LAPORAN PRAKTIKUM Penyehatan Air dan Pengelolaan Limbah Cair- A
Hari/Tanggal
: senin/ 10 desember 2012
Waktu
: 13.00 -16.00 WIB
Tempat
: Labratrium !ese"atan Lingkungan
#udul
: $emeriksaan %li&rm dan %litin'a pada sampel air sumur gali
Tu'uan
: untuk mengeta"ui berapa ban(ak %li&rm dan %litin'a pada
sampel dengan menggunakan media LB dan B)LB. I.
Tinjauan Puta!a
Bakteri %li&rm merupakan glngan mikrrganisme (ang mikrrganisme (ang la*im digunakan la*im digunakan sebagai indikatr + di mana bakteri mana bakteri ini ini dapat men'adi sin(al untuk sin(al untuk menentukan suatu sumber air tela" tela" terknta terkntamin minasi asi le" patgen atau atau tidak. tidak. Berdas Berdasark arkan an penelit penelitian ian++ bakteri bakteri ,li&rm ,li&rm ini meng"asilkan meng"asilkan *at etinin (ang dapat men(ebabkan men(ebabkan ka kank nker er.. elain itu+ bakteri pembusuk ini 'uga memprduksi berma%am-ma%am ra%un seperti indl dan skatl (ang skatl (ang dapat menimbulkan pen(akit menimbulkan pen(akit bila bila 'umla"n(a berlebi" di dalam tubu" . tubu" . Bebera Beberapa pa patgen patgen (ang tela" tela" dikenal dikenal se'ak se'ak beberap beberapaa dekade dekade lalu lalu adala" adala" giardi giardiaa lamblia giardiasis giardiasis+ %r(ptspridium cryptosporidiosis cryptosporidiosis+ + "epatitis pen(akit terkait "ati+ dan "elmint"es %a%ing parasit. Bakteri ,li&rm dapat digunakan sebagai indikatr karena densitasn(a berbanding lurus dengan tingkat pen%emaran tingkat pen%emaran air. air. Bakteri ini dapat mendeteksi patgen pada air seperti irus+ prt*a irus+ prt*a++ dan parasit dan parasit.. elain itu+ bakteri ini 'uga memiliki da(a ta"an (ang lebi" tinggi daripada patgen serta lebi" muda" diislasi dan ditumbu"kan. ,iri-%iri bakteri %li&rm antara lain bersi&at aerb atau anaerb &akultati&+ termasuk ke dalam bakteri gram negati&+ negati&+ tidak membentuk membentuk spra+ spra+ dan dapat mem&ermentasi laktsa untuk laktsa untuk meng"asilkan asam dan gas pada su"u 3,-34,. ,nt" bakteri %li& %li&rm rm antara antara lain lain Escherichia coli+ coli+ Salmonella Salmonella spp. spp.++ Citrobacter + Enterobacter + Klebsiella+ Klebsiella+ dan lain-lain. dan(a dan(a bakteri bakteri %li& %li&rm rm di dalam dalam makanan makanan atau atau minuma minuman n menun' menun'ukan ukan kemung kemungkina kinan n adan(a adan(a mikr mikrrg rgani anisme sme (ang (ang bersi& bersi&at at enter enterpat patgen genik ik dan atau atau tksig tksigeni enik k (ang (ang berba"a berba"a(a (a bagi bagi kese"at kese"atan. an. Bakter Bakterii %li&r %li&rm m dapat dapat di bedakan bedakan men'adi dua glngan (aitu 5
1. Bakteri %li&rm glngan &ekal misaln(a Escherichia coli 2. Bakteri %li&rm glngan nn &ekal.misaln(a Enterobakter aerogenes E. coli merupakan bakteri (ang berasal dari ktran "ean maupun manusia sedangkan E .aerogenes Biasan(a di temukan pada "ean atau tanaman-tanaman (ang tela" mati 7engsi"+ 2010. ,li&rm &ekal kadang-kadang %li&rm &eses atau &e%l %li&rm adala"+ bakteri &akultati&-anaerb berbentuk batang+ gram negati&+ dan nn-sprulasi. ,li&rm &ekal mampu tumbu" dan meng"asilkan asam dan gas dari laktsa dalam aktu 89 'am di 88 0+ ; ,. ekmendasi ?