Universidad Nacional Autónoma Autónoma de Chota UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE CHOTA . ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA FORESTAL Y AMBIENTAL. Curso: TÉCNICAS BIOLÓGICAS DE DESCONTAMINACIÓN . Alumnos: DIAZ MUÑOZ, Luis Angel; GONZALES VÁSQUEZ, Wilmer. E-mail del Grupo:
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phase seo olus vulgar ulgar is ) en suelos Evaluación del crecimiento de Plántulas de Frijol ( pha contaminados con petróleo I. INTRODUCCIÓN La actividad petrolera puede influir notoriamente en las características físicas y químicas de los suelos. La utilización del suelo con fines de explotación petrolera significa cambios de usos que, en muchos casos, por razones de seguridad, restringen o limitan usos alternos. La idea de usar plantas para limpiar sistemas contaminados no es nueva. nueva. A finales del siglo 19 se propuso el uso uso de plantas en el tratamiento de aguas residuales (Mujica et al., 2006). Las plantas que crecen en suelos con hidrocarburos hi drocarburos como las gramíneas y las leguminosas pueden ser bioindicadores de la calidad del suelo, lo que permite valorar y determinar los factores de riesgo asociados con la exposición de la planta a petróleos nuevo (recién extraído del subsuelo) o intemperizado (expuesto a las condiciones ambientales al menos durante 20 años) y al petróleo acumulado en el suelo por derrames crónicos c rónicos (Mujica et al., 2006). La fitorremediación se fundamenta en el uso de plantas y su microbiota asociada para remover, retener o reducir los contaminantes presentes en el ambiente y puede operar mediante diversos mecanismos que involucran distintas partes de las plantas (Chávez, 2010). La contaminación por petróleo es un problema global que ocasiona efectos negativos significativo en los ecosistemas por el cual la fitorremediación es una alternativa aliada con el medioambiente para la descontaminación de suelos contaminados; se utilizará dos especies especies de plantas Phaseolus (frijol) para la absorción del petróleo a través de su sistema radicular y adhesión en el vulgaris (frijol) para follaje.
II. OBJETIVOS General
Evaluar el crecimiento de Phaseolus vulgaris en suelos contaminados con petróleo
Específicos
Describir el crecimiento de Phaseolus vulgaris vulgaris en suelo contaminado con petróleo. Evaluar el crecimiento de la planta de Phaseolus vulgaris vulgaris bajo distintas concentraciones de petróleo en el suelo.
III. HIPÓTESIS Las plantas que se encuentran en suelos con mayor concentración de petróleo son las que más dificultades tienen para realizar su crecimiento.
IV. MARCO TEÓRICO El Petróleo: El petróleo es la fuente de energía más importante en la actualidad; además es materia prima en numerosos procesos de la industria química. El origen del petróleo es similar al del carbón. En ambos casos, se hallan en las rocas sedimentarias, pero el petróleo procede de la descomposición de materia orgánica (especialmente restos de animales u grandes masas de placton en un medio marino). Su explotación es un proceso costoso que sólo está al alcance de grandes empresas (Bazán, 1984). El petróleo es un recurso fósil que se emplea como energía primaria; sustituyó al carbón que era la fuente principal de energía a finales del siglo XIX. El porcentaje respecto del total de la energía primaria consumida, en un país industrializado, ha ido aumentando desde principios de siglo hasta hace pocos años. La crisis del petróleo, en 1973, motivada por la alarmante subida del precio del petróleo decretada por la OPEP (Organización de Países Exportadores de Petróleo), ha estabilizado el consumo, consiguiendo incluso que varios países diversifiquen su dependencia energética y hagan descender las cifras de las importaciones de petróleo (Bazán, 1984). El petróleo es un líquido de color oscuro, aspecto aceitoso, olor fuerte y densidad comprendida entre 0´8 y 0´95. Está formado por una mezcla de hidrocarburos (Bazán, 1984).
