UNIVERSIDAD BIBLIOTECA DE ALEJANDRIA
INSTRUCTIVO DE OPERACIÓN, CALIBRACIÓN, VERIFICACIÓN Y AJUSTE AJUSTE DEL DEL EQUIPO EQUIPO ESPECTR ESPECTROFOT OFOT METRO UV-VIS 1700 SHIMADZU
Año 53 A. C
ACT:
1
INSTRUCTIVO DE OPERACIÓN, CALIBRACIÓN, VERIFICACIÓN Y AJUSTE DEL EQUIPO ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS 1700 SHIMADZU
Elaboró
Hefestión
Revisó:
Balacro
Aprobó: Alejandro Magno
Fecha
53 A.C.
Fecha
53 A.C.
Fecha
53 A.C.
1/21
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Año 53 A. C
ACT:
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1
1. OBJETO Este instructivo describe las acciones a desarrollar para la operación, calibración, verificación y ajuste del equipo Espectrofotómetro UV-VIS 1700 Shimadzu.
2. ALCANCE Es aplicable al equipo Espectrofómetro UV-VIS 1700 Shimadzu ubicado en la instalaciones de la empresa.
3. GLOSARIO DE TÉRMINOS •
Absorbancia : Medida de cuanta radiación ultravioleta o visible es absorbida por una muestra.
•
Ruido : Señales aleatorias producidas por un número de componentes en el espectrofotómetro, incluido el detector y los componentes electrónicos que procesan la señal.
•
Fluctuación: Rango de oscilación de la línea base, excluyendo los picos de ruido.
•
Tolerancia: Valores extremos de un error permitido por las especificaciones, las regulaciones, etc., para un instrumento de medición dado.
Descripción de los modos básicos de operación: •
Modo Fotométrico: Se utiliza para medir las absorbancias o transmitancias a longitudes de ondas fijas. También es posible cuantificar los resultados por el método del factor-K, el cual es un método simple de cuantificación.
•
Modo Espectral: En este modo se realiza una medición espectral. Hay tres formas de medición disponibles: Abs, %T y rayo sencillo E (energía). El espectro puede ser grabado en la memoria para luego ser sometido a diferentes procesamientos de datos en el modo de procesamientos de datos.
•
Modo de Cuantificación: Permite elaborar las curvas de calibración, hasta con tres longitudes de onda.
•
Modo Cinético: Utilizado para determinar el cambio de absorbancia o % de transmitancia con el tiempo a una longitud de onda fija. Con este modo se logra hacer determinaciones de actividad enzimática.
•
Modo de Cuantificación Multicomponente: En este modo se logra cuantificar diferentes componentes.
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ACT:
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4. DOCUMENTOS APLICABLES •
Formato para resultados de calibración del equipo Espectrofotómetro Shimadzu UV-VIS 1700.
•
Formato para resultados de verificación del equipo Espectrofotómetro Shimadzu UV-VIS 1700.
•
Método de Ensayo Estándar SM 3500 Fe-B de las normas APHA-AWWA-WPCF.
5. CONDICIONES GENERALES •
La información referente al patrón de trabajo se encuentra documentada y disponible en un archivo especial existente en el laboratorio de patrones cuya consulta puede hacerse por nombre correspondiente al equipo.
•
Se dispone de un listado actualizado de los patrones y materiales de referencia utilizada para las diferentes actividades de calibración de todos los equipos e instrumentos, que se encuentran en control metrológico, donde se relacionan los aspectos de identificación, control y aseguramiento de cada uno de ellos. Para el caso del laboratorio, este listado se registra en el formato específico de cada equipo.
6. DESCRIPCIÓN DEL EQUIPO •
El espectrofotómetro consta de un compartimiento de porta-celda, cavidad con instrumentación óptica, lámparas de deuterio y tungsteno, pantalla y teclado.
•
Celda patrón sellada de Cloruro de Holmio, N°01-1 N°01-1 80207-90
•
Software UV PROBE 2.01.
7. DESARROLLO 7.1 OPERACIÓN El analista del Laboratorio a.
Oprime el botón de encendido del equipo, y levanta la pantalla.
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NOTA 1: AUTOMÁTICAMENTE EL EQUIPO COMENZARÁ UN AUTOCHEQUEO AUTOCHEQUEO Y COLOCARÁ UNA ESTRELLA EN CADA PARAMETRO QUE QUE SE ENCUENTRA TRABAJANDO SATISFACTORIAMENTE . P OSTERIORMENTE OSTERIORMENTE SE UBICARÁ EN LA PANTALLA MODE. E L TIEMPO REQUERIDO PARA ESTE PROCESO ES INFERIOR A LOS TRES MINUTOS , AL CABO DEL CUAL, SE OBSERVARÁN LOS 8 MODOS POSIBLES DE SELECCIONAR .
b.