$ dan untuk suplai air ruma" tangga+ untuk pengbatan+ 'umla" ,li&rm &ekal kurang dari 2000 %lnies/100 mL+ dan untuk tandar air minum kurang dari 1 klni / 100 ml. Bakteri %li&rm dalam air minum dikategrikan men'adi tiga glngan+ (aitu %li&rm ttal+ &e%al %li&rm+ dan E. coli. =asing-masing memiliki tingkat risik (ang berbeda. ,li&rm ttal kemungkinan bersumber dari lingkungan dan tidak mungkin berasal dari pen%emaran tin'a. ementara itu+ &e%al %li&rm dan E. coli terindikasi kuat diakibatkan le" pen%emaran tin'a+ keduan(a memiliki risik lebi" besar men'adi patgen di dalam air. Bakteri &e%al %li&rm atau E. coli (ang men%emari air memiliki risik (ang langsung dapat dirasakan le" manusia (ang mengnsumsin(a. !ndisi seperti ini meng"aruskan pemerinta" bertindak melalui pen(ulu"an kese"atan+ inestigasi+ dan memberikan slusi untuk men%ega" pen(ebaran pen(akit (ang ditularkan melalui air nnim2+ 2010. Bakteri ,litin'a merupakan air (ang mengandung %litin'a berarti air tersebut ter%emar tin'a. Tin'a dari penderita sangat ptensial menularkan pen(akit (ang ber"ubungan dengan air.
=etde per"itungan =$7 memiliki prinsip ker'a dengan menggunakan larutan sebagai media pertumbu"an atau disebut sebagai media %air broth (ang ditempatkan dalam tabung reaksi. Hasil per"itungann(a dilakukan dengan meli"at 'umla" tabung (ang psiti& gas. @mumn(a setiap pengen%eran digunakan 3- bua" tabung. Lebi" ban(ak tabung (ang digunakan menun'ukan ketelitian (ang lebi" tinggi.
$engen%eran "arus dilakukan sedemikian rupa se"ingga beberapa tabung ditumbu"i satu sel sa'a sedangkan tabung lain tidak mengandung sel. etela" inkubasi di"arapkan pada beberapa tabung ter'adi pertumbu"an A sedangkan lainn(a -. $emili"an kmbinasi (aitu berdasrkan pada pengen%eran terak"ir dimana semua tabung memberikan reasi psiti&+ kemudian diambil dua p engen%eran berikutn(a. $er"itungan klni bakteri berdasarkan atas aktiitas bakteri tersebut dalam melakukan metablisme. =etde ini disebut 'uga sebagai $= Most Probable Number . Ba"an u'i (ang akan di"itung ppulasi dien%erkan beberapa kali+ dilan'utkan dengan inkulasi "asil pengen%eran tersebut dalam media tertentu (ang dapat mendeteksi adan(a akti&itas metablisme bakteri u'i. Hasil (ang diperle" kemudian diru'uk pada table $= atau =$7+ se"ingga ppulasi dapat diketa"ui dengan pendekatan tersebut. =etde $= atau =$7 sering dipakai untuk meng"itung 'umla" ppulasi bakteri ?.%li dalam air limba"+ karena kemampuann(a dalam melakukan &ermentasi dalam substrat media %air la%tse Brt". =etablitn(a berupa gas karbn diksida (ang akan terperangkap dalam tabung ur"am (ang senga'a dimasukan dalam tabung reaksin(a dengan psisi terbalik. 7ilai =$7 adala" perkiraan 'umla" unit tumbu" growth unit atau unit pembentuk-klni colony-forming unit dalam sampel. 