Antigenos A y B en saliva INTRODUCCION La saliva es un líquido de la cavidad bucal, bucal , producido por las glándulas salivales, salivales , transparente, transparente, de viscosidad variable, compuesto principalmente por agua, agua, sales minerales y algunas proteínas. proteínas. Se estima que la boca está humedecida por la producción de entre uno y dos litros de saliva al día, durante la vida de una persona se generan unos 38.000. Esta cantidad de saliva es variable ya que va disminuyendo conforme avanzan los años y debido a diferentes tratamientos. La producción de saliva está relacionada con el ciclo circadiano, circadiano , de tal manera que por la noche se segrega una mínima cantidad de saliva; además, su composición varía en función de los estímulos (como el olor o la visión de la comida) aumentando -por ejemplo- el pH ante estos estímulos (cuando en condiciones normales es de 6 a 7). Es segregada por las glándulas salivares mayores (parótida, sublingual sublingual y submaxilar) submaxilar) y menores. La composición es similar a la del plasma. Está compuesta por : Agua, Iones cloruro, Bicarbonato y fosfato, fosfato, Moco, Lisozima, Lisozima , Enzimas, Estaterina e INMUNOGLOBULINAS. La saliva se produce en varias glándulas especializadas que se sitúan bajo la lengua y en el interior de la boca; son las glándulas parótidas y las submaxilarsublingual Ya que las mucinas están compuestas de glicoproteínas, no es de extrañar que los antígenos de los grupos sanguíneos ABO sean producidos en abundancia por las glándulas salivares submaxilar-sublingual y ampliamente distribuidos en la saliva humana. Si una persona es secretora secretora de grandes cantidades cantidades de antígenos de su grupo sanguíneo se encuentran presentes en su saliva, por lo que la capacidad de adhesión de ciertas bacterias a los dientes se ve inhibe o limita en gran medida, con lo que el riesgo de caries se reduce. Los no-secretores apenas segregan el antígeno de su grupo sanguíneo en sus fluidos corporales, corporales, por lo que el riesgo que tienen de sufrir caries es bastante mayor. Asimismo tienen unos niveles inferiores de los anticuerpos anticuerpos IgA en su saliva, lo que también compromete su capacidad de protegerse contra esas bacterias. Las personas con poca higiene bucal mantienen una dentadura libre de caries, mientras que otros que se cepillan los dientes después de cada comida parecen condenados a visitar al dentista cada dos o tres veces por mes. Los estudios muestran que el grupo O –especialmente los no-secretores-parece tener el mayor riesgo de caries, mientras que el grupo con menor incidencia es el grupo A, especialmente los secretores.
MATERIAL
• • • • • • • •
•
•
Mechero Bunsen Frasco de boca ancha Centrifuga clinica Tripie 1 tubo de 13 x 100 mm Solucion salina isotonica 3 pipetas Pasteur con Bulbo Sueros tipificadores anti-A y Anti-B previamente diluidos a la maxima dilucion aglutinante. Eritrocitos Humanos A y B conocidos, en suspensión al 5 % en solucion salina isotonica. 4 Tubos de 10 x 75 mm.
METODO 1.-Colectar 5 a 10 ml de
saliva en un tubo. No estimular la secrecion con chicle o con algun materíal azucarado.
6.- A los tubos A y A testigo agregar una gota de suero anti-A diluido. Al tubo B y B testigo, agregar una gota de suero anti-B diluido. Incubar todos los tubos a tempertura ambiente durante 10 minutos
2.-Diluir la saliva con igual volumen de solucion salina y mantener en baño Maria a ebullición durante 10 minutos, para inactivar las enzimas presentes.
5.- A los tubos marcados A y B agregarles 1 gota de saliva. A los testigos, agregar una gota de solución salina
7.-A cada tubo de la serie A agregar una copa de eritrocitos eritrocitos A al 5%. Cada tubo de la serie B, agregar na gota de eritrocitos B al 5%.
9.-Observar la presencia o ausencia de aglutinación.
3.-Centrifugar 3.-Centrifugar a 3,000 r.p.m. durante 10 minutos y transferir el sobrenadante sobrenadante a otro tubo.
