Accion Bacteriostatica Del Cristal Violeta

ÍNDICE

1.

Objetivos

…………………………………..

2.

Fundamento Te Teórico órico

………………………………….

3.

Metodologa

…………………………………

4.

!esultado

………………………………...

5.

Discusión

………………………………..

6.

Conclusiones

……………………………….

7.

!ecomendaciones

…………………………………

8.

Cuestionario

…………………………………

9.

"ibliogra#a

…………………………………

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

LABORATORIO NRO. 5 $CCION "$CTE!IO%T$TIC$ DE& C!I%T$& 'IO&ET$ Acción bacteriostática selectiva del cristal violeta 1. Objetivos   

Determinar si (a) crecimiento de bacterias 'eri#icar la acción bacteriost*tica del cristal violeta+ el ,oder in(ibidor en muestras ,re,aradas con di#erentes concentraciones de cristal violeta. Obtener las di#erentes colonias ) clasi#icar mediante la coloración de bacterias el ti,o de bacteria al -ue corres,onde.

2. Fundaento teórico Acción bacteriostática selectiva del cristal violeta &a acción bacteriost*tica es un conjunto de ,rocesos en el cual altera la re,roducción de ciertas bacterias. &o -ue conlleva a -ue se vuelva lento el ,roceso de la multi,licación de los grmenes ,atógenos+ con lo -ue se tornan m*s vulnerables ante los ,rocesos de#ensivos (umorales ) celulares del organismo. &a actividad bacteriost*tica se e/,lora mediante el mtodo de di#usión.

A!ente bacteriostático Es a-ul -ue tiene la ,ro,iedad de in(ibir la multi,licación bacteriana+ in(iben la tinción de las bacterias+ la misma -ue se reanuda cuando se retira el agente. $lgunos agentes tienen #inalidad ,articular ,or medio de genes o los lesionan es,ec#icamente.

"ristal violeta El cristal violeta es un colorante derivado del tri#enilmetano+ como sabemos el #enol ) sus derivados act0an como microbicidas o microbiost*ticos de,endiendo de la concentración -ue se utilice. &os #enoles ,oseen e#ecto germicida ,ues da1an la membrana ) desnaturali2an las ,rotenas bacteriales. &os colorantes b*sicos como el violeta de cristal+ reaccionan intensamente con los *cidos nucledos de las nucleo,rotenas+ -ui2*s ,or la #ormación de sales. &as bacterias 3ram 4 son m*s sensibles -ue las 3ram 5+ -ue se debe al car*cter *cido de las ,rotenas de las clulas+ gran ,ositivas. "acteria 3ram 6ositiva "acteria 3ram Negativa Tiene una ca,a gruesa de ,e,tidoglicano ) dos clases de *cidos teicoicos.. El *cido Teicoico es el res,onsable del determinante antignico del organismo. Entre la membrana cito,l*smica ) la ,ared celular (a) un es,acio ,eri,l*smico con en2imas (idrolticas+ en2imas inactivadoras de antibióticos ) ,rotenas de trans,orte. &os colorantes no solo ti1en a las bacterias sino -ue tambin son in(ibidores en diluciones mu) altas+ ,ueden clasi#icarse en dos gru,os7 8cidos o aniónicos 9se combinan

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con los constitu)entes b*sicos del ,roto,lasma bacterianos: ) "*sicos o catiónicos 9se combinan ti1endo los constitu)entes *cidos del ,roto,lasma bacteriano:. Dentro de los colorantes tri#enilmetanos de a,licación mdica se1alaremos al verde brillante+ verde mala-uita ) violeta de genciana 9cristal violeta:. %on e#ectivos contra microorganismos 3ram ,ositivos+ ) sobre (ongos ,atógenos del gnero C*ndida es,ecialmente. El mecanismo de acción de los colorantes de este gru,o no se encuentran a0n bien de#inido+ aun-ue la acción del cristal violeta es atribuida a su acción de inter#erencia en la sntesis del ,e,tidoglicano de la ,ared celular+ en caso delos 3ramnegativos su membrana e/terna actuara como una barrera im,ortante ,ara la ,enetración del colorante+ de all su acción selectiva. Entre los colorantes de acridina o ;#lavinas< 9#lavus7 amarillo: citaremos la acri#lavina+ tiene un es,ectro de acción m*s am,lio sobre los microorganismos ma)or estabilidad antimicrobiana ,udiendo actuar en ,resencia de material ,urulento. %u mecanismo de acción se basa su inter#erencia sobre la sntesis de *cido nucleicos insert*ndose en el $DN entre dos bases sucesivas 9intercalación:. Es im,ortante destacar -ue el a2ul de metileno est* indicado actualmente como antdoto de las into/icaciones con nitratos ) nitritos+ en los mam#eros. a. Tri#enilmetano El tri#enilmetano 9o tritano: es un sólido incoloro -ue ,resenta tres gru,os #enilo ) un *tomo de (idrógeno unidos a un *tomo de carbono. Derivados de esta estructura se encuentran en el centro de numerosos colorantes. b. Cristal 'ioleta !eacciona con radicales *cidos. Mecanismo de acción bacteriost*tico= ,robablemente #orma sales con los *cidos nucleicos. %e em,lea en medio de cultivo selectivo+ antis,tico de ,iel ) membrana bucales+ in(ibe las bacterias 3ram ,ositivas. El violeta cristal es un colorante b*sico bacteriost*tico ,otente+ es,ecialmente contra microorganismos gran ,ositivos+ las bacterias 3ran negativas son alterada en ,oco grado. c. Crecimiento "acteriano Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo a,ro,iado+ los mismos comien2an a dividirse activamente em,leando los nutrientes -ue le a,orta el medio de cultivo ,ara >#abricar> nuevos microorganismos. Este ,roceso contin0a (asta -ue alg0n nutriente del medio de cultivo se agota 9sustrato limitante: ) el crecimiento se detiene. Tambin ,uede detenerse el crecimiento ,or acumulación de alguna sustancia in(ibidora #ormada ,or los mismos microorganismos+ ,ero su,óngase ,or a(ora -ue ste no es el caso ) -ue la ,rimera alternativa es la v*lida. &uego (a) dos as,ectos claramente di#erenciables -ue (acen al crecimiento microbiano7 uno este-uiomtrico+ ,or el cual la concentración #inal de microorganismos obtenidos de,ender* de la concentración ) com,osición del medio de cultivo+ ) el otro cintico+ el -ue dir* con -u velocidad se lleva a cabo el ,roceso. d. $cción oligodin*mica de los metales ,esados $lgunos metales en diluciones mu) altas son ca,aces de ejercer una acción tó/ica sobre las bacterias. %i se coloca una laminilla de ,lata o de cobre debidamente ,re,arada dentro de una ,laca 6etri ) se cubre con agar #undido+ ,reviamente inoculado con un organismo+ se ,uede observar con claridad varias 2onas di#erentes de desarrollo des,us de un ,erodo MICROBIOLOGIA SANITARIA - I 10