Oprime la tecla F1 para seleccionar PARAMETROS .
c.
Oprime la tecla F2, correspondiente a SET.
d.
Selecciona el número del archivo donde tenga almacenada la curva de interés y oprime la tecla ENTER.
e.
Coloca las celdas requeridas para ajustar el cero, y oprime la tecla AUTO ZERO.
f.
Coloca la muestra en la celda correspondiente y oprime la tecla START.
NOTA 2: E 2: E L EQUIPO REPORTARÁ LOS DATOS DE ABS Y CONCENTRACIÓN SOLICITADOS .
g.
Vuelve a la pantalla principal oprimiendo las teclas RETURN, MODE, y F3.
7.2 CALIBRACION 7.2.1 Fluctuación de la Línea Base y Ruido El Analista y/o Metrólogo del Laboratorio a.
Se ubica en la pantalla MODE, con las teclas RETURN, MODE, y F3.
b.
Selecciona SPECTRUM oprimiendo la tecla 2.
c.
Selecciona SCANNING RANGE oprimiendo la tecla 2.
d.
Introduce los límites de 1100 y 200 nm, oprimiendo 1100, ENTER, 200, y ENTER.
e.
Selecciona REC. RANGE oprimiendo la tecla 3.
f.
Introduce los límites de absorbancia de –0.01A y 0.01 A, oprimiendo - 0.01, ENTER, 0.01, y
ENTER.
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ACT:
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1
i.
Selecciona N°OF SCANS oprimiendo la tecla 5.
j.
Oprime la tecla 1 y ENTER.
k.
Selecciona DISPLAY MODE oprimiendo la tecla 6, para escoger la opción SEQUENTIAL .
l.
Verifica que los porta-celda estén vacíos.
m.
Oprime la tecla AUTO ZERO.
n.
Oprime START.
NOTA 3: D 3: D ESPUÉS ESPUÉS DE ESTE COMANDO EL EQUIPO REALIZA UN BARRIDO POR TODO EL ESPECTRO .
o.
Verifica que la fluctuación de la línea base no sea superior a 0.002 ABS y de ruido 0.004 0.004 ABS.
p.
Registra la máxima fluctuación en la absorbancia de la línea base, en el formato indicado. Moviéndose con las ← → desplaza horizontalmente la barra de longitud de onda y se registra la absorbancia.
q.
Oprime la tecla F2 y registra el mayor valor del pico en el formato indicado.
NOTA 4: E 4: E N CASO DE NO ENCONTARSE PI COS , SE REGISTRA CERO EN EL FORMATO .
r.
Si la fluctuación de la línea base y/o de ruido están por fuera de la tolerancia indicada, realiza el Ajuste (numeral 7.4.1).
s.
Regresa al menú principal, oprimiendo las teclas RETURN, MODE, y F3.
7.2.2
Exactitud de la longitud de onda
El Analista del Laboratorio NOTA 5: PARA REALIZAR LAS ACTIVIDADES DESCRITAS EN ESTE NUMERAL ES NECESARIO HABER REALIZADO EL NUMERAL 7.2.1.
a.
Se ubica en la pantalla MODE, oprimiendo las teclas RETURN, MODE, y F3.
b.
Selecciona SPECTRUM oprimiendo la tecla 2.
c.
Selecciona SCANNING RANGE oprimiendo la tecla 2.
d.
Introduce los límites de absorbancia de 650 y 250 nm, nm, oprimiendo 650, ENTER, 250, y
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ACT:
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1
f.
Introduce los límites de 0.0 A y 2.00 A, oprimiendo las teclas 0, ENTER, 2, y ENTER.
g.
Selecciona SCAN SPEED oprimiendo la tecla 4.
h.
Introduce la velocidad SLOW, oprimiendo las teclas 4, y ENTER.
i.
Selecciona N°OF SCANS oprimiendo la tecla 5
j.
Introduce el valor de 1, y ENTER.
k.
Selecciona DISPLAY MODE oprimiendo la tecla 6, para escoger la opción SEQUENTIAL .
l.
Oprime la tecla GO TO WL, 550, y ENTER.
m. Oprime la tecla AUTO ZERO n.
Coloca la celda de Oxido de Holmio en el porta-celda de la muestra.
