 1. 2. Eksperimental Analytical grade pereaksi atau bahan kimia digunakan di seluruh. Semua bahan kimia termasuk pelarut diperoleh dari Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA) atau vendor komersial lainnya dan digunakan sebagai diterima. Kompleks logam disintesis seperti yang dijelaskan sebelumnya [17]. Air yang dimurnikan ganda yang digunakan dalam penelitian semua ber asal dari sistem Milli-Q (Millipore Inc). Solusi ASM disusun dalam buffer Tris (50 mM Tris, pH 7,40, 100 mM NaCl) dan disimpan dalam gelap pada suhu 4 ° C. Konsentrasi protein ditentukan secara spektrofotometri menggunakan absorptivitas molar 36 000-1 cm M-1 pada 280 nm [18]. Konsentrat solusi kompleks itu dibuat di sebuah campuran 70% DMSO dan buffer Tris. Spektrum fluoresensi direkam pada spektrofotometer Varian Cary Eclipse. Untuk percobaan fluoresensi titrasi, larutan 3,0 cm3 ASM (3 pM) ditempatkan dalam sebuah mangkuk yg dihiasi dgn ukiran kuarsa dan dititrasi dengan berbagai jumlah larutan terkonsentrasi dari kompleks menghasilkan solusi dengan rasio mol beragam kompleks untuk ASM. Konsentrasi kompleks berkisar 3-30 pM. Setelah setiap tambahan larutan tersebut dicampur selama 30 detik dan diizinkan untuk duduk pada suhu yang
tepat selama 5 menit sebelum pengukuran. Spektrum fluoresensi solusi diperoleh dengan menarik pada 295 nm dan pengukuran spektrum emisi 300-500 nm m enggunakan celah 5 nm. Suhu dikontrol menggunakan sel-tunggal Peltier aksesori. Inframerah (IR) spektrum di kisaran 1200-2000 cm-1 diperoleh dengan menggunakan ATR aksesori (dengan kristal berlian) pada 6700 spektrofotometer FTIR Nicolet dilengkapi dengan detektor KBr DTGS dan beam splitter KBr. Spektrum inframerah dari ASM, ASM ditambah kompleks (1:1 rasio molar), dan kompleks saja dicatat. Solusi ASM-kompleks yang diinkubasi selama 24 jam sebelum pengukuran. Absorbansi buffer adalah dikurangi dari spektrum dari solusi. Kemudian Spektrum perbedaan dihitung me nggunakan paket perangkat lunak instrument. 3. Hasil dan Diskusi 3.1. Interaksi 1 dengan ASM [(6-simen) Ru (ATSC) Cl] PF6, 1, (9-ATSC = thiosemicarbazone anthraldehyde) adalah senyawa antikanker terbukti efektif terhadap payudara (MCF-7 dan MDA-MB-231) dan HCT usus-116 dan baris sel HT 29) pada konsentrasi mikromolar rendah [17]. Reaksi 1 dengan ASM awalnya ditandai dengan spektrofotometri fluoresensi. Uranium adalah sebuah metode se derhana namun efektif untuk menyelidiki kekuatan dan cara mengikat molekul kecil untuk ASM. ASM memiliki struktur terkenal yang terdiri dari rantai polipeptida tunggal. Dari residu asam amino dalam rantai tersebut, triptofan tunggal (trp 214) bertanggung jawab atas sebagian besar fluoresensi intrinsik protein. ASM memiliki emisi fluoresensi yang kuat dengan puncak dekat 350 nm pada ek sitasi pada 295 nm. Emisi ini sensitif terhadap perubahan dalam lingkungan lokal tryptophan dan sehingga dapat dilemahkan dengan mengikat molekul kecil di atau dekat residu ini. Gambar 2 menunjukkan bahwa penambahan kompleks untuk hasil ASM pengurangan yang signifikan dalam intensitas fluoresensi dengan pergeseran biru untuk 330 nm ( = 17 nm). Perubahan ini menunjukkan bahwa konformasi protein dipengaruhi oleh mengikat ke kompleks logam. Pergeseran panjang gelombang ini kemungkinan disebabkan oleh lingkungan triptofan yang menjadi lebih nonpolar [19]. 