Guía de Prácticas de Biología Celular y Molecular 2012 - Medicina USMP Filial Norte

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

Guía de prácticas BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR 2012-II Responsable Profesores

Blgo Lezama Vigo, Hélmer, MSc Blgo. Loayza Estrada, Carolina. (Coordinador) Blgo. Nolasco Cárdenas, Oscar, MSc. Blgo. Alata Linares, Vicky, Mg Blgo. Quintana Cáceda, Milagros, MSc. Blgo. Vadillo Gálvez, Giovana, Mg Q.F. Ramírez Rojas, Luisa. Blgo. Becerra Gutiérrez, Lizzie, Dr. Blgo. Abanto Díaz, Carlos, Mg. Blgo. Rodríguez Alayo, Néstor, Mg Blgo. Guzmán Vigo, César, Mg Méd. Ruiz Velazco, María Blgo. Murrugarra Bringas, Victoria. Blgo. Morales Ramos, Jorge. Méd. Sánchez Castillo, Jampieer.

APELLIDOS, NOMBRES:________________ NOMBRES:______________________________ _________________________  ___________  GRUPO:___ GRUPO:_______ ________ ____ DIA:_____ DIA:__________ _______ __ PROFESOR: PROFESOR:____ ________ ________ ______  __  1

INTRODUCCIÓN

La biología es la ciencia de la vida que estudia la estructura y función de los organismos vivos y sus componentes. Las aplicaciones de la investigación básica en biología molecular son numerosas, desde la tecnolog tecnología ía para trasplan trasplantar tar corazon corazones, es, manipul manipular ar genes, genes, diseñar diseñar fármacos fármacos contra contra microor microorgani ganismos smos patógenos hasta actividades como incrementar la producción mundial de alimentos. La guía de prácticas del curso de Biología Celular y Molecular tiene como objetivo entrenar al estudiante en los procedimientos de laboratorio y desarrollar su pensamiento científico, de manera que lo lleve a comprender los términos básicos de la Biología Molecular. El estudiante debe emplear esta guía en cada práctica de laboratorio y estar informado sobre la práctica que se llevará a cabo en cada sesión, anticipadamente. La guía se ha dividido en tres partes de acuerdo a cada evaluación parcial. La primera parte comp compren rende de la célul célula a y comp compone onente ntess celu celular lares es.. La segu segund nda a parte parte inclu incluye ye proce proceso soss celul celulare aress como como respiración, permeabilidad, división celular y la visualización de organelas. En la tercera parte se analizara el proceso de meiosis, comprensión del código genético y técnicas de manipulación de ácidos nucleicos. El alumno debe cumplir con los objetivos planteados al final de cada práctica. Así mismo debe presentar su guía de práctica terminada la misma, con las actividades requeridas en la sesión de práctica, debidamente desarrolladas.

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PROGRAMACIÓN DE CONTENIDO

 Nº

CONTENIDO

1

Introducción y organización de grupos de práctica. Bioseguridad

2

Micr Micros osco copí pía a téc técni nica cass de de man manip ipul ulac ació ión n y enfo enfoqu que e de de mue muest stra rass

3

Técn Técnic icas as de colo colora raci ción ón y obse observ rvac ació ión n de célu célula lass Proc Procar ario iota tass

4

Observación de células Eucariotas

5

Demostración experimental del fenómeno de difusión. Permeabilidad celular

6

Observación de movimientos celulares: Ciclosis. Observación de organelas celulares. Mitocondria, Cloroplasto, Vacuolas

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PRACTICA CALIFICADA

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SEMANA DE LA MEDICINA

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Actividad enzimática

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Fermentación

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Mitosis. Meiosis

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Fecundación

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Extrac racción ión de de DN DNA. El Electrof rofores resis

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Códi Código go Ge Gené néttico ico y Tra Traducc ducció ión n de de Pro Prote teín ínas as

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Estu Estudi dio o de Ras Rasgos gos Ge Gené néti tico coss en el Hom Hombre bre

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PRACTICA CALIFICADA FINAL

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Examenes Finales

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PRÁC PRÁCTI TICA CA Nº 1 BIOSEGURIDAD El trabajo en el Laboratorio requiere de la observación de una serie de normas de seguridad que eviten posibles accidentes debido al desconocimiento de lo que se está haciendo o a una posible negligencia de los alumnos que estén en un momento dado, trabajando en el Laboratorio.  A continuación se enumeran una serie de medidas e indicaciones de seguridad que deben tomarse durante las prácticas de laboratorio.

NORMAS PERSONALES 1. Lea con atención, antes de cada práctica, las indicaciones de su guía. Siga todas las instrucciones a menos que el profesor realice alguna modificación. 2. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. Se trabajará con cuidado y de manera organizada. Así mismo se mantendrá cada mesa de trabajo limpia, seca y ordenada. 3. Es obligatorio la utilización de mandil que le cubra brazos, piernas, torso y pies. Están prohibidos el uso de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos cortos, etc. en el laboratorio. La persona inapropiadamente vestida para trabajar en el laboratorio no podrá ingresar. 4. No se debe llevar las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar contaminadas. 5. Si tienes el pelo largo, deberá estar recogido. 6. Está terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas y comer. 7. En caso de derrame, accidente o daño avise inmediatamente al profesor. término de cada práctica práctica limpiar limpiar el área de trabajo y lavar los los materiales materiales utilizados utilizados con agua agua de caño. caño. 8.  Al término Lavarse las manos meticulosamente con agua y jabón. Finalmente cerciorarse que las llaves de gas y agua estén cerradas.

REACTIVOS QUIMICOS 1. Usar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos químicos peligrosos que puedan salpicar o derramarse. de utilizar un un compuesto, compuesto, asegurarse asegurarse bien de su necesidad, necesidad, fijarse fijarse bien en el rótulo. rótulo. 2.  Antes de 3. Como regla general, no coger ningún producto químico. El profesor o profesora te lo proporcionará. 4. Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el profesor. 5. Es muy importante que cuando los productos químicos de desecho se viertan en la pila de desagüe, aunque estén debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua. 6. No tocar con las manos y menos con la boca, los productos químicos. 7. No pipetear con la boca. Utilizar una bombilla de succión. 8. Los ácidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, siempre echaremos el ácido sobre agua.

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9. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben estar lejos de fuentes de calor. Si hay que calentar tubos con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama. 10.Manipule con precaución los solventes volátiles e inflamables como el éter, acetona y metanol. Nunca evapore estos solventes en una hornilla al abierto. Utilice siempre un sistema de condensación eficiente. 11.Si se vierte sobre ti cualquier ácido o producto corrosivo, lávate inmediatamente con mucha agua y avisa al profesor. 12. Al  Al preparar preparar cualquier cualquier disolución disolución se colocará colocará en un frasco limpio limpio y rotulado rotulado convenientem convenientemente. ente. 13.Encienda fuego en el laboratorio solo si no existen solventes inflamables en la vecindad. La persona que encienda el fuego debe primero verificar que no exista otra persona que este trabajando con solventes inflamables en el laboratorio.

MATERIAL DE VIDRIO 1 Use material material de vidrio vidrio limpio limpio y no no rajado. rajado. 2 El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio frío. Para evitar evitar quemaduras use guantes guantes o trapos. 3 Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa cuidadosamente estas dos normas: -Ten sumo cuidado y cerciórate que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningún compañero. compañero. Puede hervir el líquido y salir disparado, por lo que podrías ocasionar un accidente. -Calienta por la pared lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita suavemente (mira la figura).

EQUIPOS ELÉCTRICOS 1 Manipule cualquier cualquier equipo eléctrico eléctrico con las manos manos secas y asegúrese asegúrese que el área área de trabajo trabajo también este seca. 2 Ningún cordón eléctrico debe colgar fuera de la mesa de trabajo. 3 Cuando desconecte algún equipo del tomacorriente, jálelo por el enchufe y no por el cordón.

UTILIZACION DE BALANZAS

1 Cuando se se determinan determinan masas de productos productos químicos químicos con balanza, balanza, se colocará papel papel sobre sobre los platos platos de la misma y si el producto fuera corrosivo, se utilizará una luna de reloj. 2 Se debe evitar evitar cualquier cualquier perturbación perturbación que que conduzca conduzca a un error, error, como vibraciones vibraciones debidas a golpes, golpes, aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.

MANIPULACIÓN DE ESPECÍMENES

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1 2

Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo con cuidado extremo. Siempre utilice técnicas de esterilidad (a la llama del mechero, guantes, palillos estériles, etc.). Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y hojas.

NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO EN UN LABORATORIO Clasificación de microorganismos por grupos de riesgo para el trabajo de laboratorio:

Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo ) Microorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano o los animales. Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo )  Agentes patógenos que pueden provocar provocar enfermedades enfermedades humanas o animales pero que tienen pocas probabilidades de entrañar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la población, el ganado o el medio ambiente. La exposición en el laboratorio laboratorio puede provocar una infección grave, pero existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces y el riesgo de propagación es limitado. Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo )  Agentes patógenos patógenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales graves, pero que de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces. Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado )  Agentes patógenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales y que se transmiten fácilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente. Normalmente no existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces. BARRERAS DE CONTENCION Los laboratorios presentan diversas barreras de contención que previenen el escape y dispersión de agentes biológicos de riesgo.

Barrera primaria: Es aquella que protege al personal y al ambiente inmediato del agente de riesgo (vestimenta de uso exclusivo, cabina de bioseguridad y equipos provistos de dispositivos de seguridad). Barrera secundaria: Es aquella que protege el ambiente externo contra los agentes de riesgo (diseño del laboratorio e implementación de equipos de seguridad de acuerdo al nivel de Bioseguridad). Barrera microbiológica: Es un dispositivo o sistema que evita o limita la migración de microorganismos entr entre e los los espa espaci cios os situ situad ados os a ambo amboss lado ladoss del del mism mismo o y perm permitite e cont contro rola larr la conc concen entr trac ació ión n de microorganismos microorganismos en el ambiente, ambiente, dentro de límites prefijados. prefijados. Tiene como objetivo proteger proteger al operador o al operador y al proceso. Barrera microbiológica parcial: Es un dispositivo o sistema que limita la migración de microorganismos entre los ambientes situados a ambos lados del mismo. En este tipo de barrera se recomiendan Prefiltros, Filtros HEPA (Filtros (Filtros de alta eficiencia para el control de partículas en suspensión) suspensión) así como cabinas de bioseguridad clase I o II, lo cual dependerá del tipo de trabajo que se efectúa en un determinado laboratorio. Barrera microbiológica absoluta: Es un dispositivo o sistema hermético, a prueba de filtraciones filtraciones de aire o gas, que evita en forma total la migración de microorganismos entre el ambiente confinado por la barrera y el ambiente exterior de la misma. La barrera microbiológica absoluta puede confinar al producto o proceso, dejando al operador fuera de la misma o viceversa. En este caso se recomienda una cabina de bioseguridad de tipo III. Barrera química: Son dispositivos o sistemas que protegen al operador del contacto con substancias irritante irritantes, s, nocivas nocivas,, tóxicas, tóxicas, corrosiv corrosivas, as, líquidos líquidos inflamab inflamables, les, sustanc sustancias ias producto productoras ras de fuego, fuego, agentes agentes oxidantes y sustancias explosivas. En este caso se recomiendan una cabina de seguridad química.

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Barrera física: Son dispositivos o sistemas de protección individual o colectiva que protegen contra las radiaciones ionizantes, no ionizantes, ruidos, carga calórica, quemaduras y vibraciones excesivas.

NIVELES DE BIOSEGURIDAD BIOSEGURIDAD De acuerdo con el nivel de riesgo, el tipo de laboratorio, la barrera de contención requerida, los procedimientos y técnicas a usar, se han establecido los siguientes niveles de Bioseguridad.

