19
LAPORAN RESMI
LABORATORIUM HEMATOLOGI
"APTT, MASA REKALSIFIKASI, PTT "
Penyusun :
RIBCA ANGGA FEBRILIA
(30114168)
PROGRAM STUDI D III ANALIS KESEHATAN
FAKULTAS KESEHATAN MASYARAKAT
INSTITUT ILMU KESEHATAN
BHAKTI WIYATA
KEDIRI
2014
BAB I
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Hemostasis adalah mekanisme untuk menghentikan dan mencegah perdarahan. Bilamana terdapat luka pada pembuluh darah, segara akan terjadi vasokonstriksi pembuluh darah sehingga aliran darah ke pembuluh darah yang terluka berkurang. Kemudian trombosit akan berkumpul dan melekat pada bagian pembuluh darah yang terluka untuk membentuk sumbat trombosit. Faktor pembekuan darah yang diaktifkan akan membentuk benang-benang fibrin yang akan membuat sumbat trombosit menjadi non permeabel sehingga perdarahan dapat dihentikan.
Jadi dalam proses hemosatasis terjadi 3 reaksi yaitu reaksi vascular berupa vasokontriksi pembuluh darah, reaksi selular yaitu pembentukan sumbat trombosit, dan reaksi biokimiawi yaitu pembentukan fibrin. Faktor-faktor yang memegang peranan dalam proses hemostasis adalah pembuluh darah, trombosit, dan faktor pembekuan darah. Selain itu faktor lain yang juga mempengaruhi hemostasis adalah faktor ekstravascular, yaitu jaringan ikat disekitar pembuluh darah dan keadaan otot.
Pedarahan mungkin diakibatkan oleh kelainan pembuluh darah, trombosit, ataupun sistem pembekuan darah. Bila gejala perdarahan merupakan kalainan bawaan, hampir selalu penyebabnya adalah salah satu dari ketiga faktor tersebut diatas kecuali penyakit Von Willebrand. Sedangkan pada kelainan perdarahan yang didapat, penyebabnya mungkin bersifat multipel. Oleh karena itu pemeriksaan penyaring hemostasis harus meliputi pemeriksaan vasculer, treombosit, dan koagulasi.
Biasanya pemeriksaan hemostasis dilakukan sebelum operasi. Beberapa klinisi membutuhkan pemerikasaan hemostasis untuk semua penderita pre operasi, tetapi ada juga membatasi hanya pada penderita dengan gangguan hemostasis. Yang paling penting adalah anamnesis riwayat perdarahan. Walaupun hasil pemeriksaan penyaring normal, pemeriksaan hemostasis yang lengkap perlu dikerjakan jika ada riwayat perdarahan
Tujuan
APTT
Tes penyaring utama factor koagulasi melalui jalur intrinsic.
Pada pemeriksaan masa rekalsifikasi ini tujuannya adalah untuk menguji adanya kekurangan faktor pembekuan darah pada jalur intrinsik yaitu pada faktor pembekuan V, VIII, IX, XI, XII protrombin dan fibrinogen
Pada pemeriksaan PPT ini tujuannya adalah untuk menguji adanya kekurangan faktor pembekuan darah pada jalur ekstrinsik yaitu pada faktor pembekuan V, VII, X protrombin dan fibrinogen
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
Tinjauan Tentang APTT, Masa Rekalsifikasi dan PTT
APTT
APTT berbeda dengan PT, mengukur aktivitas jalur intrinsik dan umum koagulasi. Pembagian kaskade pembekuan ke dalam intrinsik, ekstrinsik dan umum jalur memiliki sedikit validitas vivo tetapi tetap menjadi konsep yang berguna untuk menafsirkan hasil pemeriksaan laboratorium.
Istilah 'tromboplastin' dalam tes ini mengacu pada pembentukan kompleks yang terbentuk dari berbagai faktor pembekuan plasma yang mengubah prothrombin untuk trombin dan pembentukan berikutnya dari bekuan fibrin.
Istilah 'Diaktifkan Partial Thromboplastin Waktu (APTT)' berasal dari bentuk asli dari tes (dirancang pada tahun 1953) di mana hanya konsentrasi fosfolipid tes dikontrol (yang bertentangan dengan fosfolipid dan konsentrasi aktivator permukaan) dan nama 'tromboplastin parsial' diaplikasikan pada waktu untuk persiapan fosfolipid yang dipercepat pembekuan tetapi tidak memperbaiki waktu pembekuan berkepanjangan plasma haemophilic. Pada dasarnya istilah 'parsial' berarti fosfolipid hadir tapi tidak ada Tissue Factor.
APTT ini juga dikenal sebagai :
Kaolin cephalin Pembekuan Waktu (KCCT) - jangan bingung ini dengan Kaolin Pembekuan Waktu (KCT) yang merupakan tes skrining untuk lupus anticoagulant tetapi yang tidak mengandung cephalin. Cephalin adalah pengganti fosfolipid trombosit.
Partial Thromboplastin Waktu dengan Kaolin (PTTK).
