IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KOEFISIEN EKSTINGSI VITAMIN B12 DENGAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA INSTRUMEN IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KOEFISIEN EKSTINGSI VITAMIN B12 DENGAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

Oleh : Putri Purnama Yanti

(1112096000012) (1112096000012)

Rizky Widyastari

(1112096000025) (1112096000025)

Reza Falepi

(1112096000028)

PROGRAM STUDI KIMIA FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 2015

Trusted by over 1 million members

Try Scribd FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions! Start Free Trial Cancel Anytime.





IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KOEFISIEN EKSTINGSI VITAMIN B12 DENGAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

Jum’at, 20 Maret 2015

I.

PENDAHULUAN

Spektrofotometer UV-VIS sering digunakan untuk penetapan kadar dan identifikasi suatu senyawa. Panjang gelombang yang secara maksimum diabsorpsi ditentukan dengan mengukur absorbansi sampel pada rentang panjang gelombang yang telah ditentukan. Setelah cahaya melewati larutan yang diuji, energi cahaya yang melewati phototube dinyatakan sebagai rasio transmitansi cahaya I (cahaya yang melewati sampel) terhadap cahaya incident I 0 (intensitas cahaya dari sumber sebelum melewati sampel). Cahaya yang diterima phototube diukur sebagai persen transmitan (%T) atau sebagai log kebalikannya, absorbansi (A). Jika I lebih kecil dari I 0artinya sampel menyerap sejumlah sinar. Dalam hal ini terdapat hubungan antara A dengan intensitas cahaya yang melewati sampel dan intensitas cahaya sebelum melewati sampel, yaitu : A = log I 0/I Bagian sinar yang diserap akan tergantung pada berapa banyak molekul yang berinteraksi dengan sinar. Dengan kata lain nilai A sangat bergantung pada konsentrasi suatu senyawa. Hubungan antara banyaknya cahaya yang diserap dengan konsentrasi suatu senyawa dinyatakan secara kuantitatif melalui persamaan hukum Lambert-Beer : log I 0/I = ε L C dimana : I0

: Intensitas cahaya sebelum melewati sampel

I

: Intensitas cahaya setelah melewati sampel

Ε

: Koefisien Koefisien ekstingsi, ekstingsi, yaitu yaitu konstanta konstanta yang yang tergantung pada sifat alami dari sneyawa sneyawa





Koefisien ekstingsi sering pula dinyatakan dalam koefisien absorptivitas molar. Nilai absorptivitas molar dapat bervariasi, contohnya vitamin B12. Vitamin B12 disebut juga kobalamin, adalah sebuah vitamin larut air yang berperan penting dalam berfungsi normalnya otak o tak dan sistem saraf, serta dalam pembentukan darah. dara h. Vitamin ini merupakan salah satu dari delapan vitamin B. Umumnya, vitamin ini terlibat dalam metabolisme setiap sel dalam tubuh, terutama pengaruhnya pada sintesis dan regulasi DNA serta pada sintesis asam lemak dan produksi energi.Vitamin B12 merupakan kumpulan senyawa-senyawa yang terhubung secara kimia, yang semuanya memiliki aktivitas sebagai vitamin. Secara struktur, vitamin B12 adalah vitamin yang paling kompleks dan mengandung mengandung elemen kobal yang jarang tersedia secara biokimia. Vitamin B12 memiliki dua puncak serapan dalam spektrum UV-VIS. Dua puncak serapan ini disebabkan oleh promosi elektron dari pasangan elektron bebas gugus karbonil dan delokalisasi elektron ikatan rangkap terkonjugasi dari orbital pi bonding ke orbital pi antibonding. Dalam pengukuran kemurnian suatu senyawa dapat dilakukan dengan menentukan harga serapan relatifnya. Serapan relatifnya adalah perbandingan harga pada dua ujung panjang gelombang tertentu. Serapan relatif vitamin B12 berdasarkan Farmakope Indonesia Ed IV hal 723-724 adalah 3,15-3,45 untuk 361/550 nm dan 1,75-1,98 untuk 361/278 nm.

II. TUJUAN

1. Memahami prinsip identifikasi vitamin B12 melalui metode spektrofotometer UVVIS 2. Menentukan koefisien absorptivitas molar (ε) vitamin B12 dengan spektrofotometer UV-VIS

III.

METODE a. Alat dan Bahan

Peralatan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah erlemeyer 100 ml, corong, kertas saring, mortar, batang pengaduk, tabung reaksi, pipet, dan





b. Prosedur Kerja

1. Preparasi Sample Ditimbang vitamin B12 yang telah dihaluskan dulu dengan mortar, kemudian dilarutkan dalam 8 ml air aquades lalu disaring, kemudian ditambahkan aquades hingga mencapai 10 ml.

2. Pengukuran nilai serapan relatif relat if Dinyalakan alat spektrofotometer UV-Vis sebelum digunakan, minimal 15 menit. Disiapkan larutan blanko yaitu aquades, dan dimasukkan kedalam kuvet dan keringkan bagian sisi terang kuvet agar tidak ada larutan yang menempel pada sisi kuvet. Kemudian dipilih aplikasi wavelength program. Kemudian masukkan panjang gelombang 550nm, 361nm, dan 278nm. Lalu dipilih lampu yang akan digunakan dan dipilih berapa kali pengulangan pembacaan. Lalu dimasukkan sampel yang mau diukur dan diberi nama. Dilakukan autozero terlebig dahulu hingga pembacaan atau nilai absorbansinya 0.00. setelah kalibrasi, ganti kuvet bagian depan dengan sample atau larutan yang akan diuji dan kuvet perlu dibilas terdahulu dengan sample yang akan diuji. Kemudian diklik start dan diukur sample. Kemudian diperhatikan userapan yang muncul dan diulang langkah-langkah diatas hingga seluruh sampel selesai diukur.

