Actividad Antibacteriana in Vitro de La Grindelia Boliviana Rusby

"ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA IN VITRO DE LA Grindelia boliviana Rusby (CHIRI CHIRI) EN CEPAS DE Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes" Dra. Rosa Inés Vengoa Fígueroa 1, Dr Gustavo Tagle Carbajal2 RESUMEN: La medicina tradicional utiliza la Grindelia boliviana Rusby (GbR) en el tratamiento empírico de diversas enfermedades atribuyéndole a esta planta propiedad antibacteriana. Realizamos el presente estudio con la finalidad de evaluar in vitro la actividad antibacteriana de la Decocción (DE), Extracto Alcohólico (EA) y Aceite Esencial (AE) de la GbR y determinar su Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) frente a cepas de Staphylococcus aureu (Sa) ATCC 25923 y Streptococcus pyogenes (Sp) EMB 217. El Diseño corresponde a un estudio experimental, prospectivo, longitudinal, simple ciego que consta de 3 pasos: a) Estandarización de la curva de crecimiento bacteriano (fase logarítmica promedio) que fue para el Sa=0,39 y Sp=0,36. b) Estandarización de la Concentración antibacteriana de la GbR por el método turbidimétrico para hallar la CIM para cada forma medicamentosa frente a las dos cepas standard. c) Pruebas de Susceptibilidad. Se encontró que la CIM fue para Sa con DE: 640 mg (40 ul); EA: 320 mg (20 ul) y AE: 2500 mg (10 ul) y para el Sp DE: 320 mg (20 ul); EA: 160 mg (10 ul) y AE: 1250 mg (5 ul). Y se hallaron halos de inhibición para las tres formas; de preparación. Se concluye que: - La DE, EA y AE de GbR tienen actividad antibacteriana in vitro en Sa y Sp. - La forma medicamentosa con mayor actividad antibacteriana fue el aceite esencial seguida del extracto alcohólico ( Método excavación). Palabras Clave: Grindelia boliviana, Actividad antibacteriana, Chiri Chiri ABSTRACT: Traditional Medicine uses Grindelia boliviana Rusby (GbR) in the empiric treatment of  many diseases ascribing to this plant antibiotic characteristics, we made this study...., and determinate its Least Inhibitory Concentration (CIM) against stubs of  Staphylococcus aurous (Sa) ATCC 25923 and Streptococcus pyogenes (Sp) EMB 217. The design of the investigation is experimental, prospective, longitudinal, one blind with three steps: a) Make an standard curve of bacterial growing "logarithmic phase average", the which was for Sa=0,39 and Sp=0,36. b) Make an average of the anfibiotic concentration of GbR by the Turbidimetric Method M ethod and get the CIM for every medicinal method of GbR against the two standard stubs. And c) Susceptibility Tests. The CIM was for Sa with DE; 640 mg (40ul), EA: 320 mg (20ul) and AE 2500 mg (10ul), and for Sp with DE 320 mg (20ul); EA: 160 mg (10ul) and, AE: 1250 mg (5ul), and we found inhibition rings for the three preparation models. We conclude: - The DE, EA and AE of GbR have antíbiotic antí biotic activity in vitro against Sa and Sp. - The medicinal model with major antibiotic activity was the essential oil followed by the alcoholic abstract (excavation method). Key words: words: Grindelia boliviana, Antibiotic activity, Chiri Chiri

