INTRODUCCION Los Micrococcus son células bacterianas esféricas de diámetro comprendido entr entre e 0,5 y 3 micró metr os que típi came nte apare cen dispu estas en té tr adas ad as..
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cataloga
como
patógeno
oportunista, particularmente
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con inmunodeficiencia, tales como enfermos de VIH. en los que puede producir infecciones pulmonares y en raras ocasiones bacteriemia recurrente, Shock séptico, endocartidis o neumonía .La importancia del estudio de los micrococos en alimentos nos permite conocer que algunas desdoblan las proteínas con producción de ácidos. Por esta capacidad Proteolíticaactúan contaminantes de alimentos cárnicos, otras especies toleran concentraciones elevadas de sal, también son capaces de crecer en s a l m u e r a s , O t r a s p r o d u c e n pigmentaciones
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anormales en la superficie de los alimentos, al imentos, afectando su calidad, por ejemplo M. luteus produce un pigmento amarillo, mientras que M. roseus produce un pigmento rosa rosado do.Los .Los Micrococcos son a erobios est rictos y termorresi stentes. Du ra nt e la ma du raci ra ción ón desciende desciende su número. Elaboran Elaboran proteasas proteasas y lipasas lipasas extracelulares que actúan durante la maduración de algunos quesos. Los micrococcos son débilmente f ermentadores, for man parte de la flora inocua que contamina la leche cruda, tiene poca actividad enzimático por lo tanto son de muy poca importancia como agentes adulteradores en leche leche.. Sin Sin emba embarg rgo o por por ser ser la la flora flora más abun da nt e en le ch e cr uda y
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- 1.- ESTUDIO DE BACTERIAS DEL GENERO MICROCOCCUS 2.- PROBLEMA: a. ¿Cómo identifico las bacterias del tipo Micrococos? b.En que alimentos podemos encontrar y que enfermedades pueden causar 3.- OBJETIVOS: a. Conocer y comprender las características de las bacterias del género Micrococos y todos los aspectos relacionados. b. Determinar métodos y técnicas para su identificación en muestra de queso artesanal. 4.- MARCO TEÓRICO:4.1.- ASPECTOS GENERALES 4.1.1.- GENERO MICROCOCCUS Los Micrococos son células bacterianas esféricas de diámetro comprendido entre 0,5 y 3micrómetros que típicamente aparecen dispuestas en tétradas. Son Gram positivas,aerobias estrictas. Taxonómicamente pertenecen a: Dominio:BacteriaFilo:ActinobacteriaClase: ActinobacteridaeOrden:
ActinobacteriaSubclase:
ActinomycetalesSuborden:
MicrococcineaeFamilia:
MicrococcaceaeGénero: MicrococcusEspecies: M. Antarcticu, M. luteus, M. lylae, M. Mucilaginosis, M. roseus Micrococcus tiene una gruesa pared celular que puede abarcar el 50% del materialcelular. Su genoma es rico en guanina y citosina (65 al 75%). A menudo contienen plásmidos que proporcionan al organismo características útiles.Estas bacterias generalmente son organismos saprofíticos, están presentes normalmenteen la microflora cutánea, productos lácteos, agua y suelo. El género es raramenteasociado con enfermedades,
aunque
actualmente
se
cataloga
como
patógeno
oportunista, particularmente en pacientes con inmunodeficiencia, tales como enfermos de VIH en los - no arrojó ningún L
que puede producir infecciones pulmonares y en raras ocasiones bacteriemia recurrente,Shock séptico, endocartidis o neumonía.También a veces se encuentran contaminando alimentos. La mayoría de las especies queabundan en los alimentos son aerobias, no son patógenas (desprovistas de coagulasa yhemolisina) y catalasa positivas.La importancia de los micrococos en alimentos se debe a las siguientes características: • Al gunas es pec ies des doblan la s proteínas con pr oducción de ác idos.
