Estudio del bombeo de protones por levaduras.docx

Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los Inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los desacoplantes.

Objetivos

1. Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los cambios de pH producidos por las levaduras. 2. Que el alumno describa las vías por las cuales la glucosa genera los cambios de pH. 3. Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los desacoplantes sobre la salida de protones.

INTRODUCCION

las levaduras tienen un núcleo en donde reside la información genética de la célula, mitocondrias en donde se lleva a cabo la síntesis de ATP y un retículo endoplásmico y aparato de Golgi que se encargan de la síntesis de proteínas cuya localización final es la membrana plasmática o el exterior. A nivel de la membrana plasmática, las levaduras tienen una ATPasa de H + que acopla la hidrólisis del ATP con el bombeo de protones hacia afuera de la célula. Como resultado de la actividad de la ATPasa de H + en la levadura, se genera un gradiente electroquímico electroquímico de protones que se utiliza para impulsar el transporte de nutrientes al interior de la célula, proceso catalizado por sistemas de t ransporte llamados simportadores simportadores o uniportadores. Para darse una idea d e la importancia de esta enzima en la economía celular y en la energización de la membrana celular, basta decir que la ATPasa de H + consume hasta un 25 % del ATP que se sintetiza en la célula.

Hipótesis Si las levaduras consumen glucosa, se observará una disminución progresiva de su concentración en el medio de cultivo con el tiempo y cambios en el pH extracelular. Material • Tres vasos de precipitado de 100 ml. • Pipeta de 10 ml. • Potenciómetro. Potenciómetro. • Piceta para enjuagar el electrodo del potenciómetro. • Levadura (Saccharomyces ( Saccharomyces cerevisiae) cerevisiae) 200 mg/ml. • Solución de glucosa (10%) para una concentración final de 1%. • Agua destilada.

Método Experimento. 1 .Se preparó una solución de levadura con concentración al 10% en 50ml de agua destilada, así como una solución de glucosa al 10% en 50ml de agua destilada.

2. Se determinó el Ph de la solución de lavadura, posteriormente el Ph de la solución de glucosa, asi como su peso. Las mediciones de Ph y peso se determinaron dos veces mas con un intervalo de 3min.

3. se adiciono 5ml de la solución de glucosa a la solución de levadura, se tomó su peso. 4. Se determinó el pH de la solución cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos 2 veces más.

Análisis de resultados 1. Se elaboró una gráfica con los resultados de cada uno de los experimentos; utilizando los valores de las lecturas de pH vs. Tiempo.

Determinacion de pH 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 3min

6min

10min

15min

Levadura

20min Glucosa

25min

30min

40min

Sol. Levadura Glucosa

50min

2. Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control. Los cambios de pH en lo solución de levadura-glucosa se debe a la protonación de la glucosa, efecto sucedido por la reacción de levadura, la cual a nivel celular es encargada de los acoplamientos de hidrolisis del ATP, el cual funciona como motor de bombeo de protones H+ hacia a fuera de la célula.

La liberación de H+ por la acción de la formación de ATP, acto conseguido por la ATP sintasa ubicado en la mitocondria de la levadura, al obtener los H+ de la glucosa para la formación de ATP así como el bombeo se genera un gradiente electroquímico de protones que se utiliza para impulsar el t ransporte de nutrientes al interior de la célula. También se observó que de la misma forma el peso de la solución disminuía con el tiempo debido a la liberación de CO2 durante la fermentación alcohólica sucedida en

la solución.

Referencias 1. Peña A. Studies on the mechanism of K+ transport in yeast. Arch Biochem Biophys. 1975; 167:397-409. 2. Pardo JP. La ATPasa de H + de la membrana plasmática de los hongos. Mensaje Bioquímico.