INTRODUCCIÓN No obstante la amplia utilización empírica de la Grindelia boliviana Rusby (chiri Chiri) como antiinflamatorio en la Medicina Tradicional Peruana, no se hallan estudios (como antibacteriano) que precedan a esté trabajo. La farmacopea alemana describe a las especies Grindelia robusta Nutt y Grindelia squarrosa Dunal, con usos terapéuticos. Asimismo se observa el uso de las Grindelias dentro de la farmacopea de Inglaterra, Francia, España, Alemania, Bélgica y desde 1893 se integra a la farmacopea americana (1,2). El agua de la Grindelia y la tintura tienen efectos antibióticos frente a las bacterias Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis (1). El presente estudio trata de demostrar uno de los probables efectos farmacológicos de la Grindelia boliviana Rusby (Chiri Chiri), usado en medicina tradicional a la cual se le confiere muchas propiedades (1-3,13-15). El problema en estudio es: ¿Son efectivas la Decocción, el extracto alcohólico y/o el aceite esencial de las hojas y flores de la Grindelia boliviana Rusby (Chiri Chiri) como antibacteriano en cultivos in Vitro de cepas patrón de Staphylococcus aureus y/o Streptococcus pyogenes?. El Objetivo central de este estudio es: Demostrar la acción antibacteriana de la Grindelia boliviana Rusby oriunda del sur andino y como objetivos específicos. a. Evaluar in Vitro la actividad antibacteriana de la decocción, extracto alcohólico y/o aceite esencial de Grindelia boliviana Rusby. b. Determinar la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) de Grindelia boliviana Rusby en cepas estándar de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. c. Determinar cual de las formas medicamentosas tiene mayor efecto antibacteriano. Buscamos de esta manera: Revalorizar el uso de plantas medicinales de nuestro medio, brindando un aporte técnico (científico) adecuado a la Medicina Tradicional; Demostrar el efecto antibacteriano, nos permitirá ofrecer una alternativa importante en el enfoque tradicional del tratamiento de heridas superficiales en la zona rural y Promover el diseño del ensayo clínico derivado del presente estudio, luego de la demostración in Vitro, por todo esto planteamos la siguiente Hipótesis "La decocción, el extracto alcohólico y/o aceite esencial de las hojas y flores de la Grindelia boliviana Rusby (Chiri Chiri) tienen acción antibacteriana in Vitro en cepas estándar de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes". El presente es un estudio experimental, prospectivo, longitudinal, con aleatorización simple, simple ciego. MATERIAL Y MÉTODOS Se realizó un control no experimental por selección mediante criterios de inclusión y exclusión. Material : Se incluyeron todas aquellas muestras de la Grindelia boliviana Rusby ( Chiri Chiri ), Obtenidas del Valle Sagrado de los Incas (Pisac) a 3,000 msnm, nivel Qheswa, cultivadas (in situ) mediante agricultura orgánica, recolectadas de 8 a 11 a.m. entre los meses de diciembre a febrero, fueron secadas a sombra y se demostraron las características completas de la especie, se recogió el tercio superior de la planta. TÉCNICA DE PREPARACIÓN DE LAS FORMAS MEDICAMENTOSAS: DECOCCIÓN: 50 gramos de hojas y flores secas se mezclaron con agua destilada 50 cc a temperatura ambiente (peso/volumen)(22) y se dejaron en baño maría, Termostato Tre-C Tipo F Brev. 22766, durante 30 minutos, removiéndose repetidamente, finalmente se filtró en caliente. Reduciéndose en baño maría a 3 cc. almacenado en recipiente de vidrio acaramelado y refrigerado a una temperatura de 4 °C.