4.-Marcar 4 tubos de la siguiente manera: A, A testigo, B y B testigo.
8.-Mezclar el contenido de cada tubo y centrifugar a 1000 r.p.m. durante 60 segundos
Sistema Rh INTRODUCCION El Antigeno Rh es otro antigeno eritrocitico importante que puede dar lugar a reacciones transfuncionales. Anunque no existe anticuerpos naturales frente los antigenos Rh, las personas que no expresan el antgeno Rhesus D (Rh) (alrededor del 15% de la población) pueden resultar sensibilizadas frente a este antigeno y producir anticuerpos Rh cuando reciben transfusiones de sangre procedentes de donantes que expresan RhD. Los grupos sanguineos Rh (descubierto por Landsteiner y Wiener en 1940) tiene un interés clínico similar a los grupos ABO dada su relación con la enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN) y su importancia en la transfusión. ¿Qué es el Rh? En 1940, el Dr. Landsteiner descubrió otro grupo de antígenos que se denominaron factores Rhesus (factores Rh), porque fueron descubiertos durantes unos experimentos con monos Rhesus. Las personas con factores Rhesus en su sangre se clasifican como Rh positivas; mientras que aquellas sin los factores se clasifican RH negativas. Las personas Rh negativas forman anticuerpos contra el factor Rh, si están expuestas a sangre Rh positiva. ¿Por qué es importante saber qué Rh tiene una persona? La presencia de anticuerpos contra los antígenos de la sangre determina las compatibilidades e incompatibilidades de los grupos sanguíneos. La transfusión de sangre entre grupos compatibles generalmente no causa ningún problema. La transfusión de sangre entre grupos incompatibles origina una respuesta inmune contra las células que portan el antígeno y produce una reacción a la transfusión. El sistema inmune ataca las células de la sangre donada, causando su fragmentación (hemolización). Esto puede causar serios problemas, incluyendo temperatura alta, presión arterial elevada, taquicardia, insuficiencia renal y shock. Los antígenos también están presentes en otros componentes de la sangre, como los glóbulos blancos, las plaquetas y las proteínas del plasma. Estos componentes también causan un tipo de reacción similar a la transfusión como shock anafiláctico grave, hipotensión, bronco espasmo, urticaria, púrpura-post-transfusional, diarrea, hepatitis. Hoy en día, toda la sangre para transfusión es verificada cuidadosamente. La enfermedad del Rh es provocada por una madre Rh- que concibe un hijo Rh+. Los anticuerpos de la sangre materna destruyen los Rh+ del bebé. Si la madre piensa tener un segundo hijo debe aplicarse una vacuna que elimina los anti-Rh, llamada la gammainmunoglobulina. Ésta debe ser aplicada dentro de las 72 horas después del primer parto, ya que si se tiene un segundo bebe con Rh+ la madre producirá anti-Rh en exceso que destruirá la sangre del hijo, produciendo una enfermedad llamada Eritoblastosis fetal (anemia severa), si el hijo nace, por que por la producción en exceso de los anti-Rh el hijo puede morir intrauterinamente.
MATERIAL • • • • • • •
Centrifuga clinica 1 baño Maria a 37 0C. 2 tubos de 10 x75 mm Suero tipificador anti-D comercial Solucion de albumina bovina al 22% Suero de Coombs Solucion salina isotonica.
METODO 1.-Tomar una muestra de sangre de manera similar como se describio en el inciso para determinar en el inciso 1 para determinar sistema ABO 6.-Buscar la presencia de aglutinación, primero en el autotestigo y después en el otro tubo
2.-Marcar dos tubos, uno con Rh y otro como autotestigo. Colocar en cada uno una gota de eritrocitos
5.- Centrifugar ambos tubos durante 60 segundos a 1000
7.-Si el resultado es NO aglutinación, entonces se procede a la fase con antiglobulina.
