Antibiograma

PRACTICA N°7: MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE LA SENSIBILIDAD BACTERIANA A LOS ANTIBIÓTICOS. ANTIBIOGRAMA OBJETIVOS: -

Realizar la técnica de siembra por hisopado o plateado para el método de difusión en agar o antibiograma. Determinar la sensibilidad o resistencia de una cepa bacteriana frente a distintos antibióticos.

INTRODUCCION: Conocer la sensibilidad bacteriana a los antibióticos tiene varias aplicaciones, como por ejemplo dirigir el tratamiento frente a una infección causada por un agente conocido, generar una base de datos para determinar la presencia de cepas resistentes y su seguimiento. Los métodos para determinar la sensibilidad frente a antimicrobianos pueden ser cualitativos o cuantitativos. Los métodos cualitativos son aquellos que permiten clasificar a los microorganismos en sensibles, moderadamente sensibles o resistentes frente a los antibióticos en estudio, para lo cual se sigue la técnica de difusión en agar, antibiograma o método de Kirby-Bauer. En la cual un inóculo microbiano de concentración conocida, se siembra por hisopado en una placa de agar Mueller-Hinton sobre la que se depositan discos de papel filtro (también llamados discos de antibiograma) impregnados con el antibiótico (fig 7.1). El antibiótico difunde en el agar y puede o no formarse a su alrededor un halo de inhibición de crecimiento. Dependiendo del diámetro del halo de inhibición se puede establecer si el microorganismo es sensible, moderadamente sensible o resistente al antibiótico. Los métodos cuantitativos son aquellos que permiten calcular la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración mínima bactericida (CMB). La CMI es la mínima concentración del antibiótico capaz de inhibir el crecimiento de un inóculo bacteriano previamente estandarizado. Mientras que la CMB es la mínima concentración del antibiótico capaz de matar al 99.99% de una población bacteriana previamente estandarizada. La determinación de la CMI se realiza por la técnica de dilución en tubo que consiste en exponer a las cepas de microorganismos a estudiar, a diferentes concentraciones del antimicrobiano, en diluciones a la mitad y observar el crecimiento o no de los microorganismos en los tubos. Técnica para el método de difusión en agar o antibiograma 1. Se aísla el microorganismo del que se quiere investigar su sensibilidad antimicrobiana.

2. Con el microorganismo aislado se prepara un inóculo en 10 ml de Mueller Hinton caldo o agua destilada estéril. El inóculo debe tener una turbidez similar a la del estándar 0.5 en la escala Mc Farland que equivale a 1.5 x 10 8 ufc/ml. 3. Mediante la técnica de hisopado se siembra el microrganismo en la caja con agar Muller Hinton y se procede a depositar con una pinza los discos de los antibióticos de manera que queden homogéneamente distribuidos. 4. La caja se deja reposar 5 minutos y luego se coloca con la base hacia arriba en la incubadora a 37°C. 5. Los resultados se leen transcurridas 18 a 24 horas de incubación. Los discos pueden o no aparecer rodeados de un halo de inhibición del crecimiento microbiano. 6. La lectura se realiza a través de la medición en mm del diámetro de los halos de inhibición y este valor se compara con datos publicados en tablas en las que se determinará si el microorganismo es sensible, moderadamente sensible o resistente al antibiótico. NOTAS: Los discos de antibióticos se conservan en refrigeración o congelación y deben ser sacados una hora antes de su uso. Cada disco tiene inscritas las iniciales del antibiótico y la concentración. Se DEBE copiar esta información para luego compararla con la de las tablas.

Fig 7.1 Antibiograma.

Cuestionario: 1. Complete la siguiente tabla para el microorganismo que utilizó: ANTIBIOTICO

1

CODIGO DEL DISCO

NOMBRE DEL MICROORGANI SMO

DIAMETRO DEL HALO (mm)

SENSIBLE, MODERADAMENTE SENSIBLE O RESISTENTE

2 3 4 5

2. Según los resultados de la tabla que antibiótico recomendaría para inhibir el crecimiento del microorganismo ensayado? 3. Explique cómo se prepara la escala Mc Farland? Haga un cuadro indicando el número de la escala y la concentración bacteriana a la que corresponde. 4. ¿Cómo determinaría si la zona de inhibición es debida a muerte o solo a inhibición del crecimiento de la bacteria? (use sus propias palabras y sugiera algo que podría hacer en el laboratorio). 5. Indique 3 factores que deben ser cuidadosamente controlados en el método de antibiograma o Kirby-Bauer. 6. ¿En qué fase de su crecimiento las bacterias son más susceptibles a los antibióticos y por qué?