EXTRACTO ALCOHÓLICO: Mediante percolación alcohólica (22,23) se introduce 50 gramos de hojas y flores, previamente trituradas en mortero, en el percolador al cuál se agregó 400 cc alcohol etílico a 60°. El líquido de extracción se introdujo por la parte superior del percolador, circulando lentamente a través de la droga, consiguiendo una maceración progresiva en 24 horas, para lograr una extracción del 95% de la sustancia. Luego es concentrado en baño maría por evaporación a 3 cc. y almacenado en recipiente de vidrio acaramelado y refrigerado a una temperatura de 4 °C. ACEITE ESENCIAL: Obtenida mediante destilación por vapor (24) de 1000 gramos de hojas y flores frescas de la planta, posterior condensación y separación del aceite equivalente a 5 cc. El punto de ebullición de este compuesto fluctuó entre los 80 °C y 100 °C. Esté fue almacenado en recipiente de vidrio acaramelado y dejado a temperatura ambiente. TÉCNICA DE MANEJO DE LOS CULTIVOS:Se trabajo con 192 muestras, En el Laboratorio Clínico del Hogar Clínica San Juan de Dios del Cusco. - Se aplicaron los parámetros básicos Para el cultivo de las cepas estándar utilizándose como medio de cultivo el agar Mueller Hinton (DIFCO) para Staphylococcus aureus, y para Streptococcus pyogenes el agar Mueller Hinton enriquecido con sangre humana al 3% (27). - Se usó como medio de cultivo para la estandarización de la curva de crecimiento de las cepas patrón el caldo B.H.I.(Infusión cerebro - corazón). (DIFCO). - El tipo de siembra en las placas de Petri, fue por la técnica de cubrimiento de Barry modificada (25,28). - El tipo de incubación fue por aerobiosis. - Las placas se incubarán a 37 °C, durante 18 - 24 horas (29) dentro de un incubador Dryng Chamber type P/G 2007. serie 510525. - El excavado del agar se realizó utilizando un "molde de excavación" estéril (de vidrio o metal) que genera un hoyo de 5 mm de diámetro. - Los Discos Experimentales fueron elaborados con papel filtro Whatman N° 3 de 8 mm de diámetro con una capacidad de absorción de 20 ul (30). - La lectura de los halos de inhibición se efectuó a las 18 horas y confirmadas a las 24 horas. - La lectura se realizó por medición directa lo más exactamente posible al milímetro, a simple vista, por la cara inferior de la placa. - Se excluyeron aquellas placas de Petri cuyo control de calidad determinó una sospecha de incumplimiento de los parámetros establecidos para los cultivos bacterianos, y aquellas que presentaron contaminación. DISEÑO DEL EXPERIMENTO: Se evaluó la actividad antibacteriana de las drogas naturales. El experimento consistió en tres pasos: a) Estandarización de la curva de crecimiento del: (8, 31, 32) Staphylococcus aureus American Type Cultural Collection (ATCC) 25923. y Streptococcus pyogenes EMB 217 - NAMRID Para lo cuál: - Se sembró 0,5 ml de cultivo fresco de Staphylococcus aureus ATCC 25923 o de Streptococcus pyogenes EMB 217 en 4,5 ml de caldo B.H.l (Infusión cerebro-corazón) pH =7.0. Incubadas a 37 °C. La evaluación del crecimiento bacteriano se realizó cada hora mediante la lectura del cultivo en el espectrofotómetro Wiener lab Group Model BTR-811. Serie 801150387.

