Hematología forense. Tema T ema 3
COMPOSICIÓN DE LA SANGRE: La sangre consta de una parte líquida, el plasma sanguíneo, en el que se encu encuen entr tran an elem elemen ento toss for forme mess (las (las cé célu lula lass sa sang nguí uíne neas as)) en suspensión. La sangre es de color rojo debido a la presencia de hemoglobina en los hematíes. u !iscosidad " su densidad est#n relacionadas relacionadas con la cant ca ntid idad ad de hema hematí tíes es " su pres presió ión n os osmó móti tica ca,, so sobr bre e todo todo,, co con n su contenido en proteínas. u p$ se encuentra entre %.3&'%.&. l !olumen de sangre circulante o !olemia es la cantidad total de sangre que que tiene un indi!iduo " representa representa apro apro*imadamente *imadamente el + del del peso peso corpo corpora rall (&.& (&.& L en un hombr hombre e de %- g " /&- ml en un rec ecié ién n naci nacido do que que pese pese 3./ 3./ g). g). 0el 0el !ol1 !ol1me men n sa sang nguí uíne neo o tota total, l, alrededor de 2 litro se encuentra en los pulmones, 3 litros en la circulación !enosa sistémica " el litro restante se reparte entre el coraón, las arterias sistémicas, las arteriolas " los capilares. l plasma sanguíneo es un líquido amarillento claro constituido por un 4& de agua " el & restante por di!ersas sustancias en solución " suspen suspensió sión. n. stas stas susta sustanci ncias as inclu" inclu"en5 en5 6ones 6ones minera minerales les (sodio (sodio,, pota potasi sio, o, ca calc lcio io,, clo cloro, etc etc), pequ peque7 e7as as molé molécu cula lass or org# g#n nicas icas (ami (amino no#c #cid idos os,, #c #cid idos os gras grasos os " gluc glucos osa) a) " prot proteí eína nass plas plasm# m#ti tica cass (alb1minas, 8brinógeno....). n condiciones normales, las proteínas del plasma constitu"en el %'4 del plasma (9'+ g:2-- ml), destacando tres grandes grupos de proteínas5 alb1minas, globulinas " factores de la coagulación como el 8brinógeno " la protrombina. Las alb1minas son las m#s peque7as " abundantes " representan el 9- de las proteínas del plasma. Las sintetia el hígado " act1an como transportadoras de lípidos " hormonas esteroides en la sangre, sien siendo do res espo pons nsab able less de la ma ma"o "orr part parte e de la pres presió ión n os osmó móti tica ca (presión oncótica) que regula el paso de agua " solutos a tra!és de los capilares. Las globulinas representan el - de las proteínas del plasma. e di!i di!ide den n en 'globul globulina inas, s, 'globu 'globulin linas as " 'globu 'globulin linas. as. Las " ' globulinas se sintetian en el hígado " transportan lípidos " !itaminas liposoluble liposolubless en la sangr sangre. e. Las Las 'globulina 'globulinass (gamm (gammaglobu aglobulinas linas)) son son
anti anticu cuer erpo poss prod produc ucid idos os por por las las cé célu lula lass plas plasm# m#ti tica cass " res esul ulta tan n fundamentales en la defensa del organismo frente a las infecciones. l 8bri 8brinó nóge geno no es un impo import rtan ante te fact factor or de la co coag agul ulac ació ión. n. s sintetiado por el hígado " representa el /' de las proteínas del plasma. ;ormal ;ormalmen mente, te, la compos composici ición ón del plasma plasma se mantie mantiene ne sie siempr mpre e dentro de unos límites seguros desde un punto de !ista biológico, grac gracia iass a di!e di!ers rsos os me meca cani nism smos os home homeos ost# t#ti tico coss (hom (homeo eost stas asia ia < equilibrio). 0istinguimos entre plasma " suero5
l plasma es la parte líquida de la sangre sin coagular.
l suero es el líquido sobrenadante que queda cuando la sangre total se coagula, por lo que tiene una composición similar a la del plasma, aunque sin 8brinógeno ni otros factores factores de la coagulación.
*isten 3 tipos de células en la sangre5
=lóbulos rojos o eritrocitos o hematíes
=lóbulos blancos o leucocitos5 =ranulocitos o leucocitos granulares
(neu (neutr tró8 ó8lo los, s, eo eosi sinó nó8l 8los os " basó basó8l 8los os). ). >gra >granu nulo loci cito toss o leuco leucoci cito toss agranulares agranulares (linfocitos " monocitos)
?laquetas o trombocitos.