Nivel de Bioseguridad I: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio básico, por personal adiestrado en los procedimientos que se ejecutan en él. En este nivel se trabaja con agentes clasificados en el Grupo de riesgo I por presentar un peligro mínimo para el personal del laboratorio y para el ambiente. En el nivel de Bioseguridad I no se requiere equipo especial ni un diseño específico de las instalaciones. El personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un científico con entrenamiento en microbiología. Nivel de Bioseguridad II: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio básico, por personal adiestrado en el manejo de agentes de riesgo del grupo II. Es similar al nivel I y en él se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel I en las siguientes características: 1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de agentes patógenos. 2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se está realizando algún trabajo. 3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzo cortantes contaminados. 4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en cabinas de trabajo microbiológico. Nivel de Bioseguridad III: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de contención. contención. El personal debe contar con adiestramiento específico para el manejo de agentes de alto riesgo clasificados clasificados en el grupo de riesgo III. En el laboratorio se realiza trabajo trabajo con agentes que pueden causar un daño daño serio serio y poten potencia cialm lmen ente te morta mortall como como result resultado ado de la inhal inhalaci ación ón o expos exposici ición ón a los mism mismos. os. El laboratorio cuenta con un diseño y características especiales tendientes a proteger al operador y al ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de protección siguiendo protocolos rigurosos. Los laboratorios se mantienen con una presión de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente. Nivel de Bioseguridad IV: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de contención máxima. Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biológicos clasificados en el grupo de riesgo IV por representar representar un alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo para la vida. Los agentes nuevos que presentan características antigénicas, patogénicas u otras similares a agentes de nivel III y IV son confinados confinados a nivel IV hasta que exista suficiente información científica científica para establecer a cual grupo de riesgo pertenecen. El personal que trabaja en los laboratorios de nivel IV tiene entrenamiento específico y extensivo en el mane manejo jo de agent agentes es infecc infeccios iosos, os, y cuen cuenta ta con entre entrena nami mient ento o para para traba trabaja jarr en el ambi ambient ente e estér estérilil y controla controlado. do. El laborato laboratorio rio cuenta cuenta con un diseño diseño y caracte característ rísticas icas especia especiales les tendient tendientes es a proteger proteger al operador y al ambiente. ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta vestimenta y equipo de protección de características superiores a las exigidas para el trabajo en un laboratorio de nivel III. Los trajes están diseñados diseñados para cubrir la totalidad del cuerpo, presentan un sistema de respiración respiración individual asociado y una leve sobrepresión interna para evitar así la entrada accidental accidental de partículas infecciosas. infecciosas. Los laboratorios se mantienen con una presión de aire negativa , lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos

escapen al ambiente.

 TIPOS DE LABORATORIOS En relac relación ión con el grado grado de riesg riesgo o los los labora laborator torios ios combin combinan an las las carac caracter teríst ística icass de diseñ diseño, o, construcción, medios de contención, equipo, prácticas y procedimientos de operación necesarios para trabajar con agentes patógenos de los distintos grupos de riesgo. De esta manera los laboratorios se clasifican en 3 categorías:

Laboratorio básico: Dividido en dos grupos, el de nivel de bioseguridad 1;y el de nivel de bioseguridad 2; Laboratorio de contención: con nivel de bioseguridad 3, y 7

Laboratorio de contención máxima: con nivel de bioseguridad 4.

TRABAJO GUIADO 1.-Complete los nombres de los distintos símbolos de bioseguridad que se presentan a continuación.

1.- complete el recuadro : NIVEL DE

CARACTERISTICAS

BIOSEGURIDAD

EJEMPLOS DE PATOGENOS

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FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

PRACTICA N° 2 9

FIRMA/ SELLO PROFESOR

MICROSCOPÍA Y ENFOQUE DE MUESTRAS

I.

FUNDAMENTO

La invención del microscopio se atribuye a Johannes y Zacharias Jansen (1590) y el descubrimiento de la estructura celular de los organismos a Robert Hooke (1665). Posteriormente, en 1683 y con un microscopio muy rudimentario Leeuwenhoek descubrió un universo enmarcado sólo por decenas de micrómetros. Desde aquel entonces, el perfeccionamiento continuo al microscopio ha permitido a la Ciencia profundizar cada vez más en el conocimiento de la ultraestructura celular y de las relaciones intercelulares. MICROSCOPIO COMPUESTO El microscopio es un instrumento óptico que se compone de una serie de lentes para conseguir  imágenes aumentadas de objetos diminutos que por su extrema pequeñez no son visibles al ojo humano. El microscopio compuesto está constituido de un SISTEMA OPTICO destinado a obtener una imagen aumentada del objeto, un SISTEMA MECANICO que sostiene los distintos elementos ópticos y los objetos que se van a examinar y un SISTEMA DE ILUMINACIÓN. CARACTERISTICAS DEL MICROSCOPIO Dado que la imagen del microscopio no es real sino virtual, se han determinado algunos términos de medida microscópica: En cualqui cualquier er microsc microscopio opio el poder poder de resoluci resolución ón define define su rendim rendimiento iento óptico, óptico, porque porque es su capacidad para ver como separados dos puntos que realmente lo están pero que nuestro ojo sólo puede ver  como una entidad única (es decir es su capacidad de entregar imágenes bien nítidas). El máximo poder de resolución resolución del microscopio microscopio óptico es de 0,2 micrómetros(0,2 micrómetros(0,2 µm), debido a que la longitud de onda de la luz utilizada (400-700 (400-700 µm) es un factor limitante. El ojo humano tiene un poder de resolución de aproximadamente 100 micrómetros. El límite de resolución puede definirse como la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que se puedan distingu distinguir ir como separados separados.. El límite de resolución resolución se puede calcula calcularr a partir de la siguiente ecuación: Kλ L.R. = ---------------

K = constante = 0.61

 A.N λ = longitud de onda de luz AN = apertura numérica de cada lente objetivo es su capacidad para captar la máxima cantidad de la luz difractada por el objeto. Depende del índice de refracción del medio. Recuerda: A menor límite de resolución mayor será el poder de resolución Resolución y magnificación Máximas Instrumento óptico Resolución Magnificación Ojo humano 0,1 mm Microscopio óptico 0,2 u 2500 Microscopio electrónico 0,1 nm 1000 000 II. OBJETIVOS  

Reconocer las partes del microscopio óptico. -Conocer su utilización para la observación de distintas muestras biológicas.

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III. MATERIALES Y MÉTODOS En el laboratorio encontrarás: - Microscopio compuesto - Aceite de inmersión - muestras fijadas IV. PROCEDIMIENTO. Se reconocerán las partes de un microscopio óptico. Señalar las partes del mismo en el dibujo adjunto. 1. SISTEMA OPTICO. El sistema óptico está constituido por:

Objetivos: sistema de lentes convergentes que actúa como una lente que se encuentran montados en el revolver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos ( 4x, 10x, 40x, 100x) los que se clasifican en:  

Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparación. Objetivos de inmersión: en el cual un líquido ( aceite) se interpone entre la lente y la preparación.

Ocular : El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto número de veces (X veces, según se indica en el propio ocular). Los aumentos más comunes son 10X y 16X. 2.-SISTEMA DE ILUMINACIÓN.

Condensador : Sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparación. Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la preparación. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta). Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste. 3.-SISTEMA MECANICO

Tubo óptico: Cilíndrico ahuecado destinado a llevar el ocular en su extremo superior y los objetivos montados en el revólver en su extremo inferior. La longitud del tubo debe ser siempre precisa. Revólver : Pieza metálica situada en la parte inferior del tubo que por rotación sitúa los diferentes objetivos en posición de trabajo. Platina: Superficie plana con una perforación central para permitir el paso de la luz hacia preparación. Posee un carro que sostiene la preparación preparación y que puede desplazarla hacia delante y hacia el lado izquierdo o hacia el lado derecho. Tornillo Macrométrico: Mecanismo de enfoque de avance rápido. Tornillo Micrométrico: Mecanismo de enfoque con precisión o ajuste fino. Base o Pie: Estructura sólida y pesada que sostiene y da estabilidad a todo el instrumento. Columna: Vástago vertical que se articula con la base y con el tubo del microscopio y lleva el mecanismo de 11

movimiento del mismo. NOTA IMPORTANTE. Presta mucha atención al manejo del microscopio que tienes a tu cargo. Debes hacerlo hacerlo cuidado cuidadosam samente ente porque son aparatos aparatos muy delicados delicados y dejarás dejarás a consign consigna a tu documen documento to de identificación.

MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO 1 Colocar el objetivo de menor aumento aumento en posición de empleo y bajar la platina completame completamente. nte. 2 Colocar la preparación preparación sobre sobre la platina sujetándola sujetándola con las pinzas metálicas. metálicas. 3 Comenza Comenzarr la observa observación ción con objetiv objetivo o de menor menor aumento. aumento. Si la preparación preparación es de bacterias bacterias emplear emplear el objetivo de mayor aumento (objetivo de inmersión, ver punto 6). 4 Para realizar el enfoque: a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando empleando el tornillo macrométrico. Esto Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, oculares, ir separando separando lentamente el objetivo objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino. 5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. 6 El empleo empleo del del objetiv objetivo o de inmersió inmersión n es siemp siempre re utilizan utilizando do aceite aceite de inmers inmersión. ión.

TRABAJO GUIADO 1.- Indique todas las partes del microscopio

FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

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FIRMA/ SELLO PROFESOR

PRACTICA Nº 3 PRIMERA PARTE: TECNICAS DE COLORACION. PREPARACION DE MUESTRAS I. FUNDAMENTOS La coloración implica la penetración del colorante por fenómeno osmótico y su fijación se debe a fenómenos de absorción de partículas o iones. Químicamente la coloración es la unión de las moléculas del colorante con los elementos constituyentes de la célula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino y se tiñen con los colorantes ácidos; otros tienen pH ácido y se tiñen con colorantes básicos. Sin embargo es necesario señalar que tanto el núcleo como el citoplasma tienen características anfótericas de manera que se pueden teñir, el núcleo con algunos colorantes ácidos y el citoplasma con algunos colorantes básicos. El mecanismo de coloración de las muestras biológicas pueden ser afectados por:  Pureza del colorante  Concentración del colorante  pH de la solución del colorante  Temperatura del medio ambiente ambiente   Temperatura  Sustancias adicionales (mordientes) coloración.   Tiempo de coloración. Los preparados microscópicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que tienen por objeto identificar en forma rápida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la finalidad de resolver algún problema de interés particular. Los preparados microscópicos microscópicos más frecuentes en Biología son: Preparados “en fresco” Preparados “en seco” Los preparados “en Fresco” son preparaciones microscópicas acuosas, que se caracterizan por que la sustancia examen, no está adherida de un modo fijo a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el preparado. Los preparados “en seco” son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensión, fijación y coloración), y se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la muestra.

Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicación de estos factores que inciden inciden básicam básicament ente e en la complem complement entació ación n del aprendi aprendizaj zaje e del estudio estudio de estruct estructuras uras celulares, identificación de tejidos y microorganismo. II. OBJETIVO. 1. Diferenc Diferenciar iar y explicar explicar el fundam fundamento ento de las distin distintas tas colorac coloracione ioness 2. Realiza Realizarr colorac coloracion iones es con con muestr muestras as bioló biológica gicass III. MATERIALES

13

Encontrarás en el laboratorio. - Microscopio óptico - Pipetas pasteur - Goteros - Agua destilada - Mechero - Azul de metileno - Giemsa

- Safranina - Eosina - Violeta de genciana - Wright - Fucsina - Verde de Janus - Hematoxilina

IV. PROCEDIMIENTO

PREPARADOS EN FRESCO 1. Colocar Colocar una una gota gota de agua agua estanc estancada ada en en una lamina lamina 2. colocar una laminilla cubreobjetos 3. observar PREPARADOS EN SECO 1. Coloca Colocarr la la mues muestra tra en la lamin lamina a 2. Realiza Realizarr la colora coloració ción n resp respect ectiva iva 3. Secar Secar al medio medio ambi ambient ente e 4. obse observa rva la micro microsc scop opio io

PARTE 2: OBSERVACIÓN OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS PROCARIOTES, PROCARIOTES, I. FUNDAMENTO La principal característica característica de la célula procariota es que carece de núcleo celular. Las bacterias, los organism organismos os procariot procariotes es más represen representativ tativos, os, compren comprenden den por  una parte, especies de importancia importancia médica puesto que producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los anim animale aless pero, pero, por otra otra parte parte,, una una gran gran mayor mayoría ía repres represent enta a beneficios para la agricultura, la industria y la salud humana y animal. Para observar este tipo de células se utiliza la Tinción Gram, Gram, técnica técnica diseñad diseñada a por el médico médico danés danés Hans Hans Christia Christian n Gram. Esta consiste en poner en contacto las células bacterianas con colorantes básicos como violeta de genciana, utilizando la solución de lugol como mordiente. Esto forma un compuesto yodad yodado o que que se fija fija fuerte fuerteme ment nte e en determ determina inada dass bacter bacterias ias.. Según la coloración que adquieran, las bacterias se clasifican en: GRAM POSITIVAS: se tiñen fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloración violeta. GRAM NEGATIVAS NEGATIVAS:: se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se decoloran con solvente solventess orgánicos orgánicos.. Se utiliza utiliza adiciona adicionalmen lmente te la safrani safranina na o fucs fucsin ina, a, que que se empl emplea ea com como colo colora rant nte e de contr ontras aste te,, adquierendo una coloración rosada. La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial de sus paredes bacterianas. Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular con mureina y ácido teitoico. En cambio, las Gram negativas tienen una pared mucho más compleja que contiene, además del peptidoglucano, una asociación de proteínas lípidos y lipopolisacáridos  Además de la coloración coloración esta esta técnica nos permite permite distinguir distinguir en las bacterias: bacterias: a) morfología: morfología: cocos, cocos, bacilos, bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios, etc) b) agrupación: pares, cadenas tétradas, racimos, sarcina  A: forma forma de caña o bacilos bacilos B: Redondos en líneas: estreptococos

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C: redondos en cúmulos: estafilococos D: Redondos en pares: diplococos E: Forma de espirales: espirilos F: En forma de coma: vibrios II. OBJETIVOS Reconocer los distintos tipos de bacterias según se tiñan o no con la Tinción Gram.



III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio:  Microscopio óptico - Alcohol acetona  Soluciones para la tinción: - Fucsina o safranina - Violeta de genciana - Aceite de inmersión - Lugol - Mechero de alcohol

IV. PROCEDIMIENTO La tinción Gram se realizará sobre las muestras de yogur, sarro dentario y vinagre que los alumnos traerán. Bacterias del yogurt El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: bacterianas: el Streptococcus termophilus , poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio. Bacterias del vinagre El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético, principalmente  Acetobacte  Acetobacterr aceti , aunque también Gluconobacter . Se trata de bacilos rectos con flagelos polares. Bacterias del sarro dental El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constitu constituido ido princip principalme almente nte por restos restos proteico proteicos, s, sales sales minerale mineraless y bacteria bacteriass junto junto con sus product productos os metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, saprófitas, pudiéndose observar  gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos. Realizar los siguientes pasos para la tinción Gram de cada una de las 3 muestras indicadas. 1 2 3 4 5 6

Realizar Realizar una extensión extensión de de la muestra muestra de de cultivo bacteriano bacteriano sobre un portaobjetos portaobjetos Seca Secarr ante ante un un mec meche hero ro.. Cubrir Cubrir el prepar preparado ado con con violeta violeta de genc genciana iana por por 1 minuto. minuto. Enjuaga Enjuagarr la lámina lámina con agua agua desti destilada lada Añad Añadir ir lug lugol ol por 1 minu minuto. to. Lavar Lavar con agua agua destilad destilada a y decolorar decolorar con con alcohol alcohol aceton acetona. a. 15

7 Añadir Añadir fucsin fucsina a o safranin safranina a y dejar dejar que actúe actúe por por 1 minuto. minuto. 8 Lava Lavarr con agua agua corri corrien ente, te, sec secar  ar  9 Coloque Coloque una gota de de aceite de de inmersión inmersión encima encima de la lámina lámina cubreobjetos cubreobjetos y observar observar al microscopio con el objetivo de inmersión.

PARTE PRACTICA 1.- completar el grafico

2.-Dibuje todas las muestras observadas en la práctica

Muestra:_________  Coloración:_______ Aumento:________

Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

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Muestra:_________  Coloración:_______ Aumento:________

FECHA

ACTITUDINAL

Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

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FIRMA/ SELLO PROFESOR

PRACTICA Nº4 OBSERVACIÓN DE CÉLULAS

EUCARIOTES

I. FUNDAMENTO En 1939, en base a observaciones realizadas por los científicos alemanes Schleiden y Schwan, se plasmó la teoría celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biológicas. Esta teoría postula que los “cuerpos de todos los animales y vegetales están formados de células y que solo pueden aparecer  nuevas células por división de las células preexistentes”. De ahí que los organismos por muy sencillos que sean están constituidos por unidades vivas denominadas células. La célula eucariota es más compleja que la célula procariota y contiene, a diferencia de esta última, núcleo celular. Los organismos más simples (protozoarios) están constituidos de una sola célula eucariota mientras que los más complejos o multicelulares están formados por un gran número de células eucariota que se hallan organizadas en tejidos, órganos y sistemas. II. OBJETIVOS  

Observar y caracterizar células eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla y mucosa bucal). Observar y caracterizar células eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).

III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio  Microscopio óptico  Cubeta de tinción  Lugol  Frasco lavador   Mechero de Alcohol  Alcohol absoluto  Lanceta estéril



Cubeta de tinción



Láminas portaobjeto y cubreobjeto Gotero Bisturí u hoja de afeitar  Levadura de pan

 

Cebolla  Hisopos  Tocino estancada en frasco oscuro oscuro   Agua estancada Materiales de disección: tijera, pinza, estilete. 





Hematoxilina Formol Eosina Sudan III



  

IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Observación de células vegetales (Células epiteliales de Allium cepa) 18

Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla, son de forma alargada y bastante grande. La pared celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Los núcleos son grandes y muy visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente coloreadas. 1 Separe Separe una de las capas capas del bulbo bulbo de la cebolla cebolla.. Con ayuda de una pinza pinza desprend desprenda a la membrana membrana epidérmica que cubre la parte interna de la cebolla y extiéndala en el portaobjetos. 2 Utiliza Utilizando ndo una hoja de afeitar afeitar obtenga obtenga una porción de medio medio centímetro centímetro cuadrado cuadrado,, cúbrala cúbrala con una gota de lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio. 3 Reconoz Reconozca ca las las partes partes de la la célula célula vegetal. vegetal. 4.2. Observación de organismos unicelulares 1 2 3 4

Coloque Coloque una gota de de agua estancada estancada sobre un un porta objeto y cubran cubran con una laminilla. laminilla. Observe Observe con el objeti objetivo vo de de menor menor aume aumento. nto. Ajuste Ajuste el diafra diafragma gma para para increme incrementar ntar el contr contraste aste.. Observe la forma, tamaño tamaño y movimiento movimiento de de los organismos organismos unicelulares unicelulares (ver figura adjunta).

4.3. Observación de levaduras del pan

1

Diluya un trocito de levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae) con agua destilada, en un tubo de ensayo. 2 Observe Observe con el objetiv objetivo o de mayor mayor aumen aumento. to. 3 Ajuste Ajuste el diafr diafragma agma para para increm incrementa entarr el contras contraste. te. 4 Observe Observe la la forma forma y tamaño tamaño de de estos estos organi organismos smos.. 4.4. Observación de células animales (Epitelio bucal) El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo y con menos color el citoplasma de las células. Éste suele ser algo granuloso. 1 2 3 4 5 6

Con un hisopo limpio extraiga extraiga suavemente suavemente la mucosidad mucosidad de de la cavidad cavidad bucal. bucal. Deposite la mucosidad mucosidad extraída extraída en el centro centro de una una lámina portaobjetos portaobjetos y extiéndalo extiéndalo con un frotis. Agregue Agregue unas unas gotas gotas de AZUL AZUL de de metileno metileno y espere espere 3 minutos minutos.. Elimine el exceso exceso de colorante colorante utilizando utilizando agua agua y coloque un cubreobjetos cubreobjetos.. Observe la muestra muestra a menor menor aumento aumento y localice: células asociadas asociadas y dobladas. dobladas. Luego visualice visualice a mayor aumento aumento y reconozca reconozca los componentes componentes celulares.

4.5. 4.5.

Obse Observ rvac ació ión n de cél célul ulas as ani anima male less (Tej (Tejid ido o adip adipos oso) o)

El Sudan III es un compuesto que tiñe lípidos de color rojo intenso. En el tejido adiposo, que contiene gran cantidad de grasas, se observarán los adipocitos teñidos por el Sudan III. 1 2 3 4 5

Con ayuda ayuda de de un bisturí, bisturí, corta cortarr una fina fina capa de de grasa grasa de tocino tocino Colocarla Colocarla en un portaobjetos portaobjetos y cubrirla con unas gotas de formol. formol. Dejar Dejar actuar 4 minutos. Lavar la muestra muestra con agua agua y cubrirla cubrirla con unas unas gotas de Sudán III. Dejar actuar actuar unos unos 5 minutos. minutos. Volver Volver a lavar la preparac preparación ión con agua, agua, cubrirla cubrirla con con un cubreobje cubreobjetos tos Obser Observa varr al al micr microsc oscop opio. io.

4.6. Observación de células animales (Sangre)  Al microscopio microscopio las células sanguíneas sanguíneas se verán predomin predominante antemen mente te los glóbulos glóbulos rojos, rojos, hematíe hematíess o eritroci eritrocitos tos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, 19

teñido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. -Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo grande, redondo, son los más móviles y su función función principal principal es la fagocito fagocitosis sis.. -Polim -Polimorfon orfonucl ucleares eares:: núcleo núcleo fragmen fragmentado tado o arrosariado. arrosariado. Pueden ser eosinófilos, eosinófilos, con abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos. 

Los eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el núcleo teñido de color azul marino. Estos glóbulos aumentan su número en caso de parasitosis o procesos alérgicos.



Los basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy oscuro. -Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción. Efectúa los siguientes pasos para ambas coloraciones, Wright y Hematoxilina-Eosina:



1 2 3

Con ayuda de una lanceta desechable, desechable, realice una punción del pulpejo del dedo anular de la mano izquierda, previa desinfección con algodón y alcohol. Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto Colocar el frotis extendido ya seco, sobre una base plana en posición totalmente horizontal.

Para la coloración de Wright:

1 2 3 4

5 6

Coloree con unas gotas de colorante Wright, inmediatamente agregar sobre el colorante el mismo numero de gotas de agua destilada y mezclar rápidamente, soplando suavemente hasta que se forme una capa plateada . Dejar Dejar repos reposar ar la la mezcl mezcla a por 8 - 10 minutos, minutos, observan observando do la inten intensida sidad d de de color color.. Lave Lave con con agua agua corr corrien iente te y dejar dejar seca secarr al medio medio amb ambien iente, te, si si es posib posible le con con la lam lamin ina a en forma forma vertical. Observe Observe al al microsco microscopio pio.. Utilice Utilice el objet objetivo ivo de 100X 100X para para la observ observació ación n de las célul células as y núcleos núcleos.. Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrófilos, basófilos , eosinófilos, monocitos y linfocitos. Dibuj ibuje e cada ada for forma ma de núcl núcleo eo..