b) Estandarización de la concentración antibacteriana de la Grindelia boliviana Rusby con las dos cepas patrón. Por el Método turbidimétrico (8, 32). Se utilizaron tubos de vidrio conteniendo 4,5 ml del inóculo fresco en caldo B.H.l de S. aureus o S. pyogenes a una densidad óptica de 0,39 y 0,36 respectivamente "fase logarítmica promedio" a los que se agregó 0,5 ml de las concentraciones equivalentes a: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640,1280 miligramos de la decocción y extracto alcohólico, y concentraciones equivalentes de: 625 mg (2.5 ul), 1250 mg (5ul), 2500 mg (10ul), 3750 mg (15ul), 5000 mg (20 ul) de aceite esencial de Grindelia boliviana Rusby. Todo ello se compara con controles para cada cepa (4,5 ml de B.H.l. más inóculo) Incubándose a 37 °C por 18 horas (25). Al final del período de incubación, los tubos se examinaron visualmente y por espectrofotometría controlando la turbidez que indica que el crecimiento bacteriano no fue inhibido por la concentración antibacteriana contenida en el medio. El punto de ruptura representa la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM). c) Aplicación de la estandarización en cepas patrón: Por el método Disco-placa y el Método excavación-placa (8, 23,31). Los que se basan en la medición del diámetro de zonas de inhibición de crecimiento bacteriano que rodean a los discos o excavaciones que contienen las diferentes diluciones de la decocción, extracto alcohólico o aceite esencial. Se sembró la superficie del agar por el método de cubrimiento de Barry modificado. Se cerró la placa de Petri y, se dejo que el inóculo se seque durante 5 minutos por lo menos, pero no más allá de los 30 minutos. Se aplicaron los discos previamente embebidos en diferentes diluciones de la decocción, aceite esencial o extracto alcohólico, colocándolos sobre la superficie del agar, presionando suavemente contra la superficie del medio, empleando pinzas estériles, previamente flameadas y enfriadas (24). Se aplicaron en las excavaciones las diluciones obtenidas de la decocción, extracto alcohólico o aceite esencia¡, con ayuda de una micropipeta. El control se hizo con discos embebidos con agua destilada estéril que también se empleo en la excavación con volúmenes equivalentes a las dosis usadas (33). El manejo de datos se realizó por lista de chequeo y el análisis: Descriptivo por promedio de halos de inhibición y Inferencial mediante el Coeficiente de correlación de Pearson y el de Regresión. RESULTADOS 1.- ESTANDARIZACIÓN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO DEL Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. La lectura de la proliferación bacteriana se realizó con espectofotómetro a una longitud de onda de 670 mm, llevando el aparato a una densidad óptica (DO) de cero con caldo BHI sin inóculo (blanco) obteniéndose lo siguiente. (ver Tabla N° 1) (Gráfico N° 1). 2.- ESTANDARIZACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA: MÉTODO DE DILUCIÓN EN TUBOS. En Staphylococcus aureus: DECOCCIÓN: Se registró nitidez a partir de la quinta dilución, por lo tanto la CIM es de 640 mg (40ul), con una densidad óptica (DO) inicial de 0,34 y final de 0,22 EXTRACTO ALCOHÓLICO: La CIM fue de 320 mg (20ul) correspondiendo a una DO inicial de 0,20 y final de 0,14. ACEITE ESENCIAL: Observándose turbidez sólo en el primer tubo de ensayo (5ul),siendo su CIM de 10ul = 2500 mg, lo que corresponde a una DO inicial de 0,73 y final de 0,040. BLANCO: Presentó turbidez constante, con una DO de 0.435. En Streptococcus

pyogenes: DECOCCIÓN: Se halló una CIM de 320 mg (20ul). Con una DO inicial de 0, 16 y final de 0,93. EXTRACTO ALCOHÓLICO: La CIM fue de 160 mg (10 ul), que corresponde a una DO inicial de 0,16 y final de 0,14. ACEITE ESENCIAL: Su CIM fue de 1250 mg (5ul), que equivale a una DO inicial de 0,112 y, final de 0,054. BLANCO: presentó turbidez constante. Con una DO de 0,445 3.- PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD BACTERIANA: Los diámetros promedio de halos de inhibición de la Decocción, Extracto alcohólico y Aceite Esencial de Grindelia boliviana Rusby se muestran en la Tabla N° 2. Se aprecia que en el método de Disco-Placa el Aceite esencial es la forma medicamentosa que presenta los halos de inhibición más altos que van de 0 á 20,6 mm para el caso del Staphylococcus aureus con dosis equivalentes de 1250 a 5000 mg respectivamente (520 ul). Con la cepa de Streptococcus pyogenes es el Extracto alcohólico el que muestra los diámetros más altos que van de 0-18,25 mm con dosis equivalentes de 80 á 640 mg (5-20 ul). En el método Excavación - Placa el Aceite esencial es nuevamente la forma medicamentosa más efectiva con halos de inhibición de 16,88 a > 26,38 mm que equivalen a dosis de 1250 - 3750 mg (5 - 20 ul), para el Staphylococcus aureus y para el Streptococcus pyogenes con halos de inhibición de 0 - 22,75 mm que son equivalentes a dosis de 1250 - 5000 mg (5-20 ul). Mediante el análisis inferencial realizado a todos los diámetros de inhibición se obtuvo los siguientes resultados (Tabla N° 3. Gráficos del 2 al 9), según las formas medicamentosas para las dos cepas en estudio. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN 1) ESTANDARIZACIÓN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO: El Staphylococcus aureus ATCC 25923, llegó a su fase de crecimiento exponencial a las dos horas de haber sido cultivada, con una densidad óptica (DO) de 0,39 unidades de absorbancia. El Streptococcus pyogenes EMB 217, alcanzó su fase exponencial a las tres horas, con una DO de 0,36 unidades de absorbancia resultado que semeja al de otros trabajos (20). Esto se explica porque la mayor parte de los microorganismos crecen exponencialmente, pero la velocidad de crecimiento varia mucho de un organismo a otro (8) 2) ESTANDARIZACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA Y PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD En resultados obtenidos por el Método de Dilución en tubos sobre la CIM de las diferentes formas medicamentosas de Grindelia boliviana R. revelan que tienen mayor efecto inhibitorio sobre el Streptococcus pyogenes con diluciones más bajas (decocción 320 mg; extracto alcohólico 160 mgl; aceite esencial 1250 mg). Lo que se evalúa también mediante la medición o lectura de la densidad óptica siendo resaltante en el extracto alcohólico, que esta se mantiene elevada al final de la prueba. aún existiendo nitidez visible, pudiendo explicarse que dicho aumento corresponda a la activación de algún componente de la planta por el calor (incubadora a 37 °C). Se pudo apreciar que en el método excavación con el Aceite Esencial la CIM (1250 mg) fue la más baja para el Staphylococcus aureus.