Secara historis, kaolin digunakan sebagai aktivator permukaan. Ia mengikat langsung ke FXII mengakibatkan aktivasi permukaan ke XIIa. XIIa memotong FXI Xia tetapi dengan tidak adanya kalsium, aktivasi faktor berikutnya tidak terjadi. Kaolin jarang digunakan ketika APTT otomatis sebagai opacity membuat deteksi optik endpoint (yaitu pembentukan bekuan fibrin) sulit. Aktivator Umumnya digunakan untuk analisis otomatis termasuk micronized silica dan asam ellagic.
Cephalin adalah pengganti fosfolipid yang menggantikan fosfolipid trombosit dalam ujian (ingat tes menggunakan platelet miskin plasma dan sehingga membutuhkan sumber fosfolipid untuk koagulasi terjadi.)
PROSES PEMBEKUAN DARAH
Proses pembekuan darah yang normal mempunyai 3 tahap yaitu
Fase koagulasi
Koagulasi diawali dalam keadaan homeostasis dengan adanya cedera vascular. Vasokonstriksi merupakan respon segera terhadap cedera, yang diikuti dengan adhesi trombosit pada kolagen pada dinding pembuluh yang terpajan dengan cedera. Trombosit yang terjerat di tempat terjadinya luka mengeluarkan suatu zat yang dapat mengumpulkan trombosit-trombosit lain di tempat tersebut. Kemudian ADP dilepas oleh trombosit, menyebabkan agregasi trombosit. Sejumlah kecil trombin juga merangsang agregasi trombosit, bekerja memperkuat reaksi. Trombin adalah protein lain yang membantu pembekuan darah. Zat ini dihasilkan hanya di tempat yang terluka, dan dalam jumlah yang tidak boleh lebih atau kurang dari keperluan.
Selain itu, produksi trombin harus dimulai dan berakhir tepat pada saat yang diperlukan. Dalam tubuh terdapat lebih dari dua puluh zat kimia yang disebut enzim yang berperan dalam pembentukan trombin. Enzim ini dapat merangsang ataupun bekerja sebaliknya, yakni menghambat pembentukan trombin. Proses ini terjadi melalui pengawasan yang cukup ketat sehingga trombin hanya terbentuk saat benar-benar terjadi luka pada jaringan tubuh. Factor III trombosit, dari membrane trombosit juga mempercepat pembekuan plasma. Dengan cara ini, terbentuklah sumbatan trombosit, kemudian segera diperkuat oleh protein filamentosa (fibrin). (Sylvia A.Price &Lloraine M.Wilson.,2003)
Produksi fibrin dimulai dengan perubahan factor X menjadi Xa, seiring dengan terbentuknya bentuk aktif suatu factor. Factor X dapat diaktivasi melalui dua rangkaian reaksi. Rangkaian pertama memerlukan factor jaringan, atau tromboplastin jaringan, yang dilepaskan oleh endotel pembuluh darah pada saat cedera.. karena factor jaringan tidak terdapat di dalam darah, maka factor ini merupakan factor ekstrinsik koagulasi, dengan demikian disebut juga jalur ekstrinsik untuk rangkaian ini. (Sylvia A.Price &Lloraine M.Wilson.,2003.)
Rangkaian lainnya yang menyebabkan aktivasi factor X adalah jalur intrinsic, disebut demikian karena rangkaian ini menggunakan factor-faktor yang terdapat dalam system vascular plasma. Dalam rangkaian ini, terjadi reaksi "kaskade", aktivasi satu prokoagulan menyebabkan aktivasi bentuk pengganti. Jalur intrinsic ini diawali dengan plasma yang keluar terpajan dengan kulit atau kolagen di dalam pembuluh darah yang rusak. Factor jaringan tidak diperlukan, tetapi trombosit yang melekat pada kolagen berperan. Faktor XII, XI, dan IX harus diaktivasi secara berurutan, dan faktor VIII harus dilibatkan sebelum faktor X dapat diaktivasi. Zat-zat prakalikrein dan HMWK juga turut berpartisipasi, dan diperlukan ion kalsium. (Sylvia A.Price &Lloraine M.Wilson.,2003)
Dari hal ini, koagulasi terjadi di sepanjang apa yang dinamakan jalur bersama. Aktivasi aktor X dapat terjadi sebagai akibat reaksi jalur ekstrinsik atau intrinsik. Pengalaman klinis menunjukkan bahwa kedua jalur tersebut berperan dalam hemostasis. Langkah selanjutnya pada pembentukan fibrin berlangsung jika faktor Xa, dibantu fosfolipid dari trombosit yang diaktivasi, memecah protrombin, membentuk trombin. Selanjutnya trombin memecahkan fibrinogen membentuk fibrin. Fibrin ini pada awalnya merupakan jeli yang dapat larut, distabilkan oleh faktor XIIIa dan mengalami polimerasi menjadi jalinan fibrin yang kuat, trombosit, dan memerangkap sel-sel darah. Untaian fibrin kemudian memendek (retraksi bekuan), mendekatkan tepi-tepi dinding pembuluh darah yang cederadan menutup daerah tersebut. (Sylvia A.Price &Lloraine M.Wilson.,2003.)