3.-Al primer tubo (Rh) agregar una gota de suero antiD y agitar suavemente
4.-Al segundo (autotestigo) agrgar una gota de albumina al 22% y
8.-Incubar ambos tubos a 37 0C durante 30 minutos y lavar 3 veces con solucion salina isotonica centrifugando a 3,400 r.p.m durante dos minutos. Después de la ultima centrifugacion desechar el sobrenadante y agregar al paquete celular una gota de suero de Coombs (anti-globulina humana)
9.-Resuspender suavemente el paquete celular y centrifugar ambos tubos a 1000 r.p.m. durante 60 segundos.
10.-Buscar la presencia de aglutinación
CUESTIONARIO 1. ¿Qué causa la intolerancia de Rh? La mayoría de la gente tiene sangre de factor Rh-positivo. Esto significa que producen el factor Rh, una proteína hereditaria que se encuentra en la superficie de sus glóbulos rojos. Alrededor del 15 por ciento de los individuos de raza blanca y el 7 por ciento de los de raza afroamericana carecen del factor Rh y son considerados Rh-negativos. La condición negativa de su factor Rh no afecta la salud de estas personas en absoluto. La intolerancia de Rh de los neonatos ocurre cuando existe una falta de compatibilidad entre la sangre de la madre y la de su feto 2. ¿Qué consecuencias puede tener una madre que contenga Rh negativo y el hijo Rh positivo y que se realiza en esos casos?
Cuando la madre de un bebé es Rh-negativa y el padre es Rh-positivo, es posible que el bebé herede la sangre Rh-positiva de su padre. En este caso existe el peligro de que algunos de los glóbulos rojos de la sangre Rh-positiva del bebé penetren en el flujo sanguíneo de la madre durante el embarazo y, especialmente, durante el parto y el nacimiento. Como los glóbulos rojos que contienen el factor Rh son extraños para el sistema orgánico de la madre, su cuerpo trata de eliminarlos mediante la producción de anticuerpos. Esta activación de la respuesta inmune de la madre se denomina sensibilización
3. ¿Cómo funciona la RhIg? La RhIg contiene anticuerpos contra el factor Rh. Estos anticuerpos se adhieren rápidamente a las células Rh-positivas del feto que se encuentran en el flujo sanguíneo de la madre y ayudan a destruirlas. Como consecuencia de esto, el cuerpo de la madre no produce anticuerpos contra las células Rh-positivas del feto. La protección que brinda la RhIg sólo perdura durante unas 12 semanas, por lo que es necesario repetir el tratamiento durante cada embarazo y ante las situaciones descritas más arriba en que las células sanguíneas del feto pueden mezclarse con la sangre de la madre.
PRUEBA COOMBS DIRECTA
INTRODUCCION
La prueba de la antiglobulina humana permite detectar e identificar inmunoglobulinas y/o componentes del complemento unidos a hematíes, ya que, añadido a hematíes sensibilizados producirá su aglutinación a condición de que dichos hematíes hayan sido lavados a fondo con suero salino fisiológico para eliminar las proteínas plasmáticas que no estén unidas específicamente a los mismos. PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA
Detecta loa anticuerpos o componentes del complemento fijados in vivo en los hematíes de un paciente. Por ello, podemos aplicar dicha prueba al estudio de la enfermedad hemolítica del recién nacido y de las anemias hemolíticas, ya sean autoinmunes o inducidas por fármacos y de las reacciones transfusionales.
PRUEBA DIRECTA · Enfermedad hemolítica del recién nacido · Anemia hemolítica por autoanticuerpos · Anemia hemolítica debido a fármacos · Investigación de reacciones transfusionales
DUDAS RESUELTAS 1.- ¿Cuáles son los valores normales?
Coombs directo negativo para eritrocitos y Coombs indirecto negativo para el suero 2.- En que padecimientos la prueba de Coombs directa da resultados anormales? • •
• • • • • • •
Anemia hemolítica autoinmunitaria sin otra causa subyacente Anemia hemolítica inducida por medicamentos (muchos medicamentos han sido asociados con esta complicación) Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica del recién nacido) Mononucleosis infecciosa Infección por micoplasma Sífilis Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno linfoproliferativo Lupus eritematoso sistémico u otra afección reumatológica Reacción a transfusión como la ocasionada por unidades de sangre de compatibilidad impropia.