975756.fig.002 Gambar 2: Pendar emisi ASM di hadapan meningkatnya jumlah 1. [ASM] = 3.0 pM; [Ru] = (a) 0, (b) 3.0, (c) 6.0, (d) 9.0, (e) 12,0, (f) 15,0, (g) 18,0, (h) 21,0 , (i) 24.0, (j) 27,0, dan (k) 30.0 pM. Suhu = 20 ° C. 3.2. Analisa Data Kuantitatif Titrasi 3.2.1. Analisis Nonlinier Sebuah penilaian kuantitatif dari data fluoresensi untuk menentukan kekuatan dan modus kemungkinan mengikat dapat dibuat dengan memperlakukan data menggunakan beberapa metode yang berbeda. quenching Fluoresensi dapat terjadi oleh apa yang sering digambarkan sebagai mekanisme statis atau mekanisme dinamis. Kuantitatif, ini dapat dijelaskan oleh persamaan Stern-Volmer F0F = 1 + KSV [Ru] = 1 + kq0 [Ru], (1) mana F0 dan F adalah intensitas fluoresensi ASM dalam ketiadaan dan kehadiran 1 (1 direpresentasikan sebagai Ru) dan KSV adalah quenching Stern-Volmer konstan. Seperti Gambar 3 menunjukkan, sebidang F0 / F versus [Ru] tidak sepenuhnya linear seperti yang diharapkan karena ada penyimpangan positif
jelas pada konsentrasi kompleks yang lebih tinggi. Ada dua penjelasan umum untuk penyimpangan ini. Pertama ASM dapat dipadamkan melalui kedua mekanisme quenching umum operasi secara bersamaan. 975756.fig.003 Gambar 3: Stern-Volmer plot untuk pendinginan dari fluoresensi ASM oleh 1 pada temperatur yang berbeda. Atau mungkin ada lebih dari satu situs pengikatan independen atas ASM dan mereka tidak semua diakses kompleks. Ketika kedua quenching statis dan dinamis ini terjadi, data quenching dapat diobati dengan menggunakan persamaan berikut: F0F = (1 + KS [Ru]) (1 + KD [Ru]) (2) yang mengarah pada manipulasi F0F = 1 + K1 [Ru] + K2 [Ru] 2, (3) mana K1 = KS + KD dan K 2 = KSKD (KS dan KD adalah konstanta quenching statis dan dinamis). Sifat kedua-order (3) tercermin dalam lengkungan plot Stern-Volmer. Suatu usaha dilakukan agar sesuai dengan data eksperimental untuk (3) menggunakan add-in Solver dalam Microsoft Excel. Pada 20 ° C, persamaan kuadrat tidak bisa diselesaikan karena jumlah imajiner yang akan terjadi. Namun pada 25 ° C dan 35 ° C, nilai 186.987 dan 5.321 M-1 dan 604.962, dan 5.785 M-1, masing-masing, yang diperoleh sesuai dengan nilai untuk KD dan KS. Yang sesuai dengan nilai yang konstan dapat menyimpulkan dengan menghitung laju orde kedua konstan, kq, dari persamaan Stern-Volmer . Jika KD adalah 186.987 M-1, kq dihitung menjadi 1,87 × 1013 M-1 s-1 , dengan asumsi 0 = 10 ns [ 20] untuk ASM. Pada 35 ° C kq adalah 6,04 × 1013 M-1 s-1. Nilai-nilai ini jauh lebih besar dari quenching tumbukan maksimum yang konstan 2.0 × 1010-1 M-1 [21]. Jadi nilai 186.987 dan 604.962 ditugaskan untuk KS berarti bahwa bahwa kontribusi statis untuk memadamkan dominan. 3.2.2. Modifikasi Stern-Volmer Analisis Dengan asumsi bahwa proses quenching didominasi statis (pada konsentrasi rendah 1), konstanta mengikat untuk reaksi dapat diperoleh dari analisis (MSV) diubah Stern-Volmer. Ini melibatkan memperlakukan data menggunakan F0F0 - F = 1f · 1K [Ru] + 1f, (4) dimana f = fraksi dari fluorophore yang awalnya diakses ke kompleks logam dan K adalah quenching efektif konstan untuk diakses fluorophore yang dapat diambil sebagai suatu konstanta yang mengikat (dengan asumsi penurunan fluoresensi berasal dari interaksi dari ASM dengan 1. Gambar 4 menunjukkan plot F0 / (F0 - F) sebagai fungsi dari 1 / [Ru] Nilai pengikatan konstan (diberikan dalam Tabel 1) diperoleh dari rasio intercept untuk lereng Rerata fraksional.. aksesibilitas atas rentang temperatur yang dikaji adalah 1,2. Ini menunjukkan bahwa mungkin ada lebih dari satu situs mengikat bagi 1 dan bahwa lingkungan molekul tryptophan yang mudah diakses kompleks, paling tidak pada awalnya. tab1