Penghentian pembentukan bekuan
Setelah pembentukan bekuan, sangat penting untuk melakukan pengakhiran pembekuan darah lebih lanjut untuk menghindari kejadian trombotik yang tidak diinginkan.yang disebabkan oleh pembentukan bekuan sistemik yang berlebihan. Antikoagulan yang terjadi secara alami meliputi antitrombin III (ko-faktor heparin), protein C dan protein S. Antitrombin III bersirkulasi secara bebas di dalam plasma dan menghambat sistem prokoagulan, dengan mengikat trombin serta mengaktivasi faktor Xa, IXa, dan XIa, menetralisasi aktivitasnya dan menghambat pembekuan. Protein C, suatu polipeptida, juga merupakan suatu antikoagulan fisiologi yang dihasilkan oleh hati, dan beredar secara bebas dalam bentuk inaktif dan diaktivasi menjadi protein Ca. Protein C yang diaktivasi menginaktivasi protrombin dan jalur intrinsik dengan membelah dan menginaktivasi faktor Va dan VIIIa. Protein S mempercepat inaktivasi faktor-faktor itu oleh protein protein C. Trombomodulin, suatu zat yang dihasilkan oleh dinding pembuluh darah, diperlukan untuk menimbulkan pengaruh netralisasi yang tercatat sebelumnya. Defisiensi protein C dan S menyebabkan spisode trombotik. Individu dengan faktor V Leiden resisten terhadap degradasi oleh protein C yang diaktivasi. (Sylvia A.Price &Lloraine M.Wilson.,2003.)
Resolusi bekuan
Sistem fibrinolitik merupakan rangkaian yang fibrinnya dipecahkan oleh plasmin (fibrinolisin) menjadi produk-produk degradasi fibrin, menyebabkan hancurnya bekuan. Diperlukan beberapa interaksi untuk mengubah protein plasma spesifik inaktif di dalam sirkulasi menjadi enzim fibrinolitik plasmin aktif. Protein dalam bersirkulasi, yang dikenal sebagai proaktivator plasminogen, dengan adanya enzim-enzim kinase seperti streptokinase, stafilokinase, kinase jaringan, serta faktor XIIa, dikatalisasi menjadi aktivator plasminogen. Dengan adanya enzim-enzim tambahan seperti urokinase, maka aktivator-aktivator mengubah plasminogen, suatu protein plasma yang sudah bergabung dalam bekuan fibrin, menjadi plasmin. Kemudian plasmin memecahkan fibrin dan fibrinogen menjadi fragmen-fragmen (produk degradasi fibrin-fibrinogen), yang mengganggu aktivitas trombin, fungsi trombosit, dan polimerisasi fibrin, menyebabkan hancurnya bekuan. Makrofag dan neutrofil juga berperan dalam fibrinolisis melalui aktivitas fagositiknya. (Sylvia A.Price & Lloraine M.Wilson.,2003.)
WAKTU PEMBEKUAN DARAH
Kisaran waktu terjadinya pembekuan darah adalah 15 detik sampai 2 menit dan umumnya akan berakhir dalam waktu 5 menit. Gumpalan darah normal akan mengkerlit menjadi sekitar 40% dari volume semula dalam waktu 24 jam.
Prothrombin time (PT) adalah tes darah yang mengukur berapa lama waktu yang dibutuhkan darah untuk membeku. Sebuah tes waktu prothrombin dapat digunakan untuk memeriksa masalah pendarahan. PT juga digunakan untuk memeriksa apakah obat-obat untuk mencegah pembekuan darah bekerja.
Sebuah tes PT juga dapat disebut tes INR. USD (rasio normalisasi internasional) singkatan cara standardisasi hasil tes waktu prothrombin, tidak peduli metode pengujian.
Darah faktor pembekuan yang diperlukan untuk darah menggumpal (koagulasi). Protrombin, atau faktor II, adalah salah satu faktor pembekuan dibuat oleh hati. Vitamin K dibutuhkan untuk membuat faktor-faktor pembekuan protrombin dan lainnya. waktu protrombin adalah tes penting karena memeriksa untuk melihat apakah lima faktor pembekuan darah yang berbeda (faktor I, II, V, VII, dan X) yang hadir. Waktu prothrombin dibuat lagi oleh:
Obat pengencer darah, seperti heparin. Tes lain, diaktifkan waktu tromboplastin parsial (APTT) uji, adalah tes yang lebih baik untuk mengetahui apakah dosis yang tepat heparin sedang digunakan.
Rendahnya tingkat faktor pembekuan darah.
Perubahan dalam aktivitas dari setiap faktor pembekuan.
Tidak adanya faktor pembekuan.
Zat lain, yang disebut inhibitor, yang mempengaruhi faktor-faktor pembekuan.
Peningkatan dalam penggunaan faktor-faktor pembekuan.