3.-¿Cuándo es negativo el Coombs directo?
En anemias hemolíticas por defecto intrínseco de los hematíes (hemoglobinopatías, enzimopatías, membranopatías). 4.-¿Qué otro nombre se le da a la prueba de Coombs directo?
Prueba de antiglobulina directa
MATERIAL • • •
• • •
Centrifuga clínica Baño Maria a 37 grados C. Suspensiones de eritrocitos problema y eritrocitos normales previamente lavados y al 2%. Solución salina isotónica. Suero de Coombs. 2 tubos de ensaye de 13x100 mm.
DIAGRAMA DE FLUJO
Colocar en un tubo de ensaye 2 gotas de la suspensión al 2% de los GR problema.
Centrifugar los tubos a 1000 r.p.m durante 60 seg.
Añadir 2 gotas del suero de Coombs
Preparar de la misma forma en un tubo que contenga una suspensión de GR normales y suero de Coombs (testigo negativo de suero de Coombs).
Desprender el botón suavemente y buscar la presencia de aglutinación.
NOTA; la integración de los eritrocitos problema con el suero de Coombs indica que dichos eritrocitos están recubiertos con anticuerpos específicos. El tubo testigo no debe presentar aglutinación.
PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA
Detecta los anticuerpos o los componentes del complemento fijados in vitro a los hematíes durante un tiempo de incubación en el laboratorio. Tiene aplicación en el estudio de anticuerpos en un suero problema a través de hematíes de composición antigénica conocida (hematíes de escrutinio, paneles de hematíes, etc.), determinación de antígenos eritrocitarios a través de antisueros específicos y, por último, en las pruebas de compatibilidad pretransfusional. El reactivo antiglobulina que se utiliza básicamente en todas las aplicaciones indicadas es un suero poliespecífico que contiene principalmente anti-IgG y anti-componente C3d del complemento, pudiendo contener además anticuerpos de otras especificidades: anti IgM, anti-IgA, anti-C3b, etc., pero no es conveniente que contenga anti-C4, ya que dicha especificidad no sólo carece de significado para el diagnóstico, sino que los resultados positivos debidos a la misma pueden confundir por tratarse de positivos falsos. En una prueba de antiglobulina directa positiva con el suero poliespecífico, puede tener interés investigar, mediante los sueros antiglobulina monoespecíficos, el tipo de anticuerpo unido a los hematíes. Siempre que en los hematíes se detecte algún anticuerpo fijado, se puede separar mediante un proceso de elución y proceder a su estudio. Si únicamente están fijados componentes del complemento, no se puede efectuar ninguna elución pero ello constituye un dato útil para el diagnóstico PRUEBAS INDIRECTA · Investigación de anticuerpos · Pruebas cruzadas · Fenotipos eritrocitarios Reactivo antiglobulina Los diversos sueros antiglobulina inmunoespecíficos se obtienen de modo análogo a los poliespecíficos, pero se utilizan las distintas fracciones separadas y purificadas para inyectar a los animales destinados a producir el reactivo, aunque en la actualidad se obtienen reactivos de calidad excelente gracias a los métodos de obtención de anticuerpos monoclonales. Para los estudios de anticuerpos irregulares en sueros problema y las pruebas cruzadas, se ha cuestionado la utilidad de la presencia de anticomplemento en los reactivos antiglobulina humana.
DUDAS RESUELTAS
1.- ¿Para qué se realiza el Coombs indirecto?
En pruebas cruzadas (transfusiones), detección de anticuerpos, anemia hemolítica del recién nacido en la madre. 2.- ¿Qué es la enfermedad hemolítica del recién nacido?
Es una enfermedad que se debe a la destrucción de los hematíes fetales por anticuerpos (IgG) maternos, que se produce cuando la madre es Rh negativa y el feto Rh positivo. Al nacer se debe determinar la hemoglobina y bilirrubina en la sangre de cordón umbilical y realizar un test de Coombs directo en los hematíes del recién nacido. 3.- ¿Se puede prevenir la enfermedad hemolítica del recién nacido?
