UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA Química Farmacéuic! "i!#$%ica Micr!&i!#!%ía G'('ra# I
Características macroscópicas de cultivos Realizado por: Godoy Rodríguez Didián Yamileth Rojas Cisneros No Gerardo !ictoria Chávez Re"eca Re "eca Yael Yael Grupo: #$%& '(uipo: ) *emestre: &%#+,#
-sesor: .eatriz 'lena -rellano /imentel
OBJETIVOS •
• • •
Familiarizar al alumno con el manejo de los principales métodos de esterilización usados en el laboratorio de microbiología la adecuada preparación del material! El alumno analizar" el #undamento de los principales tipos de medios de culti$o para bacteriología! El alumno elegir" el tipo de siembra adecuada a la consistencia del medio de culti$o la aplicar" seg%n sea el objeti$o! El alumno obser$ar" di#erenciar" de manera correcta las principales características de crecimiento de los microorganismos en medios sólidos& semisólidos lí'uidos!
(ETO)O*O+,Se prepararon los medios de c"ltivo sólidos, semisólidos # l%&"idos necesarios' se
e los ceparios otor!ados, se seleccionó # realizó la siembra de los microor!anismos en cada "no de los medios
Se esterilizaron los medios de c"ltivo en la olla de presión
Se re!istraron las observaciones realizadas$
Se esterilizó por calor húmedo (121°C a 15 lb de presión, en olla de presión) los contenedores de vidrio a emplear: caja etri, pipetas !rad"adas
(E)IOS )E ./*TIVO 01E0-1-)OS -gar E(B -gar nutriti$o 2-34 -gar Salmonella-Shigella 2SS4 .E0-1IOS
-gar Sal manitol 2S(4 5ISI(
Se inc"baron los medios inoc"lados a *$5°C d"rante + horas (a ro-$)
Se observó la mor.olo!%a de las colonias de los microor!anismos inoc"lados en los
.aldo nutriti$o 2.34
Klebsiella pneumoniae Salmonella typhi
Streptococcus pyogenes Corynebacterium xerosis
Bacillus cereus Staphylococcus aureus
1ES/*T-)OS )espués de preparar los medios de culti$o necesarios para la proli#eración de las bacterias& se realizó la inoculación de di#erentes microorganismos& los cuales presentaron características coloniales distinti$as de cada cepa! *a tabla 6 condensa la mor#ología colonial obser$ada! Tabla 6! 1esultados de mor#ología colonial! "ac'ria Pseudomonas aeruginosa
M')i! )' cu#i*!
-3 -3
Bacillus cereus
S(
F!rma
.ircular Filame ntoso In8ibid o
Tama+!
E#'*aci$(
Mar%'(, &!r)'
Lur'.#'/a)a
Lura(0mii)a
C!#!r
T'1ura, C!(0i0'( 2cia
Ora0 carac'rí0ica0
Viscosa
Olor a u$as podridas! 0igmento $erdoso en el medio
(ediano
Ele$ada
Entero
Brillante
Trasl%cida
Blanco opaco
+rande
0lana
Filamentoso
Opaca
Trasl%cida
Blanco
Viscosa
77
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
Viscosa
*actosa positi$o
Viscosa
*actosa positi$o
Viscosa
Verde met"lico 1osa intenso Beige
Escherichia coli
E(B
.ircular 0e'ue9o
.on$e:a
Entero
Brillante
Opaca
Klebsiella pneumoniae
E(B
.ircular
.on$e:a
Entero
Brillante
Opaca
E(B
.ircular 0e'ue9o
0lana
Entero
Brillante
Trasl%cida
.on$e:a
Entero
Brillante
Opaca
3egro con 8alo blanco
Viscosa
.ircular 0e'ue9o
0lana
Entero
Brillante
Trasl%cida
.a#é claro
Seca
*actosa negati$o *actosa negati$o 0roducción de ;
.ircular 0e'ue9o
.on$e:a
Entero
Brillante
Opaca
Blanco
Seca
= 8emolítico
S(
In8ibid o
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
In8ibido
S(
.ircular 0e'ue9o
.on$e:a
Entero