Tes lain pembekuan darah, disebut tromboplastin parsial waktu (PTT), langkah-langkah faktor pembekuan lainnya. Tromboplastin parsial waktu dan waktu prothrombin sering dilakukan pada waktu yang sama untuk memeriksa perdarahan masalah atau kesempatan untuk perdarahan terlalu banyak dalam operasi.
Prothrombin time (PT) diukur untuk:
Cari penyebab perdarahan abnormal atau memar.
Periksa untuk melihat apakah obat pengencer darah, seperti warfarin (coumadin), bekerja. Jika tes ini dilakukan untuk tujuan ini, PT dapat dilakukan setiap hari pada awalnya. Ketika dosis obat yang benar ditemukan, Anda tidak perlu begitu banyak tes.
Periksa rendahnya tingkat faktor pembekuan darah. Kurangnya beberapa faktor pembekuan dapat menyebabkan perdarahan gangguan seperti hemofilia , yang dilewatkan dalam keluarga (diwariskan).
Periksa tingkat rendah vitamin K. Vitamin K dibutuhkan untuk membuat faktor-faktor pembekuan protrombin dan lainnya.
Memeriksa seberapa baik hati bekerja. Tingkat protrombin diperiksa bersama dengan tes-tes hati yang lain, seperti aspartat aminotransferase dan alanin aminotransferase.
Periksa untuk melihat apakah tubuh menggunakan sampai faktor pembekuan sangat cepat sehingga darah tidak bisa menggumpal dan perdarahan tidak berhenti. Ini mungkin berarti orang tersebut telah disebarluaskan koagulasi intravaskular (DIC) .
2. Masa Rekalsifikasi
Masa rekalsifikasi merupakan waktu yang dibutuhkan untuk menyusun fibrin dari plasma rendah trombosit dan Ca2+ dengan adanya penambahan CaCl2. Sebenarnya masa rekalsifikasi ini digunakan untuk mengetahui adanya kelainan defisiensi factor intrinsic, yaitu factor pembekuan V, VIII, IX, X, XI, XII, dan fibrinogen serta protrombin. Reagen yang diperlukan adalah larutan kalsium klorida 0.025M dan larutan natrium klorida 0.9%.
Fungsi penambahan CaCl2 adalah untuk mengaktifkan ion Ca2+ yang berfungsi sebagai katalisator terbentuknya fibrinogen karena Ca mengendap saat dilakukan pemusingan, padahal Ca2+ ini diperlukan untuk mempercepat terbentuknya benang fibrin hingga terjadi bekuan.
Pada pemeriksaan masa rekalsifikasi digunakan sampel plasma rendah trombosit, karena semakin banyak jumlah trombosit maka akan semakin singkat masa rekalsifikasinya sehingga akan diperoleh hasil masa rekalsifikasi yang dipercepat.
Untuk memperolehnya, dilakukan tahap-tahap sebagai berikut:
1. Lakukan pengambilan darah vena.
2.Campur 4,5 ml darah dengan 0,5 ml antikoagulan Na.Citrat (perbandingan darah:Na. Citrat=1:9).
3. Centrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama 20 menit.
4. Ambil plasma.
Kecepatan dan lamanya pemusingan harus diperhatikan, karena kurangnya kecxepatan atau waktu pemusingan akan mendapatkan plasma tinggi trombosit. Jika plasma tinggi trombosit, maka akan cepat terbentuk fibrin sehingga mempercepat masa rekalsifikasi.
Berikut sedikit penjelasan mengenai factor pembekuan darah jalur intrinsic:
FactorV : plasma aselerator globulin, yaitu suatu plasma yang mempercepat perubahan protrombin menjadi thrombin.
Factor VIII : antihemofilik globulin (AHG), yaitu suatu factor plasma yang berkaitan dengan factor III trombosit, dan factor Christmas; mengaktifkan protrombin.
Factor IX : factor Christmas, yaitu factor serum yang berkaitan dengan factor III trombosit dan VIIAHG; mengaktifkan protrombin.
Factor X : factor stuart-power, yaitu suatu factor plasma dan serum; aselerator konversi protrombin.
Factor XI :plasma tromboplastin antecedent (PTA), yaitu suatu factor plasma yang diaktifkan oleh factor Hageman (F XII); aselerator pembentukan protrombin.
Factor XII : factor Hageman, yaitu suatu factor plasma; mengaktifkan PTA (F XI).
Contoh penyakit gangguan koagulasi yang berhubungan dengan masa rekalsifikasi adalah hemophilia. Ada dua jenis hemophilia yang secara klinik identik, yaitu:
1. Hemophilia klasik atau hemophilia A, dimana aktivitas factor antihemofilia VIII kurang atau tidak ada.
2. Penyakit Christmas atau hemophilia B, dimana aktivitas factor IX kurang atau tidak ada.
3. PPT
PT Protrombin disintesis oleh hati dan merupakan prekursor tidak aktif dalam proses pembekuan. Protrombin (F II) dikonversi menjadi thrombin oleh tromboplastin untuk membentuk bekuan darah. Pemeriksaan PT digunakan untuk menilai kemampuan faktor koagulasi jalur ekstrinsik dan jalur bersama, yaitu : faktor I (fibrinogen), faktor II (prothrombin), faktor V (proakselerin), faktor VII (prokonvertin), dan faktor X (faktor Stuart). Perubahan faktor V dan VII akan memperpanjang PT selama 2 detik atau 10% dari nilai normal.
