MORFOLOGIA MACROSCOPICA Y MICROSCOPICA RESUMEN: Aunque existe un enorme número de microorganismos implicados en procesos infecciosos todos ellos se parecen mucho entre si desde el punto de vista morfológico; las características macroscópicas y microscópicas son de gran ayuda en la identificación y clasificación de estos, cada microorganismo crece de manera diferente formando colonias de distinto color, forma, tamaño, textura, olor y brillo, existen colonias más elevadas que otras, con bordes enteros, estrellados y desflecados entre otras, por otra parte las características microscópicas; nos ayuda identificar de forma individual de su agrupación y sólo en raras ocasiones generan un diagnóstico definitivo. El tiempo de incubación es necesario para que aparezcan las colonias, que son un grupo de células con similares características, que actúan en conjunto con la excepción de que su función no es formar una unidad estructural mayor a especie de tejido. Lo más importante fue identificar la morfología de los distintos microorganismos (Klibsella y S. aureus) en sus respectivos medios de cultivos (agar nutritivo, caldo nutritivo, MYP y hektoen), describir y enumerar las características de los microorganismos con la utilización de dos instrumentos muy importantes como el microscopio, que hace visible objetos de tamaño minúsculo y el estereoscopio, este permite hacer estudios de objetos y espécimen demasiados pequeños para ser estudiados a simple vista. Se realizo la preparación del área de trabajo para el estudio de los microorganismos ya mencionados, luego se examino detalladamente cada una de sus características en cada una de las bacterias. Se pudo destacar que los microorganismos crecen sobre medios de cultivos que exhiben apariencia macroscópica y microscópica de su crecimiento estas diferencias llamadas características lo cual son la base para la separación de ellos en grupos taxonómicos.
Palabras claves: Bacterias, consistencia, estereoscopio, microscopio, morfología.
INTRODUCCIÓN: La forma de las bacterias al microscopio está determinada por la rigidez de su pared celular. Básicamente, se diferencian según su forma en cocos (esféricas u ovaladas), bacilos (cilíndrica o de
bastones; rectos o curvos) y espirilos (espiral); dentro de estas últimas se encuentran: Treponema, Borrelia y Leptospira (Las espirilos varían en el número de vueltas, desde pocas (Borrelia) a muchas
(Treponema). Las bacterias pueden mantenerse unidas unas con otras después de la división celular, pero conservando siempre la independencia celular. Si el plano de división es único, podemos encontrar diplococos o cocos en cadena (microorganismos del género Streptococcus). Si los planos de división son muchos, los cocos pueden agruparse en tétradas o en racimos (Staphylococcus). Los bacilos pueden ser muy cortos (cocobacilos) o muy largos. Sus extremos pueden ser redondeados o rectos; pueden estar aislados, en cadenas, en filamentos o formando letras chinas (Corynebacterium). Los bacilos curvos pueden tener forma de coma (Vibrio cholerae). La morfología bacteriana debe ser observada con el microscopio óptico o el microscopio electrónico, dado el tamaño pequeño de estos microorganismos. El más usado en el laboratorio es el microscopio óptico de campo claro, pero existen otros como el microscopio óptico de campo oscuro en los que los organismos aparecen brillantes en fondo oscuro. Este microscopio permite la visualización de bacterias difíciles de colorear como el Treponema pallidum, agente de la sífilis. Las bacterias pueden observarse sin tinción (examen en fresco) si se las coloca en glicerol o soluciones no acuosas que aumenten el índice de refracción o con tinción usando distintas coloraciones que mejoran
su visualización ya que son células incoloras. Dichas tinciones se basan en la afinidad que presentan los colorantes por las estructuras bacterianas. Los colorantes catiónicos por ejemplo, son atraídos por los componentes de carga negativa como los ácidos Nucleicos y los polisacáridos. Ejemplo de este tipo son: el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. El examen en fresco no es el más usado para observar la morfología bacteriana porque las bacterias tienen citoplasma incoloro y su índice de refracción no difiere mucho del vidrio y del agua. Con esta técnica se puede verificar la existencia de bacterias y evidenciar su capacidad para moverse. El examen en fresco también puede ser usado con técnicas especiales como la tinción con tinta china que nos permite determinar la presencia de cápsula rodeando la bacteria. También puede usarse en el microscopio de campo oscuro por ejemplo para observar Treponemas o Leptospira con su movimiento característico. Las coloraciones que se usan para teñir los preparados de bacterias, se pueden dividir en: simples, diferenciales y especiales. Las primeras, por ejemplo el azul de metileno, nos permiten observar la existencia de bacterias, su morfología, su agrupación, la presencia de esporos y la existencia de otros tipos celulares. Las diferenciales (por ejemplo la coloración de Gram y la de Ziehl
Nielseen) además de lo anterior, permiten la diferenciación de las bacterias porque usan diferentes colorantes que se comportan distinto según el microorganismo en cuestión. Las tinciones especiales se usan para objetivar distintas estructuras como la cápsula, el núcleo, los flagelos, los esporos, etc. Antes de la coloración hay que realizar la preparación y la fijación del frotis. La preparación del frotis consiste en extender homogéneamente la muestra (por ejemplo un cultivo bacteriano) o una suspensión de la misma sobre una lámina. Una vez preparado el frotis debe secarse y fijarse (por ejemplo con calor).
