UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO ASIGNATURA:
TECNICAS HISTOLÓGICAS TITULO: CONTROL DE CALDAD Y BIOSEGURIDAD EN HISTOTECNOLOGÍA TEMA: RECONOCIMIENTO DE UN LABORATORIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA
ESTUDIANTE (Grupo 2): Johnathan Vela
TERCER SEMESTRE
DOCENTE: Lic. Iván Peñafiel Méndez Fecha de la práctica: 28 de Octubre de 2015 Fecha de entrega: 04 de Noviembre de 2015 2015 – FEBRERO FEBRERO 2016 PERÍODO: OCTUBRE 2015 –
RIOBAMBA – ECUADOR ECUADOR
1. RESUMEN La Anatomía Patológica estudia las alteraciones morfológicas, tanto macro-micro y ultramicroscópicas que se producen durante la enfermedad, y se diferencia de la patología general que estudia las alteraciones fisiológicas asociadas a la enfermedad. El laboratorio de natomia patológica debe contar de varias arias las cuales están conformadas por equipos que se utilizaran en los procesos para obtener cortes histológicos los cuales nos servirán para realizar informes que posteriormente ayudaran a un buen diagnostico La estación de inclusión de parafina es el primer paso después de obtener la muestra a ser procesada. El micrótomo es un equipo automatizado encargado de producir cortes histológicos en micras, siendo uno de los pasos más importantes en el procesamiento de muestras El baño de flotación será el siguiente paso en donde se expenderá el corte obtenido del micrótomo Las estufas histológicas tendrán la función de desparafinizar la muestra obtenida en la estufa Como último paso es la tinción a través de las baterías de tinción pues después de realizar ese proceso todo estará listo para la observación. La utilidad de la Anatomía Patológica es a diferentes niveles, como el diagnóstico y el estudio de la patogenia de las lesiones: el conjunto de los procesos que conducen a la aparición de las lesiones, por qué se producen y sus consecuencias.
La necropsia consta en abrir el cadáver ; esta ha de ser ordenada, sistemática y completa.
La biopsia consta de la extracción de un fragmento de órgano o tejido con el fin de su estudio diagnóstico.
Hoy en día se suelen utilizar la endoscopia para la extracción de muestras para biopsias, el estudio citológico consta de la obtención y examen de células con finalidad diagnóstico
2. OBJETIVOS 2.1.Objetivos generales 2.1.1. Identificar el área de anatomía patológica
2.2.Objetivos específicos 2.2.1. Realizar reconocimiento del área total requerida y distribución para un laboratorio de anatomía patológica. 2.2.2. Observar los equipos y materiales necesarios en cada área de trabajo en un laboratorio de anatomía patológica. 2.2.3. Clasificar cada uno de los desechos generados dentro del área de anatomía patológica.
3. Materiales, Equipos y reactivos 3.1. Microscopio 3.2. Equipo o estación de inclusión de tejidos en parafina 3.3.Plancha fría ( 5° C ) 3.4. Micrótomo 3.5. Baño de flotación 3.6.Estufa de histopatología 3.7. Batería de Tinción
4. FUNDAMENTO TEÓRICO Fijación La fijación es esencialmente un método para la preservación de la morfología y composición química de la célula. Durante la fijación, las sustancias albuminoides del tejido pasan del estado sol, como se encuentran en vida, al de gel, cuyo contenido de agua es menor. De esta manera, se detienen los procesos posmortem y las estructuras se conservan con un mínimo de artificios, preparándolas para tratamientos ulteriores.
Procesamiento Procesamiento de tejidos Obtención del tejido • Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas: – Biopsia – Autopsia Fijación • En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem. post-mortem. • Unos de los fijadores mas usado es el Formol al 10% (Formaldehido) formol Inclusión • Se debe lavar el tejido para quitar exceso de fijador, fijador, luego se deshidrata y se pasa por un líquido intermediario que es miscible con la parafina. • Infiltración En este paso la muestra se coloca en parafina liquida, de manera que se impregne con ella. • Inclusión Aquí se forman bloques de parafina y dentro de estos bloques están las muestras a estudiar. Se deja enfriar para que adquiera dureza. Corte • Tallado Previo al corte, se debe tallar el bloque para el obtener secciones adecuadas en el micrótomo. • El micrótomo es un instrumento que permite obtener cortes cortes muy delgados de muestra (5μm). micrótomo Corte Los cortes se obtienen seriados, uno tras otro, obteniendo una cinta. • Luego se echan a un baño de flotación para que se estiren y se rescatan con un portaobjetos, que luego se calienta para evaporar el agua y que los cortes queden adheridos. Tinción • Las placas se tiñen con la técnica de hematoxilina/eosina u otra especial. • La muestra debe desparafinarse y pasar por una serie de soluciones. • Finalmente, las muestras se deshidratan y se montan para ser vistas al microscopio.