PT diukur dalam detik. Dilakukan dengan cara menambahkan campuran kalsium dan tromboplastin pada plasma. Tromboplastin dapat dibuat dengan berbagai metoda sehingga menimbulkan variasi kepekaan terhadap penurunan faktor pembekuan yang bergantung pada vitamin K dan menyebabkan pengukuran waktu protrombin yang sama sering mencerminkan ambang efek antikoagulan yang berbeda. Usaha untuk mengatasi variasi kepekaan ini dilakukan dengan menggunakan sistem INR (International Normalized Ratio). International Committee for Standardization in Hematology (ICSH) menganjurkan tromboplastin jaringan yang digunakan harus distandardisasi dengan tromboplastin rujukan dari WHO dimana tromboplastin yang digunakan dikalibrasi terhadap sediaan baku atas dasar hubungan linier antara log rasio waktu protrombin dari sediaan baku dengan dari tromboplastin lokal.
Bahan pemeriksaan PT adalah plasma sitrat yang diperoleh dari sampel darah vena dengan antikoagulan trisodium sitrat 3.2% (0.109 M) dengan perbandingan 9:1. Darah sitrat harus diperiksa dalam waktu selambat-lambatnya 2 jam setelah pengambilan. Sampel disentrifus selama 10 menit dengan kecepatan 2.500 g. Penyimpanan sampel plasma pada suhu 2-8 oC menyebabkan teraktivasinya F VII (prokonvertin) oleh sistem kalikrein.
PT dapat diukur secara manual (visual), foto-optik atau elektromekanik. Teknik manual memiliki bias individu yang sangat besar sehingga tidak dianjurkan lagi. Tetapi pada keadaan dimana kadar fibrinogen sangat rendah dan tidak dapat dideteksi dengan alat otomatis, metode ini masih dapat digunakan. Metode otomatis dapat memeriksa sampel dalam jumlah besar dengan cepat dan teliti.
Prinsip pengukuran PT adalah menilai terbentuknya bekuan bila ke dalam plasma yang telah diinkubasi ditambahkan campuran tromboplastin jaringan dan ion kalsium. Reagen yang digunakan adalah kalsium tromboplastin, yaitu tromboplastin jaringan dalam larutan(CaCl2). Beberapa jenis tromboplastin yang dapat dipergunakan misalnya
Tromboplastin jaringan berasal dari emulsi ekstrak organ otak, paru atau otak dan paru dari kelinci dalam larutan CaCl2 dengan pengawet sodium azida (misalnya Neoplastine CI plus)
Tromboplastin jaringan dari plasenta manusia dalam larutan CaCl2 dan pengawet (misalnyaThromborelS).
PT memanjang karena defisiensi faktor koagulasi ekstrinsik dan bersama jika kadarnya <30%. Pemanjangan PT dijumpai pada penyakit hati (sirosis hati, hepatitis, abses hati, kanker hati, ikterus), afibrinogenemia, defisiensi faktor koagulasi (II, V, VII, X), disseminated intravascular coagulation (DIC), fibrinolisis, hemorrhagic disease of the newborn (HDN), gangguan reabsorbsi usus. Pada penyakit hati PT memanjang karena sel hati tidak dapat mensintesis protrombin. Pemanjangan PT dapat disebabkan pengaruh obat-obatan : vitamin K antagonis, antibiotik (penisilin, streptomisin, karbenisilin,kloramfenikol, kanamisin, neomisin, tetrasiklin), antikoagulan oral (warfarin, dikumarol), klorpromazin, klordiazepoksid, difenilhidantoin , heparin, metildopa), mitramisin, reserpin, fenilbutazon , quinidin, salisilat/ aspirin, sulfonamide. PT memendek pada tromboflebitis, infark miokardial, embolisme pulmonal. Pengaruh Obat : barbiturate, digitalis, diuretik, difenhidramin, kontrasepsi oral, rifampisin dan metaproterenol.
Faktor yang dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan PT adalah sampel darah membeku, membiarkan sampel darah sitrat disimpan pada suhu kamar selama beberapa jam, diet tinggi lemak (pemendekan PT) dan penggunaan alkohol (pemanjangan PT)
Test PPT ini abnormal / memanjang pada :
Obstructive jaundice
Penyakit-penyakit hepar yang lanjut
Penyakit-penyakit perdarahan pada newborns
Penyakit-penyakit congenital seperti :
Deficiency faktor VII
Deficiency faktor V
Deficiency faktor II
Syndrome nephrotic.
Penderita-penderita yang mendapatkan pengobatan dengan obat-obatanticoagulansia (hal ini memang kita buat memanjang, sering dibuat menjadi 2 kali dari normal, misalnya : PPT kontrol 12,0 detik ; PPT penderita 23 detik).