Para la coloración de Hematoxilina-Eosina: 1 Colocar Colocar el frotis de sangre sobre sobre la cubeta cubeta de tinción tinción y añadir añadir unas gotas gotas de alcohol alcohol absoluto absoluto y dejar  que el alcohol se evapore para fijar la preparación. 2 Cubrir con con unas gotas gotas de hematoxilina hematoxilina y dejar actuar actuar durante 15 minutos. minutos. Evitar la la desecación desecación del colorante agregando más líquido. 3 Lavar la preparación preparación y añadir añadir unas unas gotas de eosina eosina dejándola dejándola actuar actuar 1 minuto. minuto. 4 Volver Volver a lavar lavar hasta hasta que que no queden queden restos restos de de colorant colorante. e. 5 Dejar secar secar aireando aireando el porta o bien bien al calor calor muy muy lento de la llama llama del mechero. mechero. 6 Observar Observar al microscopio. microscopio. Utilice Utilice el objetivo objetivo de 100X para para la observación observación de las células y núcleos.

DESARROLLO 1.- ¿Por qué los eritrocitos se tiñen con Eosina y los Leucocitos con Hematoxilina?  ___________________________  _________________________________________ ____________________________ ____________________________ _______________  _   ___________________________  _________________________________________ ____________________________ ____________________________ _______________  _   ___________________________  ______________________________  ___  2.-¿para qué sirve el FORMOL en la coloración de adipositos?  ________  ____________ ________ _________ __________ _________ _________ _________ ________ ________ ________ _________ _________ _________ __________ __________ __________  _____  20

 ________  ____________ ________ _________ __________  _____ 

3. Dibuje las las distintas distintas muestras muestras observada observadass en la práctica práctica

Muestra:_________  Coloración:_______ Aumento:________

Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

Muestra:_________  Coloración:_______ Aumento:________

Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

Muestra:_________  Coloración:_______ Aumento:________

Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

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FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

FIRMA/ SELLO PROFESOR

PRACTICA Nº 5 OBSERVACIÓN OBSERVACIÓN DE PERMEABILIDAD CELULAR I.

FUNDAMENTO

La membrana celular permite el transporte de sustancias de manera selectiva. Muchas sustancias, además del agua, entran a la célula y salen de ella por efecto de los gradientes de concentración, aunque sólo unas cuantas (CO2 y O2) puedan hacerlo tan fácilmente como el agua. Si una membrana celular se deja atravesar por una sustancia, se dice que es permeable a dicha sustancia.

El volumen celular cambia cuando el agua penetra o sale de la célula por un proceso denominado osmosis. En términos osmóticos las soluciones o medios separados por una membrana se pueden clasificar  como hipertónicas, isotónicas e hipotónicas; se dice que un medio es hipertónico, cuando la concentración del soluto en la solución es mayor en relación con otro medio de solución. Por ejemplo, si tenemos dos soluciones, soluciones, la solución 1 con agua destilada destilada y la solución 2 con una solución de azúcar al 10%, se dice que la solución 2 de azúcar es hipertónica en relación a la solución 1. Por el contrario, la solución 1 es hipotónica en relación a la solución 2 azucarada, es decir que la concentración del soluto es menor en relación con el otro medio. Y una solución isotónica, se cuando la concentración de soluto es igual a la concentración de soluto de la otra solución.

22

II. OBJETIVO. 2.1 Observar y describir los fenómenos de difusión y ósmosis y su importancia en el intercambio de sustancias en la célula. III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio. - Microscopio óptico - Agua destilada - Tubos de ensayo - Algodón - Gradillas - Marcador de vidrio - Sol Soluc ució ión n hipo hipotó tóni nica ca NaCl NaCl 0.0 0.065 65 M - Lig Ligad adur ura a - Solución hipertónica NaCl al 2% - Alcohol corriente -Azul de metileno - Solución isotónica de NaCl al 0.9% (suero fisiológico) IV. PROCEDIMIENTO

Parte A 1 En tres tres tubos tubos de ensay ensayo o numerad numerados os coloq coloque: ue: -1 ml. de solución hipotónica NaCl 0.01 % -1 ml. de solución isotónica de NaCl al 0.9% (suero fisiológico) -1 ml. de solución de hipertónica NaCl al 2%.

2 3 4 5 6

Obtener 2ml de sangre venosa con la lanceta hematológica en un tubo limpio con heparina Dejar Dejar caer 5 gotas gotas de sangre sangre en cada cada uno de los los tubos tubos con un gotero gotero.. Agite Agite los tubos tubos y dejar dejar en reposo reposo durant durante e 2 ó 3 minutos. minutos. Con un gotero gotero coloque coloque en una lámina lámina portaobjeto portaobjeto una gota de cada cada uno de los tres tubos. tubos. Luego examine examine en el el microscopio microscopio su aspecto. aspecto. Observar Observar qué efecto efecto ha tenido tenido las distintas distintas soluciones soluciones sobre la morfología del eritrocito y explicar por qué.

Parte B 1. Colocar los tres huevos en un vaso de precipitación de 1 litro y verter el vinagre hasta cubrir  completamente los huevos. Debe realizarse este proceso 48 horas antes de la práctica. 2. Al momento de la práctica lavar con mucho cuidado con agua de caño. 3. Frotar cuidadosamente con los dedos para sacar la cáscara por el lado de cámara de aire. Realizar este proceso hasta tener casi un tercio del huevo libre de cáscara. 4. Coloquen agua de caño en uno de los vasos de precipitación de 100ml y ubiquen allí uno de los huevos. El agua debe cubrir al huevo. 5. En otro vaso de precipitación colocar un huevo en la mezcla muy concentrada de sal en agua y colocar  allí otro de los huevos. 6. Llenar el tercer vaso con agua destilada y poner allí el tercer huevo. 7. en cada frasco se adicionó unas gotas de agua de metileno 8. Dejar por una hora y observar membrana y el contenido interno del huevo. NOTA: En todos los vasos de precipitación, los huevos deben quedar sumergidos en el líquido.

DESARROLLO 1. Mencione y dibuje las diferencias encontradas en cada uno de los huevos sometidos a cada proceso. TABLA: Observación de resultados

23

Solución de Sal

Agua de caño

Agua destilada

Huevo

2. Dibujar todas muestras observadas en la práctica

Coloración:_______ 

Muestra:_________  Coloración:_______ 

Aumento:________ 

Muestra:_________ 

Aumento:________ 

Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

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FIRMA/ SELLO PROFESOR

PRACTICA N° 6 PRIMERA PARTE: OBSERVACIÓN OBSERVACIÓN DE MOVIMIENTO CELULAR. CICLOSIS I. FUNDAMENTO El citoplasma celular esta formado por el hialoplasma y el morfoplasma. El hialoplasma es un medio acuoso, con un 85% de agua en el cual esta disuelta gran cantidad de moléculas formando una solución coloida coloidal;l; prótidos prótidos (AA, (AA, enzimas enzimas,, proteínas proteínas estructu estructurales rales), ), lípidos, lípidos, glúcido glúcidoss (polisac (polisacárid áridos, os, metabol metabolitos itos), ), ácidos nucleicos (nucleótidos, nucleósidos, ADN, ARN, ARNt, ARNr) sales e iones. El hialoplasma es un medio dinámico, ya que puede pasar del estado de sol a gel acumulando moléculas que establecen enlaces entre si y aumentando la viscosidad; pueden invertirse el proceso pasando el hialoplasma a sol al diluirse hasta que se separan las moléculas, esto permite la creación de corri corrien entes tes inter interna nass o Cicl Ciclos osis is y algun algunas as célu células las pued pueden en emiti emitirr prolo prolong ngaci acion ones es del del citopl citoplasm asma a o SEUDOPODOS como órganos de desplazamiento. II. II. OBJE OBJETI TIVO VOS S 2.1. Explicar los movimientos citoplasmáticos III. MATERIALES Encontraras en el laboratorio - microscopio compuesto - Lugol - Hoja de Elodea IV. PROCEDIMIE PROCEDIMIENTO NTO 4.1. Movimientos Citoplasmáticos: Ciclosis 1. Colocar una hoja de Elodea sobre una lamina portaobjetos 2. Agregar una gota de agua y colocar la laminilla 3. A menor y mayor aumento observar las células e identificar los cloroplastos 4. Con abundante luz observar los desplazamientos del citoplasma conjuntamente con los Cloroplastos

SEGU SEGUND NDA A

PART PARTE E:

OBSERVACIÓN DE CITOPLASMATICA

ORGANELAS

E

INCL NCLUSIONES NES

I. FUNDAMENTO Todas las funciones intracelulares (síntesis de proteínas, replicación de DNA y rutas metabólicas en general) son realizadas gracias una compleja organización de las organelas. Una célula eucariota típica contiene organelas membranosas (retículo endoplasmático, aparato de golgi, peroxisomas, mitocondrias, etc.) y organelas no membranosas (ribosomas, proteosomas, etc.). Todas ellas efectúan una función puntual en la célula que le permite su supervivencia y replicación. La supervivencia de la célula depende, entre otros factores, de la obtención de energía neta. Dicho proceso está a cargo de las mitocondrias y/o de los cloroplastos. Las mitocondrias se encuentran en mayor  número en células animales pero también pueden presentarse en células vegetales, mientras que los

cloroplastos son exclusivos de células vegetales y algunas bacterias fotosintéticas. Las mitocondrias oxidan moléculas orgánicas utilizando oxígeno del aire como aceptor de electrones y forman ATP. Los cloroplastos capturan energía de la luz y la transforman en ATP mediante el proceso denominado fotosíntesis. II. OBJETIVOS 2.1Observar y diferenciar orgánulos de células vegetales: cromoplastos y cloroplastos. -Reconocer y diferenciar mitocondrias. III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio: - Microscopio óptico - Verde de Janus - Agua destilada - Lugol - Gotero IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Observación de cromoplastos en células de pulpa de tomate La pulpa del tomate nos muestra las células generalmente bastante sueltas unas de otras. En el citoplasma se percibe una serie de gránulos rojizos-anaranjados que son los cromoplastos. El núcleo puede llegar a observarse observarse por su típico aspecto y tamaño. Es frecuente la presencia presencia de gránulos de almidón almidón de forma forma arriñonad arriñonada. a. En las células células menos alteradas alteradas por la compres compresión ión se ven grandes grandes vacuolas incoloras. 1 Cortar con con el bisturí un pequeño pequeño trozo de uno o dos milímetros milímetros de de grosor, de de la parte pulposa pulposa del tomate. 2 Llevarlo Llevarlo sobre sobre un porta, porta, sin sin poner poner agua. agua. 3 Poner Poner el cubre-ob cubre-objeto jeto y comprim comprimir ir suavemen suavemente te la preparaci preparación. ón. 4 Obser Observa varr al micros microsco copio pio 4.2. Observación de cloroplastos en células de Elodea

1 2 3

En un portaobjetos coloque una porción pequeña de hoja de Elodea y agregue una gota de agua. Cubrir Cubrir la muestra muestra con con una una lámina lámina porta portaobje objetos. tos. Aprecie Aprecie la forma forma de de los cloropl cloroplasto astoss y el movimient movimiento o de estos. estos.

4.3. Observación de mitocondrias en células epiteliales humanas 1 2 3 4 5

Preparar Preparar un un frotis frotis de epite epitelio lio buca bucall con un un hisopo. hisopo. Seca Secarr al al medi medio o amb ambien iente. te. Agregar Agregar unas unas gotas gotas de Verde Verde de Janus Janus y dejar dejar reposar reposar por por 3 minutos. minutos. Elimine Elimine el exces exceso o del colora colorante nte con con agua agua destilad destilada. a. Observe al microscopio microscopio y describa la forma forma de las mitocondrias mitocondrias en la célula. célula.

PARTE PRACTICA 1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la práctica. Mencionando el aumento total.

