Inmunidad inespecífica o resistencia natural Lisozima
Introducción:
La lisozima, también llamada muramidasa, es una enzima que daña las células bacterianas catalizando la hidrólisis de las uniones beta 1,4 entre los residuos de ácido N-acetilmurámico y N-acetil-D-glucosamina en un peptidoglicano. Frente a la acción patógena de los microorganismos, el huésped puede presentar diversas modalidades de defensa o de respuesta inmunitaria, que, según su especificidad y origen, pueden agruparse en dos categorías: mecanismos inespecíficos y específicos. Mecanismo inespecífico o innata: es la primera barrera defensiva del organismo y no requiere sensibilización previa. Son mecanismos naturales o innatos presentes en todos los seres vivos (congénitos), que defienden frente al ingreso de cualquier patógeno (inespecíficos). Su eficacia es desigual, impidiendo muchas veces la infección o sólo retardando su aparición. También se denominan mecanismos de resistencia o de inmunidad natural inespecífica. Es la resistencia que presentan todos los organismos a dejarse invadir por primera vez por un patógeno. En muchas enfermedades el desenlace de la misma comúnmente es decidido antes de que los anticuerpos puedan producir una acción efectiva. Los mecanismos de resistencia involucrados no son completamente entendidos en la actualidad pero indudablemente varía en relación al agente, el hospedador y la vía de entrada.
Objetivos:
Demostrarás la presencia de lisozimas en exudados lagrimales para determinar la presencia de inmunidad innata no específica en líquidos corporales.
Demostrar el efecto bactericida que tiene la lisozima en lágrimas frente a agentes patógenos.
Desarrollo de la práctica:
Materiales utilizados:
Solución salina fisiológica: solución al 0.9 % de NaCl.
Tubos de ensayo con tapón de rosca estériles.
Hisopos estériles (2)
Cultivo de M icrococos
Papel filtro, una tira
Asa bacteriológica
Una placa de agar soya tripticaseína
Mecheros
Gradilla
Pipetas de 5ml.
Pipeteadora automático o pro-pipeta.
luteus
Procedimiento:
1. Añade 5ml de suero fisiológico a un tubo estéril. Paso 1: preparado de NaCl 0,457g + agua destilada (50ml), luego agitar: SF Paso 2: añadir 5ml de la solución Fisiológica en un tubo universal estéril 2. Con la punta de un hisopo estéril obtén una muestra de un cultivo con Micrococos luteus
tubo será notoria.
y mézclala en la solución salina, la turbidez producida en el
3. De esta solución turbia coloca 2 ml en cada uno de dos tubos. 4. Humedece con secreciones lagrimales una pequeña tira de papel de filtro estéril, poniendo un extremo en el saco conjuntival inferior, y cerrando el parpado encima de él. 5. Corta la porción humedecida de la tira y déjalo caer en uno de los tubos. 6. En el otro tubo corta y deja caer una porción no tratada del papel filtro para que sirva de testigo. 7. Agita bien los tubos y obsérvalos en 30 minutos.
Utilizamos un horno (incubadora) a 37°C
8. Toma un hisopo estéril, sumerge la punta en la solución original de
M. luteus
y realiza una siembra en una caja de Petri con agar de soya tripticaseína.
9. Divide en dos partes una placa de agar soya tripticaseína y en un lado de la placa pon una tira de papel filtro con lisozima, al otro lado ponga una tira no tratada como testigo.
Observaciones:
1. El tubo sin lisozima continuará turbio mientras que el que contiene lagrima (lisozima) se volverá totalmente transparente. 2. El lado testigo de la caja de Petri tendrá micrococos creciendo en todo su alrededor, mientras que el lado de la caja con la lisozima mostrará un área limpia y clara a su alrededor debido a la acción inhibidora de la lisozima.
Medidas de bioseguridad:
Mantener siempre la esterilidad en todo momento de dichos materiales utilizados en el laboratorio.
Resultados y conclusiones:
Experimento en los tubos:
Con lágrima
Sin lágrima
a) Con lágrima: se mostró la presencia de lisozima, porque de lo que estaba un poco turbio la muestra se volvió totalmente transparente.
b) Sin lágrima: en este tubo no hubo cambio, se mantuvo un poco turbio el papel, por lo tanto no hubo inhibición en el crecimiento de bacterias.
Experimento en agar:
Sin lágrima
Con lágrima
a) Con lagrima: se mostró un área casi limpia y clara a su alrededor debido a la acción inhibidora de la lisozima.
b) Sin lagrima: se notó la presencia de crecimiento de bacterias, porque el papel filtro que se utilizó no tenía presencia de lisozima.
Cuestionario
1. ¿Qué es la lisozima? La lisozima es una enzima presente en las lágrimas y la saliva en donde actúa como una barrera frente a las infecciones. También es muy abundante en la clara del huevo, de donde se extrae para su uso industrial, en particular para el control de las bacterias lácticas en los vinos.
2. ¿Qué función tiene la inmunidad innata en la protección de un organismo?
Prevenir la entrada de microorganismos
Muerte de microorganismos.
Fagocitosis temprana, muerte de microorganismos.
Fagocitosis, muerte de microorganismos, activación de respuesta inflamatoria
Muerte de células infectadas, activación de macrófagos.
3. ¿Por qué no hubo crecimiento bacteriano en la mitad de la placa con el papel filtro impregnado de lágrimas? Porque hubo presencia de lisozima, y su función de la lisozima es inhibir el crecimiento bacteriano, por lo tanto es bactericida.
4. ¿Qué otros ejemplos de inmunidad innata puede mencionar? Piel y epitelios: Está cubierta protege a todo el organismo y se torna vulnerable cuando muestra laceraciones o soluciones de continuidad. Aparato respiratorio: Está provisto de vibrisas y secreción mucosa. Aparato digestivo: Participan en su protección algunos componentes de la saliva
(mucinas,
tiocianato,
lactoferrina, fosfolipasa, etc.
carbonato
y
diferentes
enzimas:
lisozima,
Bibliografía:
http://es.scribd.com/doc/167532322/Lisozima-Como-Bactericida
http://es.scribd.com/doc/240514340/Lisozima