Pada faktor intrinsic membutuhkan waktu yang lebih lama, agar waktunya menjadi lebih pendek, maka faktor contact diganti dengan kaolin = china clay = bolus alba, dan juga faktor thrombocyte diganti dengan partial thromboplastine (aktivitasnya mirip dengan phospholipid). Jadi disini faktor XII dan faktor XI by pass.
BAB III
PROSEDUR KERJA
PRA ANALITIK
Alat
Waterbath
Tabung serologi
Pipet 1 ml
Rak tabung
Stopwatch
Reagen
Larutan NaCl 0,95 ml
Cacl2
Thrombosit
Na Citrat 3,8%
Plasma citrat
Reagent OBT (Ortho Brain Tromboplastin)
Probandus
Nama : Ribca Angga Febrilia
Umur : 20 tahun
Jenis Kelamin : Perempuan
B. ANALITIK
1. Prinsip
APTT
Kalsium dalam darah penderita diikat oleh antikoagulan yang ditambahkan,sehingga koagulasi tercegah dalam plasma terdapat semua factor koagulasi intrinsic,kecuali kalsium dan thrombocyte ke dalam plasma tersebut ditambahkan kalsium untuk mengaktivasi thrombocyte dalam mensubtitusikan hospolipid dan tambahkan aktivasi kaolin, terjadi pembekuan (coagulasi)
b. Masa rekalsifikasi
Keapada plasma yang rendah trombosit yang tidak mengandung ion Ca ditambahkan sejumlah CaCl2 lamanya.
c. PPT
Kepada plasma diberi dengan sejumlah tromboplastin dan ion kalsium yang optimal dan lamanya waktu untuk menyusun fibrin dapat diukur
2.Prosedur Kerja
APTT
Waterbath dipasang suhunya hingga konstan 37 C dan semua reagen dimasukkan dalam waterbath selama 1-2 menit.
Siapkan tabung serologi ukuran 13 x 100 nm,kemudian isi dengan 0,1 ml plasma citrat
Tambahkan 0,1 ml reagen trombosit,kemudian kocok dan diinkubasi 3-5 menit dalam waterbath 37 C
Tambahkan 0,1 ml cacl2, stopwatch dipasang campur baik-baik.
20 detik kemudian diangkat, dan catat masa pembekuan terbentuknya kekeruhan atau benang-benang fibrin
Masa rekalsifikasi
Diinkubasi di dalam waterbath semua reagen dan plasma
Dipipet sebanyak 0,1 ml PZ
Ditambahkan dengan 0,1 ml plasma citrat dalam tabung serologi
Diinkubasi 37ºC selama 60 -80 detik
Ditambahkan dengan 0,1 ml CaCl2 (stopwatch dinyalakan)
Diinkubasi lagi 60 – 80 detik
Diamati terjadinya bekua tiap 20 detik
PPT (Plasma Protrombine Time)
Diinkubasi di dalam waterbath semua semua reagen dan plasma
Siapkan tabung serologi ukuran 13 x 100 nm,kemudia isi dengan 0,1 ml plasma citrate.Tunggu 1-2 menit pada suhu 370C.
Tambahkan 0,2 ml suspense tromboplastin ,stopwatch dipasang ,campur baik-baik dalam waterbath.
10 detik kemudian diangkat,lihat apakah sudah ada bekuan plasma atau terbentuk kekeruhan .Kalau sudah stopwatch dimatikan dan catat hasilnya.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. POST ANALITIK
1. Interpretasi Hasil
APTT
35 – 45 detik.
Pemeriksaan masa rekalsifikasi
90 – 250 detik.
Pemeriksaan PPT
11 – 16 detik.
2. Hasil
APTT
Didapatkan hasil 40 detik.
Pemeriksan Rekalsifikasi
Di dapatkan hasil 95 Detik
Pemeriksaan PPT
Di dapatkan hasil 12 Detik
DISKUSI
Hal-hal yang perlu diperhatikan pada pemeriksaan hemostasis :
Antikoagulan
Untuk pemeriksaan koagulasi antikoagulan yang dipakai adalah natrium sitrat 0,109 M dengan perbandingan 9 bagian darah dan 1 bagian natrium sitrat.Untuk hitung trombosit antikoagulan yang dipakai adalah Na2EDTA. Jika dipakai darah kapiler, maka tetes darah pertama harus dibuang.
Penampung
Untuk mencegah terjadinya aktivasi factor pembekuan, dianjurkan memakai penampung dari plastic atau gelas yang telah dilapisi silicon.
Semprit dan Jarum
Dianjurkan memakai semprit plastic dan jarum yang cukup besar. Paling kecil nomor 20.
Cara pengambilan darah
Pada waktu pengambilan darah, harus dihindari masuknya tromboplastin jaringan. Yang dianjurkan adalah pengambilan darah dengan memakai 2 semprit. Setelah darah dihisap dengan semprit pertama, tanpa mencabut jarum, semprit pertama dilepas lalu pasang semprit kedua. Darah semprit pertama tidak dipakai untuk pemeriksaan koagulasi, sebab dikhawatirkan sudah tercemar oleh tromboplastin jaringan.