7amun+ pada umumn(a+ nilai =$7 'uga diartikan sebagai perkiraan 'umla" indiidu bakteri. atuan (ang digunakan+ umumn(a per 100 mL atau per gram. #adi misaln(a terdapat nilai =$7 10/g dalam sebua" sampel air+ artin(a dalam sampel air tersebut diperkirakan setidakn(a mengandung 10 %li&rm pada setiap gramn(a. =akin ke%il nilai =$7+ maka air tersebut makin tinggi kualitasn(a+ dan makin la(ak minum. =etde =$7 memiliki limit keper%a(aan C persen se"ingga pada setiap nilai =$7+ terdapat 'angkauan nilai =$7 terenda" dan nilai =$7 tertinggi. =etde =$7 terdiri dari tiga ta"ap+ (aitu u'i pendugaan presumtie test+ u'i kn&irmasi %n&irmed test+ dan u'i kelengkapan %mpleted test. alam u'i ta"ap pertama+ keberadaan %li&rm masi" dalam tingkat prbabilitas renda"5 masi" dalam dugaan. @'i ini mendeteksi si&at &ermentati& %li&rm dalam sampel. !arena beberapa 'enis bakteri selain %li&rm 'uga memiliki si&at &ermentati&+ diperlukan u'i kn&irmasi untuk mengetes kembali kebenaran adan(a %li&rm dengan bantuan medium selekti& di&erensial. @'i kelengkapan kembali me(akinkan "asil tes u'i kn&irmasi dengan mendeteksi si&at &ermentati& dan pengamatan mikrskp ter"adap %iri-%iri %li&rm: berbentuk batang+ )ram negati&+ tidak-berspra. dapun ragamn(a (aitu: da 3 ragam (ang biasan(a dipakai pada pemeriksaan =$7 (aitu :
1. >agam 11 -
tabung (ang berisi LB duble D 10 ml
-
1 tabung (ang berisi LB single D 1 ml
-
1 tabung (ang berisi LB single D 0+1 ml
2. >agam -
tabung (ang berisi LB duble D 10 ml
-
tabung (ang berisi LB single D 1 ml
-
tabung (ang berisi LB single D 0+1 ml
3. >agam 333 -
3 tabung (ang berisi LB duble D 10 ml
-
3 tabung (ang berisi LB single D 1 ml
-
3 tabung (ang berisi LB single D 0+1 ml
3. >agam 333
tandar analisa air untuk mengeta"ui adan(a bakteri %li&rm ada 3 melalui ta"apan u'i (aitu: 1.
@'i duga Presumtie !est Bertu'uan untuk menduga adan(a bakteri %li (ang mempun(ai si&at mampu mem&ermentasikan laktsa dengan meng"asilkan gas. Bakteri %li (ang diduga meliputi semua bakteri gram negati& tdak membentuk spra+ seln(a membentuk sel pendek+ bersi&at &akultati& anaerb+ membentuk gas dalam aktu 28 'am dari laktsa pada temperatur 34 dera'at ,elsius. pabila terbentuk gas dalam a ktu 28 'am kedua 89 'am u'i din(atakan meragukan. edangkan apabila gas tidak terbentuk dalam aktu 89 'am u'i din(atakan negati&. pabila "asil u'i duga negati&+ maka u'i-u'i berikutn(a tidak perlu dilakukan karena dalam "al ini berarti pula tidak ada bakteri %li dalam %nt". @ntuk analisis air+ dalam u'i penduga di gunakan la%tse brt"+ sedangkan untuk %nt" lain(a (ang ban(ak mengandung bakteri asam laktat+ misaln(a susu+ di
gunakan brilliant green la%tse bile brt" B)LBB. Bakteri asam laktat dapat mem&ermentasi laktsa dan membentuk gas+ "ingga dapat mengakibatkan pemba%aan u'i psiti& (ang sala". B)LBB merupakan medium selekti& (ang mengandung asam bile se"ingga dapat meng"ambat bakteri gram psiti& termasuk ,li&rm. Inkubasi di lakukan pada su"u 3, selama 28-89 'am dan tabung di n(atakan psiti& bila terebentuk gas seban(ak 10 E atau lebi" dari lume di dalam tabung ur"am.tabuung (ang tidak menun'ukan terbentukn(a gas di perpan'ang lagi inkubasin(a "ingga 89 'am. #ika tetap tidak terbentuk gas+ di "itung sebagai tabuung negati&. #umla" tabuung (ang psiti& di "itung pad masing-masing seri. =$7 penduga dapat di "itung dengan meli"at table =$7 4 tabung. 2.
