Coatron M1

COATRON M1 1.20

1

Símbolos

SÍMBOLO

SIGNIFICADO SIGNIFICADO

EXPLICACIÓN

Adve Ad vert rten enci ci a

Ind ic a in form fo rm aci ón impo im po r tante tan te y tip t ipss .

Precaución!

Riesgo Riesgo d e posible daño de salud o daño considerables al equipo si la precaución no es atendida.

El equipo puede ser potencialmente Biológico Peligroso! infeccioso debido a las muestras y reactivos reactivos utilizados. Riesgo potencial del personal de operación o equipo debido a un ch oque eléctrico.

Peligro!

ADVERTENCIA: Lea cuidadosamente el el Manual de operación antes de utilizar el Coatron M1. M1. Para asegurar una adecuada ejecución deberá seguir todas las las advertencias y referencias para la seguridad seguridad técnica descritas en este manual. Las reparaciones del instrumento deberán realizarse por personal calificado y deberán reemplazarse las partes de acuerdo con las especificaciones del instrumento. El COATRON M1 esta diseñado para para usarse con plasma plasma humano. Así como con todos los productos derivados de sangre humana, no se conoce ninguna prueba que garantice completamente que estos productos no podrán trasmitir Hepatitis, SIDA u otras enfermedades infecciosas, por lo que el operador del instrumento deberá de tomar las precauciones apropiadas. En caso de que se derrame en el instrumento, limpie con una toalla de papel empapada con hipoclorito al al 10%.

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El coatron M1 es fabricado por TECO GmbH. TECO GMBH Dieselstrasse 1 D-84088 Neufahrn i. N.B. Germany

MEDICAL INSTRUMENTS, PRODUCTION + TRADING GMBH

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Historia del Software: 1.04 Primera Liberación 1.08

Tiempo muerto para PT/TT/FaE = 5 seg (anterior 7 seg) Tiempo muerto para PTT/Fal = 10 seg (anterior 7 seg) Tiempo muerto para FIB = 4.5 seg (anterior 5 seg)

1.09

Mejoramiento de la auto-amplificación del óptico para evitar mensajes de fallas ópticas

1.10

Nueva implementación de un sistema de control control de de medición completo. El interruptor interruptor de tiempo básico ahora se controla por un reloj de cristal en lugar de un reloj controlador para aislar el sistema de medición de la temperatura. Se adicionó un Sistema de chequeo en el menú. Presionando la tecla “menú” el óptico comenzará a calibrar. El valor debe estar entre 10000-14000 (se requiere un canal vacío). Presionando “UP/DOWN” la amplificación amplificación se puede puede cambiar manualmente. manualmente. Inicio automático del óptico. Después de que el óptico esta “activo”, la determinación comenzará automáticamente cuando la señal óptica cambie (ej. al adicionar reactivo). Con reactivos muy claros (f.e. Fibrinógeno) el “Autostart” requiere una técnica de pipeteo muy rápida. Se introdujo para cada prueba una COAC-corrección. Se adapto la nueva prueba de Dímero-D.

1.11

Se mejoro la programación programación de los datos de calibración. calibración. El valor cambia en incrementos de 10 primeramente. Mediante el cambio de la dirección el valor se cambia para el 1er. Incremento. Se igualaron al Coatron M2 los algoritmos para todas las pruebas. Cambio de la auto-amplificación del óptico para evitar mensajes de fallas ópticas.

1.12

Software especial, sólo para el canal óptico 400 nm. Pruebas FA-I y FA-E se reducen a una prueba FAC (seguridad de memoria) Implementar 2 nuevas pruebas ECAH y ECAT

1.13

Pruebas en el tablero: TP, TTP, TT, FAC, DD Curva de calibración de tres puntos para TP (100%, 50% y 25 %), si el 50% y 25 % son =0, no se realiza el % de actividad. El protocolo de transmisión de datos cambia (“M1 NR TEST SEC mOD % INR Unit”), separado con “TAB” y terminar con “LF” (ejemplo: “ M1 5 TP 12.5 0 100 1.00 0”).

1.18

(requiere canal óptico 400 nm) Introducción de métodos cromogénicos Pruebas nuevas en el tablero: AT3, PC (o ECAH, ECAT para algunos países) Doble determinación incluyendo valor medio en pantalla e impreso % TP podría calcularse con doble logaritmo matemático para mejorar la linealidad Reinicio del instrumento en la última prueba usada Inicio automático puede ser ajustado o apagado La prueba de Dímero D se puede adaptar para diferentes reactivos Soporte con el protocolo de interfase TECAM SMARTpara utilizar características LIS

1.19

Mejora la conversión digital análoga para reducir el ruido de la señal Inicio automático desactivado si la señal óptica esta por debajo de 350 dígitos DD default: 3200-150 mE, 1600-80 mE, 200-20 mE, OD_corr = 180, COAG_ corr = 240

1.20

Verifica óptico durante el encendido encendido Paquete de servicio para conversión AD, especialmente para la prueba de Dímero D. COATRON M1 1.20

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TABLA DE CONTENIDOS 1. INFORMACION DE SEGURIDAD

7

2. DESCRIPCION GENERAL

8

3. USO

10

4. INSTALACION

10

5. TEORIA DE OPERACIÓN

14

6. INSTRUCCIONES DE OPERACIÓN

16

7. DETERMINACION DE PT

20

8. DETERMINACION DE PTT

22

9. DETERMINACION DE FIB

24

10. DETERMINACION DE TT

26

11. DETERMINACION DE FACTORES EXTRINSECOS

28

12. DETERMINACION DE FACTORES INTRINSECOS

30

13. DETERMINACION DE DIMERO-D

32

14. SERVICIO

34

4.1 COMPONENTES DEL EQUIPO 4.2 DESCRIPCION 4.3 DATOS TECNICOS 4.4 ESTANDARES DE SEGURIDAD APROBADOS

11 12 13 13

5.1 MÉTODO TURBIDIMÉTRICO (MÉTODO DE COAGULACIÓN ) 6.1 CALENTAMIENTO 6.2 SELECCIÓN DE PRUEBA 6.3 RELOJ DE PARO 6.4 CALIBRACIÓN 6.5 DETERMINACIÓN 6.6 DOBLE DETERMINACIÓN

14 16 16 17 17 18 19

14.1 VALORES PRE-ESTABLECIDOS 14.2 AJUSTE DE TEMPERATURA 14.3 CORRECCION DE RESULTDOS 14.4 CHEQUEO OPTICO 14.5 DISPARO AUTOMATICO 14.6 INTERFASE RS 232 14.7 LIS CON TECAM SMART

35 36 37 37 38 38 39

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5

15. GUIA PARA RESOLUCION DE PROBLEMAS

43

16. PARTES QUE COMPONEN EL APARATO

44

17. ESQUEMA DEL EQUIPO EN TERCERA DIMENSION

45

TABLA DE FIGURAS Figura 1 Equipo

11

Figura 2 Vista Frontal

12

Figura 3 Principio de detección

14

Figura 4 Curva de coagulación

15

Figura 5 Ajuste de temperatura

36

Figura 6 Manejo de resultados de TECAM SMART

40

Figura 7 Base de datos TECAM SMART

41

Figura 8 Estadística con TECAM SMART

41

Figura 9 Reporte de resultados con TECAM SMART

42

Figura 10 Esquema del equipo

45

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1. Información de seguridad MATERIALES RECOMENDADOS Utilizar solo repuestos originales Utilizar solo material aprobado por el fabricante EVITAR CONTACTO Nunca tocar las partes móviles tales como el rotor de medición o el brazo robot durante la operación del dispositivo.

