I.
INTRODUCCION
La biotecnología vegetal es serie de técnicas y procesos que permitan el cultivo y modificación en el laboratorio de las plantas o de partes de ellas (células, tejidos u órganos). Esto con el fin de multiplicarlas masivamente, hacerlas mejores, más productivas u obtener productos útiles a partir de ellas. Las dos ramas más importantes dentro de la biotecnología vegetal son el cultivo de tejido vegetales y la Ingeniería Genética de las plantas. La biotecnología vegetal es una de las herramientas más valiosas que se tienen t ienen actualmente para el mejoramiento y conservación de las plantas que sostienen la vida humana. El cultivo de tejidos, como técnica, consiste esencialmente en aislar una porción de la planta (explante) y proporcionarle artificialmente las condiciones físicas y químicas
apropiadas para que las células células expresen su
potencial intrínseco o inducido. Es necesario además adoptar procedimientos de asepsia para mantener los cultivos libres de contaminación microbiana. Este contexto daremos a conocer un reconocimiento del Laboratorio de Biotecnología Vegetal, con sus respectivas instalaciones e funciones de cada uno, y así mismo los equipos y materiales a utilizar mediante las prácticas a realizar.
Objetivos
Conocer la organización y las funciones de cada área de un laboratorio laboratorio de cultivo in vitro.
Identificar instrumentos instrumentos y equipos más importantes importantes en en un laboratorio de cultivo in vitro.
Establecer y seguir las normas de trabajo en el laboratorio. laboratorio.
Conocer y diferenciar los métodos de esterilización de materiales y medios de cultivo.
II.
REVISION DE LITERATURA
2.1. Laboratorio de biotecnología El laboratorio de cultivo de tejidos dispone de un área destinada al establecimiento, crecimiento y multiplicación de las plantas producidas: esta área es especialmente necesaria en los laboratorios de investigación y desarrollo y en los productos comerciales. Aquellos laboratorios que se dedican a la producción y distribución de materiales de sanidad certificada, por ejemplo, deben incluir además facilidades para la cuarentena y para la evaluación fitosanitaria. ROCA y MROGINSKI (2003).
2.2. Organización de las áreas de un laboratorio de Biotecnología vegetal Un
laboratorio
de
cultivo
de
tejidos
se
puede
dividir
esquemáticamente en áreas separadas para las diferencias funciones que se desarrollan, mediante las practicas, sin embargo, algunas de las funciones pueden desarrollarse en un mismo ambiente.
2.2.1. Área de preparación Se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero debe proveer también un espacio para almacenar los materiales de vidrio y de plástico, y los reactivos químicos. Este ambiente debe contar con mesas de trabajo para la preparación de los medios y para colocar las balanzas, el medidor de pH, los platos caliente con agitación, y otros elementos; también debe incluir vitrinas, estanterías y espacio para el equipo de refrigeración; y para la incubadora o la cámara de crecimiento(o para ambas.)
2.2.2. Área de lavado y de esterilización Puede estar constituida por dos áreas conectadas entre sí, o por un solo ambiente, y puede estar localizada dentro del área general de preparación.
El área de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con agua caliente y agua fría y una fuente de agua de alto grado de pureza, preferiblemente agua doblemente destilada; para el efecto debe usar un destilador de vidrio o de material no toxico y un desionizador de agua entre el destilador y el lavadero. Esta área debe disponer de un espacio para almacenar agua destilada en botellas de plástico; también debe proveer basureros adecuados para el material vegetal, inorgánico y de vidrio que se deseche.
2.2.3. Área de transferencia En esta área se realiza el trabajo de excision, inoculación y transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Dado que este trabajo demanda lo más altos niveles de limpieza ambiental, se recomienda la instalación de gabinetes de flujo horizontal y vertical de aire filtrado bajo presión, o la construcción de cuartos de transferencia.
2.2.4. Área de incubación Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o cámaras de crecimiento; estas pueden ser más eficientes en cuanto al control ambiental, pero son más costosas. El área de incubación o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control de la temperatura (20-28ºC), de la i luminación (variable, según las necesidades: 1000 a 5000 lux) y de la humedad relativa (70%- 80%).
2.3. Áreas de investigación de un laboratorio de biotecnología 2.3.1. Áreas de crecimiento Las plantas que se regeneran en el área de incubación se pueden acondicionar o aclimatar y luego trasplantar en macetas, bandejas o cámaras apropiadas. Estas operaciones se pueden llevar a cabo en tinglados.
2.3.2. Áreas de cuarentena y control fitosanitario Cuando la función del laboratorio es la producción de materiales elites de sanidad certificada, se hace necesario contar con un área para la
recepción de las muestras o plantas destinadas a la limpieza clonal, generalmente protegida contra insectos. Esta área debe estar separada del resto del laboratorio pero cercana al área de control fitosanitario.