Coloración:_______ 

Muestra:_________  Coloración:_______ 

Muestra:_________ 

Aumento:________ 

Aumento:________ 

Muestra:_________ Coloración:_______

Muestra:_________   Coloración:_______ 

Aumento:________  Aumento:________ 

Coloración:_______ 

Muestra:_________  Coloración:_______ 

Aumento:________ 

FECHA

ACTITUDINAL

Muestra:_________ 

Aumento:________ 

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

FIRMA/ SELLO PROFESOR

PRACTICA Nº 7 ACTIVIDAD ENZIMÁTICA PRIMERA PARTE: CATALASA I. FUNDAMENTO Las enzimas son proteínas cuya función es acelerar (catalizar) reacciones químicas que ocurren dentro de la célula y que en ausencia de ellas no se llevarían a cabo o de lo contrario toma tomaría rían n much muchís ísimo imo tiemp tiempo. o. Como Como se aprec aprecia ia en la siguie siguient nte e figura figura,, las enzim enzimas as son son específicas para sus sustratos, los cuales quedan unidos complementariamente al sitio de unión de la enzima donde son modificados enzimáticamente, liberándose al final de la reacción los productos respectivos.

La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y veget vegetal ales es.. La funci función ón de esta esta enzi enzima ma en los tejid tejidos os es neces necesari aria a porqu porque e duran durante te el metabolismo metabolismo celular, se forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se soluciona el problema. La reacción de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente:

La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias  patógenas  patógenas son anaero anaerobias bias (no pueden pueden vivir con con oxígeno oxígeno), ), mueren mueren con con el desprend desprendimiento imiento de oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada. II. OBJETIVO. 2.1 Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal. III. MATERIALES

Encontrarás en el laboratorio - Gradillas - Pipetas-tubos de ensayo Deberás traer de casa - Hígado de pollo - Agua oxigenada

IV. MÉTODOS 1 Colocar Colocar en un tubo de ensayo ensayo unos trocitos trocitos de hígado. 2 Añadir Añadir 5 mililitr mililitros os de de agua agua oxige oxigenad nada. a. 3 Se observará observará un intenso intenso burbujeo burbujeo debido debido al desprendimient desprendimiento o de oxígeno. oxígeno. 4 Discutir Discutir la formación formación de burbujas burbujas en distintas distintas mesas, mesas, relacionándolo relacionándolo con la concentració concentración n de catalasa.

SEGUNDA PARTE: HIDROLISIS DE LA AMILASA I.

FUNDAMENTO

Mediante esta experiencia vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina , presente en la saliva. Esta enzima actúa sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace

O-glicosídico, por lo que el almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa. Es importante que recuerdes las reacciones características de glúcidos para comprender esta experiencia. II. II. OBJET OBJETIV IVOS. OS. Comp Comprob robar ar que sólo sólo bajo bajo ciert ciertas as condi condici cion ones es las enzim enzimas as funci funcion onan an óptimamente catalizando una reacción enzimática con su sustrato. III. MATERIALES MATERIALES Encontrarás en el laboratorio. - tubos de ensayo -gradillas -solución diluida de almidón y sacarosa

- Baño maría - Vaso de precipitados - Lugol

IV. MÉTOD MÉTODOS OS 1. 2. 3. 4.

Poner Poner en una gradilla gradilla cuatro cuatro tubos tubos de ensay ensayo, o, numera numerados dos del 1 al 4. Proc Procede ederr a llena llenarr los tub tubos os como como lo ind indica ica la la figur figura. a. Agre Agrega garr 3 got gotas as de lug lugol ol a cada cada tubo tubo Apar Aparec ecer erán án difer diferen enci cias as entre entre los 4 tubo tuboss depe depend ndie iend ndo o de si hay hay o no almid almidón ón en el medio medio.. Recuerda: Recuerda: reacción positiva, color violeta, hay almidón. Reacción negativa, no cambia color, no hay almidón.

Nota: Para ayudarte y formar más saliva, piensa en un limón o en algo que te apetezca mucho comer... Así favoreces que se forme más saliva.

DESARROLLO 1.-¿En qué parte de las células encontramos la enzima catalasa y cuál es la función de dicha enzima?.  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ________________  _______   _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ______________  _____  2.- ¿Qué factores, además de la temperatura, podrían afectar la actividad de una enzima?.  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ________________  _______   _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ______________  _____ 

5. Dibuje las reacciones observadas en la práctica. e incluya alguna observación a sus resultados

 __________  ______________ ________ ________ ______  __   __________  ______________ ________ ________ ______  __   __________  ______________ ________ ________ ______  __ 

 ___________  _______________ ________ ________ _____  _   ___________  _______________ ________ ________ _______  ___   ___________  _______________ ________ ________ _______  ___   ___________  _______________ ________ ________ _______  ___   ___________  _______________ ________ ________ _______  ___ 

FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

FIRMA/ SELLO PROFESOR

PRACTICA Nº 8 METABOLISMO METABOLISMO ANAEROBIO: FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA

I. FUNDAMENTO La respiración celular es el proceso mediante el cual se oxidan moléculas energéticas (glucosa, principalmente), empleando al oxígeno como aceptor final de electrones, y obteniendo gran cantidad de energía para la realización de las funciones celulares básicas. La fermentación, por el contrario, es un proceso anaeróbio que implica la ruptura de alimentos por  un proce proceso so de degra degradac dación ión quím química ica que que no requie requiere re oxíge oxígeno no.. Los Los alim aliment entos os no son degra degradad dados os completamente hasta CO2 y H2O (como ocurre en la respiración), respiración), sino hasta compuestos intermedios intermedios tales como ácido láctico (fermentación láctica) o alcohol (fermentación alcohólica). Esta ruptura incompleta de los alimentos significa que menos energía es disponible disponible durante la fermentación fermentación que el liberado durante la respiración.  Ambos procesos pueden tomar lugar en las células a la vez. Además, Además, los primeros pasos en la ruptura de la glucosa en la respiración, son anaeróbicos.  Anaeróbica  Anaeróbica Glucosa

Ácido láctico  Aeróbica

Glucosa

CO2 + H2O

Ciertas bacterias bacterias y hongos derivan todo sino parte de su energía de la fermentación y los productos finales son frecuentemente el alcohol y CO2, el proceso en este caso es denominado fermentación alcohólica. alcohólica. Las levaduras y bacterias, las cuales conducen a la fermentación fermentación son capaces de emplear sus sistemas enzimáticos para liberar energía anaeróbicamente a partir de carbohidratos, particularmente almidón y azúcar.

DESTINO DE LA GLUCOSA EN CONDICIONES AEROBIAS (RESPIRACIÓN) O ANAERÓBIAS (FERMENTACIÓN)  ADP ADP ADP ATP + P P ATP

GLUCOSA

1 ETANOL

II. OBJETIVOS

2.1 2.2 2.3

Comprobar que ante la presencia de oxígeno, el azúcar es oxidado hasta CO2 y agua. Comprobar que en ausencia de oxígeno, el azúcar es convertido en etanol y CO2 por las levaduras, mediante el proceso de fermentación alcohólica. Compara Compararr cualita cualitativa tivamen mente te un un proces proceso o fermen fermentativ tativo o vs. vs. Resp Respiraci iración. ón.

III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio -Tubos de ensayos -Reactivo de Fehling A y B - Gradillas - Baño Maria - Probetas -Algodón -Tiras de medidas de pH -Dicromato de potasio -Soluciones al 2% de fructosa, glucosa, almidón y sacarosa -Acido sulfúrico diluido IV. MÉTODOS Fermentación alcohólica 1. Preparar Preparar los tubos tubos como como lo indic indica a la tabla: tabla: REACTIVO

1

2

3

4

5

6

 Agua Destilada Destilada

....

....

....

.....

....

....

Sol. de levadura 1mL

1mL

1mL

1mL

Solución de Glucosa Sol. Sacarosa Sol. Almidón Sol. Fructosa Sol. Glucosa

1mL

1mL

1mL

2mL 2mL 2mL 2mL 2mL

2. La muestra muestra con glucosa glucosa sola sola nos servirá servirá para realiza realizarr la reacción reacción de Fehling Fehling y comprobar comprobar que que es glucosa por su poder reductor. 3. Para colocar la levadura en el tubo, previamente se tiene que disolver una punta de espátula de la cepa de panificación de Sacharomyces cerevisae en un poco de agua. 4. Llena Llenarr los tubos tubos cuidand cuidando o que que no queden queden burbuja burbujass de aire, aire, para para cons consegu eguir ir un ambien ambiente te de anaerobiosis. Colocar un globo en la boca de los tubos para que el sistema quede cerrado herméticamente. 5. Llevar Llevar todos todos los tubos tubos a 37ºC 37ºC por por 30 min. min. 6.  Anotar la formación de CO2 para cada tubo (La fermentación se evidenciará por la presencia de burbujas en el tubo y el globo hinchando, debido a la producción de CO2. 7. Detectar la presencia presencia de glucosa glucosa aplicando aplicando reactivo reactivo de Fehling Fehling A y B, llevando llevando a Baño Baño Maria por por 8 minutos 8. Medi Medirr el el pH pH del del medi medio. o. 9. Opcionalmente, el profesor del grupo detectará cuidadosamente la presencia de etanol en las muestras. Hay que tener mucho cuidado porque hay que manipular Ácido sulfúrico y puede ser  peligroso el manejarlo. Se tomarán 2 ml. de la solución del tubo herméticamente cerrado y la ponem ponemos os en otro otro tubo tubo de ensay ensayo. o. Añad Añadimo imoss unos unos crist cristal alito itoss de dicrom dicromato ato potási potásico co y a conti continu nuac ación ión 2 ml. ml. de acido acido sulfú sulfúric rico o dilui diluido do.. Al calent calentar ar al baño baño María María debe debe forma formarse rse un comp compue uesto sto aromá aromátic tico o carac caracter terís ístic tico, o, y se pone pone de manif manifies iesto to porqu porque e camb cambia ia de color color de amarillento a verdoso. Es una reacción que nos indica que existe etanol. 10. Observar, Observar, comparar y discutir discutir los resultados de los experimentos experimentos planteados. planteados.

DESARROLLO 1.- Complete el dibujo y la tabla. .

CO2 glucos a pH etanol  _________  _____________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ ________  ___   _________  _____________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ ________  ___   _________  _____________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ ________  ___   _________  _____________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ ________  ___   _________  _____________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ________ _________ __________ _________ ______  __ 

FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

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PRACTICA Nº 9 DIVISIÓN CELULAR: MITOSIS y MEIOSIS PARTE I MITOSIS I. FUNDAMENTO El ciclo celular es un proceso que consiste en la replicación de material genético y formación de células hijas. Compromete dos etapas: La primera llamada interfase, donde no ocurre división celular  propiamente dicha y la segunda de división celular (ver figura). Dependiendo del tipo de células donde se lleve a cabo, la división celular toma el nombre de Mitosis (si ocurre en células somáticas) o Meiosis (si ocurre en células germinales). La mitosis implica cuatro etapas: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. En las dos primeras ocurre la condensación y ordenamiento de los cromosomas y en las dos últimas se lleva a cabo la distribución de los cromosomas. El resultado final son dos células hijas diploides (2n).

II. OBJETIVOS Reconocer las distintas fases del ciclo celular en células somáticas de raíz de cebolla. III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio - Placa Petri - Orceína acética - Pinza de madera - Microscopio

- Mechero de alcohol - Acido Acético - Etanol 0 IV. PROCEDIMIENTO Con 8 días de anticipación a la práctica preparar el cultivo de cebolla de la siguiente manera: En un vaso con agua, de preferencia de borde oscuro, colocar una cebolla mediana de tal manera que haga contacto la parte terminal de la cebolla con el agua y dejar en lugar semioscuro.