NOTA 6: M ANIPULE ANIPULE CON CUIDADO LA CELDA CELDA PATRÓN DE CLORURO DE HOLMIO , Y SIEMPRE LÍMPIELA CON UN PAÑO SUAVE SUAVE ANTES DE COLOCARLA EN EL PORTACELDAS .
o.
Oprime START.
NOTA 7: D 7: D ESPUÉS ESPUÉS DE ESTE COMANDO EL EQUIPO REALIZA UN BARRIDO EN LA REGIÓN SELECCIONADA SELECCIONADA.
p.
Oprime la tecla F2 para obtener los picos.
q.
Verifica que las desviaciones están dentro de la tolerancia de acuerdo con la Tabla 1.
r.
Registra los datos de longitud de onda, de la tabla 1 en el formato indicado.
s.
Regresa al menú principal, oprimiendo las teclas RETURN, MODE, y F3. TABLA 1. Picos del patrón de Cloruro de Holmio.
Longitud de Onda (nm)
Tolerancia (nm)
287.5
±
360.9 418.7
±
536.5
0.5
0.7 ± 0.5 ± 0.4
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7.2.3
Año 53 A. C
ACT:
7/21
1
Repetibilidad Fotométrica (reproducibilidad espectral)
El Analista del Laboratorio NOTA 8: PARA REALIZAR LAS ACTIVIDADES DESCRITAS EN ESTE NUMERAL ES NECESARIO HABER REALIZADO LOS NUMERALES 7.2.1 7.2.1 Y 7.2.2.
a.
Se ubica en la pantalla MODE, oprimiendo las teclas RETURN, RETURN, MODE, y F3.
b.
Selecciona PHOTOMETRIC oprimiendo la tecla 1
c.
Oprime la tecla GO TO WL, 536.5 y ENTER.
d.
Coloca la celda de Cloruro de Holmio en el porta-celda porta-celda de la muestra.
e.
Oprime START.
f.
Registra en el formato indicado el mayor valor de la columna ABS obtenido de las filas 1-2, 13, 1-4 y 1-5.
NOTA 9: L 9: LOS VALORES NO 0.003 ABS. NO DEBEN SER MAYORES DE 0.003 ABS.
g.
Regresa al menú principal, oprimiendo oprimiendo las las teclas RETURN, MODE, y F3.
h.
Guarda la celda de Cloruro de de Holmio.
i.
Coloca el rótulo de calibración diligenciado en el equipo.
El Supervisor del Laboratorio.
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ACT:
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1
NOTA 10: COMO EL FORMATO PARA RESULTADOS DE VERIFICACIÓN SIRVE PARA MULTIPLES VERIFICACIONES , ESTE SE DEBERÁ ARCHIVAR EN LA HOJA DE VIDA CUANDO SE LLENE COMPLETAMENTE .
7.4. AJUSTE 7.4.1 LINEA BASE El Analista y/o Metrólogo del Laboratorio a.
Oprime las teclas RETURN dos veces y F1 para corregir línea base.
NOTA 11: E 11: E SPERA SPERA UNOS MINUTOS HASTA QUE EL EQUIPO CORRIJA LA LÍNEA BASE .
b.
Oprime la tecla START y permite que realice el barrido.
c.
Verifica que la fluctuación de la línea base no sea superior a 0.002 ABS, ni el ruido mayor a 0.004 ABS.
d.
Registra la máxima fluctuación de la línea base, en el formato indicado.
e.
Oprime la tecla F2 y registra el mayor valor del pico en el formato indicado.
NOTA 12: E 12: E N CASO DE NO ENCONTARSE PICOS , SE REGISTRA CERO EN EL FORMATO .
f.
Siga el instructivo en el numeral 7.2.1 en el paso s.
7.4.2 ALINEAMIENTO El Instrumentista.
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ACT:
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1
8. MANEJO DEL SOFTWARE UV PROBE 2.01 8.1. ELABORACION DE CURVAS El Analista del Laboratorio 8.1.1 a.
Iniciar el programa
Da clic en el icono UV PROBE 2.01 que se encuentra en el escritorio (ver Figura 1). Para iniciar el programa.
2.01. Figura 1. Acceso directo al programa UVPROBE 2.01.
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SOFTWARE. Figura 2. Conexión ESPECTROFOTOMETRO - SOFTWARE. 8.1.2
Creación del Método
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ACT:
1
10/21
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b.
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ACT:
11/21
1
Da clic en el botón METHOD (ver Figura 4) para crear el método.
Figura 4. Creación del método.
c.