2.3.3. Área de oficina En esta área deben ubicar el mobiliario de oficina como escritorios, archivos y almacenamiento de datos, los libros de referencia y de control del laboratorio, los catálogos y otros documentos. También se coloca en ella el equipo de cálculo o computación,
2.4. Instrumentos y equipos en el laboratorio 2.4.1. Centrifuga Una centrífuga es una máquina que pone en rotación una muestra para separar por fuerza centrífuga sus componentes o fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad. Utilización: Son muy útiles para precipitar células y moléculas. Vienen en distintos tamaños y con distintas capacidades en el manejo de muestras. Este aparato somete la muestra a fuerzas de aceleración que obligan a las moléculas a concentrarse en el fondo del envase utilizado, separándolas del medio en que se encuentran. Incluso, bajo ciertos métodos se puede generar un gradiente de concentraciones dentro del mismo tubo, separando distintas moléculas a distintos niveles o fases dentro del tubo. Con ayuda de jeringas, se puede perforar la pared del tubo y extraer del mismo sólo aquella fase donde se encuentren las moléculas de interés. En el laboratorio las centrífugas se utilizan, en general, en procesos como la separación por sedimentación de los componentes sólidos de los líquidos bioló- gicos y, en particular, en la separación de los componentes de la sangre: glóbulos rojos, glóbulos blancos, plasma y plaquetas, entre otros, y para la realización de múltiples pruebas y tratamientos. ALFARO (2004).
2.4.2. Cámara de siembra o germinación La función de la cámara de germinación es la de facilitar la germinación de las semillas elevando su temperatura, un termostato adaptado
en el interior del germinador para obtener la temperatura óptima, un ventilador distribuye el aire del interior para homogeneizar la temperatura, este tipo de cámara de germinación es manual
2.4.3. Voxtex El agitador de tubos vortex está diseñado para ser usado con un tubo o hasta con múltiples tubos según se requiera. El equipo consta de tres unidades: 1) superficie de apoyo para un solo tuvo 2) plataforma circular, apropiada para agitar varios tubos 3) El switch de doble posición para operación continua o manual. No emplear este equipo para otras actividades que no sean para lo cual está diseñado. Agitador incorpora un motor permanentemente lubricado que permite el manejo del cabezal. El switch de doble posición permite que el agitador sea operado de manera continua o también por presión manual del agitador plástico o de la plataforma de agitación.
2.4.4. Materiales estériles Los artículos estériles deben ser almacenados en un área específica y claramente identi ficada. • Dicha área debe ser libre de humedad, polvo o plagas (Ej. cucarachas). • Las estanterías deben ser lavables y de superficies no
porosas. No se recomienda usar cajas de cartón para almacenar artículos estériles. • Las estanterías para almacenamien to de material estéril (en Central
de Esterilización) deberían estar a 25 cm del piso, 45 cm del techo y 5 cm de la pared. • Se debe evitar que los artículos estériles estén expuestos directamente a rayos solares, humedad o calor excesivo. • No se debe agr upar varios paquetes estériles con bandas elásticas. • Se debe minimizar la manipulación de artículos
estériles. Cuanto mayor sea la manipulación, mayor será el riesgo de contaminación del paquete (por lo tanto, evitar el conteo rutinario con manipulación del paquete en Economatos y otros servicios.)
2.4.5. Microcentrifuga Es una máquina centrífuga especializada utilizada en el laboratorio clínico. Ésta pone en rotación una muestra más pequeña para separar por fuerza rotatoria sus componentes o fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad. Esta es de uso para los tubos capilares. Es muy útil para precipitar ADN y otras sustancias que se trabajan en volúmenes pequeños. ALFARO (2004).
2.4.6. PH- metro El pH-metro es un sensor utilizado en el método electroquímico para medir el pH de una disolución. La determinación de pH consiste en medir el potencial que se desarrolla
a
través
de
una
fina membrana de vidrio que
separa
dos soluciones con diferente concentración de protones. En consecuencia se conoce muy bien la sensibilidad y la selectividad de las membranas de vidrio durante el pH.
2.5. Esterilización y desinfección 2.5.1. Esterilización La esterilización es un proceso a través del que se logra la destrucción total de los microorganismos viables presentes en un determinado material. Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacéutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilización de materiales estériles. Entre éstos podemos destacar:
La esterilización de equipos quirúrgicos y otros materiales de uso médico con el propósito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.
El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc.) que va a ser utilizado en los laboratorios de microbiología.
La preparación de medios de cultivo que serán empleados con diferentes propósitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o
personal, análisis microbiológico de medicamentos, cosméticos, alimentos, etc.)
La descontaminación de material utilizado.
2.5.2. Desinfección En este proceso se eliminan los agentes patógenos reconocidos, pero no necesariamente todas las formas de vida microbianas. Es un término relativo, donde existen diversos niveles de desinfección, desde una esterilización química, a una mínima reducción del número de microorganismos contaminantes. Estos procedimientos se aplican únicamente a objetos inanimados.
