Informe de Curva Estandar

Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Carrera de Química Farmacéutico-Biológica Farmacéutico-Biológica Laboratorio de Bioquímica Celular y de los Tejidos I Informe #1: Curva estándar

Asesor: Leonor Aguilar Santelises Integrantes del grupo 1401 y equipo #5: García Solano Irving Cruz Alatorre Karla Nayeli Gonzales Gonzales Tania Karen Martínez Sánchez Alex Eduardo

Fecha: miércoles 23 de agosto del 2017

Título: Curva estándar Objetivos: 

Desarrollar y analizar una curva estándar



Determinar la concentración de albumina en la clara de huevo por el método de Lowry



Aprender el uso y fundamento del espectrofotómetro



Aprender a manejar las micropipetas

Resultados: Se inició haciendo una dilución de 1000 veces para igualar la concentración de albumina del huevo con la del estándar o blanco. Tabla 1.- Contenido final de cada tubo para la realización de la curva estándar Tubo

Blanco

1

2

Solución problema de proteínas mL

-

0.3

0.5

Solución patrón de proteínas mL

-

-

-

H2O destilada mL

2.0

1.7

Reactivo 3 mL

1.0

1.0

3

4

5

6

7

-

-

-

-

-

0.1

0.2

0.4

0.8

1.5

1.3

1.9

1.8

1.6

1.2

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

0.1

0.1

0.1

0.1

0.7

Agitar y reposar 10 min. Reactivo 4 mL

0.1

0.1

0.1

0.1

Agitar inmediatamente y dejar reposar 20 min. Medir absorbancia a 640 nm

Valores teóricos de la practica Valores decididos por el equipo para la parte experimental Tabla 2.- Absorbancias obtenidas experimentalmente Tubo Blanco 1 2 3 4 5 6 7

Concentración en mg 0 A determinar A determinar A determinar 0.01 0.02 0.04 0.08

Tubos ocupados para graficar la curva estándar Tubos con muestra problema para determinar la concentrac ión

Absorbancia 0 0.028 0.030 0.032 0.019 0.026 0.031 0.038

Para la determinación de la concentración de albumina en nuestra muestra se graficaron los datos y trazando una línea de tendencia que nos pe rmitiera deducir una ecuación para la misma.

Se obtuvo la ecuación de la recta, su coeficiente de correlación y en base a eso se graficaron las coordenadas mediante un despeje de la ecuación de la recta donde se despejo a  X   dado que se conocía a Y   (Absorbancia) y a M   que era la pendiente, finalmente se obtuvo la concentración de albumina para las muestras.

Coordenadas obtenidas de los tubos que se ocuparon para graficar la curva estandar (tubos del 4 al 7) y el blanco. - Los puntos de colores son las muestras que se hicieron ( tubos del 1 al 3).

Después con ayuda de una regla de tres se obtendrá la concentración de la albumina para 100 ml Tubo 1

0,0477   0.3    100  X= 15.9 mg Tubo 2

0,0511    0.5    100  X= 10.22 mg Tubo 3

0,0545   0.7    100  X= 7.79 mg

Para finalizar se hizo uso del mismo factor de dilución que se ocupó al inicio de la práctica, para obtener la concentración real de albumina. Muestra

Concentración obtenida en mg

Tubo 1

15.9

Tubo 2

10.22

Tubo 3

7.79

Concentración real  en el huevo “

”

1 ) = 0.0159 (15.9 )( 100 1000 100 1 ) = 0.0102 (10.22 )( 100 1000 100 1 ) = 0.00779 (7.79 )( 100 1000 100

Análisis de resultados. Los resultados obtenidos no fueron para nada cercanos con e l valor teórico de 11 g/ 100ml de albumina en el huevo, lo cual se detectó al momento de preparar las muestras debido a la falta de color azul que era el fundamento del mé todo de lowry, ya que se veía casi transparente. Hacer porcentajes de error, cálculos de exactitud y presión quedan de más debido a que se sabe que se cometió un error de tipo sistemático lo cual es atribuido en mayor par te al hecho de que fue la primera experiencia del equipo frente a instrumentos como las micro-pipetas, lo cual se debe corregir con el paso del tiempo al ganar experiencia y confianza al tr abajar con dichos instrumentos. En el caso del método de Lowry se demostró la facilidad que este implica para la determinación de proteínas, ya que, aunque no se obtuvo lo que se esperaba aun con una concentración tan pequeña de albumina se logró notar turbidez o color azul en la muestra lo que indica que el método tiene una gran sensibilidad respecto a la cuantificación de las proteínas. Conclusiones. Aunque los resultados no son para nada satisfactorios se puede rescatar el hecho de que se cumplieron los objetivos, se logró construir la curva estándar, además de aprender el fundamento y uso del espectrofotómetro, así mismo e l uso de micro pipetas, por lo cual la práctica no fue fallida del todo, como recomendaciones para el próximo experimento se debe tener más precaución con el uso de micro pipetas y verificar que las muestras sean bien preparadas, para eliminar la mayoría de errores sistemáticos.