Tabel 1: konstanta Binding untuk interaksi [(simen) Ru (ATSC) Cl] PF6 dengan ASM. 975756.fig.004 Gambar 4: Plot dari F0 Stern-Volmer dimodifikasi persamaan / (F0 - F) versus 1 [Ru]. 3.2.3. Analisis Scatchard Untuk lebih menguji kekuatan mengikat, metode Scatchard digunakan untuk menganalisis data. Metode ini memiliki keterbatasan (terutama sejak transformasi mendistorsi kesalahan eksperimental) tetapi itu tetap merupakan metode umum untuk analisis dan penyajian data yang mengikat. Metode ini didasarkan pada persamaan berikut: RCF = nK + rK, (5) dimana r adalah jumlah mol 1 terikat per mol ASM, Cf adalah konsentrasi molar kompleks logam bebas, n adalah jumlah situs yang mengikat, dan K adalah konstanta intrinsik mengikat. Analisis (dari sebidang r / Cf versus r, Gambar 5) menunjukkan bahwa ada sebuah situs mengikat tunggal pada protein sebagai rata-rata 1,16 n selama rentang suhu dipelajari. 975756.fig.005 Gambar 5: The plot Scatchard untuk mengikat 1 sampai ASM. 3.2.4. Lineweaver-Burk Analisis Metode lain yang umum dalam literatur untuk analisis data yang mengikat adalah penggunaan persamaan Lineweaver-Burk 1F0-F = 1F0KD [Ru] + 1F0. (6) Persamaan ini agak mirip dengan persamaan Stern-Volmer dimodifikasi dan sebidang (-F F0) -1 versus 1 / [Ru] (Gambar 6) memberikan KD konstan mengikat sebagai rasio mencegat ke lereng. Seperti yang terlihat pada Tabel 1 metode ini memberikan nilai yang sama untuk mengikat konstanta intrinsik. 975756.fig.006 Gambar 6: Linweaver-Burk plot (1 / (F0 - F) versus 1 [Ru] /) untuk reaksi 1 dengan ASM. Sehingga Tabel 1 menunjukkan, semua metode analisis memberikan nilai yang sebanding untuk konstanta mengikat. Nilai 105 adalah mengenai urutan besarnya lebih besar daripada senyawa logam anorganik. Kompleks Ni (OAc) 2L2 · 2H2O dan Cu (OAc) 2L2 · 2H2O (L = N, N'-dibenzylethane-1 ,2diamina) memiliki konstanta mengikat sebesar 1,97 × 104 M-1 dan 2,36 × 104 M-1 , masing-masing [22, 23]. Keppler telah melaporkan bahwa Pt (II) kompleks dari alkohol amino memiliki konstanta asosiasi dengan ASM mulai dari 1,0 × 103-2,4 × 104-M 1 [23]. Peningkatan konstanta mengikat dengan suhu menunjukkan bahwa beberapa interaksi kovalen-tipe yang bermain dalam mengikat. Nilai untuk f dan n (dekat persatuan) menyatakan bahwa alasan untuk lengkungan ke atas plot Stern-Volmer rumit dan sulit untuk menjelaskan. quenching itu bisa diawali dengan pembentukan sebuah kompleks tanah negara, tapi fakta bahwa peningkatan suhu konstanta mengikat dengan jelas menyatakan bahwa dinamis (tumbukan) mekanisme berperan dalam fluoresensi quenching terutama pada konsentrasi logamkompleks tinggi. Hal ini disarankan oleh Gambar 2 juga karena situs mengikat protein yang awalnya terkena 1 diaktifkan sebuah formasi aduk menjadi semakin dikubur sebagai lebih 1 telah ditambahkan.