III.
MATERIALES Y METODOS
3.1. Lugar de ejecución La práctica de reconocimiento los equipos e instrumentos y instalaciones del laboratorio, se realizó en el laboratorio de Biotecnología Vegetal, perteneciente a la Universidad Nacional Agraria de la Selva .
3.2. Materiales utilizados
Un bolígrafo
Una libreta de apuntes
El manual de practicas
Cámara fotográfica
3.3. Metodología Para esta práctica, de reconocimiento, primeramente se realizó las indicaciones respectivas por el docente encargado del curso, lo cual se explicó sobre el mantenimiento y cuidado del laboratorio. Sucesivamente con la orientación de la técnica encargada del laboratorio, pasamos de 5 en 5 personas, para conocer las instalaciones, asimismo los equipos más importantes en el laboratorio.
IV.
RESULTADOS
En el siguiente cuadro se muestra los materiales explicados en reconocimiento del laboratorio, con respeto al área donde se encuentra. Cuadro 1. Materiales del laboratorio de biotecnología vegetal SALA DE PREPRACION Tubos de ensayos pipetas materiales de laboratorio vaso precipitado refrigerador caja Petri reactivos
MATERIALES SEGÚN SU AREA SALA DE SIEMBRA cámara de siembra cámara de siembra manual termostato centrifuga microcentrifuga espectrofotómetro pH- metro agitador vortex
V.
SALA DE INCUBACION muestras agrícolas muestras forestales aire acondicionado 24ºC
CONCLUSION
Se logró determinar y conocer las funciones de dicha área, como es la sala de preparación, donde se preparan los cultivos y en caso de materiales se encuentra las e vidrio como, el tubo de ensayo, vaso precipitado, pipetas etc., es un ambiente. En la sala de siembra, su función es la siembra de cultivos, para lo cual consta de materiales como; la cámara de siembra, cámara de siembra manual, termostato, centrifuga, agitador vortex. Por ultimo en la sala de incubación se mostró un ambiente de
V.
CONCLUSION
Se logró determinar y conocer las funciones de dicha área, como es la sala de preparación, donde se preparan los cultivos y en caso de materiales se encuentra las e vidrio como, el tubo de ensayo, vaso precipitado, pipetas etc., es un ambiente. En la sala de siembra, su función es la siembra de cultivos, para lo cual consta de materiales como; la cámara de siembra, cámara de siembra manual, termostato, centrifuga, agitador vortex. Por ultimo en la sala de incubación se mostró un ambiente de crecimiento de los cultivos , para lo cual necesita luz , por ende se deja la luz prendida todo los días del año, y aire acondicionado a 24ºC, en esta área se encuentra puras muestras. Se aprendió las normas del laboratorio, la cual consiste, no entrar con botas, no traer guardapolvos sucios, no ingerir alimentos, etc.
VI.
RECOMENDACIONES
1. Tener cuidado con los reactivos, y materiales de vidrio en la hora de hacer el reconocimiento. 2. Llevar una cámara digital, para obtener las fotos de los materiales a conocer. 3. Tener a la mano un bolígrafo y una libreta de apunte 4. Leer la guía de práctica antes de venir a clases para tener información sobre, la práctica a realizar. 5. Tener cuidado a la hora de entrar a la sala de incubación, de no apoyarse mucho a las muestras, ya que podemos dañar o romper.
VII.
BIBLIOGRAFIA
ALAVARO, V. 2004. Centro de Bachillerato Tecnológico Industrial y de Servicios. Operar Equipo y Material de Laboratorio. Investigación microcentrifuga y centrifuga. ITSX. (Instituto tecnológico superior de Xalapa).2011. Manual de operación y mantenimiento de los equipos del laboratorio de química y usos múltiples ROCA, W; MROGINSKI.2003. Establecimiento de un laboratorio para el cultivo de tejidos vegetales
EN
LINEA
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf http://www.uaa.mx/investigacion/revista/archivo/revista20/Articulo%207.pdf
ANEXOS
Figura1. Materiales de vidrio
Figura 3. Refrigerador
Figura 2. Termostato
Figura4. Muestra
Figura 5. Camara de sienbra manual
Figura 7. Camara de sienbra
Figura 6. Muestras
Figura 8. Centrifuga
Figura 9. Muestras en tubos de ensayo
Figura 11. Pipetas
Figura 10. Agitador vortex
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA FORESTAL
RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA
CURSO
:
BIOTECNOLOGIA FORESTAL
DOCENTE
:
Ing.Msc. JHINMY LARC HEMERYTH BARTRA
ALUMNO
:
SANTOS FLORES, Cleide
FECHA DE ENTREGA: 09-06-2017
TINGO MARÍA, PERÚ 2017