Por estacapacidad proteolítica actúan como contaminantes de alimentos cárnicos. •Otras especies toleran concentraciones elevadas de sal, son capaces de
crecer enlas salmueras. •L a m a y o r í a s o n m e s ó f i l o s . A l g u n a s e s p e c i e s s o n t e r m o d ú r i c a
s, resisten altratamiento comercial que se aplica a la leche ( M. varians ). Algunos micrococosson psicrofilas y son capaces de crecer a temperaturas próximas o inferiores a los10°C. •Otras producen pigmentaciones y coloraciones anormales en la superficie de
losalimentos, afectando su calidad, por ejemplo M. luteus produce un pigmento amarillo, mientras que M. roseus produce un pigmento rosado. Micrococcus en pescados refrigerados y congelados Las especies de peces capturadas en mares y aguas tropicales y templadas presentan bacterias del Genero Micrococcus a nivel de branquias e intestinos.M. lut eus fo rma par te de la mic rof lor a del pes cado , y se le considera un potencial contaminante ambiental y que en algunas ocasiones puede causar infecciones. Sobrevivea bajas temperaturas y comienza su proliferación después de 9 días de almacenamiento,siendo capaz de producir diferentes enzimas descarboxilasas productoras de cadaverina y putrescina que causan la descomposición del pescado mantenido en congelación 4.1.2- DIAGNÓSTICO MICROBIOLOGICOA.COLORACIÓN GRAM: Cocos Gram positivos, dispuestas en tétradas B.- MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E IDENTIFICACION:
B.1.- Medio de cultivo AGAR SANGRE: Crece bien en agar sangre, tras 48h deincubación en aerobiosis, forma colonias que miden aproximadamente 1 ó 2 mm dediámetro y tienen un aspecto mate. No produce hemólisis (hemólisis gamma γ) AGAR SANGRE
Es un medio enriquecido, constituido por una combinación de un medio base (agar nutritivo) mas el agregado de 5 % de sangre ovina, también puede usarse sangre humana.El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Fórmula (en gramos por litro) del medio base: Infusión de músculo de corazón 375.0Peptona 10.0Cloruro de sodio 5.0Agar 15.0PH final: 7.3 ± 0.2 PREPARACION DEL MEDIO BASE: Suspender 40 g del polvo del medio base en un litro de agua destilada. Mezclar muy bien hasta obtener una suspensión homogénea. Calentar en baño María con agitación frecuente hasta disolver muy bien el polvo. Esterilizar 20 minutos a 121°C. PREPARACION DEL AGAR SANGRE: Enfriar a 45° C el medio base y agregar en forma aséptica un 5% de sangre estéril desfibrando (a temperatura ambiente). Homogenizar bien para mezclar la sangre con la media base y distribuir en placas. Características del medio Medio base: color ámbar. Medio base más 5% de sangre de carnero: color rojo cereza. FUNDAMENTO La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio de cultivo un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agregado de sangre al m edio de cultivo, en concentración de 5 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar la capacidad hemolítica de losmicroorganismos patógenos. Observando los halos hemolíticos alrededor de las coloniasse determina el tipo de hemólisis que posee: alrededor de la colonia. bacterias sintetizan una hemolisina que origina lisis total de los glóbulos rojos, formándose una zona transparente alrededor de la colonia. poca importancia patógena). 2.- Medio de cultivo AGAR MANITOL SALADO: Los Micrococcus crecen bien en este medio. Forman colonias rojas, relativamente grandes, elevadas,