3.3. Analisis Binding Mode Dalam protein-ligan mengikat sejumlah gaya antarmolekul umum mungkin memainkan peran penting. Ini termasuk ikatan hidrogen, van der Waals interaksi serta elektrostatik dan hidrofobik (dan lainnya noncovalent) interaksi. Analisis termodinamika, yang termasuk menentukan entalpi tersebut (H °) dan entropi (S °) reaksi, memberikan wawasan mode mengikat. Konstanta mengikat pada berbagai temperatur yang digunakan untuk menghitung parameter-parameter ini dengan menggunakan persamaan van't Hoff Dalam K =- H0RT + S0R,? G ° =- RTln K. (7) Hasil dari plot ln K terhadap 1 / T (Gambar 7, yang didasarkan pada nilai-nilai K dari analisis Stern-Volmer diubah) diberikan dalam Tabel 2. Reaksi ASM dengan 1 adalah spontan yang ditunjukkan dengan nil ai negatif untuk °? G. Baik ° H dan S ° adalah positif. Dalam interaksi protein-ligan situasi ini biasanya disebabkan [24] untuk interaksi hidrofobik menjadi kontributor utama untuk mengikat. Sebuah nilai positif bagi S juga berhubungan dengan interaksi elektrostatik dan sejak kompleks logam dibebankan, interaksi tersebut tidak dapat dikesam pingkan. Nilai besar dari 152 Jmol-1K-1 untuk perubahan entropi juga menunjukkan bahwa proses pengikatan sebagian besar didorong entropi. Mungkin itu sebagai perubahan lingkungan triptofan dari (maksimum emisi dekat 350 nm) polar ke keadaan yang lebih nonpolar (emisi maksimum 325 nm dekat), memerintahkan molekul air dikeluarkan untuk membuat saku hidrofobik dan seluruh sistem menjadi lebih acak. tab2 Tabel 2: Parameter Termodinamika untuk pengikatan [(simen) Ru (ATSC) Cl] PF6 dengan ASM. 975756.fig.007 Gambar 7: The plot van't Hoff menggunakan konstanta kesetimbangan dari analisis Stern-Volmer dimodifikasi. 975756.fig.008 Gambar 8: FT-IR spektrum (a) HSA bebas dan (b) spektrum perbedaan ASM diperoleh dengan mengurangkan spektrum kompleks logam dari larutan logam kompleks-ASM. [ASM] = [Ru] = 3 pM; inkubasi 24-jam. Tidak ada preseden literatur untuk kompleks seperti 1 berinteraksi dengan ASM, namun ada kemungkinan bahwa kovalen mengikat ke pusat ruthenium tidak terjadi. Tingkat aquation ini untuk senyawa serupa sangat tinggi (meskipun angka ini tergantung pada chelating ligan) dan kompleks aquated umumnya diyakini akan lebih reak tif. Telah diketahui bahwa DNA mengikat sangat k uat (melalui residu guanin) untuk kompleks tersebut dengan bantuan kekuatan hidrofobik [25]. Reaksi serupa dengan ASM melalui cincin indola pada triptofan akan lemah namun karena akan membutuhkan deprotonasi nitrogen indola. Dengan analogi dengan basa purin DNA, hal ini kurang kemungkinan di bawah pH fisiologis. Namun, dengan data di tangan tidak jelas bahwa kita kuantitatif dapat memisahkan kontribusi dari setiap interaksi kovalen. Namun ide ini adalah bagian dari strategi desain kelas ini senyawa antikanker: penggabungan fitur yang hidrofobik meningkatkan koordinasi dan kovalen simultan dalam rangka mengoptimalkan biologis penargetan. 3.4. Spektrofotometri Inframerah
Suatu penilaian kualitatif dari reaksi 1 dengan ASM juga dilakukan dengan menggunakan spektrofotometri inframerah. Spektrum inframerah protein pameran amida saya band (karena peregangan dari grup C O = fungsional dari gugus peptida) antara 1600 dan 1700 cm-1. Band ini dikaitkan dengan struktur sekunder dari protein [26] dan gangguan obligasi pada interaksi dengan senyawa logam dapat memberikan informasi tentang mengikat. Gambar 7 menunjukkan spektra inframerah sebelum dan sesudah inkubasi ASM dengan 1. Untuk rasio molar 1:1 dari HSA ke 1, amida saya band menggeser posisi 1.653,2-1650,7 cm-1. Hal ini menunjukkan bahwa struktur sekunder terganggu terasa pada interaksi dengan 1 dan mungkin disebabkan oleh aduk membentuk. 