IV.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Massa sampel : 2,6317 Konsentrasi vitamin B12 : 175.000 ppm Panjang gelombang gelombang (nm)

Serapan

Koefisien ekstingsi (ε)

550

0,578

3,302 x 10

361

2,581

1,475 x 10 -

278

10,00

5,714 x 10

-

-





Praktikum kali ini bertujuan untuk memahami identifikasi vitamin B12 dengan metode spektofotometri uv-vis dan untuk menentukan koefisien absorptivitas vitamin B12. Sampel yang digunakan dalam dalam praktikum adalah tablet Neurodex. Vitamin BI2 yang biasanya diisolasi disebut sianokobalamin sebab molekul ini mengandung gugus siano yang berikatan dengan kobalt (Lehninger, 1995). Membantu

dalam pemindahan atom hidrogen dari dari satu atom karbon ke atom

berikutnya se bagai pengganti alkil, karboksil, hidroksil, atau gugus amino. Sehingga bentuk ini merupakan bentuk yang yang stabil. Pertama, sebanyak 5 buah tablet Neurodex digerus dan ditimbang massanya. Penggerusan berfungsi agar dampel lebih mudah dilarutkan untuk selanjutnya diidentifikasi dengan spektrofotometer uv-vis. Kemudian sampel yang sudah halus ditambahkan silarutkan dengan 8 ml aquades dan dihomogenkan. Setelah itu larutan disaring dan hasil saringan ditepatkan sampai 10 ml. Aquades digunakan karena vitamin B12 bersifat polar, jadi digunakan pelarut polar untuk melarutkannya. Setelah itu, hasil saringan divortex agar larutan menjadi homogen dan bercampur dengan baik. Hasil penyaringan sampel Neurodex berwarna merah muda, hal ini disebabkan sianokobalamin (vitamin B12) pada Neurodex dalam bentuk kobalt (III) . Warna merah muda disebabkan oleh semua senyawa kompleks kobalt (III) mengadopsi geometri oktahedron. Senyawa Senyawa kompleks dapat berwarna karena senyawa tersebut menyerap energi pada daerah sinar tampak. Penyerapan energi tersebut digunakan untuk melakukan promosi atau transisi elektronik pada atom pusat. Bagian molekul yang mengabsorpsi dalam daerah UV dan daerah sinar tampak dinyatakan sebagai kromofor. Gugus kromofor adalah gugus yang menyebabkan molekul menjadi berwarna. Hal inilah yang menyebabkan filtrat vitamin B12 dapat diukur oleh spektrofotometer uv-vis karena vitamin B12 mengandung gugus kromofor. Gugus kromofor yang terkandung dalam vitamin B12 adalah ikatan ikatan rangkap rangkap dan cincin benzene. benzene. sianokobalamin :

Berikut ini ini adalah struktur dari





Gambar 2. Struk Struktur tur sianokobalamin

Kemudian dilakukan pengukuran sampel dengan spektrofotometer uv-vis pada panjang gelombang 550, 550, 361, dan 278 nm. Didapat serapan sebesar 0,578 ; 2,581; dan 10,00 untuk panjang panjang gelombang 550, 361, dan 278 nm secara secara beurutan. Dari hasil serapan dapat dilihat bahwa pada panjang gelomban 278 nm didapat serapan sebesar 10,00. Serapan yang besar ini disebabkan karena sampel yang digunakan memiliki konsentrasi yang cukup besar yaitu 175.000 ppm sehingga semakin banyak molekul yang berinteraksi dengan sinar. Setelah didapatkan nilai serapan maka dapat dicari nilai koefisien ekstingsinya dengan menggunakan hukum Lambert-Beer. Sehingga didapatkan koefisien ekstingsi sampel pada panjang gelombang 550, 361, dan 278 sebesar 3,302 x 10 -6 ; 1,475 x 10 -5 ; dan 5,714 x 10 -5 . nilai koefisien ekstingsi akan dipengaruhi oleh jarak cahaya yang melewati sampel (tebal kuvet) dan konsentrasi sampel yang digunakan. Dimana semakin besar jarak cahaya dan konsentrasi maka nilai koefisien ekstingsinya akan semakin kecil.







V.

SIMPULAN 

Vitamin B12

adalah salah satu jenis vitamin yang yang larut dalam dalam air dan

merupakan bagian dari vitamin B complex yang mengandung kobalt, sehingga disebut sebagai sianocobalamin. 

Nilai serapan sianokobalamin pada panjang gelombang 550, 361, dan 278 sebesar 0,578 ; 2,581; dan 10,00.



Nilai koefisien ekstingsi pada panjang gelombang 550, 361, dan 278 sebesar 3,302 x 10 -6 ; 1,475 x 10 -5 ; dan 5,714 x 10 -5

VI.

DAFTAR PUSTAKA

Kristianigrum, Susila. Handout instumen uv-vis Lehninger, A. 1995. Dasar-dasar Dasar-dasar Biokimia. Biokimia. Alih Bahasa. Meggy Thenawijaya.Erlangga. Jakarta. http://www.chem-istry.org/materi_kimia/instrumen_analisis/spektrum_serapan_ultraviolet-tampak_uvvis_/hukum_beer_lambert/ diakses pada Kamis, 28 Maret 2015

VII.

LAMPIRAN

Perhitungan koefisien ekstingsi 

Panjang gelombang 550







A

Panjang gelombang 361 =εLC

10,00 = ε . 1 cm . 175.000 ppm ε = 5,714 x 10 -5

IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KOEFISIEN EKSTINGSI VITAMIN B12 DENGAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

Recommend Documents