SEPARACIÓN DE COLORANTES POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y EN COLUMNA Y CUANTIFICACIÓN POR ESPECTROFOTOMETRÍA Andrés Santiago Santiago Candil Rozo Rozo 1, Daniela Mora 1, Diego Rodriguez 1 1 Universidad de la Salle, Facultad de Ingeniería Ambiental Sanitaria, !ogot" D#C, Colombia
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RESUMEN
Introducción: $a cromatogra%ía es una técnica de se&araci'n en la cual, los com&onentes de la muestra, se distribuen entre dos %ases de di%erente naturaleza como consecuencia de la variaci'n de velocidad (ue se establece al ser arrastrados &or una %ase m'vil, lí(uida o gaseosa, a través de una %ase estacionaria, s'lida o lí(uida#
Objetivos: ) ) ) )
se&arar se&arar los com&o com&onent nentes es de una mezcl mezcla a de colorante colorantes s usando usando cromatogr cromatogra%ía a%ía en colum columna# na# reco recono noce cerr el e%ect e%ecto o del del camb cambio io de &ola &olari rida dad d de la %ase %ase m'vil m'vil en la se&ar se&arac aci' i'n n de una mezcla# cuanti%ic cuanti%icar ar &or es&ectro es&ectro%otom %otometría etría el el &rimer &rimer colorante colorante (ue (ue salga salga de la columna columna## evaluar evaluar la &urez &ureza a del com&ue com&uesto sto median mediante te en cromato cromatogra%í gra%ía a en ca&a ca&a delgada delgada##
Materiales y métodos: los &rocesos de cromatogra%ía se llevaron a cabo &or columna &or ca&a %ina, adem"s se *izo una cuanti%icaci'n de un colorante en la mezcla &or curve de calibraci'n cromatogra%ía %ía en ca&a %ina se encontr' encontr' un RF de la muestra muestra &roblema &roblema Resultados: +n cromatogra igual igual al RF de la m nitroanil nitroanilina ina de -#. &ara acetato acetato,, -#./ &ara etanol etanol &ara acetato acetato etanol -#.0 DA2I+$A## DI+34 cum&li lier eron on los los ob5e ob5eti tivo vos s &ro& &ro&ue uesta sta &ara &ara los los di%e di%ere rent ntes es ti&o ti&os s de Conc Conclus lusio ione nes: s: Se cum& cromatogra%ía Palabras Clave: Cromatogra%ía, %actor de retardo, &atr'n, %ase m'vil, %ase estacionara
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ABSTRACT
$a crom cromat atog ogra ra%í %ía a es una una técn técnic ica a de se&araci'n en la cual, los com&onentes de la muestr muestra, a, se distri distribu buen en entre entre dos dos
%ase %ases s de di%e di%ere rent nte e natu natura rale leza za,, como como consecuencia consecuencia de la variaci'n de velocidad (ue se establece al ser arrastrados &or
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una una %ase %ase m'vi m'vil, l, lí(u lí(uid ida a o gase gaseos osa, a, a través de una %ase estacionaria, s'lida o lí(uida# $a %ase %ase m'vi m'vill es a(ue a(uell lla a (ue (ue %lu %lue e a través de una %ase estacionaria, arrastrando con ella a los com&uestos de la mezcla# $a %ase estacionaria es a(uella en la cual est"n retenidos los com&onentes de la muestra, a través de la cual %lue la %ase m'vil arrastrando a los mismos# 617 la cromatogra%ía en columna### +n la cromatogra%ía en ca&a %ina 68$C7, la %ase estacionaria es una ca&a de &artículas de unos milímetros de es&esor, %i5adas sobre un so&orte s'lido gene genera ralm lmen ente te de alum alumin inio io,, &l"s &l"sti tico co o vidrio vidrio## Des&u Des&ués és de a&lic a&licar ar una una mezcla mezcla cerca de la &arte in%erior de la &laca seca, el diso disolv lven ente te em&i em&iez eza a a &rod &roduc ucir ir la se&araci'n# $a venta5a &rinci&al de la 8$C es (ue se analizan simult"neamente la muestra el &atr'n, mientras (ue en la cromatogra%ía en colu column mna a las las mues muestr tras as se anal analiz izan an individu individualme almente# nte# Adem"s Adem"s,, las muestras muestras (ue son di%íciles de se&arar, se &ueden reso resolv lver er util utiliz izan ando do dos dos diso disolv lven ente tes s di%erentes &or desarrollo de la &laca en direcciones &er&endiculares# &er&endiculares# 697 $a man manc*a c*a en una &lac laca de 8$C se caract caracteri eriza za &or la dista distanci ncia a (ue recorr recorre e con relaci'n a la distancia recorrida &or la %ase %ase m'vi m'vil# l# +l grado rado de rete retenc nci' i'n n en crom cromat atog ogra ra%ía %ía &lan &lana a de su&e su&er% r%ic icie ie se e:&resa como el %actor de retardaci'n, o índice de retenci'n R%;
● METODOO!"# Montaje cromato$ra%&a en columna Se debe tener un tubo de ensao &reviamente instalado con una cantidad míni mínima ma de algo algod' d'n n en la llav llave e de la columna# +n este este e:&eri e:&erimen mento, to, la column columna a a se enco encont ntra raba ba con con su %ase %ase esta estaci cion onar aria ia com& com&ac acta tada da &or &or la comb combin inac aci' i'n n de la sus&ensi'n 6sílica gel +tanol 0;>7 de la %ase %ase m'vi m'vill 6+ta 6+tano noll 0;>7 0;>7## +s de suma suma im&ortancia nunca de5ar (ue la columna se se(ue# ?osteriormente, se agrega a&ro:imadamente 1 ml de la mezcla a la columna# Se abra la llave de la columna &ara &oder de5ar entrar la muestra, con un &oco de la %ase m'vil se lim&ia las &are aredes de la col column umna cerr cerra ando ndo abrie abriendo ndo la llave llave &ara &ara la entra entrada da de la totalidad de la la mezcla# ?or @ltimo, se &asa a la %ase en d'nde se e:tra e:traer er" " la eluc eluci' i'n n &or &or %rac %racci cion ones es,, es deci decirr, con con la llav llave e cerr cerrad ada a se agre agrega ga suavem suavement ente e la %ase %ase m'vil m'vil 6+tan 6+tanol7 ol7## Se abre abre la llav llave e cuan cuando do se vea vea (ue (ue la &rimera sustancia est" &or salir, recogerla en un vaso &reci&itado lim&io mida el volumen# +ste valor debe ser registrado# Debe tener él cuenta (ue la columna no debe secarse nunca#
RF< dR = dM Donde dR es la distancia recorrida &or la sustancia d M es la distancia recorrida &or
Montaje cromato$ra%&a en 'laca %ina
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a&li a&lic' c' la mues muestr tra a los los &atr &atron ones es m nitro nitroani anilin lina a ro5o ro5o Cong Congo# o# Utiliz Utilizand ando o un ca&i ca&ila larr de vidr vidrio io se tom' tom' &art &arte e de la mezcla inicial &atrones se acercaron suavemente a la &laca o %ase estacionaria, esto se *izo unas > veces &ara asegurar la %i5aci'n de las sustan sustancia cias# s# Una Una vez reali realizad zado o el &aso &aso anterior se llevaron las &lacas a las %ases m'vi m'vile les s (ue (ue %uer %ueron on acet acetat ato o de etil etilo o etanol#
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(ección II Se evidencia como la muestra &roblema los &atro trones avan vanzaro zaron n de mane manera ra vertical en el %rente de la &laca debido a la reacci'n con las %ases m'viles 6%igura#97
AC+8A84
+8A24$
RE()T#DO(
(ección I* Se&araci'n &or CC
Ima$en +, /* Monta5e Se&araci'n &or Cromatogra%ía ca&a %ina
R0 E+ #CET#TO RF
M#? -#.