LA SANGRE EN EL LUGAR DE LOS LOS HECHOS: La b1squeda debe hacerse re!isando cuidadosamente sobre el cuerpo de la !íctima, en el presunto !ictimario (si se lo ha capturado), el piso del lugar (inclu"endo uniones entre mosaicos)@ paredes " muebles@ en el arma (si es que ha" una in!olucrada). n todos estos casos se debe tener la precaución de e*aminar desde diferentes posiciones, !ariando el #ngulo de !isión " de iluminación (se recomienda el uso de linternas " fuentes alternati!as de lu), debido a que no siempre son plenamente !isibles al simple e*amen ocul oc ular ar,, "a pued pueden en qued quedar ar enma enmasc scar arad adas as por por el co cont ntra rast ste e co con n la supe super8 r8ci cie e que que la co cont ntie iene ne,, "a por por el inte intent nto o de rem emoc oció ión n para para encubrir un hecho delicti!o.
Ana !e sean localiadas, debe efectuarse una toma fotogr#8ca ó fílmica de las mismas, así como también una descripción por escrito consignando5 color, forma, posición relati!a, dirección, cantidad apro*imada. 0eterminación de tra"ectoria5 sto es posible mediante el estudia morfológico de las manchas de pro"ección estas se pueden di!idir en5 st#ticas (cuando el cuerpo est# quieto), las que serían gotas propiamente dichas " din#micas (cuando el cuerpo est# en mo!imiento), que reciben el nombre de salpicaduras. n la escena deben buscarse manchas de sangre sobre la !íctima, sobre el acusado, en la ropa de ambos, instrumentos prendas, suelo. n las armas blancas debe in!estigarse sangre en la unión de la hoja con el mango en las uniones de los ladrillos La determinación del punto de origen es 1til de saber en la escena del hecho, en los supuestos de grandes cantidades de manchas de sangre por pro"ección, para determinar si tales indicios tienen un 1nico origen ó no.
RECOLECCIÓN EM!ALA"E DE LAS MUES#RAS DE SANGRE: El Dr .L.Raf ael Mor enoGonz ál eznosdi c e:“ Lai mpr es c i ndi bl epr o t ec c i ónyc ons er v ac i ón del l ugardel oshec hos ,debeent ender s ec omol api edr af u ndament al del ai nv e st i gac i ón c r i mi nal í s t i c a” . a ) .Ene lc as od ee nc on t r a rs ang r el í qu i d ae ne ll u ga rd el o she ch os ,d eb er át o mar s ec on a y udadeun ap i p et aPa s t e urodeungo t er oydep os i t a r l aenunt u bodeen sa y ol i mp i oy s ec o,al qued eber áañadi r s e1ml desol uc i óns al i naes t ér i l porc ada5ml desang r e. b) .Si noseenc uent r asangr ef r es c a,per osi c oágul os ,s et omar ánés t osc onel e xt r emode u na pl i c ado rdema der ays ec ol o ca r á ne ne li n t e r i o rdeu nt ub od ee ns a y o,p r o ce di e nd o d es p ué sc omoe ne lc a s oa nt e r i o r . c ) .Si úni c ament esel oc al i z ar anmanc hasdesangr ese caenobj et oss ól i doss er ec ol ec t ar a e np eq ue ño sf r a gme nt o sd e2 x 2c md et e l ab l a nc ayl i mp i al i b r ed ea pr e s t o ,h ume de c i d os c onso l u ci ó ns al i na( 0 . 8 5%) .T el aqueseco l o ca r át a mb i énenunt u bod ee ns a y o,p ar as u en ví oal l abor at or i o.Conot r of r agment odet el a,pr epar adodel ami s maf or ma,s et omar á u namu es t r adec o nt r o ld eu naz on ad el s o p or t enoma nc h ad ac o ns an gr e . d) .Cuandol asmanc hass eenc uent r ansobr ecual qui ert i podet el a,s er ec or t ar án p or c i o ne sr e sp ec t i v a sdel amue s t r a ,a síc omount r o zodel ami s mat e l apr o bl e maqu en o s ee nc u en t r ema c u l a doc o ns a n gr e .