Brillante
Opaca
Beige
Viscosa
(anitol positi$o 0roducción de "cido
S(
0unti#or 0e'ue9o me
0lana
Entero
Opaca
Opaca
Blanco> Beige
Viscosa
(anitol positi$o
Salmonella typhi
SS
Proteus vulgaris
SS -gar sangre
Streptococcus pyogenes Staphylococcus aureus Corynebacterium xerosis
.ircular
(ediano
(ediano
En la tabla < se muestran las im"genes de las colonias obser$adas en cada medio de culti$o! -+-1 3/T1ITIVO
-+-1 Salmonella-Shigella
-+-1 S-* A (-3ITO*
-+-1 S-3+1E 2Streptococcus pyogenes4
-+-1 E(B
-dem"s de la lectura de mor#ología colonial en las placas& se interpretaron los otros medios preparados? 5I- 2sólido en tubo en pico de #lauta4& SI( 2medio semisólido4 caldo nutriti$o! (E)IO )E ./*TIVO
B-.TE1I- SE(B1-)-
I3TE101ET-.I3
Escherichia coli
Ccido>"cido con producción de gas
I(-+E3
5IPseudomona aureginosa
Staphylococcus aureus
S274 I 23o realizado4 (274
Proteus vulgaris
S2D4 I 23o realizado4 (2D4
SI(
S. aureus
.aldo nutriti$o
Escherichia coli
3o se obser$ó un cambio
Pseudomonas aureginosa
.recimiento en la super#icie
E. coli
-3C*ISIS )E 1ES/*T-)OS 0ara lograr la identi#icación presunti$a de una bacteria se re'uiere la realización de un trabajo pre$io de esterilización en el material de aislamiento& conocer los medios de culti$o adecuados para el desarrollo de las bacterias& su metabolismo las características de crecimiento de las bacterias aisladas& así mismo como realizar el aislamiento en un ambiente aséptico! En esta pr"ctica no se realizó un diagnóstico presunti$o debido a 'ue las bacterias trabajadas #ueron dadas en ceparios eti'uetados& sin embargo& con la obser$ación macroscópica de sus crecimientos& se logró la con#irmación de características! El agar nutriti$o es un medio b"sico para microorganismos no e:igentes! En este medio se sembraron Pseudomona aeruginosa y Bacillus cereus ! P. aeruginosa tu$o un buen crecimiento& se obser$ó 'ue la colonia aislada presentaba una #orma circular con borde entero& poseía un color blanco opaco brillante casi gris& color característico de esta bacteria adem"s de 'ue el medio se tornó de un color amarillo $erdoso& esto se debe a la producción de pio$erdina piocianina& moléculas producidas por la misma bacteria& así mismo se detectó su olor característico 2a u$as podridas4& son glucosas positi$as& por lo 'ue el agar nutriti$o #ue un buen medio para su reproducción! B.cereus por su parte creció de buena #orma& ésta presentó una mor#ología colonial característica? #orma #ilamentosa& un tama9o de 7 mm de di"metro de color blanco opaco asemejando un $idrio esmerilado@ las colonias tienden a e:tenderse por todo el medio! -lgunos medios de culti$o tienen sustancias 'ue #a$orecen o in8iben el crecimiento de ciertas bacterias& estos medios de culti$o generalmente son selecti$os di#erenciales! El agar sal manitol es un medio 'ue contiene una concentración mu ele$ada de 3a.l 2G!H4& por lo 'ue permite el crecimiento de microorganismos 8aló#ilos& principalmente esta#ilococos patógenos& adem"s de poseer un indicador de p; 2rojo de #enol4 manitol& 'ue con su degradación la producción de "cidos cambia el color del medio! En este medio se aisló a Bacillus cereus& Streptococcus pyogenes& Staphylococcus aureus Corynebacterium xerosis!