SI, con el fenotipaje de parejas, en aquellas parejas que la mujer sea Rh negativa deben ser tipadas con relación al Rh. Si el compañero de una mujer sensibilizada es Rh positivo homocigoto, todos los fetos estarán afectados con la enfermedad hemolítica del recién nacido; si es heterocigoto existe un 50 % de probabilidades de que cada feto sea Rh negativo y en consecuencia no presente dicha enfermedad. 4.-¿Qué otro nombre se le da a la prueba de Coombs indirecto?
Prueba de antiglobulina indirecta
MATERIAL • • • • • • • •
Centrifuga clínica Baño Maria a 37°C. Suspensión de eritrocitos de grupo O Rh positivo al 5 %. Suero problema Suero de Coombs Solución salina isotónica 3 tubos de ensaye de 13x100mm Suero anti-D diluido a titulo subaglutinante.
DIAGRAMA DE FLUJO
Colocar en un tubo de ensaye etiquetado como problema 2 gotas de suero problema y añadir 2 gotas de la suspensión de GR al 5% de GR O Rh positivos.
Centrifugar todos los tubos a 1000 r.p.m. durante 60 segundos
Desprender suavemente los GR sedimentados y buscar aglutinación. En caso de ser negativa o débilmente positiva los GR se resuspenden y se incuban a 37°C durante 20 min.
Desprender el botón suavemente y buscar aglutinación.
Colocar en un segundo tubo etiquetado como testigo negativo 2 gotas de soln. Salina isotonica y 2 gotas de la suspensión al 5% de GR O Rh positivos.
Colocar un tercer tubo etiquetado como testigo positivo 2 gotas de suero antiD comercial diluido a titulo subaglutinante y 2 gotas de la suspensión al 5% de GR O Rh positivos. Lavar los GR por centrifugación con soln. Salina una sola vez, y después de decantar resuspender en la soln. Salina remanente, añadir 2 gotas de Coombs.
Mezclar y centrifugar a 1000 r.p.m durante 60 seg.
GRUPO SANGUINEOS
INTRODUCCION
Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen de los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los antígenos y el factor RH. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock , o muerte. Los antígenos
Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en la superficie de sus glóbulos rojos (de ahí que se denomine "O" y no "cero", pues procede de la palabra alemana Ohne que significa Sin) pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO. Herencia del tipo A,B,O .
Para tener una visíon más amplia de como se produce la herencia genética se puede ver el artículo Gregor Mendel .
Son controlados por un solo gen con tres alelos: O (SIN, por no poseer los antigenos ni del grupo A ni del grupo B), A, B. Los epítopos responsables son carbohidratos que aparecen en glicoesfingolípidos de membrana y también en glucoproteínas. El gen H codifica la enzima fucosil transferasa, que adiciona fucosa a una cadena oligosacarídica precursora. Los tres últimos azúcares de la cadena se denominan antígeno H (Figura 1). En un locus aparte está el sistema ABO, con tres alelos. El alelo A codifica una transferasa que une N-acetil
galactosamina a la cadena H, mientras que el alelo B codifica una transferasa que une una galactosa. El alelo O no produce transferasa y por tanto no modifica la sustancia H. El azúcar unido al carbono 3 de la galactosa determina la actividad antigénica. La galactosa no acepta azúcar en el carbono 3 a no ser que haya fucosa unida al carbono 2. El alelo A da tipos A, el B tipos B y el alelo i tipos O siendo A y B alelos dominantes sobre i. Así, las personas que heredan dos alelos ii tienen tipo O; AA o Ai dan lugar a tipos A; y BB o Bi dan lugar a tipos B. Las personas AB tienen ambos fenotipos debido a que la relación entre los alelos A y B es de codominancia. Por tanto, es prácticamente imposible para unos progenitores AB el tener un hijo con tipo O.