Preparación de la Muestra

1 2 3 4 5 6

Disponer de gran número de raíces de cebolla, cebolla, haciendo cortes de la parte terminal (aproximadamente (aproximadament e de 0.5cm.) y depositar en una placa Petri. Colorear con orceína por 10 minutos: contiene orceína A que interrumpe el proceso si se está dando en ese momento y reblandece la unión de las células muertas, así como orceína B que tiñe la cromatina o material hereditario. Luego Luego calentar calentar la muestra muestra sólo hasta hasta que emane emane vapores vapores por 2 veces consecut consecutivas ivas con interv intervalos alos de enfriamiento. Trasladar Trasladar las raíces a diferentes diferentes portaobjetos, portaobjetos, separar separar solo el ápice (parte terminal terminal de la raíz) y agregar  agregar  una gotita de orceína y cubrir con el cubreobjeto. Apretar Apretar la la muestra muestra suav suavemen emente te con la la yema yema de los dedos dedos.. Secar el exceso de de colorante con con papel secante secante y llevar llevar al microscopio microscopio para para su observación observación a menor menor y mayor aumento.

Interfase

Profase Temprana Temprana

Anafa Anafase se Tardí Tardía a

Profase Tardía

Telof Telofase ase Tempra Temprana na

Metafase Metafase

Telof Telofase ase Tardí Tardía a

Anafase Temprana Temprana

Citoc Citocin ines esis is

DESARROLLO 1.- dibuje las muestras observadas.

Coloración:_______  Aumento:________ 

Muestra:_________  Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

Muestra:_________ 

Muestra:_________ 

Coloración:_______  Coloración:_______ Aumento:________  Aumento:________ 

Coloración:_______  Aumento:________ 

Muestra:_________  Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

PARTE II. - MEIOSIS I. INTRODUCCIÓN La meiosis es un proceso celular, ligado a la reproducción sexual, por el cual, la célula madre de naturaleza diploide, da origen a los gametos de naturaleza naturaleza haploide, de tal manera que en la fecundación se reestablece el número diploide de cromosomas. Así, mientras la mitosis es un proceso de división celular con formación de dos núcleos hijos con el mismo número de cromosomas cromosomas que la célula original, en la meiosis en cambio hay dos divisiones celulares con reducción del número de cromosomas a la mitad. La meiosis es un proceso citológico que comprende dos divisiones celulares. En la primera división meiótica ocurre una serie de intercambios de material genético entre los cromosomas homólogos. Este fenómeno es un proceso complejo que comprende una larga profase en la que, para su mejor estudio y comprensión, se distinguen los estadios: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis. Entre la telofase I y el comienzo de la segunda división meiótica, a diferencia con la mitosis, no hay un período de síntesis y duplicación del ADN, por lo demás la división meiótica II, tiene lugar como la mitosis normal en cada una de las células haploides (meiocitos de segundo orden), resultantes de la división meiótica I. II. OBJETIVOS: Al finalizar la presente práctica los alumnos estarán capacitados para: 2.1 Reconocer Reconocer y diferenciar los estados fisiológicos fisiológicos por los que atraviesan atraviesan los cromosomas cromosomas durante el proceso meiótico en células animales. III. MATERIALES Y METODOS Un excelente material para la observación de los procesos de división celular lo constituyen insectos de la especie Grillos asimilis “grillo domestico” y Laplatacris sp “langosta”. En los individuos machos debe recuperarse el testículo después de la disección en el que se estudiará la meiosis en células de maduración (espermatocitos) de la zona proximal al canal deferente. El material a usar en el presente ejercicio es el siguiente: -

Microscopio Mechero de alcohol Cloroformo Carmín acético Carnoy Solución salina 0.7% Placas petri Laminas, laminilla  Algodón Papel filtro Estilete de punta fina

IV: PROCEDIMIENTO -  Anasteciar  Anasteciar los animales en las placas petri, colocando colocando dentro de un pedazo de algodón embebido en cloroformo. - Disecar el animal con la ayuda del estereomicroscopio o lupas, colocándolo en posición dorsal. Separar los testículos adicionándoles adicionándoles la solución salina procurando no exponer los órganos al aire para evitar posibles desecaciones. - Seccionar los testículos en partes pequeñas de 2 a 3 mm y colocarlos en un vial con fijador carnoy por espacio de 30 min. - Traspasar los fragmentos a una luna de reloj que contiene carmín acético y lleve al calor del mechero hasta que entre en ebullición por espacio de 15 segundos de 5 a 7 veces. - Retire el fragmento del testículo con una pinza de punta fina y colóquela sobre un portaobjetos y agréguela una gota de carmín acético.

- Tape la preparación con una laminilla cubre objetos y sobre esta ponga un papel absorbente. Presione Presione el cubre objetos con la yema del dedo pulgar y luego con la extremidad plana de un lápiz presionar un poco mas fuerte hasta convertir el material del porta objetos en una capa delgada (squash). Al realizar esta operación, tenga cuidado para no romper el cubre objetos. - Limpie el exceso de colorante del porta objetos con papel higiénico y lleve el preparado al microscopio para su observación a menor y mayor aumento. - Observar y esquematizar.

1.- Dibuje las muestras observadas. Coloración:_______ 

Muestra:_________  Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

Aumento:________ 

Muestra:_________ 

Muestra:_________  Coloración:_______  Coloración:_______ Aumento:________  Aumento:________ 

Coloración:_______ 

Muestra:_________  Muestra:_________  Coloración:_______  Aumento:________ 

Aumento:________ 

Coloración:_______ 

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Aumento:________ 

FECHA

ACTITUDINAL

Aumento:________ 

MATERIAL

PARTICIPACIÓN

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PRÁCTICA N°10 FECUNDACIÓN I.

FUNDAMENTO La fecundación es el proceso de unión del óvulo y el espermatozoide, y en virtud de la cual se origina el cigoto o célula huevo. La fecundación fecundación en la especie humana humana es interna, i nterna, pues se lleva a cabo en el interior del aparato reproductor de la hembra, concretamente en las trompas de Falopio.

En esta esta prác práctitica ca se obse observ rvar ará á el proc proces eso o de fecu fecund ndac ació ión n entr entre e un gam gameto eto masc mascul ulin ino o (espermatozoides) y un gameto femenino (ovulo), en erizo de mar. Se podrán observar los gametos o Células reproductoras masculina y femenina, cuyo núcleo sólo contiene un cromosoma de cada par. El óvulo es una célula redonda de gran tamaño. Posee un núcleo donde se alojan los cromosomas portadores de la información genética materna, y un citoplasma que posee sustancias nutritivas para alimentar al embrión en sus primeras etapas, en el caso de que ocurra la fecundación. El espermatozoide, o gameto masculino, es una célula pequeña con capacidad de movimiento para poder alcanzar al óvulo.

Según donde se encuentren el espermatozoide y el óvulo, existen dos tipos de fecundación: a) Fecundación EXTERNA, cuando tanto el macho como la hembra liberan sus gametos al medio externo, que es el agua, de manera que los espermatozoides nadan en el agua hasta encontrar a los óvulos. Es lo típico de todos los animales invertebrados acuáticos, y en los vertebrados se da en los peces y en los anfibios. b) Fecundación Fecundación INTERNA, cuando el macho deposita sus espermatozoides en el interior de la hembra, y se mueven por el organismo de la hembra hasta encontrar al óvulo. En el erizo de mar no hay dimorfismo sexual de modo que externamente no se les puede diferenciar a las hembras de los machos. Las gónadas femeninas son de color rojo vinoso y las gónadas masculinas son de color  amarillo grisáceo. En ambos casos se encuentran en las zonas interambulacrales interambulacrales (celoma) ubicado en el interior del hemisferio hemisferio superior. A través de las glándulas genitales (5), las gónadas se comunican al

exterior mediante el poro genital, por donde son derramados los huevos. La fecundación es externa porque los gametos se encuentran fuera de la cavidad genital y el óvulo se fecunda externamente.

II.

OBJETIVOS - Identificar gametos masculinos y femeninos en erizo de mar. - Evidenciar el proceso de la fecundación.

III.

MATERIALES Encontrarás en el laboratorio - Microscopio - Placa Petri - Pipeta - Bagueta Traer el alumno - Portaobjetos Portaobjetos - Cubreobjetos - Goteros - Materiales de disección: tijera, pinza,estilete. - Erizos de mar  VIVOS en baldes con tapa y con agua de mar 

IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Obtención de Óvulos y Espermatozoides 1. Usando el material de disección, cortar las púas del erizo a nivel del ecuador todo el contorno radial e introducir la punta de la tijera para perforar y cortar transversalmente el caparazón por la zona cortical, obteniendo 2 mitades: el aboral y el ventral; en el aboral (lado superior) en las placas interradiales (5) del celoma es donde se encuentra las gónadas en sus respectivas masas genitales de color crema para los MACHOS y rojo vinoso para las HEMBRAS. 2. Luego echar las gónadas en un petri con agua de mar y con la ayuda de una bagueta se trozan los ovarios para liberar los óvulos. En otro cristalizador, se hacen exactamente lo mismo con los testículos

4. 4.2. 2.

Montaj ntajee y obser bserva vaci ció ón de gam gametos etos 1. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con óvulos y observar su forma y color  2. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con espermatozoides y observar su forma, tamaño, flagelo, etc.

3. Después de observar esta preparación coloque una gota del colorante cristal violeta sobre los gametos masculinos y observe nuevamente 4. Observar a mayor aumento ambos gametos.

4.3 Fecundación 1. De las muestras obtenidas, coloque en un portaobjeto una gota con óvulos y otra con espermatozoides y mezclar. 2. Observar a mayor y menor aumento 3. Observar con detenimiento los cambios que sufre el óvulo una vez fecundado.

DESARROLLO 1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la práctica. Mencionando el aumento total.

Coloración:_______ 

Muestra:_________  Muestra:_________  Coloración:_______ 

Aumento:________ 

Aumento:________ 

Muestra:_________  Muestra:_________ Coloración:_______  Coloración:_______  Aumento:________  Aumento:________ 

FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

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PRACTICA Nº 11 PRIMERA PARTE: EXTRACCIÓN DE ADN I. FUNDAMENTO El ADN es un polímero de desoxiribonucleótidos, que en eucariotes es el componente de la cromatina o material genético. En la cromatina el ADN se encuentra asociado a proteínas conocidas como nucleoproteínas de tipo histonas, protaminas y en menor proporción con proteínas de tipo ácidas. Para extraer el ADN sin arrastrar sus proteínas asociadas se podría emplear soluciones ácidas. Sin embargo, éstas soluciones podrían dañar la estructura de la hebra, de modo que se prefiere emplear solventes orgánicos como cloroformo, el cual extrae proteínas dejando insoluble al ADN.

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente. La secuencia general de extracción es la siguiente: 1 Liberación Liberación del ADN ADN en forma forma soluble soluble por medio medio de la la destrucción destrucción de los los sistemas sistemas membranosos de los tejidos (membrana celular y nuclear). 2 Separación Separación de los complejos complejos de de nucleoproteína nucleoproteína por denaturación denaturación de la parte proteica. proteica. 3 Separación Separación del ADN ADN de las las otras macromolécu macromoléculas las por solubilidad solubilidad diferencial. diferencial.