El frijol Dentro del grupo de las leguminosas que poseen semillas comestibles, el frijol común corresponde a una de las más importantes. Actualmente se encuentra distribuido en los cinco continentes y es un componente esencial de la dieta, especialmente en Centroamérica y Sudamérica (Ulloa, Ramírez, & Estela, 2008). Taxonómicamente, el frijol corresponde a la especie del género Phaseolus. Su nombre completo es Phaseolus vulgaris L., asignada por Linneo en 1753, a la tribu Phaseoleae, subfamilia Papilionaideae, familia Leguminosae y al orden Rosales (Ulloa et al., 2008). Habito y forma de vida Hierba de vida corta, enredada en forma de espiral en algún soporte, o erecta en forma de arbusto, con algunos pelillos (Loga, 2017). Tallo De hasta 40 cm de alto los tipos arbustivos y de hasta 3 m de largo las enredaderas (Loga, 2017). Hojas En la base de las hojas sobre el tallo se presenta un par de hojillas llamadas estípulas, estriadas las hojas son alternas, pecioladas, compuestas con 3 hojitas llamadas foliolos ovaladas o rómbicas, con el ápice agudo; en la base de cada foliolo se encuentra un par de diminutas estípulas llamadas estipelas (Loga, 2017). Inflorescencia. Pocas flores dispuestas sobre pedúnculos más cortos que las hojas, ubicados en las axilas de las hojas las flores acompañadas por brácteas estriadas Espinoza (citado por Loga, 2017).
Flores El cáliz es un tubo campanulado que hacia el ápice se divide en 5 lóbulos, 2 de los cuales se encuentran parcialmente unidos, la corola rosa-púrpura a casi blanca, de 5 pétalos desiguales, el más externo es el más ancho y vistoso, llamado estandarte, en seguida se ubica un par de pétalos laterales similares entre sí, llamados alas y por último los dos más internos, también similares entre sí y generalmente fusionados forman la quilla que presenta el ápice largo y torcido en espiral y que envuelve a los estambres y al ovario; estambres 10, los filamentos de 9 de ellos están unidos y 1 libre; ovario angosto, con 1 estilo largo y delgado, con pelos hacia el ápice, terminado en un estigma pequeño (Loga, 2017). Frutos y semillas. Legumbres lineares, de hasta 20 cm de largo, a veces cubiertos de pelillos, semillas globosas, variables (Loga, 2017). Requerimientos Climáticos Y Edáficos Altitud 0-2400 m. 500 - 1000 m. Precipitaciones anuales Requiere de 350 a 400 mm durante el ciclo (Loga, 2017). Partes del frijol:
El frijol es una planta que se adapta muy bien a las condiciones de los suelos de sabana, por otra parte, existe una gran actividad petrolera en las sabanas de los estados Monagas y Anzoátegui, por lo que las posibilidades de que ocurra un derrame petrolero son relativamente altas, el uso potencial de esta leguminosa para la fitorremediación de suelos afectados por petróleo debe ser investigado. El frijol ha demostrado su capacidad de tolerancia a condiciones de suelos contaminados Campos y Ruiz (citados por Bazán, 1984).
Mecanismos de remoción de contaminantes 4.1. Fitorremediación La fitorremediación es considerada a menudo como una alternativa para las tecnologías de remediación convencionales por ser una actividad económicamente sostenible, eficaz y respetuosa con el medio ambiente (Kumar, 1995). En suelos contaminados con hidrocarburos, la biorremediación puede llevarse a cabo con los microorganismos que habitan el suelo y con el establecimiento de plantas; esto último es mejor conocido como fitorremediación. En la fitorremediación se utilizan plantas para recuperar suelos contaminados por compuestos orgánicos como el petróleo, porque éstas remueven y destruyen a los contaminantes; Anderson y Walton (citados por Hernandez, Rubiños, E, & Alvarado, 2004) Lo anterior se debe a que en las raíces de las plantas (zona rizosférica) existe una proliferación de microorganismos del suelo para llevar a cabo la degradación de compuestos orgánicos. Así, se ha demostrado la capacidad que tienen las plantas y su rizosfera en la remoción de contaminantes como insecticidas y herbicidas presentes en el suelo; Walton y Anderson (citados por Hernandez et al ., 2004).