Observación. El patólogo observa la muestra al microscopio y consigna el diagnóstico.
Inclusión de tejidos en parafina Para la inclusión de muestras que han de observarse con el microscopio óptico se utiliza sobre todo la parafina, y en menor medida la celoidina, como medio de inclusión. Vamos a describir los pasos para la inclusión en parafina de muestras de tejido previamente fijadas.
La parafina es una sustancia de aspecto ceroso que está formada por mezclas de hidrocarburos saturados. A temperatura ambiente es sólida y su punto de fusión puede variar entre 40 °C y 70 °C según la composición de la mezcla de hidrocarburos. Así, parafinas más duras a temperatura ambiente tienen un punto de fusión mayor, mientras que q ue las más blandas uno menor. Es recomendable una dureza mayor para incluir muestras más duras. Las parafinas más usadas tienen un punto de fusión en torno a los 60 °C. Podemos también modificar las características de las parafinas añadiendo sustancias para variar su dureza, viscosidad, fragilidad, etcétera.
La parafina no es miscible con agua, mientras que todos los tejidos están formados principalmente por agua. a gua. Además, la mayoría de los fijadores son soluciones acuosas. Esto implica que para que la parafina líquida pueda penetrar completamente en el tejido ha de sustituirse el agua por un solvente orgánico. Esto se consigue mediante la deshidratación del tejido en alcoholes, normalmente etanol, de gradación creciente hasta alcohol de 100°. Posteriormente se transfiere el tejido a un líquido que es miscible tanto con el alcohol de 100° como con la parafina, denominado sustancia intermediaria, como es el benceno, xileno, tolueno o el óxido de propileno, entre otros. Estas sustancias son normalmente aclarantes por lo que comprobando la translucidez de la pieza podemos cerciorarnos de la penetración de la sustancia intermediaria en el tejido. El tiempo de incubación de la pieza en algunos de estos líquidos intermediarios como el tolueno o xileno no debe ser excesivo puesto que estas sustancias endurecen la pieza y crean problemas al hacer las secciones.
Por último se pasa el tejido a parafina previamente licuada en una estufa regulada a la temperatura apropiada para dicho tipo de parafina. Se dan tres pasos por parafina líquida para favorecer una completa sustitución del líquido intermediario por la parafina. El tiempo que dura dichos pasos depende de lo volátil que sea el líquido intermediario y lo grande que sea nuestra pieza. Será mayor cuanto menos volátil es el líquido intermediario o mayor sea la muestra de tejido. Hay que tener en cuenta que un tiempo excesivo en parafina puede endurecer el tejido. Tras el embebimiento completo de la muestra se vierte parafina líquida en un molde, se introduce la muestra y se coloca según la orientación deseada de corte y se deja solidificar a temperatura ambiente.
Microtomía La posición del microtomo en el laboratorio es importante. Coloque el microtomo en un lugar estable, lejos de ráfagas de aire, puertas y puntos de paso. Cualquier movimiento del aire debido a los equipos de aire acondicionado u otras causas puede hacer que el tratamiento de la sección sea muy difícil. Es preferible utilizar un banco ajustable en altura y una silla ergonómica. Es muy importante que el personal no esté distraído al usar el microtomo por los riesgos de lesionarse con cuchillas extremadamente afiladas. Al colocar los microtomos en un laboratorio debería considerarse el potencial para interactuar con otros miembros del personal. Es preferible tener un suelo antideslizante en las inmediaciones de los micrótomos porque, inevitablemente, los fragmentos de parafina caerán al suelo y pueden originar
una
superficie
resbaladiza.
Muchos
laboratorios
usan
esterillas
antideslizantes para que el entorno sea más seguro.
Estudie las caracteristicas del diseña del microtomo y aprenda a utilizarlas Los microtomos con retracción están diseñados para que la muestra se retire de la cuchilla en la carrera ascendente. Es importante saber si su microtomo tiene esta prestación.
La posición retraída es una característica de diseño que proporciona distintas ventajas durante el corte y prolonga la vida de la cuchilla. Al usar un microtomo de retracción, el alineamiento de la cara del bloque al borde de la cuchilla debe ser efectuado con el bloque en la carrera descendente (en la posición avanzada – avanzada – no no retraída).
Si un bloque está alineado cerca del borde de la cuchilla mientras el brazo de la muestra está en la posición retraída, en la siguiente vuelta completa del volante, el bloque avanzará en función del valor de la posición retraída más el grosor de la sección seleccionada. Esto provocaría que se cortara un trozo grueso que podría dañar tanto la muestra como la cuchilla.
Los microtomos también pueden ser manuales, semimotorizados o completamente motorizados.