Kontrol
Setiap kali mengerjakan pemeriksaan koagulasi, sebaiknya diperiksa juga satu kontrol normal dan satu kontrol abnormal. Selain tersedia secara komersial, kontrol normal juga dapat dibuat sendiri dengan mencampurkan plasma yang berasal dari 10 sampai 20 orang sehat, yang terdiri atas pria dan wanita yang tidak memakai kontrasepsi hormonal. Plasma yang dipakai sebagai kontrol tidak boleh ikterik, lipemik, maupun hemolisis.
Penyimpangan dan pegiriman bahan
Pemeriksaan koagulasi sebaiknya segara dikerjakan, karena beberapa faktor pembekuan bersifat labil. Bila tidak dapat diselesaikan dalam waktu 4 jam setelah pengambilan darah, plasma disimpan dalam tempat plastik tertutup dan dalam keadaan beku. Untuk pemeriksaan APTT dan assay faktor VIII atau IX, bahan yang dikirim adalah plasma citrat dalam tempat plastik bertutup dan diberi pendingin, tetapi untuk PT dan agregasi trombosit jangan diberi pendingin karena suhu dingin dapat mengaktifkan F VII tetapi menghambat agregasi trombosit.
Pemeriksaan APTT
APTT kontras dengan PT, mengukur aktivitas jalur intrinsik dan umum dari koagulasi. Pembagian kaskade pembekuan ke dalam intrinsik, ekstrinsik dan umum jalur memiliki sedikit di validitas vivo tetapi tetap konsep yang berguna untuk menafsirkan hasil pemeriksaan laboratorium.
Istilah 'tromboplastin' dalam tes ini mengacu pada pembentukan kompleks terbentuk dari berbagai faktor pembekuan plasma yang mengubah protrombin trombin dan pembentukan berikutnya dari bekuan fibrin.
Istilah 'Activated Partial Thromboplastin Waktu (APTT)' berasal dari bentuk asli dari tes (dibuat pada tahun 1953) di mana hanya konsentrasi fosfolipid dari tes itu dikendalikan (yang bertentangan dengan fosfolipid dan konsentrasi aktivator permukaan) dan nama 'tromboplastin parsial' diaplikasikan pada waktu untuk persiapan fosfolipid yang dipercepat pembekuan tetapi tidak memperbaiki kali pembekuan berkepanjangan plasma haemophilic. Dasarnya istilah 'parsial' berarti fosfolipid hadir tapi tidak ada Tissue Factor.
APTT yang juga dikenal sebagai:
1. Kaolin cephalin Pembekuan Waktu (KCCT) - jangan bingung ini dengan Kaolin Pembekuan Waktu (KCT) yang merupakan tes skrining untuk antikoagulan lupus tetapi yang tidak mengandung cephalin. Cephalin adalah pengganti fosfolipid trombosit.
2. Partial Thromboplastin Waktu dengan Kaolin (PTTK).
Secara historis, kaolin digunakan sebagai aktivator permukaan. Ia mengikat langsung ke FXII mengakibatkan aktivasi permukaan untuk XIIa. XIIa memotong FXI untuk Xia tetapi dengan tidak adanya kalsium, aktivasi faktor berikutnya tidak terjadi. Kaolin jarang digunakan ketika APTT otomatis sebagai opacity membuat deteksi optik endpoint (yaitu pembentukan bekuan fibrin) sulit. Aktivator umum digunakan untuk analisis otomatis termasuk micronized silica dan asam ellagic.
Cephalin adalah pengganti fosfolipid yang menggantikan fosfolipid trombosit dalam ujian (ingat tes menggunakan trombosit miskin plasma dan sehingga membutuhkan sumber fosfolipid untuk koagulasi terjadi.)
Pemeriksaan masa rekalsifikasi
Masa rekalsifikasi merupakan waktu yang dibutuhkan untuk menyusun fibrin dari plasma rendah trombosit dan Ca2+ dengan adanya CaCl2. Pemeriksaan ini digunakan untuk mencari adanya kekurangan faktor-faktor pembekuan darah pada jalur intrinsik yaitu faktor pembekuan V,VIII,IX,X,XI,XII,protrombin dan fibrinogen.
Selain faktor tersebut ,masa rekalsifikasi juga dipengaruhi oleh jumlah trombosit. Makin banyak trombosit, makin singkat masa rekalsifikasi. Untuk itu dalam pemeriksaan ini dianjurkan memakai plasma rendah trombosit.
Faktor yang dapat mempengaruhi pemeriksaan:
Pembekuan sampel darah
Sampel darah hemolisis atau berbusa akibat dikocok
Pengambilan sampel darah pada intravena lines
Reaksi-reaksi pada jalur intrinsik digerakkan oleh banyak stimuli yang belum dimengerti dengan jelas. Dua peristiwa yang terjadi adalah perubahan trombosit dan pengaktifan faktor VIII. Perubahan trombosit menghasilkan penggumpalan trombosit yang menetap dan pelepasan secara selektif komponen-komponen tertentu antara lain fosfolipid (platelet faktor III),setelah pengaktifan faktor VIII bersama faktor IX membentuk produk aktivasi, kontak, faktor-faktor pembekuan IX,VIII,fosfolipid dan ion calsium merubah protrombin menjadi trombin.