@'i $enetapan ,m&irmed Test Bertu'uan untuk menegaskan "asil psiti& dari test perkiraan media (ang se%ara umum digunakan adala" Brilliant )reen Laktsa Bile Brnt" B)LBB 2E atau bisa 'uga menggunakan media selekti& dan di&erensial untuk bakteri %li sperti misal ?nd gar ?. $emba%aan dilakukan dengan meli"at 28-89 'am dengan meli"at tabung-tabung (ang psiti&. Test ini merupakan test (ang minimal "arus diker'akan untuk pemeriksaan bakterilgis air. Terbentukn(a gas dalam la%tse brt" atau dalam B)LBB tidak selalu menun'ukan bakteri %li karena mikrba lain(a mugkin 'uga ada (ang dapat mem&ermentasikan laktsa dengan membentuk gas+ misaln(a bakteri asam laktat dan beberapa ka"mir tertentu. Fle" karena itu perlu di lakukan u'i penguat pada agar ?=B.engan =enggunakan 'aarum se+ %nt" dari tabung =$7 (ang menun'ukan u'i penduga psiti& terbentuk gas masing-masing di inkulasikan pada agar %aan ?=B dengan %ara gresan kuadran. emua tabung di inkubasikan pada su"u 3, selam 28 'am. #umla" %aan ?=B pada masing-masing pengen%eran (ang menun'ukan adan(a pertumb"an ,li&rm+ baik &ekal maupun nn &ekal+ di"itung+ dan =$7 penguat dapat di "itung dari table =$7 4.
3.
@'i Lengkap ,mpleted Test ari pertumbu"an klni pada agar %aan ?=B+ di pili" masing-masing satu klni (ang meakili ,li&rm &ekal dan satu klni (ang meakili ,li&rm nn &ekal. @'i lengkap di lakukan untuk meli"at apaka" islat (ang di ambil benar merupakan bakteri ,li&rm. ari masing-masing klni tersebut di buat perarnaan gram+ dan sisan(a masing-masing di larutkan ke dalam 3 ml larutan pngen%er steril. ari suspensi bakteri tersebut masing di inkulasikan menggunakan 'arum se ke dalam tabung berisi lakse brt" dan tabung ur"am+ dan di greskan pada agar miring nutrien agar. Tabung di inkubasikan pada su"u 3, selam 28 'am+ dan di amati pertumbu"an dan pembentukan gas di dalam la%tse brt". !lni (ang
menun'ukan reaksi pearnaan gram negati& berbentuk batang+ dan membentuk gas di dalam la%tse brt" mereupakan u'i lengkap adan(a klni ,li&rm Bertu'uan untuk mendapatkan "asil (ang betul-betul lengkap dan memperkuat "asil u'i sebelumn(a. Biasan(a dengan membuat islasi/ piaraan murni dengan %lni (ang tumbu" pada test penetapan. @'i ulang 'uga dimaksudkan untuk u'i ulang apaka" 'asad renik (ang diduga ,li&rm pada u'i duga memang benar. alam u'i lengkap dapat diamati mr&lgi dan &isilgi dari bakteri (ang diduga %i&rm. pabila semua kriteria dipenu"i dapat ditarik kesimpulan ba"a %nt" air mengandung bakteri %li&rm.
II.
Alat dan "ahan
lat: -
Ba"an: Tabung reaksi- !apas Tabung dur"am >ak tabung Bulb Fen Lampu bunsen $ipet lume $ipet gndk Btl sampel endk reagen !mpr listrik $en'epit Batang se In%ubatr 7era%a analitik
III.