REALIZAR CONTROL DE CALIDAD Realizar corridas de mediciones controles en intervalos regulares para asegurar que el analizador continua funcionando exitosamente. DESECHOS DE CUBETAS El bloque de cubetas son utilizadas individualmente solo una vez. MATERIAL INFECCIOSO Evitar directamente el contacto con las muestras y el residuo de las muestras en las cubetas utilizadas. El material infeccioso tal como los desechos de cubetas y residuos líquidos deben ser dispuestos en cumplimiento con las regulaciones locales gubernamentales para materiales infecciosos. Utilizar guantes protectores de grado infección médica para el trabajo de limpieza y mantenimiento involucrado con el contacto potencial con líquidos infecciosos y utilizar cada par de guantes solo una vez. Utilizar un desinfectante para manos, para desinfectar sus manos después de completar el trabajo. CONDICIONES AMBIENTALES Temperatura ambiente debe ser de 18-25 °C. Humedad por debajo del 80%. Evitar vibraciones o impacto para el analizador. No utilizar el analizador en presencia de gas inflamable o explosivos alrededor. SEGURIDAD ELECTRICA Asegurarse que el voltaje de operación sea correcto antes de conectar el equipo a corrientes de energía. Utilizar solo sockets y líneas eléctricas a pruebas de choques en perfectas condiciones (conectadas a tierra). Líneas defectuosas deben ser reemplazadas sin retraso. Nunca interrumpir intencionalmente los contactos de tierra protegidos. Nunca quitar los elementos de cubierta, cubiertas protectoras o elementos estructurales de seguridad ya que de hacerlo se podrían exponer las piezas que llevan corriente eléctrica. Asegurase que las superficies tal como piso y banco de trabajo no estén húmedas mientras se esté trabajando con el equipo. COATRON M1 1.20

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2. DESCRIPCION GENERAL La Hemostasis es un proceso bioquímico para proteger al organismo de la perdida de sangre después de un daño vascular. La Hemostasis sucede en tres fases: La Vasoconstricción y agregación plaquetaria: detienen inmediatamente el sangrado (en segundos) y dispara la cascada de coagulación. La cascada de coagulación: Es una reacción en cadena en la cual enzimas inactivas se convierten a su forma activa. La cascada finaliza en la conversión del fibrinógeno a fibrina catalizada por la Trombina activada. En la presencia del factor XIIIa activado la fibrina se estabiliza y coagula para formar un trombo insoluble (coagulo de fibrina). El sangrado finalmente se detiene. Para prevenir al organismo de eventos trombóticos, la coagulación debe ser controlada de manera muy sensible. Esto se realiza por el sistema fibrinolítico. Los inhibidores son capaces de invertir la activación de los factores y regula por lo tanto, la coagulación. Los inhibidores básicos son la Antitrombina y la Proteína C. El sistema fibrinolítico es también responsable de romper el coagulo de fibrina. Después de la lisis del coágulo, el daño vascular esta completamente reparado. Todos los factores e inhibidores están muy cuidadosamente equilibrados. En caso de un desajuste o una disfunción, puede o podría aparecer una enfermedad vascular grave. La disfunción de la hemostasis es una de las enfermedades más comunes, la cual termina muy frecuentemente en la muerte (~1 por 1000). Algunos ejemplos son la trombosis venosa profunda (DVT) o embolismo pulmonar (PE). El COATRON M1 es un coagulómetro de un solo canal foto-óptico para determinar los parámetros básicos de la segunda etapa de la hemostasis (cascada de coagulación) en plasma humano citratado. Esta diseñado para las pruebas de coagulación in-vitro en el Laboratorio Clínico. Los ensayos de coagulación con formación de fibrina tales como los ensayos de punto final, se pueden correr en el instrumento, así como ensayos inmunoturbidimétricos, como el Dímero D o pruebas cromogénicas (ej. Antitrombina, Proteína C, Ensayo cromogénico de Ecarina). LAS SIGUIENTES PRUEBAS Y SUS CARACTERISTICAS ESTAN DISPONIBLES EN EL INSTRUMENTO: PT (tiempo de Protrombina) El TP se expresa en segundos (en fracciones de 100 ms para las muestras) y se normalizan automáticamente en INR (Razón de Normalización Internacional). El valor normal de TP (100%) y el ISI de la tromboplastina (Indice de Sensibilidad Internacional) se pueden almacenar a bordo. Adicionalmente el resultado se puede convertir en % de Actividad cuando los valores al 100 y 25% se almacenan en la memoria del instrumento. APTT (Tiempo de Protrombina Parcial Activada) La APTT se reporta en segundos y se normaliza automáticamente en radio: Se puede guardar en la memoria el valor normal del APTT TT (Tiempo de Trombina) El TT es reportado en segundos y normalizado automáticamente en radio. El valor normal de TT se puede almacenar en la memoria. FIB (Fibrinógeno). El FIB se reporta en segundos y se convierte automáticamente a una concentración plasmática en mg/dL. Es necesario construir una curva de calibración para obtener los resultados en mg/dL. Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. FAC (Factores) Los factores de la coagulación se expresan en segundos y automáticamente se convierten a % de actividad en plasma. Se necesita de la calibración para obtener el resultado en %. Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. COATRON M1 1.20

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Dímero D El dímero D se puede medir inmunoturbidimétricamente y expresarse en mili densidades ópticas por minuto (mOD/min) y convertirse en concentraciones de ng/mL en plasma. Se necesita de la calibración para obtener el resultado en ng/mL. Se pueden almacenar tres puntos de calibración en la memoria. AT3 (Antitrombina) PC (Proteína C) Las pruebas se miden de manera cromogénica y se expresan en mili densidades ópticas por minuto (mOD) y convertirse en % de actividad en plasma. Se pueden almacenar hasta tres puntos de calibración en la memoria para el % de actividad. ECAT (Ensayo cromogénico de Ecarina para Trombina)* ECAH (Ensayo cromogénico de Ecarina para Huridina)* Las pruebas ECA se utilizan para monitorear a los inhibidores directos de la trombina (tales como Huridina). Las pruebas ECA son equivalentes al tiempo de coagulación de Ecarina, pero el funcionamiento en mucho más avanzado mediante el método cromogénico. El resultado se expresa en mili densidades ópticas (mOD) y se convierten a % de actividad. Se pueden almacenar hasta tres puntos de calibración en la memoria. *No se encuentran instalados en la configuración estándar del equipo. CARACTERISTICAS: Todas las pruebas se llevan a cabo con una cuarta parte de los volúmenes regulares de reactivo y de muestra. La microcubeta se puede utilizar con un mínimo de 75 µL por ejemplo 25 µL de muestra + 50 µL de reactivo de Tromboplastina para TP. →

El COATRON M1 soporta una Interfase unidireccional RS232 (valores fijos a 2400, 8, 1, No). Todos los resultados se imprimen automáticamente, si la interfase esta programada en el modo de impresión. El RS 232 también puede programarse para el modo LIS. Posteriormente los resultados incluyend o sus curvas de reacción serán enviadas en el formato TECAM SMART a la PC. TECAM SMART es un sistema fácil de manejo de datos de coagulación el cual cumple las demandas de LIS (Sistema de información de laboratorio). El COATRON M1 cuenta con un área de incubación para 6 muestras y 2 posiciones para el reactivo. Al encender tardará de 3-5 minutos para alcanzar la temperatura de 37°C, lo cual se indicará con una luz verde. • • • • • • • • • • • • • • •

Analizador de coagulación para ensayos turbidimétricos, cromogénicos e inmunoturbidimétricos. Altamente confiable, de larga duración y prácticamente libre de servicio. Autosensado óptico para eliminar interferencias de Bilirrubina, Hemoglobina. Algorítmo de coagulación aprobado para todos los tipos de muestras y reactivos. Si existe un coágulo – será detectado. Inicio automático al adicionar el reactivo. Determinación costo-efectiva por los microvolumenes de prueba (total de 75μL). A cada prueba se le pueden programar hasta tres puntos de calibración. Cálculos en: % de Actividad, INR, Radio, g/L, o ng/mL. Función de reloj de paro a bordo. Modo de pruebas por duplicado (media de resultado). Impresión de resultados, calibración, servicio y sistema. Impresora térmica externa opcional. Comunicación RS232 opcional para almacenamiento de datos. Comunicación con los sistemas de información del laboratorio mediante TECO TECAM. Equipo pequeño y ligero.