e) .Si s et r at ademanc hass obr ev ege t al es ,és t oss er ec or t ar ánys ec ol oc ar ánenel i n t e r i o rd euns obr e .Un ap or c i ó nn oman ch ad ade lv e ge t a ls er át amb i é nr e co gi d ae no t r o s o b r e . f ) .L as ang r eq ues ee nc uen t r es ob r et i e r r aoa r en ad eb er ár e col e ct ar s et o ma nd ou nt r o zo c omp l e t ode ls op or t e ,e lq ues ed ep os i t a r ác ui da do sa men t eenun ab ol s ad ep l á st i c oq ue s er ác ol o ca daenun ac aj adec ar t ón .T ambi é ns et o ma r áun amue s t r adet i e r r as i ns an gr e yseempacar áporsepar ado. g ) .Si l amue s t r apr o bl e maseen con t r a r ai mpr eg na daenc abe l l o s,é st o ss et oma r ánc on pi nz asys et r as l adar ánal l abor at or i odent r odepequeñasbol s asd epl ás t i c o. h ) .Fi n al me nt e ,ma nc ha sdes an gr epr e se nt e ss ob r ee lc ue r pod el av í c t i ma ,ydel a squ e s es os p ec h en op ud i e r a ns e ro r i g i n ad asp ors upr o pi as an gr e ,s e r á nt o ma da sc omos e d es c r i b ee ne lp un t ot r e s.Ad emá sset o mar ás an gr ede lc ad áv e r ,c onel fi ndec ompa r a r l a c o nl adel a sma nc h as . T od asl a smue s t r a st omad asd eb er á nl l e v are t i q ue t a sfi r me me nt ead he r i d as ,enl a squ es e ano t ar ánl osdat osc onc r e t o sdel c as o: Nú me r odea v er i g ua c i ó noe x pe di e nt e . Fe ch ayh or aenqu es el e v an t ól aev i de nc i a . Si t i odedondes er ec ol ec t ó. Nat ur al ez apr es unt adel i ndi c i o. Nombr edel i n v es t i gadorquer eal i z óel l e v ant ami ent oyembal aj e. Manc has“ i nsi t u” Man ch a:T od amo di fi c ac i ó nd ec ol o r ,s uc i e da d,v i s i b l eon o,e nu nas upe r fi c i e ,d et e r mi n ada porel depós i t odeunpr oduc t ol í qui doyav ec essól i do.( Gi s ber t ) L ug ar e sdo nd ee spo s i b l ee nc o n t r a rma nc h a sd es a ng r e : Losves t i dosdel av í c t i ma( anv er s o,r ev er s o,puños ,bol s i l l os ,i nt er i ordel asmangas , c os t ur as ,r epl i egues ubunqueal ,et c ) Su el o Par edes Pi c ap or t e sd ep ue r t a syv en t a na s Bar andi l l adel ases c al er as Ti r ador es Ar mas Bor desdel asmesas Aguadel avado Cuar t odeaseo Zó c al o s Cor t i nas Li nt er nas J un t a sdeba l d os i ne s Ha yma nc h asq ueende t e r mi n ad asc i r c u ns t a nc i a spu ed enas e me j a r s eal as an gr e ,e nt r e
el l as : L asdeh er r umb r e( c ol o rr o j o a ma r i l l e nt oyame nu dor ug os as ) Laspr oduc i dasporal gunosv ege t al es( j ugodeci er t aspl ant as ,s uer odeál amobl a nc o, pl ant adi ent edel eón) L asc a us a da spo re ls u do r( d anl ai mp r e s i ó nd ema nc h asd es an gr el a v a da s ) Par al abús quedadel asmanc hasdes angr eut i l i z ar emo sl ai l umi nac i ónobl i c ua,l al uz ar t i fi ci al ,i nc l us ol af ot ogr af í ac onpant al l aaz ul oc onr ay osi nf r ar r oj ospar ades cubr i rl as manchasl avadas. Aspect osdel asmanchas Esmu ydi v e r s o,s egú ns ea nr e ci e nt e soa nt i g ua syse gú nt amb i é ne ls op or t eso br eel q ue a si e nt a n.Si l ag ot ad es an gr eh ac aí dos ob r et e l aab so r b en t e ,l o sc on t o r n ospa r e ce nc omo s i e s t u vi e r aso br eunpap el s e ca nt epo r q ueel l í q ui dope ne t r amá some no sr áp i da me nt e enel t ej i do. Si l ama nc hae sf r e sc as uc ol o re sr o j ov i v o ,pe r os eo sc ur e cep r og r e si v a me nt ep ar ap as ar a lma r r ó nyh ac e r s ema r r ó nn eg r u z c ac u an doy ae sal g ov i e j a . Si l amanc hahac aí dos obr et ej i dosos cur os ,esmásdi f í c i l dedi s t i ngui r ,c omoesl ógi c o, ques ic aes obr er opasc l ar as ,enc ual qui erc as oys i empr eques eapos i bl e,par av i s ual i z ar p er f e ct a me nt el a sma nc ha su t i l i z ar e mo se lL umi n ol ,c one lc ua ll a sma nc ha ss eh ar á n l umi ni s cent es .Es t er eac t i v ot i enel av ent aj adenoi nt er f er i rpos t er i or ment er eac ci ones anal í t i c as . Si l as an gr ehac aí d os o br eunob j e t on oa bs or b ent e ,e nt on ce sses ec ar ac on se r v a n dol a s f or mascar ac t er í s t i c asdel aal t ur ayl adi r ec ci óndel apr oy ec ci ón. L asma nc h a spu ed ens e rg r a nd esope qu eñ as ,i n c l u s omu yp eq ue ña s ,r e du c i d asal a di mensi óndepunt os;comoesevi dent ecuant omáspequeñasseanmáspr obl emasnos v anac aus art ant opar as ul oc al i z ac i ónc omopar as uanál i s i s .