Los equipos motorizados reducen los movimientos repetitivos que pueden contribuir a desarrollar enfermedades músculo-esqueléticas.
5. PROCEDIMIENTO 5.1. Recibir la información sobre el área, distribución y elementos que deben integrar el laboratorio de anatomía patológica. 5.2. Observar conocer y poner en práctica la generación y eliminación de desechos. 5.3.Elaborar un manual de desechos en un laboratorio de anatomía patológica.
6. TÉCNICA 6.1. Describiremos cada área, cada equipo que q ue conforman las mismas, los protocolos utilizados en la presente practica en lo que se refiere al reconocimiento del área de anatomía patología
7. OBSERVACIONES
7.1. Hemos observado cada área en el cual se se divide o debe contar un laboratorio de anatomía patológico iniciando con la estación de inclusión de tejido en parafina en donde se prepara la parafina lo cual nos permitirá realizar la siguiente fase , este equyipo contiene tres partes calientes y una fría contiene unas casetas, que llegan de la ASP(procesamieto de tejidos), hay que tomar en cuenta mucho la calibración, consta de
una palanca dispensadora, estamos hablando de un
equipo totalmente automatizado ya que consta incluso de una luz let.
A continuación tenemos el micrótomo con un principio de cortar en micras, permitido hasta 5 micras, esto permitirá un buen diagnóstico del doctor anátomo patológico. Tenemos en cuenta que todos los equipos tienen calibraciones y tarjetas de mantenimiento. Existen micrótomos manuales, automáticos, etc
Este equipo consta de varias partes como la cuchilla de micrótomo que son sumamente afilados, tenemos bloqueos o seguros para evitar accidentes,
Como siguiente equipo tenemos el baño de flotación que tiene una superficie externa e interna de teflón que guarda y preserva cierta temperatura, esto servirá para cuando ya tengamos los finos cortes de tejidos en donde se expandera y después lo pescaremos con una placa de forma rápida
Luego tenemos las estufas estufas histológicas histológicas que van a realizar la desparafinizacion que es quitar la parafina.
Al culminar todo este proceso tenemos batería de tinción que es el punto de todos los colorantes(eosina-hetoxilina) y otros como alcholes etanoles etc.
8. CONCLUSIONES 8.1. Hemos identificado las áreas de un laboratorio de anatomía patológica como la estación de inclusión de parafina, parafina, el micrótomo, Baño de flotación, flotación, estufas
histológicas y baterías de tinción, sus elementos que los conforman y los cuidados que debemos tener al momento de utilizar cada uno de estos equipos 8.2. Hemos reconocido cada uno de los elementos que conforman los equipos y sus funciones en el procesamiento de muestras histológicas las cuales llevamos a cabo para un corte optimo que nos servirá para emitir un informe y posteriormente un diagnóstico preciso 8.3. Debido a que cada uno de las áreas genera desechos hemos conocido la correcta clasificación de desechos como son: infecciosos, cortopunzantes, especiales y comunes los cuales nos servirá para una eliminación correcta de cada fluido, quimico, etc que se generen durante el procesamiento de cada una de las muestras del laboratorio de anatomía patológica.
9. RECOMENDACIONES 9.1.Utilizar las prendas o barreras de protección como son: mandil, guantes, mascarillas, gorro, botas desechables, etc. 9.2. En caso de desconocimiento preguntar a los superiores sobre el funcionamiento del equipo 9.3.Tener cuidado con la manipulación de cada parte del equipo ya que son sumamente peligrosos debido a sus cuchillas o algun as otras características 9.4.Tener en cuentas los seguros que cada equipo ofrece para evitar accidentes
10.ANEXOS 10.ANEXOS Anexo 1.-equipo 1
Ilustración 1. Estación de inclusión inclusión en parafina
Anexo 2. Equipo 2
Ilustración 2. Micrótomo Micrótomo
Anexo 3. Equipo 3
Ilustración 3. Baño de flotación flotación
Anexo 4. Equipo 4
Ilustración 4. Estufas histológicas histológicas
Anexo 5. Equipo 5
Ilustración 5. Baterías de tinción tinción
11.SITIOS 11.SITIOS WEB 11.1. http://www.leicabiosystems.com/fileadmin/img_uploads/histology_systems/ 2010/Microtomy_booklet_spanish_online.pdf 11.2. http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/18704/1/HISTOLOGIA_P2.pdf 11.3. http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-proceso.php 11.4. http://www.msal.gob.ar/inc/images/stories/downloads/Capacitacion/Cursos_ y_Talleres/Curso_de_anatomia_patologica/2_ _Obtencion_de_Muestras_y_Procesamiento_Histologia_-__Maciel_ _SAP_Modo_de_compatibilidad.pdf