4 Precipitación Precipitación del del ADN por por insolubilidad insolubilidad en alcohol alcohol y bajas temperat temperaturas. uras. II. OBJETIVOS 1 El objetivo fundamental fundamental de esta esta práctica práctica es utilizar unas unas sencillas sencillas técnicas técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar. 2 A partir de la longitud longitud enorme enorme de las fibras fibras también también se confirma confirma que en el núcleo núcleo el ADN se encuentra replegado. III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio: 1 - 2 Tubos de prueba de 20 ml

2 3 4 1 2

- 5 Baguetas - 1 embudo - Etanol helado - 5 Pipetas de 10ml - Baño María

0 - Morter Mortero o con pilón pilón 1 - Gas Gasa a este esteri rill

- Vaso de precipitación precipitación de 500ml. 500ml. - Medio de homogenización: - Lauril Sulfato de Sodio (SDS o -Hielo SLS) 50 g - Cloruro de Sodio 8. 770 g - Citrato de Sodio 4.110 g

- EDTA EDTA 0.292 0.292 g

IV. PROCEDIMIENTO Para la extracción DE ADN del manto de choro, con etanol, seguiremos los siguientes pasos. 4.1. Homogenización del Tejido El método para desintegrar el tejido debe estar adaptado a las características de éste. Para grandes volúmenes de tejidos blandos, suelen usarse licuadoras esencialmente iguales a las licuadoras domésticas. Para volúmenes menores, en general es suficiente un MORTERO y un pilón.  Tejidos más resistentes, resistentes, como por ejemplo hueso o diente, necesitan necesitan tratamientos tratamientos mecánicos especiales. Aquellos tejidos con células cuya pared celular es resistente, como por ejemplo vegetales, hongos o bacterias, requieren también condiciones drásticas. Uno de los métodos más utilizados consiste en congelar la muestra en nitrógeno líquido y, manteniéndola congelada, congelada, pulverizarla con un mortero. mortero. Así, además de desintegrar la muestra, se logra que ésta se mantenga a muy baja temperatura durante el tratamiento, con lo cual se evita la acción de enzimas endógenas que pudieran degradar el material de interés. En esta práctica se empleará un método de ruptura con mortero (sin congelamiento). La principal ventaja de este método es que se adapta bastante bien a tejidos muy diversos. Asimismo, dado que se opera a temperatura ambiente, las ribonucleasas celulares pueden degrad degradar ar parci parcialm almen ente te las molé molécu culas las de ARN. ARN. Para Para ayuda ayudarr a la solu solubil biliza izaci ción ón de los componentes celulares, a la ruptura de membranas y de complejos protéicos, la solución de lisis contendrá un detergente iónico (dodecilsulfato de sodio, SDS). Este detergente dispersa los componentes de las membranas y desnaturaliza las proteínas. La solución de lisis contiene además el agente quelante de cationes divalentes, EDTA. Esto impide la acción de las ADNasas (dependientes de Mg2+ ), aunque no tiene efectos sobre la mayor parte de las ribonucleasas. Seguir los siguientes pasos:

1 Las células se homogenizarán en un mortero empleando el medio de homogenización. ES 2

3 4 5

OBLIGAT OBLIGATORI ORIO O el uso de guantes guantes en todo todo moment momento o para evitar evitar la contam contamina inació ción n de la muestra con DNAasa proveniente del sudor de las manos que pueda degradar nuestras muestras de ADN. Se lisarán las células agregando 10 ml de la solución de homogenización por cada gramo de tejido con que se inició el proceso. Los componentes como el SDS, permitirá por una parte la separación de las proteínas asociadas a la cromatina y por otra parte la ruptura de membranas. El NaCl produce el estallido de los núcleos para liberar así las fibras de cromatina. El EDTA es un agente quelante que inactiva a las DNAasas. Incubar la mezcla en un Baño María a 60°C por 15 minutos exactos. El calor ablandará el tejido permitiendo que los componentes de la solución homogenizadora ingrese a la célula. Además, esta temperatura denatura muchas enzimas que interfieren con el procedimiento. Filtrar el homogenizado empleando la gasa esteril Enfriar rápidamente la preparación filtrada en una cubeta con hielo, por 10 minutos a fin de detener cualquier proceso degradativo del ADN.

4.2. Precipitación del ADN La precipitación de los ácidos nucleicos permite su purificación y concentración. Se basa en la simultánea neutralización de las cargas negativas y deshidratación de la molécula, lo cual posibilita su agregación y precipitación. La precipitación es un fenómeno reversible (mediante la resuspensión en soluciones acuosas) y no debe ser confundido ni con la desnaturalización (potencialmente reversible) ni con la degradación (irreversible) de los mismos. Efectuar los siguientes pasos: 1 Lentamente, Lentamente, agregar agregar etanol etanol helado por el borde interno interno del recipiente recipiente hasta hasta que comienc comience e a aparecer una consistencia blanca que significa que el ADN ha precipitado. 2 Suavemente, Suavemente, a medida medida que se agrega agrega el etanol etanol helado, helado, girar enrollando enrollando a la vez con una bagueta de vidrio. 3 Reconoce Reconoce 3 fases fases en tu solución: solución: la del alcohol alcohol (que flota flota en agua), agua), la de tu tejido triturado (abajo del todo) y la interfase entre los 2 que contiene ADN precipitado. 4 Poco a poco poco haciendo haciendo estos estos movimientos movimientos en en una sola dirección, dirección, se se logrará apreciar apreciar el el ADN en la bagueta, asemejando una madeja de un hilo sumamente fino o como copos de algodón. Nota importante. El producto filamentoso obtenido de esta extracción no es ADN puro ya que, entreme entremezcl zclado ado con él, hay fragmen fragmentos tos de ARN. ARN. Una extracci extracción ón "profes "profesion ional" al" se realiza realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN (protocolos de PURIFICACIÓN de ADN).

SEGUNTA PARTE: ELECTROFORESIS I. FUNDAMENTO El prob proble lema ma de real realiz izar ar sepa separa raci cion ones es de biom biomol oléc écul ulas as gran grande dess es enfr enfren enta tado do frecuentemente en las ciencias de la vida, tanto para análisis cuali- como cuantitativos de mezclas o de preparaciones individuales. En la mayoría de casos es deseable causar el mínimo de daño a las moléculas de manera que sus propiedades no cambien de manera significativa. Los métodos actuales para la separación de biomoléculas descansan por lo tanto en procesos físicos que causan el mínimo de desnaturalización, lo cual resulta en la máxima retención de cualquier actividad biológica. Un gran grupo de métodos de separación están basados en algunas propiedades químicas o biológicas, o en interacciones de la molécula que

se investiga, y algunas otras están basadas en diferencias en pesos moleculares o cargas netas, o a veces una combinación de las dos propiedades. Los métodos electroforéticos pueden diseñar se para explotar cualquiera de los dos, o ambos parámetros, aunque las diferencias en tamaño son las principales en el caso de las separaciones de ácidos nucleicos. La electroforesis en geles de agarosa es una técnica común en los laboratorios de Biología Molecular. El proceso consiste en la aplicación de una diferencia de voltaje a una muestra de ADN que se encuentra inmersa en un gel de agarosa, y esta a su vez en bañada por un buffer determinado. La generación de polos opuestos provoca la migración del ADN del polo cargado negativamente (Cátodo) al polo cargado positivamente (Anodo), debido a que el ADN tiene una carga neta negativa. Los geles de agarosa son el medio más popular para separaciones electroforéticas de ácidos nucleicos de mediano y gran tamaño. Las concentraciones más típicas de agarosa van de 0.3 hasta 2.5 %, y esta concentración depende de los tamaños de los ácidos nucleicos a separar. Aunque los geles de agarosa carecen de fuerza mecánica (especialmente los más diluidos), la manipulación se facilita por el uso de geles horizontales, los cuales pueden ser soportados por lámina de vidrio o de plástico El gel resultante es fotografiado en un aparato llamado transiluminador, presencia de bromuro de etidio, para poner en evidencia los fragmentos de ADN en el gel. En la presente práctica analizaremos la fotografía de un gel de agarosa y observaremos las distintas bandas de ADN que en él aparecen, discutiendo la razón por las que unas aparecen más arriba que otras. Realizaremos un análisis como el que se hace en ensayos de diagnóstico molecular y de clonación. II. OBJETIVOS -Comprobar la movilidad del ADN en un gel de agarosa -Analizar la utilidad de esta técnica en ensayos de biología molecular aplicada III. MATERIALES Y MÉTODOS Analizaremos la siguiente Lámina de un gel de agarosa y discutiremos cuál es el significado y la interpretación de esas bandas en el gel.

DESARROLLO 1.- Dibuje sus resultados

2.-Discuta y resuelva los siguientes enunciados

M

1

2

En el gel aparecen 3 carriles o calles, cada uno con una muestra distinta (M, 1 y 2). Los pocillos son hechos en el gel para introducir ahí la muestra de ADN.

1 ¿qué hay en el primer carril?

 _______________  _______________________ _______________ _______________ ________________ _______________ _______________ ________________ _______________ ______________ ________  _  2 en la muestra muestra 1, qué qué tamaño tamaño aproximado aproximado tienen las las bandas bandas de ADN? ADN?  _______________  _______________________ _______________ _______________ ________________ _______________ _______________ ________________ _______________ __________  ___  3 ¿por qué aparece RNA en algunas nuestras y por qué aparece tan abajo, comparado al ADN?  _______________  _______________________ _______________ _______________ ________________ _______________ _______________ ________________ _______________ __________  ___  4 ¿qué significado significado tiene que algunas bandas sean más más gruesas gruesas que otras? otras?  _______________  _______________________ _______________ _______________ ________________ _______________ _______________ ________________ _______________ __________  ___  5 ¿qué hubiera esperado encontrar si corría un gel con su ADN recién extraído? Dibujelo.  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ ___________  __ 

FECHA

ACTITUDINAL

MATERIAL

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PRACTICA Nº 12 CÓDIGO GENÉTICO Y TRADUCCIÓN DE PROTEÍNAS 

I. FUNDAMENTO El proceso proceso de traducc traducción, ión, es decir, decir, síntesis síntesis de novo proteínas, s, ocurre ocurre en el citoplas citoplasma, ma, novo de proteína específicamente en los ribosomas del retículo endoplasmático rugoso (en humanos). La síntesis de una proteína requiere que previamente el ARNm de ese gen haya sido transcrito en el núcleo y exportado al citoplasma. Aquí el ARNm, que contiene la información genética necesaria para codificar la proteína, se asociará a los ribosomas del RER y con la intervención de una compleja maquinaria proteica así como de los ARNt específicos para cada aminoácido, se llevará a cabo la traducción.

El ARNm porta los codones, tripletes de nucleótidos, que codifican para un aminoácido. Mientras que los ARNt portan los anticodones, que le indican qué aminoácido van a portar y llevar hasta el complejo  ARNm-ribosoma  ARNm-ribosomas-enzimas s-enzimas.. El código genético es la combinación combinación de tripletes que tienen la información información necesaria para codificar un aminoácido. Existen 64 codones en el código genético, que codifican para los 20 aminoácidos que forman las proteínas y que además contiene 1 codón de inicio de la traducción y 3 codones de finalización de la misma. En esta práctica analizaremos la degeneración del código genético, discutiremos por qué no es realmente universal y realizaremos la traducción de algunos genes en sus respectivas secuencias de aminoácidos.

II. OBJETIVOS - Reconocer los codones y anticodones posibles para los aminoácidos que forman las proteínas. - Analizar posibles mutaciones en los codones que alteren la secuencia de una proteína y con ello su función.

III. MATERIALES - Lámina de la tabla del Código Genético - Lámina de la tabla de las alteraciones del Código Genético en mitocondrias y otros organismos.

