FORMACIÓN DE LA L A IMAGEN A TRAVÉS TRAVÉS DEL MICROSCOPIO FOTÓNICO.
Los microscopios fotónicos compuestos que se emplean actualmente tienen sus antecesores en los instrumentos ópticos desarrollados, en el periodo comprendido entre 1590 y 1610, por Hans y Zacarías Janssen; quienes mediante el tallado cuidadoso de lentes icon!e"as construyeron los primeros microscopios compuestos La ima#en total del microscopio fotónico se forma mediante las im$#enes que #eneran sucesi!amente el o%eti!o y el ocular& 'ara que se forme una ima#en del o%eto oser!ado es indispensale que por lo menos dos rayos luminosos que inciden en el o%eto iluminen una porción del mismo& (n punto punto ilumin iluminado ado del o%eto o%eto trasmi trasmite te dos rayos rayos lumino luminosos) sos) uno, orient orientado ado paralelamente al e%e principal, se refracta al atra!esar la lente del o%eti!o, en tanto que el otro se traslada en dirección olicua *acia el centro óptico de la lente y la atra!iesa sin refractarse& refractarse& +n el lu#ar donde los dos rayos luminosos luminosos se interceptan interceptan se formar$ la ima#en del punto iluminado& i del o%eto se trasmiten dos rayos luminosos por cada punto que lo constituyen i#ual n-mero de puntos luminosos formar$n la ima#en& .on la diferencia que la ima#en ser$ ampliada
n-mero de !eces correspondiente al aumento
n
propio que posea el o%eti!o& o%eti!o& +sta ima#en es de mayor tama/o, real e in!ertida& in!ertida& Los otros rayos luminosos que lle#an a la lente frontal del o%eti!o y que no ilum ilumin inan an nin# nin#-n -n punt punto o del del o%e o%eto to,, al atra atra!e !esa sarr la lent lente, e, le conf confie iere ren n al camp campo o microscópico una iluminación uniforme& este tipo de iluminación se denomina de campo claro& La ima#en #enerada por el o%eti!o es captada posteriormente por la lente de campo del ocular y la amplía el n-mero de !eces del aumento que aquel posee& La ima#en formada por el ocular ser$ de mayor tama/o, derec*a con relación a la ima#en formad formada a por el o%eti o%eti!o !o y !irtual !irtual&&
La ima#en ima#en total total formada formada por amas amas lentes lentes ser$) ser$)
aumentada de tama/o, in!ertida y !irtual con relación al o%eto&
Preparación de muestras.
Identifcar cada reactivo o muestra con marcador indeleble.
Bajar la platina completamente y girar el revólver hasta el objetivo de 10x.
#n$ocar la muestra empleando el tornillo macrom!trico para acercar la preparación al objetivo.
Conectar a la energa el!ctrica y encender la l"mpara del microscopio.
Colocar y sujetar la preparación sobre la platina.
)in bajar la platina* girar el revólver para pasar al objetivo de +0x y reali'ar un en$o(ue fno girando el tornillo microm!trico.
&na ve' (ue ha logrado en$ocar a +0x* sin bajar la platina* colocar una pe(ue,a gota de aceite de inmersión* la cual deber" hacer contacto con el objetivo de 100x.
-l fnali'ar la observación limpiar con papel seda el objetivo de 100x.
#n$ocar la muestra girando sólo el tornillo microm!trico.
%bservar a trav!s del ocular y girar lentamente el tornillo macrom!trico hasta en$ocar la muestra. &tili'ar el tornillo microm!trico para obtener un en$o(ue fno.