envoltura celular clases de células.
estas
dos
Entre las principales características de las bacterias se encuentran su tamaño, forma, estructura y tipo o modo de agrupación. Todas estas características van a constituir la morfología propia de las células bacterianas.
Con la fijación del frotis se pretende obtener la muerte de los microorganismos, la adhesión a la lámina y la conservación de su morfología. Después de preparar y fijar el frotis, se puede realizar cualquier tipo de coloración (simple o diferencial). La coloración de Gram es la más usada en bacteriología; debe su nombre a quién la describió en 1884. Es una coloración diferencial, dado que las bacterias pueden clasificarse según su respuesta en grampositivas o gramnegativas. Las primeras se tiñen de color azul violeta y las segundas adquieren un color rosado o rojo. La diferente reacción de las bacterias a la coloración de Gram se relaciona con diferencias fundamentales de la
de
El tamaño es una característica para cada tipo microbiano; se puede medir con gran exactitud y fiabilidad a pesar de que sólo puede observarse la bacteria al microscopio, precisamente por sus dimensiones microscópicas. La forma es igualmente una característica para cada tipo bacteriano, que puede visualizarse con facilidad a través de microscopia; en este sentido aparecen formas enteras o cocoides, formas cilíndricas o bacilares, formas espirales o helicoidales, formas cocobacilares, forma de coma, etc. Su agrupación sigue siendo otra característica de cada tipo de bacterias, distinguiéndose aquí agrupaciones macroscópicas y agrupaciones microscópicas. Las primeras son visualizadas a simple vista y corresponden a su crecimiento en un punto en un medio de cultivo solido
para formar colonias que serán distintas y características para cada tipo bacteriano. Las segundas son visualizadas por microscopia y corresponde a lo que realmente se entiende por agrupación bacteriana, es decir la tendencia que presentan los distintos tipos bacterianos para asociarse entre sí formando pequeños grupos de 2 o más bacterias, por ejemplo en tétradas, en diplococos, en racismos, en cadenas, etc. Que con frecuencia es característico de un grupo taxonómico, por ejemplo un género.[1] Una colonia es una agrupación de bacterias formada a partir de la reproducción de una Unidad Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio sólido; aunque varía de tamaño generalmente es visible a simple vista. Una UFC puede ser un solo microorganismo o bien un grupo de microorganismos de una misma especie como en el caso de bacterias que tienen tendencia a permanecer unidas como los estafilococos o los estreptococos. Las colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos color característicos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se encuentren, es constante bajo condiciones controladas y depende de la
especie bacteriana que la forme. Debido a que las características de las colonias ocurren en varios grados y combinaciones dependiendo de las bacterias y son a menudo muy uniformes, sirven para identificar bacterias en cultivos mezclados. Sin embargo, además de éstas características se requiere también estudiar la fisiología y propiedades inmunológicas de las bacterias para poder realizar una identificación completa. La morfología colonial es comparable a una estadística ya que se deriva de una célula individual pero es la característica de la masa celular. Así pues, por ejemplo, la pigmentación es aparente en la colonia, pero no en la célula individual, en el caso de la consistencia mucosa de algunas colonias esta se deriva de la sustancia capsular en aquellas bacterias con cápsula muy grande. Medida de las colonias. Ésta característica es bastante constante dentro de las especies y puede ir desde colonias muy diminutas hasta un diámetro de varios milímetros. Forma: Está determinada por su borde y su espesor. En la figura 2 se pueden observar varias formas, elevaciones y bordes de colonias bacterianas. Consistencia y textura. La consistencia de las colonias puede variar desde una colonia seca que puede moverse sobre el agar con el asa, hasta una colonia viscosa que se pega al asa y forma filamentos o