cupuliformes y opacas, de consistencia cremosa, a las 18-24 horas de incubación a 35-37 °C, en aerobiosis. No fermentan el manitol. AGAR MANITOL SALADO Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos, donde también desarrolla especies del Genero Micrococus, a partir demuestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria. Fórmula (en gramos por litro) del medio base: Extracto de carne 1.0Pluripeptona10.0DManitol 10.0Cloruro de sodio75.0Agar15.0Rojo de fenol 0.025PH final: 7.4 ± 0.2 PREPARACION DEL MEDIO: Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Mezclar muy bien hasta obtener una suspensión homogénea. Calentar en baño María con agitación frecuente hasta disolver muy bien el polvo. Esterilizar 15 minutos a 121°C. Distribuir en placas. Características del medio: Medio preparado: color rojo FUNDAMENTO Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono,nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidratode carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo a amarillo. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva (S.aureus) fermentan el manitol acidificando el medio, las colonias son amarillas, rodeadas de una zona del mismo color amarillo. Los estafilococos coagulasa negativos (S.epidermidis) y los Micrococcus no fermentan el manitol, presentan colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color rojo o púrpura (muchas veces se lesconfunde y se recurre a pruebas de diferenciación bioquímica)
FUNDAMENTO Los ácidos formados por degradación oxidativa de la glucosa son sumamente débiles y para su detección se requiere un medio de oxido fermentación mas sensible, como el deHugh y Leifson (medio OF). C.4.- Prueba de utilización de la Glucosa en el medio Hugh y Leifson (medio OF): El medio debe colocarse en tubo y estar en plano semi-inclinado, presentando pico deflauta.1.Se requi eren dos tubos para la prue ba, inocu lado s c on el organismo desconocido con un asa de siembra de punta recta que atraviese el medio hasta llegar al fondo del tubo.2.Cubrir un tubo de cada par con una capa de un cm de aceite mineral, y el otro tubo dejar abierto expuesto al aire.3.Incubar ambos tubos a 35°C durante 48 horas. Interpretación:
La producción de acido por metabolismo oxidativo se detecta en el medio por la aparición de color amarillo. En el caso de organismos exudativos la producción de color se puede notar primero cerca de la superficie del medio, en caso de los organismos fermentativos la acidez se produce en el fondo del tubo. El siguiente cuadro indica lasreacciones:En tubo abierto Tubo cubierto Tipo de metabolismo Acida Alcalina oxidativo (Amarillo) (Verde)Acida Acida fermentativo(Amarillo) En este medio de oxidación-fermentación HughL e i f s o n ( O F ) l a s e s p e c i e s d e Micrococcus producen acido solo en el tubo abierto (utilización oxidativa), en tanto queel S.epidermidis produce acido en ambos tubos, abierto y cerrado, debido a su capacidadde fermentar hidratos de carbono. D.- CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS: D.1.- Son catalasa positiva. La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrogeno (H2O2) en oxigeno agua. El peróxido de hidrogeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo oxidativo aeróbico de los hidratos de Carbono. Si se deja acumular, el peróxido de hidrogeno es letal para las células bacterianas. La catalasa transforma al peroxido dehidrogeno en agua y oxigeno. H202 H2O + O2 (burbujas de gas)Catalasa10 Prueba de la Catalasa en lámina portaobjeto. 1.Con un asa de siembra de punta recta transferir una pequeña cantidad del centro deuna colonia bien aislada a la superficie de una lamina portaobjeto. 2. Añadir 1 a 2 gotas de peróxido de hidrogeno al 3%. 3.Realizar la lectura. Interpretación: La rápida aparición y producción sostenida de burbujas de gas oefervescencia indica una reacción positiva.Se puede usar como control positivo una cepa de Staphylococcus aureus y como controlnegativo a Streptococccus ssp. D.2.- Son no fermentadores de glucosa. Test de Fermentación de Glucosa E s t e p e r m i t e d i f e r e n c i a r a l gé n e r o M i c r o c o c cu s d e l g é n e r o Staphylococcus ya que este último da esta prueba positiva. Staphylococcus aureus : Fe rmenta glucosa, se pr oduce acidez (medio amari llo). Microco ccus spp. : No fermenta glucosa (medio rojo-naranja)Los micrococos son bacterias gram posi tivas que necesitan oxígeno para vivir. Son células esféricas que a menudo se encuentran solas o por pares. Se dividen típicamente en más de un plano, produciendo tétradas, paquetes cúbicos