4.1.1. Tecnologías de fitorremediación Dada la problemática que existe en estos suelos, el objetivo principal de los investigadores que aplican la fitorremediación es tratar de recuperar el suelo contaminado y llevarlo a su condición natural para volver a ser cultivado, de preferencia por plantas que originalmente se desarrollaban ahí o por especies que pudieran adaptarse a tales condiciones (Hernandez, Rubiños, E, & Alvarado, 2004). Clasificación taxonómica del frijol. Las técnicas de fitorremediación son de diverso tipo: fitoextracción, fitoestabilización o fitomovilización, fitodegradación, rizodegradación, rizofiltración, fitovolatilización y fitosalinización (Sanz, 2015).
De las cuales se mencionarán las más adecuadas para la fitorremediación en suelos contaminados con petróleo.
Rizodegradación. Es el rompimiento de la estructura molecular de un contaminante orgánico en el suelo a través de la actividad microbiana, la cual es incrementada por la presencia de la zona radical (Schnoor et al ., 1995). Algunos contaminantes que pueden ser tratados mediante esta tecnología son hidrocarburos totales del petróleo, benceno, tolueno, etilbenceno y xileno, así como petróleo crudo, diesel, pesticidas y disolventes clorados (EPA, 2000). La mora ( Morus rubra), la manzana silvestre ( Malus fusca), la naranja china ( Maclura pomifera), la alfalfa ( Medicago sativa), la soya (Glycine max), el frijol ( Phaseolus vulgaris) y ciertos pastos (ej: Panicum virgatum), son plantas utilizadas en esta tecnología Frick et al (citados por Hernandez et al ., 2004).
4.2. Fitorremediación de hidrocarburos. Hernandez, en el año 2004 menciona que “en la limpieza de suelos contaminados mediante tecnología de fitorremediación es importante conocer algunos aspectos que implican la función de la misma”. Tales conceptos son:
a) Efecto rizosfera. b) El papel de las plantas en la degradación. c) El papel de los microorganismos en la degradación. d) Influencia de los factores fisicoquímicos y ambientales sobre la fitorremediación. e) Aspectos a considerar en la práctica de la fitorremediación.
4.2.1. Efecto rizosfera Existen tres mecanismos por los cuales las plantas y los microorganismos remueven suelos y aguas subterráneas contaminadas por petróleo. Estos mecanismos incluyen la degradación, contención y trasferencia de los hidrocarburos del suelo a la atmósfera; Cunningham et al (citados por Hernandez et al ., 2004). En la degradación de hidrocarburos del petróleo, las plantas y los microorganismos están directa e indirectamente implicados. Aunque la degradación puede llevarla a cabo cada uno de manera independiente, la literatura sugiere que la interacción entre
plantas y microorganismos es el mecanismo primario responsable para la degradación de petroquímicos (Frick, 1999).