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3. USO El COATRON M1 esta diseñado para realizar pruebas coagulométricas tales como PT, PTT, TT, Fibrinógeno, pruebas de factores individuales, pruebas cromogénicas e inmunoturbidimétricas (por ejemplo, Antitrombina III, Dímero D, etc.) El COATRON M1 debe ser operado por un especialista entrenando en técnicas de laboratorio clínico quien también recibe instrucción y entrenamiento en operación del COATRON M1 y ha leído y entendido este manual de Operación. Utilice solo plasma citratado para corridas de análisis de prueba: Mezclar 9 partes de sangre venosa con 1 parte de citrato de sodio 3.2% (0.105M) y centrifugar la muestra a 1500g por aproximadamente 10 minutos. El plasma debe de ser utilizado dentro de las primeras cuatro horas. No utilizar plasma con una concentración de Bilirrubina mayor de 25 mg/dL. No utilizar plasma con una concentración de Hemoglobina mayor de 1000 mg/dL. Debido a que no se conoce ninguna prueba que ofrezca completa seguridad de que los productos derivados de sangre humana no transmitirán Hepatitis, SIDA u otras enfermedades infecciosas, el operador del instrumento deberá tomar las precauciones adecuadas. En caso de derrame de plasma en el instrumento, límpielo con una toalla de papel humedecida con cloro al 10%.

4. INSTALACION No se requiere de precauciones especiales cuando se instale el COATRON M1 sin embargo, se recomienda lo siguiente: •

Colóquelo en una superficie plana, libre de excesivos cambios de temperatura.

•

Evitar vibraciones en la superficie durante la medición.

•

Proteger el instrumento de la luz del sol, humedad y polvo.

•

Asegurarse que el voltaje y el dato de frecuencia en la placa de identificación del instrumento concuerden con el rango de energía local antes de poner en marcha por primera vez el instrumento.

El instrumento se conecta a la fuente de energía por medio del cable principal. Si ocurre un daño notorio de éste durante su envío, En este caso contacte con Laboratorios Licon S. A.

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4.1

COMPONENTES DEL EQUIPO.

Figura 1. Equipo El equipo incluye: • 1 Pza Pza

COATRON M1

•

1

Fuente de Poder

•

25 Pzas

Cubetas de Reacción individuales

•

5 Pzas

Tubos de Reactivo

•

2 Pzas

Adaptadores de Reactivo.

•

1 Pza

Manual de Operaciones.

Opcional: •

Impresora Térmica.

•

Cable de Impresora.

•

Pipeta Variable 10 - 100 uL, No electrónica.

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4.2

DESCRIPCION. Pantalla: 2 x 16 Caracteres. Servicio: Un LED rojo indica fallas del sistema y el rango de temperatura no es correcto (36° a 39°C) Lectura: Un LED verde indica que el sistema esta listo para operar. Cursor: Cambios del parámetro activado. Menú: Calibración de la prueba seleccionada. Enter: Confirmar los parámetros seleccionados Tiempo: Iniciar, detener, resetear el cronómetro. Optic: Activar, empezar, detener las lecturas. Incubación: Posiciones atemperadas a 37°C para las 6 cubetas. Reactivo: Posiciones atemperadas a 37°C para dos tubos de reactivo Ø 11mm Canal Optico: Posición de medida atemperado a 37°C.

Figura 2. Vista Frontal

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4.3

Datos Técnicos:

Dimensión (Largo x ancho x altura):

245 x 130 x 60 cm

Peso:

0.55 Kg

Temperatura Ambiente:

18 - 23 °C

Fuente de Poder:

In Put= Out put= US

100-240 V 12 V, 1.0 A ~

voltaje de entrada: voltaje de salida:

110 Vac, 60 Hz 2 V, 1.2 A

Dispositivo:

Tarjeta del Microcontrolador. 14 Bit ADC; chip controlador de LCD, RS232, Tablero, cargador, temperatura y Optico.

Interfase:

Serial 2400 Baud, 8 Bits, 1 paro, No paridad Usado en modo de impresión o debug.

Celda Optica.

Fotómetro con un LED emisor de 400 nm Emisor de modulación variable. Detector de amplificación variable. Rango lineal 0.001 – 1.000 OD.

Teclado:

Tablero metálico con 8 teclas y 2 LED’s

Pantalla:

2 Líneas x 16 caracteres, cristal líquido.

Bloque de Incubación:

1 Lectura, 6 de muestras, 2 pozos de reactivos Incubados a 37°C.

4.4

Estándares de Seguridad Aprobados:

Fabricado en cumplimiento con la Norma ISO 9001:2000 e ISO 13485:11//2000

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5. TEORIA DEL FUNCIONAMIENTO. El COATRON M1 es un fotómetro de 1 canal altamente sensible. Un intenso láser óptico a 400 nm asegura resultados exactos y precisos, aún con el empleo de muestras ictéricas o lipémicas. La señal receptora es detectada y convertida a una corriente eléctrica. Durante la prueba el sistema busca la mejor señal de amplificación. Los algoritmos del software están basados en la densidad óptica (extinción), la cual absorbe los efectos de la luz externa.

Figura 3. Principio de Detección El Plasma/sangre y el reactivo absorben la luz láser transmitida. La medida de absorbancia se obtiene por el detector y la envían al micro controlador. Aquí el programa analiza la señal y envía el resultado a la pantalla y a la impresora (opcional).

5.1 METODO DE TURBIDEZ (METODO DE COAGULACION) La conversión de fibrinógeno a fibrina catalizada por la trombina es la reacción final en la “cascada de coagulación.” La formación de fibrina provoca un incremento en la turbidez de la muestra, la cual se detecta por el fotómetro. La detección fotométrica se inicia automáticamente adicionando el reactivo. El tiempo entre el inicio de la detección fotométrica y punto de inflexión de la curva de reacción (ver figura) es el resultado. Este resultado aparece en segundos en la pantalla de cristal líquido (e impreso automáticamente en la impresora opcional).

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Figura 4. Curva de Coagulación. El diagrama representa una típica curva de PT con plasma control normal. En ~ 10 segundos el plasma líquido empieza a coagularse. El proceso termina en el “punto final”. El plasma es aglutinado por los monómeros de fibrina. La cinética máxima de reacción (punto de inflexión) se define como el tiempo de coagulación. El INR y/o % de actividad aparecerá en la pantalla y se imprimirá si se introdujeron los datos de calibración.

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6.

INSTRUCCIONES DE OPERACIÓN

En esta sección encontrará las instrucciones generales necesarias para obtener el máximo provecho y beneficio del Coatron M1. Para aplicaciones de pruebas específicas consulte la sección 4 – 9.

6.1

CALENTAMIENTO

Retire la cubeta del óptico y encienda el instrumento. La primera pantalla visible para el operador es la información del software instalado antes de cambiar a la pantalla de atemperamiento. Si se encuentran valores del óptico bajo durante el proceso, entonces en la pantalla aparece el mensaje “OPTIC” durante dos segundos antes de reiniciar el equipo. Verifique que las cubetas no estén en el canal óptico. Revision de Software Número de serie

SW: C1.19

SW: C1.19 optic!

(Remover cubeta)

ESPERE PARA 37 °C Pantalla de atemperamiento: Toma de 5-10 minutos para que el instrumento se equilibre a 37°C.

PT

000

(prueba seleccionada

El Coatron M1 esta listo para operar.

Cronómetro)

Retire las cubetas antes de encender el instrumento! No utilice el instrumento hasta que el LED rojo este encendido.

6.2

SELECCION DE PRUEBAS PT:

000

Seleccione la prueba con la tecla

PTB:

Cambie a Prueba activa con el .