S. aureus #ue el %nico microorganismo 'ue se desarrolló en todo el medio de culti$o& ocasionando un cambio en la tonalidad del medio& de rojo a amarillo por la #ermentación del manitol la producción de "cido! C. xerosis logró desarrollarse le$emente sobre el cuadrante de la siembra masi$a& sin embargo& B. cereus S. pyogenes no resistieron las condiciones de sal en e:ceso #ueron in8ibidos! Escherichia coli & Klebsiella pneumoniae Salmonella typhi se sembraron en agar E(B! Este medio de culti$o se clasi#ica como selecti$o
di#erencial& debido a 'ue in8ibe el crecimiento de bacterias +ram positi$as por los colorantes eosina azul de metileno! Tiene lactosa como sustrato a metabolizar& por lo 'ue las bacterias 'ue se consideran lactosa positi$as presentan colonias rosas 2 K. pneumoniae4& mientras 'ue las bacterias lactosa negati$as son transparentes o ambarinas 2 S. typhi 4! El crecimiento de E. coli en este medio muestra características especiales& por'ue aun'ue es una bacteria #ermentadora de lactosa& el color de la colonia es $erde met"lico con negro en la parte central& por lo 'ue no presenta el color característico de las lactosa positi$as@ también se identi#icó en este medio 'ue la colonia de la bacteria presenta una consistencia $iscosa& esto se debe a 'ue en su estructura& E. coli presenta c"psula@ así mismo se sabe 'ue ésta no crece en medios con citratos& por lo 'ue la elección del medio de culti$o #ue #undamental para el crecimiento de la bacteria! -gar Salmonella-Shigella es un medio altamente selecti$o di#erencial 'ue no necesita ser esterilizado después de su preparación por su gran especi#icidad! Sin embargo& no sólo crecen las especies de Salmonella sp. Shigella sp., también Proteus sp. Estas bacterias se desarrollan en este medio presentando un crecimiento característico& sKarmingL! *as especies sembradas en este agar #ueron Salmonella typhi Proteus vulgaris, este medio sir$e también para obser$ar la #ermentación de lactosa@ las especies sembradas #ueron lactosa negati$a& por lo 'ue las colonias eran transparentes con un centro negro& por la #ormación de "cido sul#8ídrico& el cual precipita por su reacción con el citrato #érrico presente en el medio! En el %ltimo medio& el agar sangre 2'ue no #ue preparado en el laboratorio4& se sembró Streptococcus pyogenes! *a técnica de sembrado #ue la empleada si el medio #uera agar c8ocolate por'ue a simple $ista parecía 'ue éste 8abía su#rido 8emólisis& por lo 'ue no #ue puncionado el medio! Sin embargo& se logró apreciar la 8emólisis causada por S. pyogenes al obser$ar el medio a contra luz& detectando un 8alo transparente 'ue rodeaba todas las colonias desarrolladas@ por lo tanto& se determinó 'ue este microorganismo es =78emolítico! /na $ez realizada la siembra& el medio #ue sellado con cinta masMin& esto para limitar la entrada de o:ígeno debido a 'ue S. pyogenes es microaero#ílico así se #a$oreció su crecimiento! El agar 8ierro de 5liger 25I-4 es un medio di#erencial en tubo& en pico de #lauta& 'ue sir$e para la determinación de las #ermentaciones de carbo8idratos 2glucosa lactosa4 con producción o no de gas para la determinación de producción de "cido sul#8ídrico! En el #ondo del tubo se metaboliza la glucosa& en el pico de #lauta la lactosa! El gas suele ser un producto terminal del metabolismo de los carbo8idratos 2.O < ; <4! *as bacterias 'ue producen gas se denominan aerogénicas& lo 'ue #ue mani#estado por E. coli al desplazar el medio del #ondo del tubo& dejando un "rea clara! -dem"s& esta bacteria cambió el color de todo el medio& lo 'ue indica la #ermentación de lactosa glucosa con producción de "cido& lo 'ue ocasionó el $iraje del indicador de p; de rojo a amarillo! En el caso de Pseudomona aeruginosa& las reacciones obser$adas en el tubo no son características de su género& a 'ue es una bacteria no
importante recordar 'ue el tiempo de incubación es un #actor determinante para la interpretación de esta prueba bio'uímica& 'ue debe cumplirse en el rango de 67
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1ealpe& (! ;ern"ndez& .! -gudelo& .! Especies del género Bacillus? mor#ología macroscópica microscópico! !evista Biom"dica! << 2