IV. MÉTODOS 4.1. Antes de solucionar los problemas planteados, determine: a. número de codones de inicio ____________________________  b. número de codones de finalización _______________________  c. aminoácidos codificados por 1 sólo codón __________________  d. aminoácidos codificados por 2 codones ____________________  e. aminoácidos codificados por más de 3 codones ____________________________  f. ¿qué cambios se han producido en el código genético de mitocondrias en humanos?  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______   _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______  g. Lista de aminoácidos esenciales y no esenciales

 _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______   _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______ 

4.2. Discuta con su profesor y responda: ¿Por qué algunos aminoácidos son codificados por 1 sólo codón mientras que otros son codificados por 2 o más codones?  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______   _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______  4.3. Los siguientes problemas deberán ser solucionados en clase con ayuda del profesor: Primer problema: Transcripción y traducción

Se tiene la siguiente secuencia de ADN (cadena codante) que es parte del gen de transferrina. 5´ ATGGCATCCTACGATCAGTATCCTATACGC 3´ ……… (EL GEN CONTINÚA) Determine: 1. la secuencia no codante del respectivo trozo del gen  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ______________  _____  2. la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ______________  _____  3. Utilizando la tabla del código genético, deduzca la secuencia de aminoácidos que codificará dicha cadena (considerando que se incubó el ADN en un extracto crudo de células de reticulocitos de conejo que contenía los respectivo ARNt, enzimas, ATP, GTP, etc.)  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ______________  _____   _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ ______________  _____  Segundo problema. problema. Mutaciones en la secuencia de nucleótidos

La secuencia de ADN del gen de transferrina, del problema 1, ha sufrido mutaciones por el efecto de radiaciones UV. Se secuenció el gen mutado y la secuencia obtenida fue la siguiente: 5´ ATGGCATCGTACGAACAGTAGCCTATACGC 3´ ………..(EL GEN CONTINÚA) Determine: 1. la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______  2. la secuencia de aminoácidos que, tras esas mutaciones, se codifica  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______  3. qué mutaciones han sido conservativas y cuales no.  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ _________________ __________________ _______________  ______  Tercer problema. Traducción en mitocondrias

Se cuenta con parte de la secuencia del gen de la proteína de Fe-S, que participa en la cadena transportadora de electrones en la mitocondria, y que es codificada dentro de la misma. La secuencia es de la cadena de ADN codante: ……. 5´ CCGTCAGAACTCGAAGCTCCGGACTTAGCT 3´ …… Determine: 1. la secuencia de aminoácidos codificada en la mitocondria, a partir de dicha cadena nucleotídica  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ ______________  ______ 

2. ¿cuál serían los aminoácidos cambiados si dicho gen se codificara en el citoplasma?  _________________  __________________________ _________________ _________________ __________________ _________________ ______________  ______ 

PRACTICA Nº 13 ESTUDIO DE RASGOS GENÉTICOS EN EL HOMBRE

I. FUNDAMENTO Las características de un organismo son el resultado de la herencia y de la interacción de los genes. Los principios de la genética establecidos por Mendel y Morgan y otros investigadores se aplican a todos los organismos vivientes, incluido el hombre. De la mism misma a mane manera ra que que en otros, otros, algun algunos os rasgos rasgos humano humanoss son son deter determin minad ados os por genes genes dominantes y otros por genes recesivos. Lo rasgos dominantes generalmente se encuentran con mayor  frecuencia que los que se deben a genes recesivos. En la transmisión de la mayoría de los caracteres hereditarios, están involucrados varios genes, pero a menudo la variación de un solo gen, produce la variación de una sola característica lo que da lugar a dos formas distintas de expresión.  Algunos  Algunos genes (y su manifestación) están ligados al sexo, es decir que la característica característica respectiva sólo se expresa en uno de los sexos. Frecuentemente el masculino (hemofilia por ejemplo). En este caso el gen en cuestión se encuentra localizado en el cromosoma X (el cromosoma Y se considera “genéticamente vacío”). En otros casos la manifestación genotípica es influenciada por el otro sexo (p.e. calvicie, es dominante en el varón y recesivo en la mujer). En este caso los genes respectivos están localizados en un cromosoma autosómico, pero su expresión esta condicionada a la acción secundaria de genes ubicados en el cromosoma X. II. OBJETIVOS 1. Determinar el fenotipo (expresión de las características) y su probable genotipo (Información genética en el cromosoma respectivo) tanto como sea posible. 2. Estimar la distribución de los genes dominantes y recesivos para cada rasgo genético observado en el grupo. III. MATERIAL Deberás traer de casa. -Espejo -Lupa IV. PROCEDIMIENTO 1. Con la ayuda de un espejo o de un compañero determine un fenotipo para cada uno de los rasgos genéticos descritos a continuación. Haga sus anotaciones en su cuaderno de trabajo. 2. Cuando se trata de una característica dominante, no es posible determinar con certeza el genotipo, pues pueden pueden estar estar presente presentess dos genes genes dominan dominantes tes para esta caracter característic ística a (homocig (homocigosis osis)) o un gen dominante y uno recesivo (heterocigosis). En consecuencia utilizaremos un guión (-) para representar el alelo desconocido. En cuanto al carácter recesivo, no hay dificultad en establecer el genotipo, los dos genes alelomórficos son recesivos. Anote su genotipo en la hoja de trabajo.

3. Tabule en la hoja de trabajo el número de alumnos con cada rasgo genético estudiado DONDE SE INCLUYA: rasgo estudiado, genes involucrados, dominancia o recesión, estado del gen expresado (homocigoto o heterocigoto), etc. RASGOS GENETICOS A SER ESTUDIADOS INDEPENDIENTES DEL SEXO 1. Enrollar la lengua: algunas personas tienen la aptitud de enrollar la lengua en forma de U. Esto es causado por un gen dominante (E). La gente que no posee este gen sólo puede curvar la lengua ligeramente hacia abajo. 2. Lóbulos separados: un gen dominante (L) determina que los lóbulos de la oreja estén separados, es decir que no estén adheridos directamente a la cabeza. En otras personas los lóbulos de las orejas están adheridos directamente al costado de la cabeza. 3. Pico de viuda: algunas personas muestran la característica de que la línea de pelo baja hasta un punto definido en la mitad de la frente. Esto se conoce como “pico de viuda”, este rasgo resulta de un gen dominante (V). El gen recesivo determina la característica de una línea continúa en el pelo. 4. Meñique doblado hacia adentro: Un gen dominante (B) hace que la última falange del meñique se flexione hacia el dedo anular. Descanse ambas manos tendidas sobre la mesa, relaje los músculos y observe si su meñique está flexionado o recto. 5. Iris pigmentado: Cuando una persona es homocigota para cierto gen recesivo (p) no hay pigmento en la parte anterior de los ojos y en cambio se muestra una capa azul detrás del iris. Esto determina que los ojos sean azules. Un alelo dominante de este gen (P) hace que el pigmento se deposite en la capa anterior del iris y enmascara el color azul en grado variable. Otros genes determinan la naturaleza y densidad exactas de este pigmento, originando los ojos pardos, violeta, verde y otros colores. Nota:  Algunas veces veces la capa capa detrás del del iris es gris y esto esto deberá considerars considerarse e como no pigmentado. pigmentado. 6. Pelo de la falange media: algunas personas tienen pelo en la segunda falange de la mano mientras otras personas no. La ausencia completa del pelo en todo, se debe a un gen recesivo (m) y su presencia se debe a su alelo dominante (M). Parece que hay un número variable de estos alelos que determinan si el pelo debe crecer en uno, dos, tres o cuatro dedos. Este pelo puede ser muy fino y será necesario usar  una lupa y mirar cuidadosamente cuidadosamente en todos los dedos, antes de decidir si está ausente en alguno de los dedos. 7. Músculo palmar largo: Cuando una persona es homocigota para cierto gen recesivo (l), presenta un músculo palmar largo, el cual puede ser detectado examinando los tendones que corren en la cara interna del antebrazo (altura de la muñeca) cierre el puño fuertemente y doble la mano hacia delante. Palpe los tendones. Si hay tres, usted tiene el músculo palmar largo. Si solo hay dos (el medial más grande no existe) usted no tiene este músculo. Examine ambas muñecas pues a veces está presente en un brazo y no en el otro, a causa de las variaciones en la expresión de los genes. Si lo encuentra en uno o ambos brazos, posee dos genes recesivos. Si no está presente en ambas muñecas tiene el gen dominante (L). 8. Forma del cabello: la forma natural del cabello de una persona puede ser lacia, ondulada o crespa, con variantes intermedias. El mecanismo por el cual se origina la forma del cabello es algo complejo, pero puede asumirse que los responsables de esta característica son un par de genes con dominancia incompleta. Asumiendo que la forma de su cabello no ha sido modificada por tratamiento artificial, anote el genotipo respectivo según el siguiente código: CC= cabello crespo Cc= cabello ondulado cc= cabello lacio. 9. Pulgar desarticulable: algunas personas tienen la habilidad de desarticular las falanges de sus dedos pulgares, a causa de que los ligamentos de esta articulación son sumamente flojos, característica que es dominante sobre ligamentos firmes. Esta circunstancia permite retirar el dedo pulgar hacia atrás

sacándolo de su articulación. Ensaye la posibilidad de desarticular el pulgar de cualquiera de sus manos manos SIN ayuda ayuda de la otra otra mano mano e identi identifiq fique ue su genoti genotipo po respect respectivo ivo así: JJ o Jj = pulga pulgar  r  desarticulable jj = pulgar no desarticulable. 10. Color del cabello: el color del cabello es determinado determinado por la interacción interacción de un gran número de factores; sin embargo, si consideramos solo las mayores categorías de color capilar, estas pueden explicarse por  la interacción de dos pares de genes (herencia dihibrida): dihibrida): (D_) pigmento pardo presente, (dd) pigmento pardo ausente, (rr) pigmento rojo presente. De acuerdo con la ley de la distribución independiente, un individuo cualquiera puede tener alguna de las siguientes combinaciones de genes y color: DDRR, DDRr, DdRR : cabello oscuro (negro) DdRr, Ddrr, DDrr : cabello castaño u oscuro con tintes rojizos ddRr : cabello rubio Dr. : cabello claro (color arena) INFLUENCIADOS POR EL SEXO 11. Segundo dedo más corto que el cuarto: mantenga sus dedos juntos y ponga sus manos sobre una hoja de papel, de modo que sus dedos descansen en ángulo recto con una línea horizontal, que usted ha trazado antes sobre el papel. Mueva su mano hacia arriba o hacia abajo hasta que el extremo del cuarto dedo (anular) toque escasamente la línea. Mire su segundo dedo (Indice) y vea si toca la línea.si no lo hace el segundo dedo es más corto que el cuarto. Se cree que este segundo dedo más corto es el resultado de un gen influenciado por el sexo del individuo. Según esto el gen es dominante en lo varones y recesivo en las mujeres. Sc para el gen correspondiente al segundo dedo corto Sl para el gen correspondiente para el segundo dedo largo. 12. Voz para el canto: el tono de la voz para el canto es determinado por un solo par de alelos V y v que muestran dominancia incompleta y están influenciados por el sexo. Clasifique su voz par el canto según el siguiente cuadro: Genotipos

Fenotipos Varón

VV Vv vv

Mujer

Bajo Barítono Tenor

 

Contraalto Meso soprano Soprano

13. Calvicie: esta es otra característica influenciada por el sexo y es controlada también por un par de alelos. Aunque esta característica no suele manifestarse antes de los 30 años, sus posibilidades personales de calvicie pueden presumirse por la presencia o ausencia de esta característica entre los miembros mayores mayores de su familia tanto por la línea materna o paterna. Establezca Establezca su probable genotipo genotipo guiándose por el siguiente cuadro: Genotipos HH Hh hh

Fenotipos Varón

Mujer 

calvo calvo normal

calva normal normal

LIGADOS AL SEXO 14. Ceguera para el color (daltonismo): tipo más común de daltonismo es heredado como carácter recesivo ligado al sexo. Puesto que el gen es portado solamente por el cromosoma X es necesario indicar el cromosoma al especificar el genotipo. Son posible genotipos y fenotipos: Fenotipos

Genotipos Mujer

Varón

Normal

XNXn

XNY

Daltónico

XnXn

XnY

DESARROLLO NOMBRE:______________________________  GRUPO:___________ MESA:___________ FECHA:_________  PROFESOR:_____________________________  1.- Anote su genotipo y fenotipo de cada característica evaluada.