↓ TEST

↓ FIB:

000

Confirme que la prueba esta activa con la Tecla .

Para alternar entre pruebas, presione la tecla para activar la prueba seleccionada, con la para cambiar y la tecla para confirmar.

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6.3 RELOJ DE PARO La función del reloj de paro (cronómetro) ayuda al operador a controlar los tiempos de incubación correctos. El reloj se detiene después de 999 seg automáticamente. TP:

123 Cronómetro.

Para activar el cronómetro presionar la Para detener y resetear el cronómetro presionar la

otra vez.

6.4 CALIBRACION Los datos de calibración son requeridos si el instrumento despliega los resultados en %, INR ó unidades. Los parámetros específicos para las pruebas pueden ser introducidos y almacenados en el COATRON M1. Hasta 3 puntos de calibración pueden ser introducidos. Establecer el punto cero de calibración sino se utiliza.

Cambiar los valores:

El cambio inicial del valor podría aumentar o disminuir en 10 unidades. Un cambio en la dirección podría entonces cambiar el número por 1. Ejemplo: Presione “ tecla hacia arriba” 3 veces. El ISI cambia de 1.22, 1.32 y 1.42. Presione “ tecla hacia abajo” 2 veces. El ISI cambia de 1.41, 1.40 TP:

000 Entrar a calibración con la

TP:

1.12

ISI Cambiar el ISI con las Confirmar con

PT:

13.5

s (100%) Cambiar el tiempo normal con las teclas del cursor. Confirmar con

PT:

16.7

s (50 %) Cambiar con las teclas del cursor. Si el Valor=0→ sin actividad. Confirmar con

PT:

PT:

26.1

s (25 %)

Cambiar con las teclas del cursor. Si el Valor=0→ sin actividad. Confirmar con

La prueba activada esta calibrada

000

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Valores pre-establecidos para las Pruebas : TP:

ISI = 1.10 (1) 100%(Normal) = 13.5 seg. (2) 50% = 16.7 seg (3)25%= 26.1 seg

TTP:

NORMAL = 30.0 seg.

TT:

NORMAL = 15.0 seg.

FIB:

(1) 300 mg/dL. = 12.0 seg. (2) 150 mg/dL. = 23.0 seg. (3) 75 mg/dL = 36.0 seg.

FAC:

(1) 100 % = 32.5 seg. (2) 10 % = 60.0 seg (3) 5 % = 70.0 seg.

DD:

(1) 1600 ng/mL = 150 mOD (2) 200 ng/mL = 30 mOD (3) 0 ng/mL = 0 mOD

6.5 MEDICION. Preparar y colocar la cubeta en el canal óptico. PT:

000

PT: 01

ACTIVO

000

PT: 02

ACTIVO

000

PT: 02



PT: 02

12.8 s 000 I = 1.04 % = 00

Active el óptico con

Cambie el número ID de la prueba con las teclas UP o DOWN

La medición automáticamente iniciará con la adición del reactivo. En caso de algún problema: presione para iniciar. 000

0.023

La determinación esta corriendo. . El valor en la segunda línea muestra la densidad óptica in (OD). Si se encuentra un coágulo, el resultado aparece en la pantalla y se imprime (si la impresora esta conectada) (% = 00, si el valor del 25% esta colocado como cero!!!)

Antes de activar el canal la cubeta debe ser colocada dentro de la posición de medición y esta listo para adicionar el reactivo de inicio. Presionar la tecla “OPTIC” para activar el canal. El mensaje “WAIT” indica que el instrumento calibra el óptico hasta el valor actual óptico. Si “ACTIVE” se despliega en la pantalla, la medición esta lista para iniciar. El resultado actual ID es también desplegado. El valor ID puede cambiarse con las teclas del cursor. Si el valor óptico cambia a partir del valor definido (ej. por adición del reactivo), la medición comenzará. También inicia si se presiona la tecla “OPTIC”. COATRON M1 1.20

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Una vez que se inicia la medición se escucha un pequeño sonido (beep) seguido por un avance de flechas. La absorbancia actual (OD) se puede leer en la pantalla. Evite el contacto con la cubeta mientras se muestre este mensaje. Nuevamente se escuchará otro sonido (beep) cuando se haya detectado el coágulo y el resultado aparecerá en la pantalla. Si la impresora esta conectada, el resultado también se imprimirá. Si la reacción de formación del coágulo necesita más del tiempo máximo de lectura (300 seg), el optic se detendrá y aparecerá: “+++.+”, lo cual significa “coágulo no detectado”. La medición puede ser cancelada presionando la

nuevamente.

La medición se iniciará automáticamente adicionando el reactivo, cuando el optic este activo. Para algunas pruebas (ej. Fibrinógeno, Trombina) esta característica no funciona adecuadamente debido a que el cambio de señal es muy pequeño. En este caso pipetee fuerte y rápidamente o presione la tecla de “optic” al adicionar.

6.6 DOBLE DETERMINACIÓN Activar el óptico e iniciar la medición. Cuando el resultado se despliega, activar el óptico otra vez y duplicar el resultado número ID con el las teclas del cursor. Inicia la medición. El resultado siguiente se despliega en 3 segundos. Entonces el equipo desplegará la media del valor.

PT: 01

ACTIVE

PT: 01

25.0 s 88% I = 1,21

PT: 01

Activar óptico

ACTIVE

Resultado 1

Activar óptico y duplicar el resultado número ID

PT: 21.8 s 02 106% I=0.96

Resultado 2

PTB: 23.4 s X 97% I = 1.02

Tres segundos después la media de los resultados se despliega. La señal “X” indica que el valor doble difiere más del 15 %.

El valor medio de unidades, % o INR se derivan de la media de los resultados (s, E).

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7. DETERMINACION DE TP. RESUMEN

El tiempo de Protrombina, descrito originalmente por Quick, ha sido ampliamente utilizado por muchos años como una prueba de screening pre-operatoria para la evaluar algunos factores de coagulación y en el monitoreo de Terapia con anticoagulantes orales. Todos los factores de la etapa II y III son necesarios para obtener resultados normales cuando se lleva a cabo el tiempo de Protrombina, pero es muy sensible a niveles disminuidos o a deficiencias de los factores I, II, V, VII y X. El Dicumerol y drogas relacionadas reducen la actividad del llamado “Complejo de Protrombina” factores II, VII, IX y X. Debido a que el tiempo de Protrombina es sensible a las deficiencias de todos esos factores, excepto el IX, ha probado ser útil en el monitoreo de la terapia con anticoagulantes orales. El TP también se pude usar en la determinación cuantitativa (Ensayos de Factor) de los factores II, V, VII y X.

PRINCIPIO

La primera fase del Tiempo de Protombina mide el tiempo de coagulación de un plasma problema después de la adición del Reactivo de Tromboplastina el cual contiene cloruro de calcio. El Reactivo proporciona una fuente de “tromboplastina tisular”, activando al Factor VII y es por lo tanto sensible a todos los factores de la etapa II y III. Las deficiencias de los factores de la fase I (VIII, IX, XI y XII) no son detectadas con esta prueba.

INDICE DE SENSIBILIDAD INTERNACIONAL (ISI)

El Comité Internacional de Estandarización en Hematología y el Comité Internacional en Trombosis y Hemostasis han convenido reportar los resultados del tiempo de Protrombina utilizando el Índice Internacional de Sensibilidad (ISI) de los reactivos de tromboplastina y una Razón Internacional Normalizada (INR). Los reactivos de tromboplastina se les asigna un valor ISI por medio de una calibración contra una preparación de referencia Internacional, (IRP, 67/40) el cual por definición tiene un ISI= 1.0. Por lo tanto el valor de ISI asignado a los Reactivos de Tromboplastina describe una pendiente comparativa o sensibilidad relativa, con respecto a la tromboplastina de referencia. Entre mas bajo es el valor de ISI, es mayor la “sensibilidad del reactivo. Conociendo el ISI de un reactivo de Tromboplastina en particular se puede calcular la razón, la cual podría haber sido encontrada si el IRP 67/400 se ha usado como el reactivo. Esta es la llamada Razón Internacional Normalizada (INR) y es determinada por: INR = R

ISI

= RAZON

ISI

(Paciente PT (s) = ( _______________ Normal PT (s)

)

ISI

Cada reactivo de PT comercial tiene asignado un valor de ISI en relación con la Tromboplastina de la WHO Estandarizada.