METODOLOGÍ A GENERAL PARA LA I NVESTI GACI ÓN CRI MI NALÍ STI CADELASMANCHASDESANGRE: L asma nc h asqu es een c ue nt r a ne no bj e t o sy / op er s o na s ,s ean al i z a nd es d ev a r i o sp un t o s dev i s t a :l abú squeda,l ac ar ac t er i z ac i ón,ei dent i fi c ac i ónd el ami s ma,esdec i ro bs er v ar p as oapa sos i l ama nc hae ss a ng r eono ,e np r i me rl ug ar ,l u egod ei n v es t i g ars i l ama nc ha e sh uma naon o,p os t e r i o r me nt ei n v e s t i g ars ug r u pos a ng uí n eoyfi n al me nt er e al i z a ru na pr ueba de ADN, con l o cual ser á compl et ado el t r abaj o de l a i nves t i gaci ón. Co mopa r t edel ai n v e s t i g ac i ó ns eha br ádeha c erl ac omp ar a c i ó nd el ADNd el a spe r s o na s
s o s p ec h o s asd eu nc r i me n os i mp l e me nt el ac o mp ar a c i ó np ar ao t r o sp r o pó s i t o se x t r a j udi c i al es .
#$CNICAS DE ORIEN#ACIÓN IDEN#I%ICACIÓN DE LA SANGRE:
PARA
LA
#&'n('a )e !en'()(na o A)ler Bundamento químico Las pero*idasas sanguíneas son catalasas que, como su nombre lo indica, poseen acti!idad catalítica en las reacciones de o*idación, "a que tienen la propiedad de descomponer el peró*ido de hidrógeno u otros peró*idos org#nicos, produciendo la liberación de radicales o*hidrilo seg1n la siguiente reacción5 l grupo hem de la hemoglobina posee esa acti!idad enim#tica, que puede cataliar la ruptura del peró*ido de hidrógeno. Cientras no estén presentes otras sustancias org#nicas o*idantes, esa acti!idad de la hemoglobina, descompone el peró*ido de hidrógeno en agua " o*ígeno, que al reaccionar con la bencidina la o*idar# formando un compuesto intensamente aul.
#&'n('a )e la fenolftaleína o )e *astle+Ma,er Bundamento químico sencialmente la rige el mismo principio que se mencionó en la reacción de >dler. La diferencia estriba5 a) La fenolftaleína debe ser reducida pre!iamente a fonolftaleína incolora " este reacti!o, por su labilidad, debe ser guardado en refrigeración en frasco #mbar. b) e trabaja en medio alcalino en !e de un medio #cido. c) e efectuar# un calentamiento pre!io a 2-- DE durante un minuto. e apuntar# a continuación el comportamiento de las pero*idasas !egetales, que e*plicar# el porqué de las modi8caciones apuntadas5 a) Termolabilidad5 e ha con8rmado que las pero*idasas !egetales se inacti!an por calentamiento a 2-- DE . > la misma temperatura las pero*idasas de origen animal son estables. An período de un minuto a 2-- DE ser!ir# para diferenciar una de otra.
b) Tiempo5 Las pero*idasas de origen animal son mu" estables, las manchas de sangre humana dan resultados positi!os a1n después de !arios meses de haberse producido. Euando manchas de la misma edad pero de origen !egetal son tratadas de esta manera, dan resultado negati!o. c) p$5 las pero*idasas de las plantas reaccionan en medio #cido, pero no en medio alcalino. ?or esta raón, ésta técnica. > pesar de esto debe efectuarse pruebas testigo sin a7adir agua o*igenada a muestras pre!iamente calentadas.