Fenotipo Bombay
Una posible explicación a este hecho es que el hijo o los progenitores clasificados como tipo O tengan en realidad el, muy raro, fenotipo Bombay; ambos han heredado dos alelos recesivos del gen H, (su grupo sanguíneo es O h y su genotipo es "hh"), y por tanto no producen la proteína "H" que es la precursora de los antígenos A y B. De esta forma no supone ningún problema la presencia de anticuerpos A o B en el suero pues los antígenos respectivos no son producidos al no existir su precursor. Las escasas personas con este fenotipo no expresan el antígeno "H" en sus glóbulos rojos y, por tanto, tampoco producen antígenos A o B. Sin embargo sí producen anticuerpos para H (que está presente en todos las glóbulos rojos excepto en aquellos con fenotipo hh) así como para A y B y por tanto sólo son compatibles con donantes del mismo tipo hh, es decir, las personas con el grupo sanguíneo con el fenotipo Bombay pueden ser únicamente transfundidas con personas del mismo grupo sanguíneo . Herencia del factor Rh
El factor Rh es heredado de la misma forma, con la diferencia de que hay dos alelos y el Rh es dominante. La enfermedad del Rh es provocada por una madre Rh- que concibe un hijo Rh+. Los anticuerpos de la sangre materna destruyen los Rh+ del bebé. Si la madre piensa tener un segundo hijo debe aplicarse una vacuna que elimina los anti-Rh, llamada la gammainmunoglobulina. Ésta debe ser aplicada dentro de las 72 horas después del primer parto, ya que si se tiene un segundo bebe con Rh+ la madre producirá anti-Rh en exceso que destruirá la sangre del hijo, produciendo una enfermedad llamada Eritoblastosis fetal (anemia severa), si el hijo nace, por que por la producción en exceso de los anti-Rh el hijo puede morir intrauterinamente.
Compatibilidad
Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal . Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que es un receptor universal . La tabla que sigue indica las compatibilidades entre grupos sanguíneos. Por ejemplo, una persona de grupo A- podrá recibir sangre O- o A- y donar a AB+, AB-, A+ o A-. Receptor
Donante O- O+ B- B+ A- A+ AB- AB+
AB+
X X X X X X X
AB-
X
A+
X X
X X
A-
X
X
B+
X X X X
B-
X
O+
X X
O-
X
X
X
X
X
X
Frecuencia
La distribución de los grupos sanguíneos en la población humana no es uniforme. El más común es O+, mientras que el más infrecuente es AB-. Además, hay variaciones en la distribución en las distintas subpoblaciones humanas. Tipo Frecuencia O+
39%
A+
33%
B+
9%
O-
7%
A-
6%
AB+ 3% B-
2%
AB- 1%
MATERIAL •
Centrifuga clínica.
•
Torundas con alcohol
•
6 tubos de ensaye de 12x75 mm.
•
3 pipetas Pasteur.
•
Jeringa desechable de 5 ml con aguja de 12x32 mm.
•
2 tubos de 13x100 mm.
•
5 aplicadores desechables.
•
Sueros tipificadotes anti-A, anti-B y anti-AB.
•
Solución de albúmina bovina al 22%.
•
Eritrocitos humanos tipo A, B y O previa y correctamente
tipificados, en suspensión al 15% (solución salina isotónica).
DIAGRAMA DE FLUJO
Obtener suero mediante la extracción de 5 ml de SP en un tubo 13x100
Centrifugar a las siguientes condiciones: 3,400 r.p.m. 15”
Rotular 3 tubos con las siguientes leyendas: Anti-A, Anti-B, Anti-AB y Desprender con agitación suave el botón de las células, e inclinarlo hasta la posición horizontal para apreciar la Del tubo de SP. Extraer eritrocitos del fondo del tubo que no estén atrapados en el coagulo y realizar un lavado con
En los tubos marcados con A, B y O, Colocar una gota de del suero del individuo y agregar 2 gotas de la suspensión al 5% de GB previamente tipificados. Mezclar suavemente.
Eliminar el sobrenadante y resuspender con NaCl al 5%. Añadir una gota de esta Centrifugar a las siguientes condiciones: 3,400 r. .m. 15” o 1000
Agregar una gota de suero comercial anti-A, B y AB según corresponda a los primeros 3 tubos marcados. Añadir al tubo de autotestigo una gota de albúmina al 22%, mezclar suavemente.