As¡ mismo se muestra, que el promedio de los halos de inhibición mas altos para el Staphylococcus aureus se hallan con Aceite Esencial y Extracto alcohólico en el Método de Excavación-Placa, y para el Streptococcus pyogenes con Extracto alcohólico en el método Disco-Placa. Como vemos los más altos promedios se dan con el método de excavación (Independiente de la bacteria). ello quizá se deba a la mejor capacidad de difusión de las formas medicamentosas en el agar ya que podría ser limitada esa capacidad al usarse papel filtro. La prueba de regresión de las tres formas medicamentosas nos permiten predecir valores de diámetros de inhibición para diluciones mayores. Las pruebas de regresión logarítmica muestran gran significancia estadística (p< 0,00 1) que se aprecia a predominio del método Excavación. El análisis de Correlación de Pearson (COR) también nos permite ver la fuerza de relación que existe entre las variables implicadas, determinando que presenta una muy buena correlación (COR > a 0.75). El Coeficiente de determinación, R-2, sirve para señalar en que porcentaje se puede explicar una variable conociendo la otra. Por tanto en la Tabla No 3 se aprecia que el R2 del Extracto alcohólico por el método de excavación es de 0.94, lo que se interpreta que 94% de la variación en el halo de inhibición se explica por las diferentes diluciones. Podemos apreciar en los gráficos 6 -al 9 que es el aceite esencial la forma medicamentosa que muestra mayor actividad antibacteriana. Suponemos que la Decocción al ser una forma medicamentosa netamente acuosa extraería los compuestos químicos hidrosolubles, el extracto alcohólico tendría compuestos químicos hidrosolubles y liposolubles a diferencia del aceite esencial que extraería los compuestos liposolubles. Imaginamos que los principios activos antibacterianos son más liposolubles que hidrosolubles. Según la composición química que muestra el género Grindelia creemos que la actividad antibacteriana se deba a la presencia de Diterpenos, flavonoides y poliacetilenos corno lo visto en otras plantas por AHMAD (34), MARTINEZ (35), HIREMATH (36) RATSIMAMANGA (37). La acción antibacteriana demostrada por el aceite esencial se basaría en los compuestos químicos como el borneol, terpinol, A-pineno y B-pineno (38,39). CONCLUSIONES 1. La Decocción, Extracto Alcohólico v Aceite Esencial de Grindella boliviana Rusbv tienen actividad antibacteriana in Vitro sobre cepas de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. 2. La CIM para el Staphylococcus aureus fue: Decocción=640 mg (40ul), Extracto Alcohólico=320 mg (20ul) y Aceite Esencial=2500 mg (10ul). 3. La CIM para el Streptococcus pyogenes según las formas medicamentosas fueron: Decocción=320 mg (20ul); Extracto Alcohólico=160 mg (10ul); y Aceite Esencial=1250 mg(5ul). 4. Las formas medicamentosas con mayor actividad antibacteriana fueron el Aceite Esencial y el Extracto Alcohólico con el método de Excavación. SUGERENCIAS - Propender a la investigación fitoquímica y farmacológica de la Grindelia boliviana Rusby. - Proseguir el estudio con cepas salvajes obtenidas de pacientes con patología dérmica. - Continuar con estudios de toxicidad subaguda, toxicidad crónica, teratogenicidad y, efectos adversos. - Corroborar luego del estudio in Vitro en animales de laboratorio, su efecto