#&'n('a )e le-'o mala-(ta /er)e Bundamento químico e basa, al igual que las anteriores en una reacción de o*idación " reducción. La estructura química de esta sustancia recuerda a la de la fenolftaleína. l pre8jo leuco se re8ere a la forma reducida incolora@ la forma leuco puede ser preparada por reducción de la malaquita !erde. Eomo en el caso de la fenolftaleína, la forma leuco puede ser o*idada por la acción de las pero*idasas para dar la forma o*idada !erde. sta técnica fue reportada por $unt, quien se7ala la encontró m#s con8able para sangre, aunque menos sensible que la bencidina.
#&'n('as es0e'tros'10('as stas técnicas permiten poner de mani8esto, mediante espectros de absorción, la presencia de hemoglobina ":o de alguno de sus deri!ados, en manchas de sangre. La hemoglobina, diluida en agua (o*ihemoglobina) tiene dos bandas de absorción en la ona del espectro !isible cu"os m#*imos se encuentran a &%& " &- nm respecti!amente@ así como la banda de oret, típica de los deri!ados por8rínicos, pró*ima a la región del ultra!ioleta, que para la hemoglobina se encuentra a 2/ nm siendo esta banda mucho m#s ancha que las dos primeras.
#&'n('a )e l-m(nol l luminol es el 3 amino'ftalhidracina " el reacti!o se prepara de la siguiente manera, en el momento de utiliarse5
olución >. Luminol -.2 gr. Earbonato de sodio 2 gr. >gua destilada c.b.p. 2-- ml. olución F. $idracina hidratada al 4& -2 gr. >gua destilada 2-- partes
a) >l ml de la solución >, se a7ade una gota de agua o*igenada e inmediatamente después, / gotas de la solución F@ b) e espera un minuto " la mecla se asperje sobre la ona sospechosa. c) n caso positi!o, las manchas de sangre producen luminiscencia. Eomo reacti!o, no altera la mancha, se puede continuar con la metodología normal.
#$CNICAS DE CON%IRMACIÓN Cr(stales )e 2em(na o )e #e('2man Bundamento químico La hemoglobina, cuando es tratada con #cido acético, se separa inmediatamente de las proteínas " del grupo prostético. 0urante la hidrólisis la globulina se desnaturalia. La o*idación del 8erro del grupo hem se efect1a m#s r#pidamente en medio #cido que en medio alcalino. i est# presente un halógeno inorg#nico como el cloro, se formar#n cristales insolubles de cloruro de ferriprotopor8rina o hemina.
Pr-e3a )e #a4a,ama 52emo'rom1geno6 Bundamento químico Tanto la ferroprotopor8rina como la ferriprotopor8rina tienen la propiedad de combinarse con otros compuestos nitrogenados por medio de la globulina. Tales compuestos inclu"en otras proteínas, hidró*ido de amonio, cianuro, nicotina " piridina " los productos resultados se llaman
hemocromógenos. Los cristales pueden formarse tanto en medio #cido como alcalino@ sin embargo, el reacti!o de TaGa"ama es de naturalea alcalina.
Cecanismo de reacción5 l hidró*ido de sodio efect1a una hidrólisis alcalina, liberando el grupo prostético de la globina@ el 8erro del hem en este momento se encuentra como ión férrico (H3) debido a la formación de la metahemoglobina en el proceso de desecación de la mancha de sangre. La carga (H3) del 8erro se neutralia por el ión I$. Ealentando la glucosa (a a1car reducida), se reduce el ión férrico a ferroso (H/) " la piridina se combina con éste para formar un producto cristalino insoluble5 el hemocromógeno o piridinferroprotopor8rina. La prueba es m#s sensible " sencilla que la de los cristales de hemina " no se dan casos de falsas reacciones positi!as.
#$CNICAS DE DE#ERMINACIÓN DEL ORIGEN DE LA SANGRE: La técnica de elección para determinar si una mancha de sangre es de origen humano, es la reacción de las precipitinas descubierta en 24-- por Ahlenhuth. Bundamento de la técnica Las moléculas del anticuerpo (inminoglobulina) reacciona con el antígeno (proteína soluble) para formar un precipitado f#cilmente !isible bajo condiciones de lu apropiadas " a las concentraciones equi!alentes de antígeno " de anticuerpo. La técnica de precipitinas en tubo o en capilar, tiene la !entaja de ser r#pida " sencilla pero es necesario tener una muestra clara. n ella debe efectuarse una cuidadosa estrati8cación en donde la capa de la solución del antígeno se encuentra sobre la preparación del anticuerpo. La precipitación sobre gel tiene una !entaja de poder realiarse con el e*tracto de una mancha de sangre aunque éste sea turbio, " requiere de mu" peque7a cantidad de muestra, pero tiene como des!entaja el emplear !arias horas para que se efect1e la difusión. La técnica
electroforética, tiene la !entaja de acelerar la difusión sobre el gel " por lo tanto disminu"e el tiempo de reacción adem#s de ser m#s sensible que las otras técnicas, pero requiere de un equipo m#s costoso.