Observar los sobrenadantes contra un fondo blanco, ara detectar hemólisis
RESULTADOS
Características y reacciones de los cuatro tipos sanguíneos ABO
DUDAS RESUELTAS
1. Que es una antígeno? Un antígeno es una molécula (generalmente una proteína o un polisacárido) de superficie celular , que puede inducir la formación de anticuerpos. Hay muchos tipos de moléculas diferentes que pueden actuar de antígenos, como las proteínas, los polisacáridos y, más raramente, otras moléculas como los ácidos nucleicos. Cada antígeno está definido por su anticuerpo, los cuales interactúan por complementariedad espacial. La zona donde el antígeno se une al anticuerpo recibe el nombre de epítopo o determinante antigénico, mientras que el área correspondiente de la molécula del anticuerpo es el paratopo. 2. Que pasa si la madre es Rh- y el feto es Rh + y no se detecta? Estos niños nacen, si sobreviven, con una especie de ictericia, la eritroblastosis, y podrán sobrevivir, solamente si se les practica inmediatamente una transfusión total de sangre, con lo que se eliminaría la presencia de los anticuerpos a los antígenos D del cuerpo del niño. Más niños no podrían sobrevivir, ya que la producción de anticuerpos se estimuló por el nuevo contacto. Para evitar esas complicaciones, se inyecta actualmente a las madres Rh-negativas, que han dado a luz a un niño Rh-positivo, un suero con anticuerpos al antígeno D, inmediatamente después del nacimiento del niño. Ellos ocupan los antígenos en los glóbulos que han penetrado y evitan así que el sistema inmunológico materno tenga contacto con el antígeno D y de esa manera no produzca anticuerpos al antígeno D.
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA
INTRODUCCION
Todos los procedimientos de estudio pre-transfusionales deben proporcionar la siguiente información acerca de ambos, el paciente y las unidades de sangre: • • •
Grupo ABO y anticuerpos Tipo Rh D Presencia de otros anticuerpos contra los glóbulos rojos que podrían causar hemólisis en el paciente.
El banco de sangre juega una parte central en asegurar que los pacientes reciban sangre compatible. Brevemente, es responsable de las siguientes tareas. 1. Asegurar que solo unidades de sangre que han sido estudiadas y encontradas negativas para infecciones transmisibles por transfusión sean aceptadas para pruebas de compatibilidad. 2. Estudiar cada componente sanguíneo para determinar el grupo ABO y Rh y etiquetarlo claramente y correctamente con el grupo. 3. Chequear que cada formulario de solicitud de sangre ha sido completado totalmente por el médico que indicó la sangre al paciente y que la información coincide con aquella en el tubo con la muestra de sangre del paciente. 4. Estudiar la muestra de sangre del paciente para determinar el grupo ABO y Rh y efectuar la detección de anticuerpos. 5. Seleccionar el producto sanguíneo más apropiado para el paciente. 6. Efectuar una prueba de compatibilidad (prueba cruzada) para estudiar los glóbulos rojos del donante contra el suero del paciente y asegurar que sangre de un grupo ABO y Rh segura es proporcionada para el paciente. 7. Etiquetar las unidades de sangre compatibles específicamente para el paciente y despacharlas o guardarlas disponibles para entrega inmediata. Típicamente, el banco de sangre reservará estas unidades por un máximo de 48 horas después del momento en que estas fueron solicitadas. Si se ha despachado sangre sin pruebas de compatibilidad en una emergencia, esto debe ser claramente indicado en la etiqueta de compatibilidad. 8. Asegurar que todos los otros chequeos y estudios han sido completados y registrados cuidadosamente. 9. Despachar los productos correctos en concordancia con los procedimientos locales.
Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal . Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que es un receptor universal . La tabla que sigue indica las compatibilidades entre grupos sanguíneos. Por ejemplo, una persona de grupo A- podrá recibir sangre Oo A- y podrá donar a AB+, AB-, A+ o A-. entre grupos sanguíneos Tabla de compatibilidad
MATERIAL •
Centrifuga clínica.
•
Baño Maria a 37 grados.