antibacteriano en ensayos clínicos. AGRADECIMIENTOS Al Hogar Clínica San Juan de Dios en la persona del Hermano Pedro Piña, por habernos facilitado amablemente las instalaciones del laboratorio. A nuestros asesores: Dr. Luis Miranda y Dra. Zenia Mongo por sus sabios consejos en la elaboración de, la investigación. Al Instituto de Ecología y Plantas Medicinales (IEPLAM) a su Director el Blgo. Justo Mantilla por toda la colaboración brindada en la obtención de la planta seca y del aceite esencial. Al Centro de Medicina Andina en la persona del Q. F. Ricardo Sánchez por la ayuda prestada para la elaboración del extracto alcohólico. Al NAMRID en la persona del Dr. Carlos Lebrón Jefe del Servicio de Bacteriología por facilitarnos las cepas estándar de los microorganismos. TABLA N°1: CRECIMIENTO BACTERIANO TIEMPO (Horas) Staphyl (DO) Streptc (DO) Control (DO)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

0,105 0,191 0,399 0,546 0,590 0,548 0,480 0,413 0,112 0,128 0,201 0,295 0,361 0,417 0,405 0,260 0,120 0.090 0,030 0,030 0,030 0,030 0,30

0,030 0,030 0,030 0,030

DO=Densidad óptica Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

TABLA N°2: ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA IN VITRO METODO

FORMA DILUCION MEDICAMENTO (mg/ul)

DECOCCION

DISCO

EXTRACTO ALCOHOLICO

ACEITE ESENCIAL

EXCAVACION

DECOCCION

DIAMETRO DE HALO DE INHIBICIÓN (mm) S. aureus

S. pyogenes

80

-

-

160

8.00

8.25

320

9.13

10.50

640

11.88

18.25

80

-

-

160

8.50

12.25

320

9.88

15.00

640

11.88

18.25

1250

-

-

2500

10.90

10.75

3750

18.40

11.75

5000

20.60

14.00

80

-

-

160

5.28

5.75

320

9.13

9.75

640

10.50

11.50

EXTRACTO ALCOHOLICO

ACEITE ESENCIAL

80

-

-

160

7.00

10.50

320

10.00

13.00

640

19.50

15.50

1250

16.88

-

2500

22.88

11.25

3750

26.38

17.75

5000

>26.38

22.75

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

TABLA N°3: ANALISIS INFERENCIAL Cepas F.M. A.M. RB COR R2

Staphylococcus aureus DECOCC EXT.OH. ACEITE E DP' EP' DP' EP' DP EP' 0.88 0.96 0.92 0.97 0.99 0.94 0.73 0.85 0.79 0.97 0.96 0.87 0.53 0.72 0.62 0.94 0.92 0.76

Streptococcus DECOCC EXTR.OH ACEITE E DP EP' DP EP' DP EP' 0.93 0.97 0.93 0.93 0.95 0.97 0.80 0.87 0.81 0.80 0.87 0.94 0.64 0.76 0.66 0.64 0.76 0.88

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp *:P<0,001 F.M. = FORMA MEDICAMENTOSA; A=ANÁLISIS ESTADISTICO ; M=MÉTODO; DP=DISCO PLACA; EP=EXCAVACIÓN PLACA; RB=COEFICIENTE DE REGRESIÓN; COR=COEFICIENTE DE CORRELACIÓN; R2=COEFICIENTE DE DETERMINACIÓN.