irregulares de cuatro células. No forman esporas y muchas de ellas no son móviles. Los micrococos son aerobios estrictos o facultativos. Respiran utilizando al oxígenocomo aceptor final de electrones. Sintetizan unos pigmentos r espiratorios llamadoscitoc romos y una clase de quin onas ta mbién implicadas en la respiración, llamadas menaquinonas. Muchas especies metabolizan azúcares, como por ejemplo la glucosa queso oxida a acetato o totalmente a CO O. Metabolizan la glucosa por la vía de la hexosa mono fosfato, en lugar de la vía de Embden-Meyerhof usada por las eucariotas y muchas bacterias heterótrofas. Algunas especies también oxidan compuestos orgánicos más pequeños, como piruvato, acetato lactato, succinato y glutamato mediante el ciclo de Krebs típico de las mitocondrias. Algunos micrococos pueden crecer en ambientes hipersalin os con porcentajes de sal en el agua de 5 % ( e l a g u a s d e m a r t i e n e aproximadamente 3.4%). Todos descomponen el peróxido de hidrógeno mediante la enzima catalasa. El género Micrococcuss Tiene varias especies, algunas de ellas con movimiento M.luteus se caracteriza por la producción de un pigmento amarrillo y M. Roseus p o r la d e u n o rojizo. La pared celular de M. Luteus se caracteriza por contener unidades peptídicas de L-lisina. Las bacterias pertenecientes a este género tienen sistemas multienzimáticos d et r a n s p o r t e d e e l e c t r o n e s l i g a d o s a l a m e m b r a n a c e l u l a r , e s t o s s i st e m a s co n t i en e n citocromos a, b y c y pigmentos carotenoides amarrillos y rojizos. La temperatura óptima para muchas especies de Micrococcus es de unos 30º C. Micrococcus roseus tiene gran parecido con M. radiodurans . Algunos bacteriólogos consideran que M. radiodurans es simplemente una cepas de M roseus , puesto que susADN poseen similares proporciones de guanina y citosina y tienen pigmentos parecidos y otras características bioquímicas en común. Sin embargo, la composición de la pared
USOS INDUSTRIALES:
Por su versatilidad metabólica algunas especies del Genero Micrococcus tienen la capacidad de utilizar un extenso rango de substratos. Pueden también realizar la biodegradación de muchos otros contaminantes ambientales y de esta manera participar en la conservación del ecosistema. Son sintetizadores de largas cadenas (C21-C34) dehidrocarbonos alifáticos utilizados para la producción de aceites lubricantes. 5.en sustancias salinas. 6.- IDENTIFICACION Y MUESTREO DE ALIMENTOS PARA ANALISISIDENTIFICACION DE MICROCOCCUS EN QUESO ARTESANAL No obstante que Micrococcus normalmente convive en armonía con el huésped humano o animal, formando parte de su flora sin causar daño, su importancia radica porque algunas especies producen pigmentaciones y coloraciones anormales en la superficie de los alimentos, afectando su calidad CONCLUSIONES: La bacteria aislada a partir de la muestra de queso artesanal se trata del Género Micrococcus.Tanto en el medio de aislamiento como en los medios de diferenciación bioquímica el comportamiento de la bacteria que se aisló indica que se trata del genero Micrococcus. 9.- BIBLIOGRAFÍA: http://www.slideshare.net/pedritopacheco/micrococcus. Greenblat, C.L., Baum, J., Klein, B.Y., Nachshon, S., Koltunov, V., Cano, R.J., (2004).“Luteus del micrococo”. Ecología microbiana 48 : 120 –127. http://www.cepis.org.pe/bvsaidis/resisoli/iii131.pdf .http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/ciencia/v01_n2/flavonoides.htm.http://www .cybertesis.edu.pe/sisbib/2003/alcantara_lj/pdf/alcantara_ljTH.3.pdf .http://bvs.minsa.gob.pe/php/decsws.php?tree_id=B03.510.400.500.500&