Ingresa los siguientes datos en la ventana PHOTOMETRIC METHOD – [ WAVELENGHTS] (ver figura 5). Para configurar la longitud de onda. •
WAVELENGHT TYPE:
•
WAVELENGHT (nm):
•
ADD: NEXT:
•
Selecciona POINT (punto a punto). Digita la longitud de onda con la cual se va a elaborar la curva. Da clic para adicionar al método la información diligenciada. Da clic para continuar.
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d.
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ACT:
12/21
1
Ingresa los siguientes datos en la ventana [CALIBRATION] (ver Figura 6). Para configurar la curva de calibración.
•
TYPE: FORMULA: WL1: PARAMETER: ORDER OF CURVE: UNITS:
•
ZERO INTERCEPTION:
•
NEXT:
• • • • •
Selecciona MULTI POINT . Selecciona FIXED WAVELENGTH. Selecciona la longitud de onda a cual vas a trabajar. Escoge CONC = F [ABS]. Elige el orden de la curva (1st, 2st…). Digita las unidades con la que vas a trabajar. Si se desea que la curva pase por cero selecciona esta casilla. Da clic para continuar.
NOTA 15. PARA TODOS LOS ANÁLISIS ANÁLISIS FOTOMÉTRICOS FOTOMÉTRICOS QUE SE REALIZAN REALIZAN EN EL LABORATORIO, LABORATORIO, LAS CURVAS CURVAS SE ELABORAN CON LAS SIGUIENTES CONDICIONES: MULTI PUNTO, A UNA LONGITUD DE ONDA FIJA, SE SELECCIONA LA ABSORBANCIA EN FUNCIÓN DE LA CONCENTRACIÓN, CONCENTRACIÓN, LA CURVA ES DE PRIMER ORDEN Y LAS UNIDADES SE REPORTAN EN mg/L. NOTA 16. NO ES NECESARIO QUE LA CURVA PASE POR CERO YA QUE SE ESTARÍA FORZANDO SU LINEALIDAD.
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e.
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ACT:
13/21
1
Ingresa los siguientes datos en la ventana [MEASUREMENT PARAMETERS (STANDART)] (ver Figura 7). Para la configuración de los parámetros de medición.
•
DATA ACQUIERED BY:
•
SAMPLE REPETITIONS:
•
DELAY SAMPLE READ:
•
TIMED REPEAT / NONE:
•
NEXT:
Selecciona INSTRUMENT para la elaboración automática de la curva. USER ENTRY para elaboración manual de la curva. Coloca el número de veces que desea sea leído cada estándar. Si desea colocar el tiempo en que demora el equipo en hacer una lectura da un clic. Inmediatamente se activan las casillas para digitar el tiempo y la unidad. Si desea repetir el tiempo selecciona TIMED REPEAT sino
NONE.
Da clic para continuar.
NOTA 17. SI SE VAN A REPETIR LECTURAS DE UN ESTANDAR AL SELECCIONAR TIME REPEAT SE ACTIVA LA OPCION REPEAT SETTING. DIGITA EL TIEMPO DE LECTURA DE CADA REPETICION.
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Figura 8. Nombre y localización del método.
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ACT:
1
14/21
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h.
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ACT:
15/21
1
En la ventana PHOTOMETRIC METHOD, una vez creado el método, aparecen una serie de pestañas que contienen la información que se ha introducido la cual puede ser modificada (ver figura 10).
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8.1.3 a.
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ACT:
16/21
1
Elaboración de la tabla de estándares
Llena la tabla con los estándares y sus respectivas concentraciones. De menor a mayor concentración (ver figura 11).
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ACT:
1
17/21
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UNIVERSIDAD BIBLIOTECA DE ALEJANDRIA
INSTRUCTIVO DE OPERACIÓN, CALIBRACIÓN, VERIFICACIÓN Y AJUSTE AJUSTE DEL DEL EQUIPO EQUIPO ESPECTR ESPECTROFOT OFOT METRO UV-VIS 1700 SHIMADZU
Figura 14. Abrir método.
Año 53 A. C
ACT:
1
18/21
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Figura 16. Tabla de muestras.
Año 53 A. C
ACT:
1
19/21
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g.
Año 53 A. C
ACT:
20/21
1
Para adicionar un factor da clic en FACTORS (ver figura 18).En la casilla VALUE escribe el valor del factor. Da clic en ADD y por ultimo da clic en CLOSE para salir de esta ventana.
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9.
Año 53 A. C
ACT:
21/21
1
CONTINGENCIAS
No aplica
10. BIBLIOGRAFÍA •
Parámetros para el uso de la celda sellada de Cloruro de Holmio, N°C005-0403. Marca Perkin Elmer.
•
Manual de Instrucciones del Espectrofotómetro UV-VIS 1700. Corporación Shimadzu.