4.2.2. El papel de las plantas en la degradación La habilidad para asimilar n-alcanos y liberar CO2 se identificó en hojas y raíces de plantas. En general, las rutas metabólicas de conversión de alcanos en las plantas es la siguiente: n-alcano = alcohol primario = ácidos grasos = acetil CoA = varios compuestos. Por tal motivo las plantas indirectamente participan en la degradación de hidrocarburos del petróleo a) suministrando exudados radicales, los cuales originan el efecto rizosférico y aumentan la degradación cometabólica. b) por la liberación de enzimas asociadas con las raíces, capaces de trasformar compuestos orgánicos. c) por los efectos físicos y químicos de las plantas y su sistema radical sobre las condiciones del suelo; Durmishidze & Gunther (citados por Hernandez et al ., 2004). Enzimas de las plantas implicadas en la degradación. Las enzimas excretadas en la rizosfera de las plantas fitorremediadoras juegan un papel fundamental en la degradación de los compuestos orgánicos. La dehalogenasa, nitroreductasa, lacasa y nitrilasa pueden degradar contaminantes de origen orgánico. Las enzimas peroxidasas también degradan contaminantes, pero no existen reportes que indiquen cuál tipo de contaminante degradan; Boyajian y Carreira & Adler et al (citados por Hernandez et al ., 2004). Efectos de las plantas sobre las condiciones físico-químicas del suelo. Las plantas y sus raíces pueden influir indirectamente en la degradación de contaminantes, alterando las condiciones físicas y químicas del suelo. La exploración del suelo permite una mayor interacción (contacto) entre las plantas, los microorganismos y los contaminantes. Las plantas también proveen de materia orgánica al suelo, aun después de morir, Cunningham et al (citados por Hernandez et al ., 2004). V. Operacionalización de variables Variable dependiente. Crecimiento de planta de frijol Variable independiente. Concentración de petróleo VI. MATERIALES Y METODOS 6.1. Materiales Sustrato Semillas de frijol Petróleo (Diésel 2) 8 envases de plástico Probetas Vernier Reglas milimetradas Balanza analítica Estufa
6.2. Preparación de suelos -
-
El sustrato que se utiliza en este ensayo es suelo con materia orgánica, la procedencia de este suelo es de terreno agrícola para ser mezclado con humus de árbol en descomposición de esta manera se estará obteniendo los nutrientes necesarios para el desarrollo adecuado de la planta. Se prepararán un total de 8 macetas con 1 kg del sustrato, en cada maceta se pondrá a germinar la semilla de frijol. En todos los tratamientos los suelos se mantuvieron las mismas condiciones de humedad,
6.3. Instalación de bioensayo Para la instalación del experimento se utilizó un diseño de macetas, un total de ocho macetas dos por cada concentración. El cultivo de frijol fue sembrado directamente en el sustrato rico en nutrientes, una semilla por cada 1 kg de suelo. A los 21 días de haber sembrado el frijol se realizó la contaminación del suelo con el petróleo dando inicio a la evaluación del experimento. Los niveles de petróleo (0, 2, 4 y 8 %), para un total de cuatro tratamientos. Se marcan las botellas y se añade el diésel 2 de acuerdo a como se indica en el siguiente cuadro.
Macetas
Tratamiento
1y2 3y4 5y6 7y8
T1 T2 T3 T4
Cantidad de suelo (g) 1000 1000 1000 1000
Diésel (ml) 0 20 40 80
Concentración de Diésel (%) 0 2 4 8
6.4. Evaluación del experimento - En el inicio del experimento se evalúa la altura de planta, número de hojas, diámetro del tallo. - Se realizarán tres evaluaciones al inicio de la contaminación, a los 15 y 30 días después de la contaminación. - Al final de la evaluación se realizó la medición de longitud de raices, peso húmedo y seco de la raíces y planta. Como se indica en el siguiente cuadro se utilizó esas variables para el inicio, 15 y 30 días después de la contaminación
Tratamiento T1 T2 T3 T4
Altura planta (cm)
Numero de hojas
Diámetro del tallo
Para evaluar las variables de pesos de la planta y raíces, longitud de raíces que se realizó al final del experimento es decir en el día 30, se utilizó el siguiente cuadro.