4. Kesimpulan ruthenium senyawa organologam terbukti menjadi target bermanfaat sebagai antikanker dan agen antimetastic. Hal ini diyakini bahwa protein bisa menjadi sasaran biologis senyawa ini dan kami telah menunjukkan bahwa senyawa dengan ligan thiosemicarbazone dapat mengikat kuat untuk albumin serum manusia. Akibatnya adalah wajar untuk menunjukkan bahwa kompleks seperti 1 dapat lebih dikembangkan untuk aplikasi biologis. Pengakuan Proyek ini digambarkan didukung oleh Amerika Serikat NIH Grant no. RR P20-16460 dari Jaringan IDEA dari Biomedical Research Excellence (INBRE) Program Pusat Penelitian Sumber Daya Nasional. Referensi 1. G. Sava, S. Pacor, A. Bergamo, M. Cocchietto, G. Mestroni, dan E. Alessio, "Dampak kompleks rutenium pada tumor eksperimental: Ketidakrelevanan sitotoksisitas untuk penghambatan metastasis," Interaksi Chemico-Biologi, vol. 95, no. 1-2, hlm 109-126, 1995. 2. G. Sava dan A. Bergamo, "senyawa Rutenium berbasis dan mengontrol pertumbuhan tumor (review)," International Journal of Oncology, vol. 17, no. 2, hal 353-365, 2000. 3. JM Rademaker-Lakhai, D. van den Bongard, D. Pluim, JH Beijnen, dan JH Schellens, "A tahap I dan studi farmakologi dengan imidazolium-trans-DMSO-imidazol-tetrachlororuthenate, sebuah novel ruthenium agen antikanker," Clinical Cancer Research , vol. 10, no. 11, hal 3717-3727, 2004. 4. G. Sava, R. Gagliardi, A. Bergamo, E. Alessio, dan G. Mestroni, "Pengobatan metastasis tumor tikus padat oleh Nami-A: perbandingan dengan cisplatin, cyclophosphamide dan dacarbazine," antikanker Research, vol. 19, no. 2, hal 969-972, 1999. 5. A. Bergamo, B. Gava, E. Alessio, et al., "Nami Rutenium berbasis tipe A kompleks dengan pengurangan metastasis vivo selektif dan dalam penghambatan invasi vitro tidak berhubungan dengan sitotoksisitas sel," International Journal of Oncology, vol. 21, no. 6, hal 1331-1338, 2002. 6. CG Hartinger, S. Zorbas-Seifried, MA Jakupec, B. Kynast, H. Zorbas, dan BK Ke ppler, "Dari bangku untuk pengembangan klinis samping tempat tidur-praklinis dan awal dari agen antikanker tetrachlorobis indazolium trans-[(1H-indazole) ruthenate (III)] (KP1019 atau FFC14A), "Journal of Biochemistry anorganik, vol. 100, no. 5-6, hlm 891-904, 2006. 7. S. Kapitza, M. Pongratz, MA Jakupec, et al., "Heterosiklik kompleks ruthenium (III) menginduksi
apoptosis dalam sel karsinoma kolorektal," Journal of Cancer Research and Clinical Oncology, vol. 131, no. 2, hal 101-110, 2005. 8. ED Kreuser, BK Keppler, KAMI Berdel, A. Piest, dan E. Thiel, "interaksi antitumor Sinergis antara kompleks rutenium baru disintesis dan sitokin dalam baris sel kanker usus besar manusia," Seminar dalam Onkologi, vol. 19, no. 2, suplemen 3, hlm 73-81, 1992. 9. RE Morris, RE Aird, P. Murdoch, et al., "Penghambatan pertumbuhan sel kanker oleh ruthenium (II) kompleks aren," Journal of Medicinal Chemistry, vol. 44, no. 22, hal 3616-3621, 2001. 10. O. Novakova, J. Kasparkova, Bursova V., et al, "konformasi DNA dimodifikasi oleh monofungsional (II) Ru aren:. Pengakuan oleh protein DNA mengikat dan perbaikan. Hubungan dengan sitotoksisitas, "Kimia & Biologi, vol. 12, no. 1, hal 121-129, 2005. 11. A. Casini, A. Guerri, C. Gabbiani, dan L. Messori, "karakterisasi biofisik dari adduct terbentuk antara metallodrugs antikanker dan protein yang dipilih: wawasan baru dari difraksi X-ray dan studi spektrometri massa," Journal of anorganik Biochemistry, vol. 108, no. 5-6, hlm 995-1006, 2002. 