PREPARACION A. Anticoagulante.

Se recomienda usar citrato de sodio, 3.8% o 3.2%.

B. Recolección de Plasma. 1. Obtener sangre por venopunción. 2. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. 3. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. 4. Retirar el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico a 2-8°C. 5. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar.

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C. Reconstitución de Reactivos (Reactivos marca Teco). Reconstituir con agua destilada con el volumen indicado en la etiqueta del frasco. Dejar a temperatura ambiente agitando ocasionalmente hasta que la solución se homogenice completamente. Estable por 7 días después de la reconstitución si se almacena de 2 - 8° C, evitar calentamiento prolongado. D. Preparación del COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5.

Encender el instrumento y esperar hasta que el LED esté encendido. Encender la impresora si está conectada (Opcional). Seleccionar PT como prueba activa. Checar la calibración Permitir que el reactivo se caliente por lo menos 5 minutos.

PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5.

Pipetear dentro de la cubeta. Precalentar el plasma por un minuto. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar óptico (presionar el ). Adicionar y simultáneamente iniciar el optic. (Presione la tecla “Optic” nuevamente). 6. El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no hay coagulación, en la pantalla aparecerá . 7. El resultado es mostrado en segundos e INR.

PRUEBAS DE CALIBRACION Para la calibración INR de PT dos parámetros son requeridos. El valor normal (determinar el valor normal de PT con el Plasma Normal.- rango esperado 11 – 14 s) El valor ISI Introducir ambos valores en el COATRON M1.

CONTROL DE CALIDAD Se deben de usar plasmas controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.

RECOMENDACIONES DE APLICACION 1. No usar vidrio. Usar solamente plástico. 2. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. 3. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. 4. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. 5. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sa ngre. 6. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. 7. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. 8. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.

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8. DETERMINACION PTT. RESUMEN Desde sus orígenes a través del trabajo de Langdell y sus colaboradores y más tarde modificado por otros, el tiempo de prueba de Tromboplastina Parcial Activada ha sido muy usado por un muchos años como un ensayo de screening pre-quirúrgico para la evaluación de ciertos factores de coagulación y en el monitoreo de Terapia con Heparina. Todos los factores del Vía Intrínseca son necesarios para obtener resultados normales cuando se lleva a cabo la prueba de APTT. Este es usado principalmente, sin embargo, para detectar deficiencias de Factores en la fase I, llamados Factores VIII, IX, XI y XII, así como el Factor Fletcher. La prueba APTT es también usada en el monitoreo de la Terapia con Heparina, mostrando resultados de pruebas prolongados aproximadamente de 0.1 unidades y más. La prueba es también usada en la determinación cuantitativa (Pruebas de Factor) de Factores VIII, IX, XI y XII y Factor Fletcher.

PRINCIPIO La Prueba APTT mide el tiempo de coagulación de plasmas de prueba después de la adición del Reactivo APTT, permitiendo después un “tiempo de activación”, seguido por la adición de cloruro de calcio. Las deficiencias de aproximadamente 40% y menor de Factores VIII, IX, XI y XII resultarán en un APTT prolongado. La presencia de Heparina en cantidades adecuadas de AT-III también resultará en una APTT prolongado.

REACTIVOS Reactivo de APTT Cloruro de Calcio

PREPARACION A.

Anticoagulante.

Usar citrato de sodio amortiguado, 3.8% o 3.2%.

B.

Recolección de Muestras.

(Ver, por ejemplo, la Ref. 7).

1. Obtener sangre por venopunción. 2. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. 3. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. 4. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. 5. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. C.

Reconstitución del Reactivo. Llevar a temperatura ambiente antes de usar. Mezclar bien con movimientos circulares o inversión y mantener una barra de agitación en el contenedor del reactivo durante su uso para evitar que el activador particulado se sedimente. Evite calentamientos prolongados.

D.

Preparación del Coatron M1. 1. 2. 3. 4.

Encender el instrumento y esperar hasta que el LED esté prendido. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar PTT como prueba activa. Precalentar el CaCl2 al menos 5 minutos. COATRON M1 1.20

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PRUEBA DE CALIBRACION Los resultados de APTT deberán normalizarse contra un valor normal, el cual es obtenido de un APTT de un Plasma Humano Normal.- ver el rango esperado en el instructivo de uso. Introducir el valor normal en el Coatron M1. El PTT es mostrado en segundos y en radio.

PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1 Pipetear dentro de la cubeta. 2 Adicionar al plasma. 3 Incubar exactamente por 4 Transferir la cubeta a la posición de medición. 5 Activar el óptico (presionar el ). 6 Adicionar 25 y simultáneamente inicie con el óptico. (Presione la tecla nuevamente. 7 El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta el coágulo, la pantalla mostrará . 8. El resultado es mostrado en segundos y radio o razón.

CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.


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9. DETERMINACIÓN DE FIBRINOGENO. RESUMEN La enzima Trombina, es la penúltima proteína en la secuencia de coagulación, actuando sobre el fibrinógeno soluble y convirtiéndolo a fibrina insoluble. Los niveles de Fibrinógeno en plasma Normal tiene un rango de 200-400 mg/dL aunque niveles tan bajos como 10 - 20 mg/dL pueden ocurrir en una hipofibrinogenemia congénita o adquirida. La determinación de niveles de fibrinógeno en plasma ha sido útil en el diagnóstico de enfermedades hemorrágicas relacionadas con el contenido de Fibrinógeno en plasma. Estas incluyen hiperfibrinogenemia, hipofibrinogenemia, disfibrinogenemia y fibrinogenemia.

PRINCIPIO El reactivo de Fibrinógeno comercial utiliza el tiempo de coagulación de Clauss para la determinación de niveles de fibrinógeno en plasma, donde un exceso de trombina bovina se utiliza para coagular el plasma diluido. Primero se hace una curva estándar usando un plasma de referencia con un contenido de fibrinógeno conocido. Cuando la trombina es adicionada, el tiempo de coagulación obtenido es inversamente proporcional al contenido de fibrinógeno. Después el plasma del paciente diluido 1/10 se coagula con la trombina y el tiempo de coagulación resultante se interpola en la curva estándar.

REACTIVO Reactivo de Fibrinógeno Buffer de Dilución (IBS) o Buffer de Owrens

PREPARACION A.

Anticoagulante.


B. Recolección de Muestras. 1. Obtener sangre por venopunción. 2. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. 3. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. 4. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. 5. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. C.

Reconstitución del Reactivo. Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando ocasionalmente con movimientos circulares hasta disolución completa. Estable por 5 días después de su reconstitución cuando se almacena de 2-8°C. Evitar el calentamiento prolongado.

D.

Preparación de la Muestra Diluir la muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)

E. 1. 2. 3. 4. 5.

Preparación del Coatron M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que esté listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FIB como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min. COATRON M1 1.20

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PRUEBA DE CALIBRACIÓN Para la calibración del Fibrinógeno se requieren 2 (máximo 3) parámetros. El Tiempo de coagulación del Control Normal diluido 1:10, 1:20 y 1:40. Leer la concentración del fibrinógeno en la etiqueta del reactivo Una Calibración típica puede ser:

300 mg/dL = 9.2 seg 150 mg/dL = 25.0 seg 75 mg/dL = 38.0 seg

Introduzca todos los valores en el COATRON M1

PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5.