hilos mucosos cuando se trata de separarla del agar. La superficie puede ser uniformemente brillante y suave o puede ser estriada con muescas concéntricas o quebradas. Al examinar la colonia con luz transmitida puede aparecer con textura granular o amorfa. Pigmentación. Esta característica es muy común en las bacterias
saprófitas en las que las colonias aparecen rojas, anaranjadas, amarillas, etc. De los microorganismos patógenos uno de importantes es Staphylococcus aureus que tiene un color amarillo dorado. El pigmento no se aprecia en las células individuales a que se debe a gránulos intracelulares muy pequeños para verse con luz transmitida.[2]
MATERIALES Y METODOS:
Se efectuó la limpieza en el lugar de trabajo con solución jabonosa y posterior mente con hipoclorito. Se utilizo varios medios de cultivos en caja de petri unos con bacteria Klibsella y otros con S. aureus. Con el estereoscopio se realizo la descripción morfológica, de cada uno de los microorganismos dados por el profesor a cargo. Con el asa redonda se tomo inoculo de Klibsella y S. aureus y se froto en un cubre objeto
RESULTADOS:
respectivamente marcado al cual se le había adicionado una gota de agua. El cubre objeto fue flameado en el mechero hasta que la muestra se fijara. Seguido se le adiciono azul de metileno dejándolo actuar por 1 minuto, al pasar este tiempo se lavó el frotis con agua de la llave a baja presión para remover el exceso de colorante. Se dejo secar la muestra al aire.
Características macroscópicas de los microorganismos estudiados: Cajas de petri: Klibsella: Agar nutritivo grande circular elevada entero blanco lisa traslucida blanda
Tamaño forma Elevación Margen Color Superficie Aspecto consistencia
Myp No se pudo medir circular elevada entero blanca lisa No se pudo medir blanca
Hektoen No se pudo medir circular convexa entero naranja rugosa No se pudo medir blanda
S. aureus: Tamaño Forma Elevación Margen Color Superficie Aspecto Consistencia
Agar nutritivo pequeño Circular plana entero blanco lisa traslucido blanda
Tubos: Caldo nutritivo sedimento Sedimento y turbidez(++)
S. aureus Klibsella AGAR INCLINADO: Crecimiento Pigmentación Características Forma Motilidad TUBOS RECTOS:
Klibsella abundante no criogénico traslucidas difusa si
S. aureus abundante No criogénico traslucidas difuso si
Klibsella S. aureus
motil motil
Características microscópicas de los microorganismos estudiados: Klibsella
S. aureus
ANALISIS: Morfología macroscópica La mayoría de las bacterias se multiplican rápidamente y son visibles como colonias cuando se las siembra en medios de cultivo sólidos adecuados. Requieren una incubación de aproximadamente 24 horas en una atmósfera que favorezca su desarrollo, a temperatura óptima. Una colonia está constituida por los descendientes de una o unas pocas células. Las características de la colonia también dependen de la movilidad de la bacteria. El tamaño puede variar desde 0.5 mm a más grandes como las enterobacterias. La forma de la colonia puede ser circular (Staphylococcus), irregular o filamentosa (Bacillus). Los bordes pueden ser ondulados en sierra o dentado La superficie de la colonia también es orientadora y puede ser: plana, convexa, mamelonada, umbilicada En relación al pigmento que adquieren, éste puede ser: verde (P. aeruginosa), amarillo (S.