Bactores que afectan la reacción de las precipitinas. on !arios5 la edad de la muestra@ su e*posición al aire, a la lu solar, a la humedad " a las altas temperaturas@ el grado de putrefacción " la contaminación con compuestos químicos, tales como detergentes.
#$CNICA CRU7ADA HUMANA:
DE PARA
INMUNOELEC#RO%ORESIS IDEN#I%ICAR SANGRE
Bundamento sta técnica inmunoquímica se basa en las reacciones que se efect1an entre un antígeno que emigra anódicamente " un anticuerpo que emigra hacia el c#todo /-durante una electroforesis. obre una placa de agarosa, se hacen horadaciones en pares@ el antígeno (seroalb1minas " alfa " beta globulinas) se coloca en una de ellas " el anticuerpo (gamma globulinas) en la otra@ una !e terminada la electroforesis aparecen bandas !isibles de precipitación entre las perforaciones pares de los materiales proteínicos especí8cos. Caterial " equipo a) E#mara de electroforesis b) Buente de poder con control de !oltaje hasta &-- !, /- ma " control de tiempo. c) ?uentes de papel 8ltro u otro material absorbente. d) ?erforador " e*tractor de gel apro*imadamente / mm de di#metro. e) Cicropipetas graduadas f) ?ortaobjetos desgrasados " pulidos. Jeacti!os5 a) uero antihumano completo
b) >gar c) Kcido dietilbarbit1rico d) Farbital sódico e) Lactato de calcio
DE#ERMINACIÓN DEL GRUPO SANGU8NEO EN SANGRE %RESCA MANCHAS DE SANGRE: Jecolección " preparación de las muestras sujetas a estudio. n personas !i!as. a) Tomar & ml de sangre !enosa con una jeringa estéril " seca b) eparar el suero por centrifugación c) $acer una suspensión del paquete globular al / en el propio suero de la muestra tomada, para trabajar en tubo de ensa"o " al & para determinaciones en placa. n cad#!eres. a) Tomar & ml de sangre de una arteria o !aso grueso, o bien de la ca!idad cardiaca teniendo cuidado de que no se contamine con tejido adiposo b) eparar el paquete globular por centrifugación c) La!ar el paquete globular3. tres !eces con solución salina fría, fresca " estéril d) $acer una suspensión de esos glóbulos al / en solución salina para determinaciones en tubo " al & cuando se utilice placa
n co#gulos a) *primir cuidadosamente el co#gulo contra las paredes de un tubo de ensa"o de 23 2--, apo"#ndonos con un aplicador de madera b) La!ar lo e*traído tres !eces con solución salina
c) ?or 1ltimo, hacer suspensiones al igual que los casos anteriores Cancha por Ehorro5 es el patrón que resulta del Mujo de la sangre que sale del cuerpo a una presión baja, formando un charco de sangre. ?atrón de goteo sobre sangre5 s el patrón que resulta del gotereo de sangre en sangre. Lanamiento5 l patrón de la mancha creada cuando la sangre es sacudida o tirada a una super8cie u objeto, en mo!imiento. ?atrón >rterial o de Ehorro5 l patrón de la mancha que resulta cuando la sangre sale del cuerpo, bajo una presión ejercida, causada por el rompimiento de una arteria. Canchas circulares5 Las manchas o gotas que se encuentran en super8cies horiontales son de forma circular, dependiendo de la altura desde donde caen. > ma"or altura, el impacto puede ocasionar que se pro"ecten en forma de estrellas. (Frian 6nnes, /---, Fodies of !idence)
CARAC#ER8S#ICAS MOR%OLÓGICAS MANCHAS DE SANGRE:
DE
LAS
Las formas " 8guras pueden !ariar en tama7o " características morfológicas, debido a la cantidad, calidad, origen, dimensión, profundidad " longitud de la lesión. (Contiel)
$uellas que gotean sobre un plano inclinado, sin que la persona tenga mo!imiento, se presentan o!aladas " alargadas con escurrimientos largos en la parte inferior. on manchas est#ticas. (Contiel)
Las huellas que caen en un plano horiontal cuando el mo!imiento es r#pido se presentan en forma de l#grimas, con una sola estría o alargamiento, que indica la dirección del mo!imiento. e conocen como manchas din#micas.