12. J. Will, A. Kyas, WS Sheldrick, dan D. Wolters, "Identifikasi (6-aren) ruthenium (II) situs binding protein dalam sel E. coli dengan kromatografi cair gabungan multidimensi dan ESI spektrometri massa tandem: mengikat spesifik [(6-p-simen) RuCl2 (DMSO)] untuk protein stres diatur dan untuk helicases, "Journal of Biological Anorganik Kimia, vol. 12, no. 6, hal 883-894, 2007. 13. A. Casini, G. Mastrobuoni, M. Terenghi, et al, "obat antikanker Rutenium dan protein:. Suatu studi tentang interaksi dari ruthenium (III) imidazolium kompleks tetrakloro trans-[(dimetil sulfoxide) (imidazole) ruthenate (III )] dengan lisozim ayam putih telur dan kuda jantung sitokrom c, "Journal of Biological Anorganik Kimia, vol. 12, no. 8, hal 1107-1117, 2007. 14. A. Casini, C. Gabbiani, E. Michelucci, et al, "Menjelajahi metallodrug-interaksi protein dengan spektrometri massa: perbandingan antara kompleks koordinasi platina dan ruthenium senyawa organologam,". Journal of Biological Anorganik Kimia, vol. 14, no. 5, hal 761-770, 2009. 15. PA Zunszain, J. Ghuman, T. Komatsu, E. Tsuchida, dan S. C urry, "Crystal analisis struktur albumin serum manusia dikomplekskan dengan asam hemin dan lemak," BMC Biologi Struktural, vol. 3, pasal 6, 2003. 16. B. Honore, "perubahan konformasi dalam serum albumin manusia disebabkan oleh ligan mengikat," Farmakologi dan Toksikologi, vol. 66, suplemen 2, hal 7-26, 1990. 17. FA Beck, G. Leblanc, J. Thessing, et al, "ruthenium kompleks organologam dengan ligan thiosemicarbazone:. Sintesis, struktur dan sitotoksisitas [(6-p-simen) Ru (NS) CI] + (NS = 9anthraldehyde thiosemicarbazones), "Kimia anorganik Communications, vol. 12, no. 11, hal 1094-1098, 2009. 18. S. Krimm dan J. Bandekar, "getaran spektroskopi dan konformasi peptida, polipeptida, dan protein," Kemajuan Protein Kimia, vol. 38, hlm 181-364, 1986. 19. J.-S. Mandeville, E. Froehlich, dan HA Tajmir-Riahi, "Studi interaksi kurkumin dan genistein dengan albumin serum manusia," Jurnal Farmasi dan Analisis Biomedis, vol. 49, no. 2, hal 468-474, 2009. 20. JR Lakowicz dan JG Weber, "Quenching dari fluoresensi oleh oksigen. Probe untuk fluktuasi struktural dalam makromolekul, "Biokimia, vol. 12, no. 21, hal 4161-4170, 1973. 21. WR Ware, "Oksigen pendinginan dari fluoresensi dalam larutan: suatu studi eksperimental dari proses difusi," The Journal of Fisik Kimia, vol. 66, no. 3, hlm 455-458, 1962. 22. S.-S. Wu, W.-B. Yuan, H.-Y. Wang, Q. Zhang, M. Liu, dan K.-B. Yu, "Synthesis, struktur kristal dan
interaksi dengan DNA dan ASM dari (N, N'-dibenzylethane-1 ,2-diamina) kompleks logam transisi," Journal of anorganik Biochemistry, vol. 102, no. 11, hal 2026-2034, 2008. 23. SS Aleksenko, CG Hartinger, O. Semenova, K. Meelich, AR Timerbaev, dan BK Keppler, "Karakterisasi interaksi antara albumin serum manusia dan platinum alkohol menghambat tumor-amino (II) kompleks menggunakan elektroforesis kapiler," Journal of Chromatography A, vol. 1155, tidak. 2, hal 218-221, 2007. 24. PD Ross dan S. Subramanian, "Termodinamika reaksi asosiasi protein: Pasukan berkontribusi terhadap stabilitas," Biokimia, vol. 20, no. 11, hal 3096-3102, 1981. 25. O. Novakova, H. Chen, O. Vrana, A. Rodge r, PJ Sadler, dan V. Brabec, "DNA i nteraksi dari monofungsional organologam (II) kompleks antitumor ruthenium di teng ah sel-bebas," jilid Biokimia,. 42, no. 39, hlm 11544-11554, 2003. 26. DM Byler dan H. Susi, "Pemeriksaan struktur sekunder dari protein melalui FTIR deconvolved," biopolimer, vol. 25, no. 3, hlm 469-487, 1986.