1& 2encione re!emente 3cómo funciona4 y los principales usos de los microscopios de) a campo claro, campo oscuro, c contraste de fases, d fluorescencia e confocal, f electrónico arrido y transmisión, # fuer7a atómica& 2icroscopía de campo rillante) el material se oser!a sin coloración& La lu7 pasa directamente y se aprecian detalles que est8n naturalmente coloreados& 'ara formar una ima#en a partir de un corte *istoló#ico usa lu7 !isile, por esto la muestra dee ser lo astante fina como para que los *aces de lu7 puedan atra!esarla& ami8n se usan m8todos de tinción, se#-n las necesidades, con el fin de aumentar los detalles en la ima#en +l microscopio en campo oscuro utili7a una lu7 muy intensa en forma de un cono *ueco concentrado sore el esp8cimen& +l campo de !isión del o%eti!o se encuentra en la 7ona *ueca del cono de lu7 y sólo reco#e la lu7 que se refle%a en el o%eto& 'or ello las porciones claras del esp8cimen aparecen como un fondo oscuro y los o%etos min-sculos que se est$n anali7ando aparecen como una lu7 rillante sore el fondo& +sta forma de iluminación se utili7a para anali7ar elementos ioló#icos transparentes y sin manc*as, in!isiles con iluminación normal 2icroscopía en contraste de fase se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las c8lulas sin colorear& +s ideal para especímenes del#ados, o c8lulas aisladas& +l microscopio de fase ilumina el esp8cimen con un cono *ueco de lu7, como en el microscopio en campo oscuro& in emar#o en el microscopio de fase el cono de lu7 es m$s estrec*o y entra en el campo de !isión del o%eti!o, que contiene un dispositi!o en forma de anillo que reduce la intensidad de la lu7 y pro!oca un camio de fase de un cuarto de la lon#itud de onda& +ste tipo de iluminación pro!oca !ariaciones min-sculas en el índice de refracción de un esp8cimen transparente, *aci8ndolo !isile& +ste tipo de microscopio es muy -til a la *ora de e"aminar te%idos !i!os, por lo que se utili7a con frecuencia en iolo#ía y medicina& 2icroscopía de fluorescencia usa una sustancia natural en las c8lulas o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un *a7 de lu7, emitiendo parte de la ener#ía asorida como rayas luminosas) esto se conoce como fluorescencia& La lu7
fluorescente de mayor lon#itud de onda se oser!a como si !iniera directamente del colorante& +l microscopio que incorpora una l$mpara especial, que act-a emitiendo una lu7 e"citadora de los fluorocromos, con los que se ti/en las muestras a oser!ar, y que posee adem$s un filtro especial, que permite el paso de la lu7 emitida por el fluorocromo& (n
microscopio
confocal
es
un
microscopio
capa7
de
otener
im$#enes
tridimensionales de la c8lula& e asa en un principio similar al de un microscopio de fluorescencia, pero se utili7an dos diafra#mas confocales uno antes de la muestra y otro despu8s capaces de enfocar la iluminación en un -nico punto de la muestra& e utili7a un l$ser como fuente luminosa, y con 8l se !a arriendo la muestra por todo su !olumen, plano a plano, creando muc*as im$#enes idimensionales que un ordenador interpreta, #enerando finalmente una ima#en tridimensional del o%eto& :& efina poder de resolución así como los factores que lo condicionan& +l poder de resolución est$ determinado en parte por la lon#itud de onda de la radiación empleada para iluminar el esp8cimen y es in!ersamente proporcional a la misma, es decir, a menor lon#itud de onda, mayor poder de resolución& <& escria mediante un esquema&las partes que componen un microscopio óptico de campo claro& 2ecanismo óptico del microscopio de campo lanco& +l lente que se encuentra m$s cercano al esp8cimen se denomina o%eti!o, tiene una distancia focal corta y, forma una ima#en real y aumentada que es el o%eto del se#undo sistema de lentes denominado ocular& +l condensador tiene la función de condensar la lu7 sore el esp8cimen =& 2encione 3por qu8 es necesario el aceite de inmersión cuando se reali7an enfoques con el o%eti!o 100"4 +l aceite tiene mayor índice de refracción que el aire& i se utili7a aceite entre el o%eti!o y la muestra, la ima#en se resol!er$ me%or y permitir$ el empleo de un mayor
aumento& 'ara que e"ista una ima#en clara, los lentes deen estar dispuestos de una manera precisa para que no produ7can efectos de difracción óptica& 5& escria la t8cnica correcta para preparar y enfocar un frotis acteriano& 1& .olocar una peque/a #ota de a#ua en el centro de un portao%etos limpio& :& >lamear el asa de siemra, tomar, en condiciones as8pticas, una peque/a cantidad del culti!o acteriano en medio sólido y transferirlo a la #ota de a#ua& ?emo!er la me7cla con el asa de siemra *asta formar una suspensión *omo#8nea que quede astante
e"tendida
para
facilitar
su
secado&