Pemeriksaan PPT
Pemeriksaan ini digunakan untuk menguji pembekuan darah melalui jalur ekstrinsik dan jalur bersama yaitu faktor pembekuan VII, X, V, protrombin dan fibrinogen. Selain itu juga dapat dipakai untuk memantau efek antikoagulan oral karena golongan obat tersebut menghambat pembentukan faktor pembekuan protrombin, VII, IX, dan X.
Prinsip pemeriksaan ini adalah mengukur lamanya terbentuk bekuan bila ke dalam plasma yang diinkubasi pada suhu 37ºC, ditambahkan reagens tromboplastin jaringan dan ion kalsium.
Hasil pemeriksaan ini dipengaruhi oleh kepekaan tromboplastin yangh dipakai oleh teknik pemeriksaan. Karena itu pemeriksaan ini harus dilakukan duplo dan disertai kontrol dengan plasma normal.
Nilai normal tergantung dari reagen, cara pemeriksaan dan alat, dan alat yang digunakan. Sebaiknya tiap laboratorium mempunyai nilai normal yang ditetapkan sendiri dan berlaku untuk laboratorium tersebut.
Jika hasil PT memanjang maka penyebabnya mungkin kekurangan faktor-faktor pembekuan di jalur ekstrinsik dan bersama atau adnya inhibitor. Untuk membedakan hal ini, pemeriksaan diulang sekali lagi dengan menggunakan campuran plasma penderita dan plasma kiontrol dengan perbandingan 1:1. Bila ada inhibitor, masa protombin plasma tetap memanjang.
Selain dilaporkan dalam detik, hasil PT juga dilaporkan dalam rasio, aktivitas protombin dan indeks. Rasio yaitu perbandingan antara PT penderita dengan PT kontrol. Aktivitas protombin dapat ditentukan dengan menentukan dengan menggunakan kurva standart dan dinyatakan dalam %.
Pemeriksaan PT juga sering dipakai untuk memantau efek pemberian antikoagulan oral. Pemberian kepekaan reagen tromboplastin yang dipakai dan perbedaan cara pelaporan menimbulkan kesulitan bila pemantauan dikerjakan di laboratorium yang berbeda-beda. Untuk mengatasi masalah tersebut ICTH (International Comittee on Thrombosis and Haemostasis) dan ICSH (International Comitte for Standardization in Haematology) menganjurkan agar tromboplastin jaringan yang akan digunakan harus dikalibrasi terlebih dahulu terhadap tromboplastin rujukan untuk mendapatkan ISI (International Sensitivity Index). Juga dianjurkan agar hasil pemeriksaan PT dilaporkansecara seragam dengan menggunakan INR (International Normalized Ratio), yaitu rasio yang dipangkatkan dengan ISI dari reagens tromboplastin yang digunakan.
BAB V
PENUTUP
A. KESIMPULAN
APTT
Jadi, dari pemeriksaan di atas didapatkan hasil 40 detik.
Pemeriksaan masa rekalsifikas
Jadi dari pemeriksaan yang telah di lakukan di dapat hasil 95 detik
Pemeriksaan PPT
Jadi dari pemeriksaan yang telah di lakukan di dapat hasil 12 detik
SARAN
Dalam pelaksanaan praktikum sebaiknya lebih berhati – hati dan teliti dalam melihat hasil.
Praktikan harus mematuhi prosedur kerja untuk mengantisipasi agar tidak terjadi kesalahan dalam praktikum.
Gunakan Alat Pelindung Diri.
Taati peraturan yang ada didalam Laboratorium.
Hindari makan dan minum saat melakukan praktek.
DAFTAR PUSTAKA
Bakta, I Made,Prof.,Dr. 2007. Hematologi Klinik Ringkas. Jakarta : EGC. Halaman 238-239
Setiabudi, Rahajuningsih D. 2009. Hemostasis dan Trombosis. Jakarta : FKUI. Halaman 23-32
Anonim. 2011. Sejarah Pembekuan Darah. http:// www.wikipedia.com, diakses pada tanggal 22 Oktober 2011.
Miletich JP: Activated partial thromboplastin time. In Williams Hematology. Fifth edition. Edited by E Beutler, MA Lichtman, BA Coller, TJ Kipps. New York, McGraw-Hill, 1995, pp L85-86
Greaves M, Preston FE: Approach to the bleeding patient. In Hemostasis and Thrombosis: Basic Principles and Clinical Practice. Fourth edition. Edited by RW Colman, J Hirsh, VJ Marder, et al. Philadelphia, JB Lippincott Co, 2001, pp 1197-1234
Olson JD, Arkin CF, Brandt JT, et al: College of American Pathologists Conference XXXI on laboratory monitoring of anticoagulant therapy: laboratory monitoring of unfractionated heparin therapy. Arch Pathol Lab Med 1998;122:782-798