•
2 jeringas desechables de 5 ml con aguja de 21x32mm.
•
Tubos de 10x75 mm.
•
Pipetas Pasteur.
•
Suero de Coombs.
•
Solución salina isotónica.
•
Solución de albúmina al 22%.
•
Suspensión de eritrocitos (lavados) al 5% en solución salina isotónica tanto del donador como del receptor.
•
Suero del donador y del receptor.
DIAGRAMA DE FLUJO
Fase I. salina rápida: En un tubo marcado como PM (prueba mayor), colocar 2 gotas de la suspensión de GB del donador y dos gotas del suero receptor.
En un segundo tubo marcado pm (prueba menor), colocar 2 gotas de la suspensión de GB del donador y dos gotas del suero receptor.
Centrifugar ambos tubos a 1000 r.p.m. por 1 min.
.
Observar el sobrenadante en busca
Resuspender suavemente el botón de los eritrocitos en busca de a lutinación Fase II. Albumina:
En los tubos de la fase 1 agregar dos Incubar a 37 grados durante 15 min . Centrifugar a 1000 r.p.m. durante 1
Resuspender suavemente el botón de GR y buscar la presencia de a lutinación.
Fase III. Prueba indirecta de Coombs:
Centrifugar a 3400 r.p.m. por 2 min. Lavar 3 veces los eritrocitos de ambos
Después del última lavado agregar dos .
Resuspender nuevamente el botón de eritrocitos y buscar la presencia de a lutinación
DUDAS RESUELTAS
Que tipos de transfusión se hacen? El fraccionamiento de la sangre permite administrar de forma adecuada a cada paciente el componente de la sangre que realmente le hace falta. Así, se pueden realizar los siguientes tipos de transfusiones: •
•
•
•
•
•
•
Transfusión de Hematíes (Glóbulos Rojos). Su objetivo es mejorar durante un tiempo la capacidad de transporte de oxígeno de la sangre, intentando corregir las manifestaciones ocasionadas por la falta de oxígeno Transfusión de Plaquetas Su objetivo puede ser doble: a) terapéutico, en caso de hemorragia; b) profiláctico: para evitar una hemorragia espontánea o quirúrgica. + Concentrado de Plaquetas + Concentrado de Plaquetas de un Donante Único Transfusión de Plasma o Componentes del plasma. Indicado en los procesos de déficil de factores de coagulación presentes en las deficiencias adquiridas o congénitas. + Plasma Congelado en Fresco + Crioprecipitado Transfusión de Granulocitos: En los pacientes con leucopenia (descenso del contenido de leucocitos en la sangre) intensa e infecciones graves y resistentes al tratamiento convencional puede recurrirse a la transfusión de granulocitos (un tipo de célula presente en la sangre). Este tipo de transfusión, de moda hace unos años casi no se utiliza en la actualidad. Alternativas a la Transfusión de Sangre Homóloga Su búsqueda se ha visto incrementada en los últimos años, debido a los riesgos que conlleva la transfusión homóloga (de un individuo a otro). + Autotransfusión: Consiste en la transfusión de sangre o componentes que fueron extraídos con anterioridad. Es decir, la sangre se le extrae al propio individuo que se le va a transfundir . + Alternativas Farmacológicas a la Transfusión: Consiste en la administración de sustancias que estimulan la producción de los elementos sanguíneos como es el caso de la eritropoyetina, que potencia la formación de hematíes (glóbulos rojos) + Transfusión Dirigida: Consiste en la selección de donantes de sangre para un paciente concreto, se realiza con fundamento científico en la preparación para el trasplante renal, púrpura neonatal isoinmune, etc. Recambio Plasmático Masivo Consiste en la sustitución de plasma del paciente por soluciones de albúmina o plasma congelado en fresco. Citoaféresis Terapéutica Consiste en la extracción de células sanguíneas anómalas. Al igual que el
recambio plasmático, se realiza mediante procedimientos automatizados de aféresis. •
Transfusión Masiva Se denomina así a la transfusión de un volumen similar a la cantidad de sangre que tiene el receptor en un tiempo inferior a 24 horas.