Proedur Kerja
- media LB - media B)LB - sampel air sumur gali - aGuadest
Media L" 1. iapkan alat dan ba"an 2. terilisasikan ba"an dan alat (ang akan digunakan menggunakan en 3. iapkan media LB la%t%e brt"+ beaker glass+ dan sendk regen dengan
per"itungan berat
ingle strengt" C+C ml seban(ak 3 tabung 6+4 ml
→
60 ml
C ml seban(ak 3 tabung uble strengt" LB
→
ml sebang(ak 3 tabung 1 ml
→
20 ml
13 gr/ l 13
1000
D 60 ml 0+49 gr ditamba" aGudest seban(ak 60 ml
13
1000
D 20 ml 0+24 gr D 2 0+2 gr ditamba" aGuadest seban(ak 20 ml
8. Lalu memanaskan media LB (ang suda" dilarutkan dengan aGuades memakai kmpr listrik "ingga mendidi". . =asukkan tabung dur"am kedalam masing-masing tabung reaksi. 6. Tuang media LB ke masing-masing tabung reaksi (ang sebelumn(a diberi label+ untuk media LB kedalam 3 tabung seban(ak ml dan untuk media LB kedalam 6 tabung (aitu 3 tabung seban(ak C ml dan 3 tabung seban(ak C+C ml 4. Balik tabung reaksi se%ara perla"an "ingga tabung dur"am terisi penu". 9. Tutup tabung reaksi dengan kapas C. =asukkan seluru" tabung reaksi tadi ke dalam en dengan su"u J100% selama 20 menit 10. etela" 20 menit ambil tabung reaksi dan dinginkan. 11. =asukkan ml sampel ke dalam 3 tabung media 12. =asukkan 0+1 ml sampel kedalam 3 tabung (ang berisi C+Cml media LB 13. =asukkan 1 ml sampel kedalam 3 tabung (ang berisi C ml media LB. 18. Tutup rapat ke C tabung dengan kapas. 1. =asukkan seluru" tabung kedalam in%ubatr dengan su"u 34% dalam aktu 1D 28 'am Media "#L"
1. mati tanda-tanda psiti& pada media LB - Terdapat gelembung gas - Tabung dur"am naik ke atas - !eru" 2. ,atat "asil pemba%aan pada media B)LB 3. Buatla" media B)LB sesuai dengan media LB (ang terba%a psiti&. 8. Buatla" rangkap untuk penanaman %li&rm dan %litin'a (ang psiti& untuk ke media B)LB.
. Hitungla" kebutu"an media B)LB dengan per"itungan 80g/l+ untuk setiap tabung berisi ml media B)L.karena (ang psiti& C tabung+ 'adi B)LB seban(ak CD2D ml C0 ml 40
$er"itungan
1000
D C0 ml 3+6 gr
6. Timbang media B)L) sesuai dengan berat (ang dibutu"kan 4. Tanba"kan aGudes sesuai dengan kebutu"an 9. $anaskan "ingga mendidi" kemudian masukkan kedalam tabung dur"am (ang berisi tabung dur"am. C. =asukkan kedalam en selama 1 menit dengan su"u 110%. 10. etela" itu keluarkan seluru" tabung reaksi dan dinginkan 11. Lakukan penanaman dari media LB ke mdia B)LB dengan mengggunakan se untuk %li&rm dan %litin'a. 12. etela" selesai tutup seluru" tabung dengan kapas. 13. =asukkan kedalam in%ubatr: @ntuk %li&rm 34% 1D28 'am @ntuk %litin'a 8%2D 28 'am 18. ,atat "asil (ang psiti& dan negati&. I$.
Pembahaan
engan menggunakan media LB maka ditemukan psiti& mikrba semua tabung reaksi (aitu pada seban(ak 3 tabung dan 6 seban(ak tabung. engan menggunakan media B)L) untuk mengeta"ui mikrba seperti %li&rm dan %litin'a ditemukan seluru"n(a psiti& baik pada tabung %li&rm seban(ak C tabung dan tabung %litin'a C tabung. $.
Keim%ulan
ari "asil praktikum kami men(impulkan ba"a 'umla" bakteri %li&rm dan %litin'a (aitu sebesar K1949 mg/l. #adi air tersebut tidak la(ak u ntuk digunakan karena melebi"i batas maksimal (ang dipergunakan.