Las manchas producidas por un goteo ininterrumpido sobre un plano horiontal presentan un rastro de sangre en forma de franjas despla#ndose estrías en los lados, que seg1n su dirección indican mo!imiento. (bloodspatter.com)
C>;E$> 0 C;5 EIC?I;;T 0L C;5 l sustrato para la coagulación del semen est# constituido por material proteinoide secretado por las !esículas seminales@ en tanto que las enimas licuantes (8brolisina " 8brogenasa) solo hacen contacto con el sustrato durante la e"aculación.
Eontiene hormonas, fructosa, fosfatasa #cida " alcalina, espermita, colina, ergotioneína, #cido cítrico, lípidos, proteínas, hilauronidasa, prostglandina, ribosa, inositol, sorbitol, Ma!inas, aminas, alb1mina, alfa, gamma " beta globulinas, lecitina, #cidos grasos, fosforilcolina, inc, calcio " antígeno soluble de grupo sanguíneo. Las sustancias del grupo >FI solubles en agua, est# presente de los indi!iduos e*cretores (apro*imadamente el +& de la población en Cé*ico) " pueden determinarse por el método de absorción inhibición, "a que se encuentran en grandes concentraciones en esos indi!iduos.
LE9AN#AMIEN#O EM!ALA"E Las prendas deben colocarse en bolsas de papel, en forma separada. i se encuentran h1medas, deben secarse a la temperatura ambiente@ en ning1n caso usar calor. n otras oportunidades, se solicita el an#lisis de e*udados !aginales o rectales de la !íctima " de tórulas con esos mismos materiales e*traídos por médicos legistas o forenses. stas muestras deben ser colocadas en tubos de ensa"o con!enientemente sellados " estériles (para e!itar putrefacción " contaminación bacteriana). i las machas se encuentran sobre soportes no transportables (colchones, tapices, etc.), se proceder# a recortar mu" cuidadosamente la mancha, "a que al secarse toma una consistencia apergaminada f#cilmente desprendible. ste problema se agudia sobre soportes no absorbentes donde forma una película o escamas brillosas, desprendibles al tacto.
%l-()os 3(ol1g('os en esta)o se'o 5man'2as6 0eterminar tipo de soporte NTransportable O se traslada al laboratorio en el soporte en el que se encuentre N;o transportable (se toma la muestra en alguna de las formas) O Brotando la super8cie de la mancha con un hisopo humedecido con agua estéril, " deber# dejarse secar antes de guardar en bola de papel. O i recupera a tra!és de un raspado con esp#tula, el pol!o obtenido deber# guardarse en un contenedor.
IN9ES#IGACION DE ESPERMA#O7OIDES:
l liquido esperm#tico contiene usualmente de %- a 2&- millones por mililitro. l espermatooide humano esta formado por5 una cabea de forma u!al que mide .9*/.9*2.& micras@ una piea intermedia que contiene las mitocondrias " una cola formada por nue!e 8lamentos que rodean a otros dos centrales. n los animales, la cabea tiene diferentes formas " dimensiones. Las cuantas esperm#ticas por debajo de &millones por mililitros, se consideran infértiles. 0ebido a las bacterias atacan su tallo primeramente en las muestras contaminadas se hace difícil su identi8cación. Condragón re8ere que el promedio de !ida es de a 9 días de !ida en las trompas " 1tero de la !agina@ en la ca!idad anal no sobrepasan las 2/ horas de !ida.