i la muestra se toma de un culti!o en medio líquido, no es necesario reali7ar los dos primeros pasos ya que asta con colocar y e"tender una #ota de la suspensión acteriana, que se toma con el asa de siemra, directamente sore el portao%etos& <& +sperar *asta que el líquido se e!apore o acelerar su e!aporación acercando el porta a la llama del mec*ero& +n este caso *ay que tener muc*a precaución de no calentar demasiado el porta pues las c8lulas pueden deformarse o romperse& =& 'asar cinco !eces el portao%etos por la llama durante unos se#undos& e%ar enfriar el porta entre los pases& (na !e7 reali7ado el frotis y fi%adas las acterias, las preparaciones pueden ser oser!adas al microscopio, aunque carecen de contraste& Lo normal es continuar con el proceso de tinción& 5& .urir el frotis con aundante colorante y de%arlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tinción concreta& uele oscilar entre 1 y 5 minutos& +n ocasiones el colorante ti/e sólo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuación se deer$ sostener el portao%etos con unas pin7as sore la llama del mec*ero para que *umee el colorante, pero teniendo muc*o cuidado de que no lle#ue a *er!ir ya que se produciría la destrucción de las c8lulas&
6& La!ar la preparación con a#ua para eliminar el colorante& +sta operación se reali7a inclinando el portao%etos y aplicando el c*orro de a#ua en su parte superior de manera que resale sore el frotis, pero sin que !aya diri#ido directamente sore 8l, pues podría arrastrar parte del frotis consi#o& +liminar la m$"ima cantidad de a#ua de los portao%etos& 6& 2encione los cuidados que se deen tener con el mane%o y uso del microscopio& 1& l finali7ar el traa%o, *ay que de%ar puesto el o%eti!o de menor aumento en posición de oser!ación, ase#urarse de que la parte mec$nica de la platina no soresale del orde de la misma y de%arlo cuierto con su funda :& Hay que mantenerlo cuierto con su funda para e!itar que se ensucien y da/en las lentes <& @o tocar nunca las lentes =& @o de%ar el portao%etos puesto sore la platina cuando no se est$ usando el microscopio 5& espu8s de utili7ar el o%eti!o de inmersión, *ay que limpiar el aceite que queda en el o%eti!o con pa/uelos especiales para óptica o con papel de filtro menos recomendale& A& 3.u$les son las principales diferencias entre c8lulas procariotas y eucariotas4 Bncluya su diferencia en tama/o& C$sicamente la en!oltura nuclear de ello se deri!an características propias como la manera en que se dispone la información #en8tica& sí como la compartimentación de sus or#$nulos memranosos internos& D& e un e%emplo de microor#anismos intermedios entre !irus y acterias y entre acterias y *on#os& Las arqueas o arqueoacterias son un #rupo de microor#anismos unicelulares que al i#ual que las acterias, son de morfolo#ía procariota sin n-cleo ni, en #eneral, or#$nulos memranosos internos, pero que son fundamentalmente diferentes a 8stas, de tal manera que conforman su propio dominio o reino&
Los microor#anismos eucariotas como) los proto7oos *eterótrofos y sin pared celular, las al#as microscópicas autótrofos y con pared celular de celulosa y los *on#os microscópicos *eterótrofos y con pared celular de quitina& 9& escria las características por las cuales un !irus no est$ incluido en nin#-n dominio o reino& 3.on qu8 tipo de microscopio se podría oser!ar un !irus y porqu84 Los !irus son sistemas ioló#icos que presentan incluso tama/os ultramicroscópicos los m$s peque/os y los de tama/os medianos solo se pueden oser!ar mediante microscopio electrónico, los cuales pueden causar infecciones y solo se reproducen en c8lulas *u8sped& Los !irus fuera de c8lulas *u8sped est$n en forma inacti!a& Los !irus constan de una cuierta protectora proteica o c$pside que rodea el material #en8tico& u forma puede ser espiral, esf8rica o como c8lulas peque/as, de tama/o entre 10 y <00 nm& l tener un tama/o menor que las acterias, pueden pasar filtros que permiten la retención de las mismas& l contrario que las acterias y los proto7oos par$sitos, los !irus contienen un solo tipo de $cido nucleico ?@ o @& @o se pueden reproducir por sí solos, sino que necesitan de la maquinaria metaólica de la c8lula *u8sped para ase#urar que su información #en8tica pasa a la si#uiente #eneración& l contrario que las acterias, los !irus no e st$n presentes en el ser *umano de manera natural e"cepto como un elemento !iral endó#eno& .uando las personas quedan afectadas por un !irus, estos #eneralmente se eliminan del cuerpo *umano mediante secreciones& 10& escria 3para qu8 se usa el a7ul de metileno y cómo se une a las c8lulas4 +s un colorante $sico para tinción en cominación eosinaa7ul de metileno se#-n Eri#*t para microscopia entre otras aplicaciones& +ste colorante tiene car#a positi!a y se une a compuestos car#ados ne#ati!amente, estos compuestos se llaman asófilos, por tener afinidad con colorantes $sicos& 'or lo cual el a7ul de metileno !a a reaccionar con la memrana celular ti/8ndola de a7ul