Tratamiento
Peso húmedo/ peso seco de las húmedo/seco de raíces (g) las plantas (g)
Longitud de las raíces (cm)
T1 T2 T3 T4
VII. RESULTADOS 7.1. Altura de plantas (cm) En la figura 1 se muestra la altura de la planta de frijol ( phaseolus vulgaris), al inicio, a los 15 y 30 días después de haber agregado el petróleo al suelo que contenían a plántulas de frejol de 22 días después de la siembra, la altura al inicio o cuando se agrego era muy uniforme en los cuatro tratamientos, pero en los días de control siguientes indica que en el T1 0% las plantas de frijol fueron de mayor tamaño en cada una de las fechas de evaluación, las plantas de T2 2% tienen una ligera ventaja al T3 4% siguiente, en cambio en el T4 6% la planta de frijol no se adaptó a la concentración de petróleo y murió antes de la segunda fecha de evaluación. Figura 1. Altura de planta (cm) de frijol (phaseolus vulgaris) al inicio, 15 y 30 días después agregar petróleo al suelo, bajo 4 tratamientos (% petróleo) 15
16 14 12
Periodo de evaluación Inicio
) 10 m c ( a 8 r u t l A 6
4
6.7
6
6.8
15 dias 30 dias
4 4.5 2.2
2.1
2.3
2
2.2 0 0
0 T1 0 %
T2 2 %
T3 4 %
T4 6%
7.2. Número de hojas En la figura 2 se muestra el número de hojas de la planta de frijol ( phaseolus vulgaris), al inicio, a los 15 y 30 días después de haber agregado el petróleo al suelo que contenían a plántulas de frejol de 22 días después de la siembra, para el número de hojas de las plantas de frijol, muestra que a los 15, y 30 días después de agregar petróleo al suelo en los tratamientos T2 2% y T3 4% hubo similar comportamiento, superados siempre por el tratamiento T1 0%.
Figura 2. Número de hojas de frijol (phaseolus vulgaris) al inicio, 15 y 30 días después agregar petróleo al suelo, bajo 4 tratamientos (% petróleo) 24
25 20
20 s a j o h15 e d o r e 10 m u N
5
Periodo de evaluación Inicio
14 11
10
11
15 30
7 5
5
5 0 0
0 T1 0 %
T2 2 %
T3 4 %
T4 6%
7.3. Diámetro del tallo (cm) Para el diámetro del tallo de las plantas frijol en la figura 3 se indica que, al inicio, a los 15 y 30 días después de haber agregado el petróleo al suelo que contenían a plántulas de frejol de 22 días después de la siembra, las plantas del T1 0% muestran un mayor grosor del tallo, pero con una ligera ventaja en cuanto a los otros tratamientos. El T4 6% la planta de frijol no se adaptó a la concentración de petróleo y murió antes de la segunda fecha de evaluación. Figura 3. Diámetro del tallo de frijol (phaseolus vulgaris) al inicio, 15 y 30 días después agregar petróleo al suelo, bajo 4 tratamientos (% petróleo) 0.45 0.45
0.39 0.40
) 0.35 m c ( o 0.30 l l a t l 0.25 e d o 0.20 r t e m0.15 á i D0.10
0.39 0.36
0.35 0.32
0.23
0.24
0.24
Periodo de evaluación Inicio
0.24
15 30
0.05
0 0
0.00
T1 0 %
T2 2 %
T3 4 %
T4 6%
7.4. Longitud de raíz (cm) La tabla 1 para la longitud de la raíz del frijol indicó, que en el T 0% la longitud de las raíces de las plantas de frijol tuvo un comportamiento superior a los otros tratamientos que, la longitud de raíz del T4 6% no fue posible medir, ya que la planta murió antes de los primeros 15 días después de haber agregado el petróleo. 7.5. Peso fresco Aéreo (g) La tabla 1 para el peso fresco aéreo del frijol indicó, que en el T 0% de las plantas de frijol tuvo un peso mayor a los otros tratamientos que, el peso fresco del T4 6% no fue posible pesar, ya que la planta murió antes de los primeros 15 días después de haber agregado el petróleo. 7.6. Peso fresco Radicular (g) No se encontraron diferencias significativas (tabla 1) solo en el tratamiento T3 4%, cuyo peso fue menor de 1 y en los otros sobrepasaron este número. 7.7. Peso seco Aéreo (g) En la tabla 1 para el peso seco aéreo del frijol indicó, que en el T 0% de las plantas de no tuvo un peso mayor significante con respecto a los otros tratamientos. 7.8. Peso seco Radicular (g) No se encontraron diferencias significativas solo en el tratamiento T3 4%, cuyo peso fue menor de 1 y en los otros sobrepasaron este número. Tabla 1. Longitud de la raíz (cm), Peso fresco (g) Aéreo y Radicular, Peso seco (g) Aéreo y Radicular de las plantas de frijol (phaseolus vulgaris), bajo 3 tratamientos (% petróleo) Tratamiento T1 0 % T2 2 % T3 4 %