GRAFICO N°2 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION Y EXTRACTO ALCOHOLICO DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N°3 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION Y EXTRACTO ALCOHOLICO DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Streptococcus pyogenes.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N°4 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N°5 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. SEGUN METODO DE SUSCEPTIBILIDAD SOBRE Streptococcus pyogenes

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N°6 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION, EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE DISCOPLACA Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N°7 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION,EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE EXCAVACION-PLACA Staphylococcus aureus.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N°8 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION, EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE DISCOPLACA SOBRE Streptococcus Pyogenes.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

GRAFICO N°9 :ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA DECOCCION, EXTRACTO ALCOHOLICO Y ACEITE ESENCIAL DE G. b.R. POR EL METODO DE EXCAVACION-PLACA SOBRE Streptococcus Pyogenes.

Fuente: Estudio AAIVGbRSaSp

1,2 Médicos cirujanos egresados de la FMH UNSAAC. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. MANTILLA J.(1991): Estudio botánico para el cultivo del "chiri chiri" (AsteraceaeAstereae) Grindelia boliviana Rusby. tesis para obtener el Grado Académico de Bachiller en Ciencias Biológicas. UNSAAC. Cusco. pg. 2-8, 48-50. 2. ROERSCH C.(1994): Plantas Medicinales del Sur Andino del Perú 2ed. Editorial Koeltz Scientific Booke Konigstein.Alemania Pg 490-96 3. EVANS W. (1991): Farmacognosia. 13 ed. Editorial Interamericana, México. Pg: 516. 4. HARRIS0N J. (1980): Farmacognosia. UNMSML Fac. Farm. y Biol, Lima. 5. STEINEGGER E. HANSEL R.(1988): Pharmakognosie and phytopharmazie. SpringerVerlag. Berlin Alemania 6. JAWETZ E. (1992): Manual de Microbiología Médica.14 Ed. Editorial Manual Moderna. México. Pg:196-8 7. KONEMAN E,at cols. (1992): Diagnóstico Microbiológico, 3 Ed. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires. Pg: 193, 313. 422-4 . 8. BROC, KTh.(1991): Microbiología. 6 ed. Editorial Prentice Hall Hispanoamericana S.A. México. Pg:361-2 330-3. 9. COWAN S.T.(1990): Manual para la identificación de Bacterias de Importancia Médica. Editorial Salvat. 10. FALABELLA R.(1990): Dermatología. Fundamentos de Medicina. 4 Ed. editorial Corporación para la Investigación Biológica (C.I.B.). Colombia. Pg: 183-4. 11. ARNOLD Jr. H.L. y Cols. (1993): Tratado de Dermatología Andrews, 4 ed. Editorial Masson-Salvat. Barcelona. Pg: 279, 286. 12. RESTREPO, Y Cols. (1991): Enfermedades Infecciosas. Editorial Medellín. Colombia. Pg: 340,342. 13. VALDIZAN H. (1930): La Medicina Popular Peruana. Ed, Impr. Torres Aguirre Lima. 118. 14. CHAMOULEAU A. (1989): La curación por las plantas. Ed. Martínez Roca S.A. España. 15. PAVLOW M (1980): El gran libro de las Plantas Medicinales, Ed. Everest S.A. España. 16. MARZOCCA A.(1985): Taxonomía Vegetal, Editorial San José IICA. 17. Instituto de Ecología y Plantas Medicinales (1994) Manejo Racional de plantas medicinales. Cusco. 45-60. 18. LOCK DE UGAZ O.(1994): Investigación Fotoquímica. Métodos en el estudio de Productos Naturales. 2 ed Editorial Pontificia Universidad