Pipetear diluido (1:10 con IBS) dentro de la cubeta. Precalentar el plasma 1 min. Transferir la cubeta a la posición de medición. Activar el óptico (presionar OPTIC) Adicionar y simultáneamente inicie con el óptico. (Presione la tecla nuevamente. 6. El instrumento leerá un máximo de 60 sec. 7. Los resultados aparecerán en segundos y en mg/dL.

CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes.


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10. DETERMINACIÓN DE TIEMPO DE TROMBINA. RESUMEN La enzima trombina es la penúltima proteína en la secuencia de la coagulación, actuando sobre el fibrinógeno soluble y convirtiéndolo en fibrina insoluble. Como reactivo, la Trombina ha demostrado ser útil en la evaluación de laboratorio de muchas enfermedades del fibrinógeno, incluyendo hipofibrinogenemia y disfibrinogenemia. Un tiempo prolongado de Trombina resultará en niveles de Fibrinógeno de cerca de 100 mg/dL y menores. Las moléculas de Fibrinógeno no funcional (disfibrinogenemia) ocasionarán un Tiempo de Trombina prolongado. La Heparina en presencia de cantidades adecuadas de AT-III, también originarán tiempos de trombina prolongados.

REACTIVO

Trombina Bovina

PREPARACION A.

Anticoagulante.


B. Recolección de Muestras. 6. Obtener sangre por venopunción. 7. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. 8. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. 9. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo plástico. 10. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. C.

Reconstitución del Reactivo. Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando ocasionalmente con movimientos circulares hasta disolución completa. Estable por 5 días después de su reconstitución cuando se almacena de 2-8°C. Evitar el calentamiento prolongado.

D.

Preparación de la Muestra Diluir la muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)

E. 6. 7. 8. 9. 10.

Preparación del Coatron M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que esté listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar TT como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.

PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. Pipetear dentro de la cubeta. 2. Precalentar el plasma por 1 minuto 3. Transferir la cubeta a la posición de medición. 4. Activar el óptico (presionar OPTIC) 5. Adicionar y simultáneamente inicie con el óptico. (Presione la tecla nuevamente. 6. El instrumento leerá un máximo de 300 seg. 7. Los resultados aparecerán en segundos y en Ratio. COATRON M1 1.20

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ENSAYO DE CALIBRACION Los resultados de TT se deben normalizar contra un valor normal, el cual se obtiene a partir de una TT de un Control Normal – rango esperado 13-17 seg. Introducir el valor normal al Coatron M1. El TT aparece en segundos y en radio.

CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.


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11.

DETERMINACIÓN DE FACTORES EXTRÍNSECOS. (FACTORES II, V, VII Y X)

RESUMEN Las disfunciones de la vía extrínseca de coagulación se indican por los tiempos prolongados de PT. La actividad de un factor de la vía extrínseca ( Factores II, V, VII, X ) se determina con un PT del plasma de prueba mezclado con el plasma deficiente de factor. REACTIVOS Reactivo de Tromboplastina PLASMAS DEFICIENTES Plasma Plasma Plasma Plasma

deficiente deficiente deficiente deficiente

F F F F

II V VII X

PREPARACION A.

Anticoagulante.


B.


1. Obtener sangre por venopunción. 2. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión del tubo contra la tapa. 3. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. 4. Retirar el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacenar en un tubo de plástico. 5. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. C.

Reconstitución del Reactivo.

Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta del frasco. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado. D.

Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)

E. 1. 2. 3. 4. 5.

Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FaEI como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.

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PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Pipetear dentro de la cubeta. Adicionar en la cubeta. Incubar por 1 minuto. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el ). Adicionar El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta coágulo, la pantalla leerá El resultado es mostrado en segundos y % de actividad.

.

ENSAYO DE CALIBRACION Para el % de actividad – calibración de un factor se requieren 2 (máximo 3) p untos de calibración. Prepare los estándares de acuerdo a la recomendación. -1:10 Plasma diluido ( 100% actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 9 partes de IBS -1:100 Plasma diluido ( 10 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 99 partes de IBS -1: 200 plasma diluido ( 5 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 199 partes de IBS Determine el tiempo de coagulación para ambas muestras e introduzca los valores al Coatron M1. CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.

RESULTADOS ESPERADOS DEL CONTROL Control anormal 40 – 60% de actividad del factor.

RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.

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12.

DETERMINACIÓN DEL FACTORES INTRÍNSECOS (Factores VIII, IX, XI, XII)

RESUMEN

Las fallas de coagulación en la vía intrínseca se indican por tiempos prolongados de PTT. La actividad de un factor de la vía Intrínseca ( Factores VIII, IX, XI, XII ) son determinados con una PTT del plasma de prueba mezclados con el plasma deficientes de factor. RECTIVOS Reactivo de APTT Cloruro de calcio PLASMA DEFICIENTES Plasma Plasma Plasma Plasma

deficiente deficiente deficiente deficiente

F F F F

VIII IX XI XII

PREPARACION A.

Anticoagulante.

B.


1 2 3 4 5 C.


Obtener sangre por venopunción. Inmediatamente mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante, mezclar bien por inversión de tubo contra la tapa. Centrifugar la muestra a 1000 rcf por 15 minutos. Remover el plasma del tubo en un lapso de 60 minutos usando una pipeta plástica y almacena en un tubo plástico. Probar la muestra de plasma en un lapso de 2 horas, de lo contrario almacenar en congelación y descongelar justo antes de usar. Reconstitución del Reactivo.

Reconstituir con agua destilada al volumen marcado en la etiqueta. Llevar a Temperatura ambiente mezclando bien con movimientos circulares o inversión hasta disolución completa. Evitar el calentamiento prolongado. D.

Preparación de la Muestra Diluir la Muestra 1:10 con IBS (1 parte de suero + 9 partes de Buffer de dilución)

E. 1 2 3 4 5

Preparación del COATRON M1. Encender el Instrumento y esperar hasta que este listo el LED. Encender la impresora si está conectada. Seleccionar FaI como prueba activa. Checar la calibración Precalentar los reactivos por lo menos 5 min.

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PROCEDIMIENTO EN EL COATRON M1. 1. Pipetear dentro de la cubeta. 2. Adicionar en la cubeta. 3. Pipetear dentro de la cubeta. 4. Incubar exactamente por 5 minutos. 5. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el ). 5. Adicionar 6. El instrumento leerá un máximo de 300 segundos. Si no se detecta coágulo, la pantalla leerá 7. El resultado es mostrado en segundos y % de actividad.

.

Prepare los estándares de acuerdo a la recomendación: -1:10 Plasma diluido (100% actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 9 partes de IBS -1:100 Plasma diluido (10 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 99 partes de IBS -1: 200 plasma diluido (5 % actividad) Mezclar 1 parte del calibrador Normal con 199 partes de IBS CONTROL DE CALIDAD Se deben probar Plasmas Controles en conjunto con las muestras de pacientes. Es recomendable que al menos un Control Normal y uno Anormal se corran como mínimo una vez cada 20 muestras de pacientes. Se debe establecer un rango de control para determinar la variación permisible en el funcionamiento diario de cada Plasma Control.

RECOMENDACIONES DE APLICACION No usar vidrio. Usar solamente plástico. No retrasar la mezcla de sangre con anticoagulante. Evitar muestras con hemólisis extrema ó lipémicas. Evitar contaminación del plasma con tromboplastina tisular. Evitar proporciones inapropiadas de anticoagulante con sangre. Correr muestras de pacientes por duplicado. Diferencias mayores de 5%, repetir la prueba. Correr regularmente controles de calidad para confirmar la funcionalidad del reactivo y del instrumento. No correr una prueba, si el LED verde esta apagado.