Longitud de las raíz (cm) 24 15 10.5
Peso fresco (g) Aéreo Radicular 6.568 1.860 2.662 1.152 1.679 0.677
Peso seco (g) Aéreo radicular 0.733 0.161 0.499 0.173 0.438 0.099
VIII. DISCUSIONES La contaminación del suelo con petróleo afectó el crecimiento y desarrollo de las plántulas de frijol; encontrándose una tendencia general a disminuir los caracteres del crecimiento en la medida que aumenta la concentración de petróleo. Se observó para los caracteres del crecimiento como, altura de planta, número de hojas, diámetro del tallo un menor desarrollo en el tiempo en la medida que aumenta al 8% la contaminación con petróleo en los suelos, presentándose una muerte temprana por efecto de la mayores niveles de contaminación, el severo daño fisiológico de la planta de frijol en el tratamiento T4 8% , según (Arias et al., 2017) se atribuye a las condiciones adversas que se generan por los cambios físicos y químicos del suelo por los hidrocarburos (aumento del carbono orgánico, concentración de nitrógeno, pH, conductividad eléctrica y contenido de arcilla). Así como por los metales pesados (cadmio, cobre, hierro, zinc y plomo) presentes en el petróleo). Se ha demostrado que la fracción soluble en agua y los
lixiviados de los hidrocarburos del petróleo, reducen el metabolismo y desarrollo fisiológico de las plantas tras un derrame, al inhibir la madurez fisiológica de las raíces y propiciar la reducción en la biomasa foliar (Arias et al , 2017). En la medida que aumenta al 4 % la contaminación con petróleo en los suelos, se presenta un retraso en los caracteres de crecimiento por efecto de mayores niveles de contaminación, esto indica que es posible mediante la utilización de cultivos la recuperación de suelos contaminado con bajos niveles de petróleo, Pérez et al. ( 2011), indican que el petróleo puede afectar la fotosíntesis y el contenido de clorofila en la vegetación, lo que podría generar una baja producción de biomasa. Por ello Mujica et al . (2006) sugieren que la vegetación puede mejorar la biodegradación de los contaminantes a través de la acción microflora de la rizósfera y que la fitorremediación es especialmente apropiada para suelos ligeramente contaminados, por ello Pérez et al . (2011) señalan que el frijol es una planta en la que se han aislado importantes microorganismos ( e.g. rizobacterias, Rhizobium), los cuales tienen la capacidad de proveer nitrógeno y fósforo para que diversos organismos degradadores se desarrollen y actúen sobre las moléculas recalcitrantes, tales como los hidrocarburos. Es conocido que la contaminación por petróleo afecta el desarrollo de las plantas debido a diferentes efectos físicos y químicos. Por una parte, las películas de aceite pueden cubrir las raíces alterando la absorción de agua y nutrientes (Mujica et al ., 2006). Los resultados generados en este bioensayo son similares a los reportados por Arias et al . (2017) que demuestran de forma cuantitativa los daños causados en el desarrollo de plantas de P. vulgaris en presencia de petróleo en el suelo. Resultados similares fueron reportados por Mujica et al . (2006) quienes trabajando con el cultivo de frijol bajo diferentes concentraciones de petróleo y utilizando dos suelos diferentes realizando un total de 8 tratamientos encontraron que la tendencia fue de un mayor desarrollo de la parte foliar de la planta a menor porcentaje de contaminación con petróleo, el peso seco de la raíz de las plantas de frijol siguió una tendencia similar al peso seco del vástago, los autores concluyeron que hay la contaminación de dos suelos con petróleo ocasionó la disminución de los caracteres de las plantas de frijol, especialmente a las concentraciones más altas (6 y 9 %), indicando que las plantas de frijol pueden crecer sin muchas dificultades a una contaminación leve (3 %).