Católica del Perú. Lima-Perú. Pg: 82, 114, 228 19. DIVO A. (1990): Microbiología Medica. 4 ed. Editorial México. Pg: 109, 116 20. CARAYHUA D. (1995): Actividad Antibacteriana in Vitro del Allium sativum (ajo) Thimus vulgarys (Tomillo) en : cepas de Streptococcus pyogenes. Tesis para obtener el Título de Medico Cirujano, UNSAAC. Cusco. Pg:16.8.22. 21. SANCHEZ, L. (1997): Staphylococcus Un patógeno de gran virulencia. Rev. Medica . Vol N°3. Edición N° 16/17 Perú,. Pg 8 22. AJAO A.O, et al, (1984) Antibacterial effect of aqueos and alcoholic extract of  Spondia monbin and Alcohornic cordifolia. University of Ife-Ife Nigeria. Rev, Fitoterapia Vol LVX N° 16 23. PENNA C. y RADICE M (1994): Antibacterial and antifungigal activities of some argentinean plant. Argentina. Revista de Fitoterapia. Volume, LXV N° 2. Pg: 172 24. FRAZAO S.JACOB M. et al. (1986): Antimicrobial Activity of essential oils of  Eucalyptus species. Francia. Rev. Journal of medicinal Plant Research Germany. Thieme. Pg:79. 25. COTILL0 P.(1990): Métodos Farmacológicos en la Investigación de productos vegetales. 1° Ed. Editorial Jarmad-UNMSM Lima-Perú Pg: 28. 26. VOIGT R. (1992) Tratado de Tecnología Farmacéutica. 3 Ed. Editorial Acribia. Zaragoza España. Pg 73, 365-66 487-513. 27. BLAZQUEZ M. A. ZAFRA-POLO M. and VILLAR A.(1980) Antimicrobial activity of  thymus Species. Valencia Espafia. Rev Planta Medica, Journal of Medicinal Plant Research. Germany. Pg: 75 28. JANSEN A.M. et al. (1986):Screening for antimicrobial activity of some essential oils by the agar Overlay Tecnique. Statics and correlations Leiden University . Rev Planta Medica Journal of Medicinal Plant Research Germany Thieme Pg.76 29. FERDOUS A.J. et al. (1992): In vitro activity of Lanuginosine and Oxostephanine. Bangladesh. Rev. Vol LXIII N° 6 30. RAWAT A.K.S.et. al. (1992): Antimicrobial Activity of Thalietrum foliolosum. India Rev. Fototerapia Vol LXIII N° 6 31. GENNARO A.R. Y Cols (1991): Farmacia. 17 Ed. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires Pg. 759, 802. 32. CALVEY E. y ROACH J.(1994):Supercritical Fluid Chromatography of Garlic extracs. Center for Food Safety and Applied Nutrition Food and Drug Administration, Washington. ULAC.S. 33. WONG-LEUNG y L. (1988). Antibactetial activites of some Hong Kong plants used in Chinese medicine. Volume LIX N° 1, Pg 11-16. 34. AHMAD I. y AHMAD M (1994): Antibacterial activites of Dodonaea viscosa Oil. Pakistan. Rev. Fitoterapia. Volume LXV N° 2 . Pg: 167-8. 35. MARTINEZ M. et. al. (1994): Antimicrobial properties of Argentatine A. isolated from Parthenium Fitoterapia. Volume LXV N° 4, Pg: 371. 36. HIREMATH S.P.(1994): Antibacterial Antifungical and Anthelmintic activity of varius extrac of Striga lutea Rev. Volume LXV N° 4. Pg. 380. 37. RATSIMAMANGA et al. (1994): Antibacterial activity of Flavonoids isolated from Mundulea monantha and Haphrosia Linearis. Rev. Fitoterapia, Volume LXY N° 6 Pg: 551 38. KNOBLOCH K. , WEIS N. and WEIGAUD H. (1986) Mechanism of antimicrobial activity of essential oils. University Erlangen Nurnberg. Rev. Planta Medica. Journal of  Medical Plant Research. Germany Thieme Pg. 76. 39. VILLAR A. Et. Al (1986): Antimicrobial of Benzylisoquinolina Alkaloids. II. Relation Between Chemical Composition and Antimicrobial Activity. Valencia Spain. Rev. Journal of Medicinal Plant Research. Germany. Thieme. Pg: 77.