•
R0 E+ ET#+O
RF
M#? -#./
•
Ima$en +, -* Monta5e Se&araci'n &or CC .olumen .olumen de %racción %r acción obtenida: .#>ml claro Color de %racción: Amarillo claro
RF
2#A -#.
R#C -
2#A -#./
R#C -#B
R0 E+ ET#+O 1 #CET#TO M#? -#.0
D'nde; M#?< Muestra &roblema
2#A -#.0
R#C -#1/
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Ima$en +, Tabla Tabla de datos Conc Concen entr trac ació ión n 2m$3 2m$34 4
#bso #bsorb rban anci ciaa
/55
- 67 5 8
-55
5 69 5 8
7 7 6
56 7 5 /
5
56; 75
/
56/--
Ecuación 'ara obtener concentración de anilina
II7# +n los resultados se &uede observar (ue (ue el com& com&or orta tami mien ento to de la mues muestr tra a &roblema en las di%erentes %ases m'viles, %ue %ue igual al com&ortamiento de la m nitroa nitroanil nilin ina a lo (ue &uede &uede signi% signi%ic icar ar (ue (ue la mues muestr tra a &rob &roble lema ma debe debe tene tener r com&uestos similares al &atr'n mencionado +l valor de R% va de - a 1, siendo -,/ un valor medio
la
A menor R% la sustancia (ueda m"s retenida en la %ase estacionaria A maor R% la sustancia no est" unida con %ue %u erza a la %a %as se esta tac cionaria es arrastrada &or la Fase m'vil
*Ima$en +,8 Curva de calibración de concentración vs absorbancia C
Concentración de la %racción:
III7# +n la imagen se observa los resultados de abso absorb rban anci cia a de una una conc concen entra traci ci'n 'n de nitr nitro o anil anilin ina a en una una diso disolu luci ci'n 'n (ue (ue se determinaron &or medio de trans%erencia de ra raos de luz dond donde e estos stos miden iden mediante la cantidad de luz emitida la luz (ue &asa nos da la cantidad de luz retenida con lo cual esto &uede determ determina inarr la absor absorban bancia cia de luz de la muestra#
CO+C)(IO+E( Concentración de la muestra: •
#+=I(I( DE RE()T#DO( I7# +n &rimera instancia, cabe aclarar (ue muestra columna su %ase estacionaria a se encontraban contaminadas con otra muestra lo cual todo &rimero lim&iarla con el solvente evidentemente nos generar errores al momento de obtener el volumen de la %rac %racci ci'n 'n obte obteni nida da de &aso &aso su absorbancia con ellos, su concentraci'n# Sin embargo, al momento de recolectar la
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A &esar de las in%erencia obtenidos, el ob5etivo %ue logrado, a (ue &or medio del método de la crom cromat atog ogra ra%í %ía a en colu column mna, a, se &udo udo ver ver la se& se&arac raci'n i'n de lo com&onentes de una mezcla# +sas se& se&ara aracione iones s se de%iní %inía an de mane manera ra visu visual al,, en este este caso caso el color color obten obtenido ido de la %racci %racci'n 'n era de un color amarillo mu claro# ?or medio de la es&ectro%otometría su curvas de
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Se evalu' la &ureza del com&uesto mediante en cromat cromatogr ogra% a%ía ía en ca&a ca&a delga delgada da##
RE0ERE+CI#( •
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617*tt&;==9#ul&gc#es=*ege=alma 617*tt&;==9#ul&gc#es=*ege=alma cen=donload=>B=>B>-=se&aracio nesE&orEcromatogra%iaE1#&d% 697*tt&;==blog#ut&#edu#co=docenciae 697*tt&;==blog#ut&#edu#co=docenciae din=%iles=9-1=-B=8I?4S CR4MA843RAFGC>G.DA#&d% 6>7*tt&s;==#uam#es=docencia=5& 6>7*tt&s;==#uam#es=docencia=5& &id=documentos=&racticas=actuales =guion&#&d%