Es un género de bacterias móviles, Gram-positivas, anaerobias facultativas y con una prominente cápsula de polisacáridos. bacteria anaerobia facultativa, gram positiva
aureus), grisáceo (N. meningitidis). También es diferente el comportamiento frente a la luz: brillante (Streptococcus) u opaca (Staphylococcus). Pueden presentar olores particulares como el frutal Por último hay que destacar la consistencia: mucoide (M), liso (S) o rugoso (R). Las colonias M tienen aspecto acuoso, brillante, propio de las bacterias capsuladas o que forman cubiertas polisacáridos como Klibsella. Morfología microscópica La forma de las bacterias al microscopio está determinada por la rigidez de su pared celular. Básicamente, se diferencian según su forma en cocos (esféricas u ovaladas), bacilos (cilíndrica o de bastones; rectos o curvos) y espirilos (espiral); Las bacterias pueden mantenerse unidas unas con otras después de la división celular, pero conservando siempre la independencia celular. Si el plano de división es único, podemos encontrar diplococos o cocos en
cadena (microorganismos del género Streptococcus). Si los planos de división son muchos, los cocos pueden agruparse en tétradas o en racimos (Staphylococcus). Los bacilos pueden ser muy cortos (cocobacilos) o muy largos. Sus extremos pueden ser redondeados o rectos; pueden estar aislados, en cadenas, en filamentos o formando letras chinas La morfología bacteriana debe ser observada con el microscopio óptico o el microscopio electrónico, dado el tamaño pequeño de esto microorganismos. El más usado en el laboratorio es el microscopio óptico de campo claro Las bacterias pueden observarse sin tinción (examen en fresco) si se las coloca en glicerol o soluciones no acuosas que aumenten el índice de refracción o con tinción usando distintas coloraciones que mejoran su visualización ya que son células incoloras. Dichas tinciones se basan en la afinidad que presentan los colorantes por las estructuras bacterianas.
CONCLUSIONES:
El estudio detallado de los componentes celulares requiere el uso de instrumentos que permitan ampliar muchas veces la imagen de las estructuras que lo constituyen como es el caso del microscopio El éxito de la observación d la estructura microbiana se
basa en el buen manejo que se le da al microscopio El Microscopio es: un instrumento que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minúsculos o detalles muy pequeños de los mismos. El microscopio simple o lente de aumento es el más sencillo de todos y consiste en realidad en una lupa que agranda la imagen del objeto observado. Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sitúa cerca del objeto que se quiere estudiar. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa sencillamente como una lupa. Zacharias y Hans Janssen construyeron en los años 1590's el primer microscopio registrado. En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrónico a base de lentes electrostáticas. Los virus, y los objetos más pequeños, como las macromoléculas solamente pueden verse a través del microscopio electrónico. El desarrollo de las colonias sobre superficies de agar, permite al microbiólogo identificar las bacterias porque las especies forman a
menudo colonias con una forma y aspecto característico El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en el que crezca la bacteria ANEXOS: 1- Señale las ventajas en cuanto a observaciones de colonias en medios sólidos frente a medios líquidos RTA: La ventaja es que en medios sólidos se puede hacer mejor el estudio de las colonias, ya que están mejor definidas. 2- Defina: Abertura numérica: En óptica, la apertura numérica (AN) de un sistema óptico es un número a dimensional que caracteriza el rango de ángulos para los cuales el sistema acepta luz. Recíprocamente, también está relacionado con el ángulo de salida del sistema. La definición exacta del término varía según diferentes áreas de la óptica. -
Campo microscopio: Se denomina campo
del microscopio al círculo visible que se observa a través del microscopio. También podemos definirlo como la porción del plano visible observado a través del microscopio. Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente proporcional al aumento del microscopio. Para medir el diámetro del campo del microscopio con cualquiera de los objetivos se utiliza el micrómetro, al que se hará referencia en el siguiente punto.
Poder de resolución: Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes utilizadas.[3]
Bibliografía: 1- http://books.google.co
m.co/books?id=sUrIec df_O8C&pg=PA250&d q=macroscopia+bacter iana&hl=es&sa=X&ei= 7fP1UbfXDvLd4AOFjY
HgAQ&ved=0CCwQ6 AEwAA#v=onepage&q =macroscopia%20bact eriana&f=false 2- http://microdonto.files.wo rdpress.com/2009/03/mor fologia-de-las-coloniasbacterianas.pdf 3- http://www.slideshare.net /PRINCESSANITA/macrosco pa