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13. DETERMINACION DE DIMERO D RESUMEN

El antígeno Dímero D siempre esta presente en el plasma como resultado del rompimiento de la plasmina de la fibrina. Después de un daño, o cuando se sufre de condiciones asociadas con un incremento en la actividad hemostásica se presenta un incremento en la concentración plasmática de Dímero-D. La determinación del Dímero-D ha llegado a ser una ayuda importante en el diagnóstico de la trombosis. Niveles elevados de DímeroD se encuentran en condiciones clínicas tales como trombosis venosa profunda (DVT), embolismo pulmonar (PE) y coagulación intravascular diseminada (DIC)2. Un resultado de Dímero-D negativo en un paciente con una sospecha de desorden trombolítico tiene un gran valor predictivo negativo.

PRINCIPIO El reactivo de micro-partículas consiste de partículas de tamaño micro de partículas de poliestireno acopladas con anticuerpos monoclonales específicos para el Dímero-D. Cuando el reactivo se expone a la muestra de plasma, el Dímero-D aglutinará las partículas ocasionando un incremento en la dispersión de la luz. Cuando se expone a una longitud de onda apropiada de luz monocromática, el incremento medido como turbidez o dispersión, es proporcional a la cantidad de Dímero D en la muestra.

RECOLECCION DE LA MUESTRA Obtener una muestra de sangre mediante venopunción. Mezclar 9 volúmenes de sangre venosa fresca con un volumen de solución de citrato trisódico. Referirse al documento de la NCCLS H3-A4 para la recolección adecuada de las muestras de sangre2 y NCCLS H21-A3 para información relacionada a la manipulación y almacenamiento de las muestras colectadas4.

PRECAUCION Únicamente para uso de diagnóstico In-vitro. Para utilizarse únicamente por personal entrenado. Almacene de 2-8°C.

MATERIAL REQUERIDO Estándar para calibración de Dímero-D – aproximadamente 3200 ng/mL Control para Dímero-D – aproximadamente 250 ng/mL Solución Salina para dilución del calibrador y muestras

CONTROL DE CALIDAD Para mantener resultados consistentes, se recomienda que se prueben plasmas controles en intervalos de tiempo regulares. PROCEDIMIENTO PARA COATRON M1 1. Pipetear dentro de la cubeta. 2. Pipetee en la cubeta. 3. Incube por 1-10 minutos. 4. Transferir la cubeta a la posición de medición y activar el óptico (presionar el ). 5. Adicionar durante los primeros 5 segundos. El mezclado se puede realizar con ayuda de la pipeta. 6. El instrumento leerá en los siguientes 150 segundos para determinar el cambio de señal. 7. El resultado es mostrado en extinción y concentración en ng/mL.

RESULTADOS Los resultados se reportan en concentración de Dímero-D (ng/mL). Como no existe un estándar internacional disponible para el Dímero-D, cada laboratorio debe establecer sus propios rangos normales y valores de corte. COATRON M1 1.20

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REFERENCIAS 1. Bounameaux H, et al. Thrombosis and Haemostasis. 1994, 71:1-6. 2. Gaffney PJ, et al. British Journal Haematology. 1988.68:91-96. 3. National Committee for Clinical Laboratory Standards. H3-A4, Procedure for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture (1988). 4. National Committee for Clinical Laboratory Standards. H3-A4, Collection, Transport and Processing of blood specimens for coagulation testing and general performance of coagulation assays (1998). 5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. C3-A3, Preparation and testing of reagent water in the clinical laboratory (1997).

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14. SERVICIO.

Favor de leer esta sección completamente antes de operar el Con el objeto de asegurar precisión y un uso adecuado del instrumento. Sólo personal autorizado, deberá llevar a cabo cualquier función de servicio en el Coatron M1.

Para entrar al submenú oculto de servicio, presionar

y “

simultáneamente.

Espere para 37°C

Tecla

+

PT:

LOAD DEFAULT? NO

000

El siguiente servicio podrá ser llevado a cabo en el Coatron M1. • • • • • •

Usar

Resetear los valores preestablecidos Ajustar temperatura Corrección – OD Corrección – Coag. Ajuste Optico. Fijar RS232. para cambiar y la tecla

para confirmar!

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14.1 VALORES PREESTABLECIDOS: El Coatron M1 puede almacenar pruebas y parámetros de sistema permanente en el tablero. Calibración PT:

ISI=1.10 (1) 100 % (normal) – 13.5 seg. (2) 50%= 16.7 seg (3) 25% = 26.1 seg.

Calibración PTT:

Normal = 30.0 s

Calibración FIB:

(1) 300 mg/dL = 12.0 seg (2) 150 mg/dL = 23.0 seg (3) 75 mg/dL = 36.0 seg

Calibración TT

Normal = 15.0 seg

Calibración FAC:

(1) 100 % = 32.5 seg (2) 10 % = 60.0 seg (3) 5 % = 70.0 seg

Calibración AT3:

(1) 100 % = 400.0 mOD (4) 50 % = 800.0 mOD (5) 1 % = 1100.0 mOD

Calibración DD:

(1) 3200 ng/mL = 190 mOD (2) 1600 ng/mL = 100 mOD (3) 200 ng/mL = 18 Mod

Calibración PC:

(1) 100% = 62 mOD (2) 50% = 23 mOD (3) 1% = 3 mOD

Corrección de Temperatura

°C = 370 (9045)

OD Corrección PT: OD Correción PTT: OD Corrección TT: OD Corrección FIB: OD Corrección FAC: OD Corrección DD: OD Corrección AT3: OD Corrección PC:

100 100 100 100 100 180 100 100

Corrección de coag PT: Corrección de coag PTT: Corrección de coag TT: Corrección de coag FIB: Corrección de coag FAC: Corrección de coag DD:

100 100 100 100 100 120

Chequeo Optico: aprox. 11000 (± 2000) Autoinicio: 250 RS 232: Impresión de Resultados (Dato->RS232 = NO)

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14.2 AJUSTE DE TEMPERATURA: El bloque de incubación del Coatron M1 tiene una temperatura de 37°C. Cuando el LED VERDE está encendido, llene un tubo de reactivo con 1 mL de agua y colóquelo en la posición del reactivo. Colocar un termómetro en el tubo de reactivo y permita que se atempere por 10 minutos. Dejar calentar por 10 minutos y leer la temperatura.

Set temperature °C = 371 (9000-9085) Ejemplo: La temperatura actual de 37.1°C. El valor AD actual es de 9000 y el digital asignado es de 9085. Compare la temperatura que aparece en la pantalla y la del termómetro. Si la temperatura es diferente, ajústela presionando las teclas Up/Down (arriba/abajo). Espere hasta que la temperatura se estabilice a 37°C y aparezca en la pantalla del Coatron M1. Cheque y corrija el sistema de temperatura si no es equivalente a la del termómetro externo. Utilice las teclas UP / DOWN (arriba/abajo) para incrementar o disminuir la temperatura

Termómetro

Tubo de reactivo, con aproximadamente 1 mL de agua

Figura 5. Ajuste de Temperatura

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14.3 CORRECCIÓN DE RESULTADOS: A.) Corrección OD.

OD – CORRECTION PT = 100 La medida de densidad óptica del instrumento se puede corregir mediante un factor para cada prueba. (OD-Correction = 100→ densidad óptica * 1.00 -> no afecta) (OD-Correction = 120→ densidad óptica * 1.20) OD-CORRECCION inferior a 100 causará: • Mayores tiempos de coagulación. Reduce sensibilidad del método (más resultados como +++.+s) • OD-CORRECCION superior a 100 causará: • Menores tiempos de coagulación. Incremento de la sensibilidad del método, la cual puede causar resultados erróneos (resultados en menor • tiempo ! ! ! !) B.) Corrección de Coagulación. Con la corrección de coagulación el instrumento puede corregir el resultado para una mejor correlación con otro sistema. Ejemplo: En otro instrumento un plasma da un PT = 12.1 segundos, en el Coatron M1 el resultado es de 11.0 segundos. Para obtener resultados iguales, el resultado tien e que ser corregido por un factor 1.10 (+10%). Esto se puede hacer introduciendo en CORRECCION DE COAG = 110 (Factor 1.10).