#$CNICA DE #INCIÓN DE GRAM: ?or este procedimiento la cabea se ti7e de color rosa " el cuerpo medio " el tallo se obser!an de color aul 24.2 ?reparación de los reacti!os a) Eolorante de Eristal !ioleta olución > / g de cristal !ioleta H /- ml de alcohol etílico absoluto olución F -.+ g de o*alato de amonio H +- ml de agua destilada Ceclar las soluciones > " F. n!asar en frasco gotero color #mbar. b) olución iodo iodurada (lugol) 2 g de iodo met#lico H / g de ioduro de potasio H 3-- ml de agua destilada 0iluir 252& en agua destilada antes de usarla c) 0ecolorante >lcohol etílico absoluto 4& d) Eolorante de safranina 2- ml de safranina (/.& en alcohol etílico) H 2-- ml de agua destilada 24./
?rocedimiento l frotis o una gota de suspensión problema se secan ligeramente al calor del mechero o bien, con metanol a) >7adir el reacti!o de cristal !ioleta hasta cubrir la muestra " dejarlo actuar durante un minuto b) La!ar con agua destilada c) Eubrir nue!amente el portaobjetos con la solución b) durante un minuto, tirar el e*ceso de lugol " decolorar con agitación usando el reacti!o c) durante 3- segundos
d) ecar con papel 8ltro " cubrir la preparación con el reacti!o d), dejarlo actuar de 2- a 3- segundos e) La!ar con agua destilada " obser!ar al microscopio con aceite de inmersión " el objeti!o correspondiente 6nterpretación Las células esperm#ticas aparecer#n te7idas5 la cabea de color rosa " el resto del cuerpo " cola aules.
#(n'(1n )e '2r(stmas tree: ?reparación de colorantes Colorante rojo rápido nuclear &- mg de colorante rojo r#pido nuclear H /.& g de sulfato de aluminio H 2-- ml de agua destilada Ealentar a ebullición los 2-- ml de agua destilada " disol!er en ellos el sulfato de aluminio, adicionar el colorante rojo r#pido nuclear, meclar con agitador mec#nico hasta disol!er completamente. nfriar " almacenar en papel Patham Q2. >lmacenar en frasco gotero #mbar a una temperatura entre / " +D E Colorante de índigo carmín 2.3 g de #cido pícrico H -./3 g de índigo carmín H 2-- ml de agua destilada 0isol!er el #cido pícrico en los 2-- ml de agua, a7adir el índigo carmín, meclar perfectamente con agitador mec#nico. =uardar en frasco gotero #mbar.
CARAC#ER8S#ICAS MICROSCÓPICAS ESPERMA#O7OIDE 5DI!U"O6:
DEL
PRUE!AS PRESUN#I9AS PARA LA IDEN#I%ICACION #$CNICAS U8MICAS DE MANCHA DE SEMEN: ?ruebas de Irientación Las pruebas de orientación tienen ma"or utilidad cuando se trata de localiar el !estigio entre las ropas de la !íctima, en super8cies grandes tales como s#banas, mantas o entre manchas dubitadas recogidas del lugar de los hechos. l papel de una prueba de orientación recae m#s en su habilidad para descartar la presencia de semen en una mancha cuestionada que en la de indicar la presencia de semen. s necesario un e*amen !isual e*hausti!o " minucioso de las distintas prendas. Ana de las técnicas que se utilia es5
Lu ultra!ioleta5 Fajo la acción de radiaciones ultra!ioletas, las manchas de semen presentan una Muorescencia directa que si bien no es especí8ca, pues e*isten otros materiales que producen similar efecto, constitu"en un recurso 1til, para localiar manchas sospechosas. Bosfatasa #cida5 s una enima fosfomonoesterasa no especí8ca, se encuentra en ni!eles altos en el semen, pro!iene de las células epiteliales de la gl#ndula prost#tica. l ni!el de la acti!idad de la fosfatasa #cida es &-- a 2--- !eces m#s alta en el semen humano que en otros Muidos o secreciones corporales (=utman >F R =utman F., 242). La detección de la fuerte acti!idad de la fosfatasa #cida es considerada como un r#pido " con8able indicador de la presencia de semen (ensabaugh =B., 24%4@ Jiisfeldt I., 2449). ?ruebas Cicroscópicas l método m#s utiliado actualmente, es la obser!ación de espermatooides al microscopio. e han detectado espermatooides mó!iles en líquido de la!ado !aginal hasta / horas después de la !iolación e inmó!iles 2-- días después de ocurrido el hecho en manchas secas. Itros métodos lectroforéticos5 . Sillanue!a " .>. =isbert'Ealbuig, proponen método bidimensional sobre papel, combinación de electroforesis " cromatografía, lo
que permite separar la espermina de los amino#cidos del semen " obtener una separación sumamente interesante de estos 1ltimos, que puede considerarse de rele!ante !alor para la identi8cación de dicho humor. Cétodos enim#ticos5 el esperma tiene una ele!ada cantidad de fosfatasa acida, no hallada hasta ahora en ning1n otro material org#nico natural sea animal o !egetal. La fosfatasa #cida prost#tica produce la hidrólisis de la fosforil colina en #cido fosfórico " colina. sta enima act1a entre un p$ .& U &.