IX. CONCLUSIONES El crecimiento de plantas de frijol ( P. vulgaris) en suelos contaminados con petróleo se ve afectado en sus características de crecimiento como altura, diámetro de tallo y número de hojas en altas concentraciones de petróleo, siendo la planta más sensible a una concentración de 8% que no se adaptó a esta y murió. Se evaluó el crecimiento de raíces y su peso en freso y en seco, de esta manera se determinó que a una concentración moderada T2 2% la planta puede adaptarse y desarrollarse sin muchas dificultades.
X. BIBLIOGRAFÍA Arias, A., Rivera, M. y Trujillo A. (2017). Fitotoxicidad de un suelo contaminado con petróleo fresco sobre Phaseolus vulgaris l . (Leguminosae). Rev. Int. Contam. Ambie. 33 (3) 411-419. Chávez, E. (2010). Efectos de rizósfera, microorganismos y fertilización en la biorremediación y fitorremediación en suelos con petróleocrudo nuevo he istemperizado. redalyc.org , 26, 121-136. EPA, (Environmental Protection Agency). (2000). introduction to phytoremediation. Ohio: cincinnati. Frick, C. F. (1999). assessment of phytoremediation as as in situ technique for cleaning oilcontaminated sites . Canadá: PTAC. Frick, C. M. (1999). Assessment of Phytoremediation as an In-Situ Technique for Clearing Oilcontaminated Sites. Canadá: Department of Soil Science. Hernandez, E., Rubiños, E, J., & Alvarado, J. (2004). restauración de suelos contaminados con hidrocarburos. mexico: ISBN. Kumar, P. D. (1995). Phytoextraction: the use of plants to remove heavy metals from soils. publicaciones ACS. Loga, E. (2017). academia.edu. Obtenido de http://www.academia.edu/22962737/ORIGEN_Y_TAXONOMIA_DEL_FRIJOL Mújica, B., Méndez, N. y Pino, M. (2006). Crecimiento de plántulas de frijol (Vigna unguiculata (L.) Walp.) en dos suelos contaminados con petróleo. Rev. Tecnológica ESPOL. 19 (1), 17-24. Pérez, B., Castañeda, D., Guadalupe, A., Jiménez, T., Tapia A. y Martínez, D. (2011). Efecto del antraceno en la estimulación del crecimiento en maíz y frijol. Rev. Terra Latinoamericana. 29 (1), 95-102. Sanz, S. B. (2015). http://docplayer.es. Obtenido de http://docplayer.es/31285125-Aplicacionde-la-fitorremediacion-a-suelos-contaminados-por-metales-pesados.html
XI. ANEXOS
FIG 01. Primer bioensayo no creció.
FIG 02. Siembra de frijol.
FIG 03 y 04. Evaluación de crecimiento, antes de agregar petróleo
FIG 05 y 06. Evaluación de crecimiento, a los 15 días después de agregar petróleo.
FIG 07 y 08. Evaluación de crecimiento, a los 30 días después de agregar petróleo.
FIG 09 y 10. Medición de peso fresco y seco de parte aérea de frijol.
FIG 11 y 12. Medición de longitud de raíz además de peso fresco y seco de raíces.