CORRECCION DE COAG PT= 100

C.) Corrección –OD para prueba de Fibrinógeno. Correr un calibrador de 300 mg/dL. El resultado debe ser cercano a 10 seg. Si este esta por arriba/debajo de 10 seg aumente/disminuya la corrección OD ligeramente. D.) Corrección para la prueba de Dímero D. Corrección OD se utiliza para el límite de sensibilidad (100 = 100mOD) Corrección de COAG se utiliza para definir el tiempo de lectura máximo ( 100 = 120 seg)

14.4 CHEQUEO OPTICO: Se recomienda el chequeo óptico, si aumentan los problemas con las determinaciones. Retire la cubeta del óptico. Asegúrese que no hay cubetas colocadas en el óptico.

mw = 11301 004 81 Señales

Alto = 11301 valor digital cuando el LED óptico esta en ON Bajo = 81 valor digital cuando el LED óptico esta en OFF Amp = 004 amplificación actual

Calibración del óptico: presione la tecla “MENU” para recalibrar el óptico.

asegúrese de que la cubeta no esta colocada en el óptico! COATRON M1 1.20

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Rango asignado alto: Rango asingado bajo: Rango asignado amp:

10.000 – 15.000 0- 250 3-20

Cambio manual: presione la tecla “ARRIBA” ó “ABAJO” para cambiar la amplificación. La verificación del óptico se recomienda, si los problemas aumentan. Remover la cubeta del óptico.

Comprobar óptico si, -Canal óptico se bloquea o hay derrame -LED fundido (cambiar el bloque óptico) -Controlador en mal funcionamiento (cambiar) 14.5 DISPARO AUTOMÁTICO: La sensibilidad de la característica de inicio automático se puede ajustar. El valor óptico se requiere cambiar antes de que el instrumento de medición inicie. SET TRIGGER 300

El valor preestablecido es 300. Aumentar el valor si la prueba inicia antes de añadir el reactivo. Disminuir el valor si la prueba no inicia del todo. Colocar 0 para deshabilitar el inicio automático de la prueba. 14.6 INTERFASE RS 232: El puerto de interfase esta establecido para 2400 Baud, 8 Bits, 1 Stop. No paridad NO→ los resultados serán impresos (default)

DATA

RS232 NO →

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Ejemplo de impresión de resultados: 01

01

12.6 s % = 95% I = 1.03 13.2 s % = 85% I = 1.35

MEDIA:

Corrimiento # 1

PT:

Corrimiento # 2 PT: Media

12.9 s % = 90 I = 1.19

SI—el resultado será enviado al host con la sintaxis siguiente: DATA

RS232 SI

→

DATOS DE LA CURVA: Cada 500 ms el valor de la densidad óptica (ej. “123” = 123 mOD) RESULT DATA: [SYS][SN][TYP][NR][TEST][RES][SCALE][RES2][SACLE2][RES3][SCALE3][LF] Delimiter: TAB (para cada dato archivado) SYS: “D1” (Sistema ID) SN: “1234” (Número serial el instrumento) TYP: “S”/”M” (Resultado individual o media del resultado) NR: “12” (número de resultado ID) TEST: “PTB” (Nombre de la prueba) RES1 “12.5” (Resultado 1) SCALE1: “s” (Unidad 1) RES2 “100” (Resultado 2) SCALE2: “%” (Unidad 2) RES3: “1.00” (Resultado 3) SCALE3: “I” (Unidad 3) LF: Línea de alimentación.

Ejemplo: “D1 1234 S PTB: 12.5 seg 100% 1.00 I” 14.7 LIS CON TECAM SMART:

La interfase del Coatron M1 debe usarse para comunicación uni-direccional de algún host de la computadora. El software TECAM SMART ofrece una solución independiente con las siguientes características: COATRON M1 1.20

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Requisitos:

Pentium III 1 GHZ, 128 MB RAM Para Windows 2000 o Windows XP

Base de datos:

Microsoft Access Jet 4.0 SP3 Max 4GB (400.000 resultados)

Recibe resultados incluyendo la curva de reacción. Manejo de resultados con base de datos con funciones de filtros mejorado (SQL) Manejo de pacientes (PID, nombre, sexo y fecha de nacimiento). Reporte de datos filtrados (ej. Imprime resultados de PTB de paciente XY de los últimos 30 días). Módulo estadístico

Figura 6 Manejo de resultados de TECAM SMART

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Figura 7 Base de datos de TECAM SMART

Figura 8. Estadística con TECAM SMART

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REPORTE DE DATOS DE COAGULACIÓN

Figura 9. Reporte de resultados con TECAM SMART

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15. GUIA PARA RESOLUCION DE PROBLEMAS Mensaje de error de sistema

Interpretación y acción correctiva

Durante la carga del equipo: Baja señal detectada. Retire la cubeta y reinicie. Si permanece el error, limpie los ópticos o reemplace el LED o el microcontrolador. Durante el menú de servicio: El Coatron M1 no está operando en su especificación óptica. Esto puede pasar, si: • No hay suficiente luz (por ejemplo con reactivos muy turbios o muestras lipémicas). Cambiar el reactivo. • Hay luz intensa (por ejemplo luz directa del sol). Proteger contra la luz del sol. • El laser LED está quemado. Remplazar el dispositivo. LED Rojo de El poder eléctrico no es suficiente. Servicio esta • Utilice una fuente de poder original. • Cargar la batería, si se usa. encendido LED Verde La temperatura está fuera de rango. Esperar unos minutos. Si el error persiste contactar al servicio técnico. esta apagado Temperatura Ajustar la temperatura.

Falla óptica !

no correcta Siempre repetir la muestra para verificar resultados. +++.+s “No detecta el Posibles razones incluyendo las siguientes: Coágulo” • El tiempo de coagulación es mayor que 300 segundos.

El tiempo de coagulación es menor que 8 segundos. Reactivo Incorrecto El nivel de Fibrinógeno de la muestra es menor de 100 mg/dL (por ejemplo muestras diluidas). Burbujas de aire. • Residuos en cubeta. • Muestras recolectadas inadecuadamente • • OD-Corrección esta programado en cero. Siempre repetir la muestra para verificar resultados. • • •

Tiempo de coagulación Posibles razones incluyendo las siguientes: muy corto • Reactivo incorrecto.

Burbujas de aire. Residuos en cubeta. Muestras recolectadas inadecuadamente Mal ajuste del óptico. Acción: • Usar materiales recomendados. • Ligera disminución del OD-Corrección Incremento del Rango – OD • de Siempre repetir la muestra para verificar resultados. • • • •

Tiempo coagulación muy largo

Posibles razones incluyendo las siguientes: Reactivos incorrectos. • Burbujas de aire. • Bajo nivel de Fibrinógeno. • Residuos en la cubeta. • Muestras recolectadas inadecuadamente • Mal ajuste óptico. • Acción: • Usar materiales recomendados. • Ligera disminución del OD-Corrección • Disminución del Rango – OD

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16. PARTES QUE COMPONEN EL APARATO. Parte

Contenido No. correspondiente al dibujo

Cubierta

1

1, 2, 3

Fuente de poder 90-264 Vac EU

1

No aparece en el dibujo

Fuente de poder 90-264 Vac USA

1


Tablero

1

4

Pantalla

1

12

Sistema a bordo

1

11

Transmisor

1

10

Receptor

1

9

Placa de Montaje

1

5

Distancia M3x16

1

29

Distancia D6xH3

1

18

Bloque Optico

1

8

Placa metálica de calor

1

13

Sensor de Temperatura

1

17

Cable RS232

1

14

Cable de salida DC

1

15

Bloque de calor

1

6

Manual de Operación

1


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17. ESQUEMA DEL EQUIPO EN TERCERA DIMENSION

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Coatron M1

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