de ?@ (oras de incubación. Inmediatamente alrededor de la laminilla se ver* una 2ona des,ejada en la cual no a,arecen colonias. Esta se conoce con el nombre de 2ona oligodin*mica. M*s al e/terior de esta 2ona (abr* otra 2ona m*s angosta en la -ue se ,resenta un crecimiento abundante. Esta se denomina 2ona de estimulación. Cantidades diminutas de iones tó/icos estimulan el crecimiento. En todo el resto del agar ocurre un crecimiento normal.

#tilidad del cristal violeta &as ra2ones ,rinci,ales ,ara controlar los microorganismos son7 ,revenir la transmisión de en#ermedades+ evitar el deterioro de los alimentos ) evitar la contaminación tanto en ,rocesos industriales -ue re-uieran cultivos ,uros+ como en laboratorios de diagnóstico o investigación. $dem*s se (a di#undido muc(o el uso de agentes bacteriost*ticos en la industria #armacutica ,ara la ,roducción de antibiótico.

$. %etodolo!&a         

Mantener @ tubos con agar nutritivo #undido en el ba1o mara a @A BC. Trans#erir ml de la solución acuosa de cristal violeta de 7 a uno de los tubos con  ml de agua. Esto da una disolución de 7. sando la misma ,i,eta+ trans#erir ml al segundo tubo con ml de agua. Esto da una disolución de 7. Trans#erir ml de la solución 7 a una ,laca de 6etri. 'erter el agar en las tres ,lacas de 6etri ) me2clar el colorante con el agar rotando suavemente la ,laca. 'erter el contenido del ultimo tubo de agar en la ,laca sin colorante ,ara -ue sirva de control. Cuando se (a solidi#icado el agar se invierte la ,laca ) dividir cada una en en dos ,artes iguales con un l*,i2. Marcar cada mitad con el nombre del organismo con el -ue se va sembrar ,or el mtodo de estras. !a)ar en estras la mitad de una ,laca con una gotita del cultivo %ector $7 %iembra de Esc(eric(ia. Coli+ %ector "7 %iembra de "acillus %ubtillis.

'. Resultado



R()#LTA*O)+

1+1////

-R#O 1 A B 4 4

-R#O 2 A B 4 4

-R#O $ A B 4 4

-R#O ' A B 4 4

-R#O 5 A B 4 G

1+1/////

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4 1+1////// )in 4 colorante 94: Ha) crecimiento 9G: No (a) crecimiento

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

4

"ON"(NTRA "I,N

!esultado7 ,lacas blanco sin colorante

-R#O )

"OLONIA 0A

N 1

-ra34bacilos

N 2 N $

-ra37 di6lobacilos -ra34 esta8ilococos

"OLONIAB -ran34 (stre6tococos -ra34 di6lobacilos -ra34 stre6tococos

N ' N 5 colorante Cristal violeta

-ra37 stre6tococos concentracion 7 7 7

%in colorante

Ec(eric(ia coli G 4 4 4

"acillus subtilis G G 4 4

6roceso de la acción bacteriost*tica selectiva del cristal violeta



Im*genes de los resultados de los gru,os







5. *iscusión 

&os resultados de la coloración 3ram no #ueron los es,erados+ esto debido a muc(os #actores+ como la mala mani,ulación de los materiales durante el e/,erimento.



%e debió (acer de nuevo el e/,erimento ,ara obtener los resultados correctos.

9. "onclusión 





%e encontró crecimiento de colonias des,us de acción bacteriológica del cristal violeta e/ce,to el gru,o dos -ue no se encontró nada debido seguramente a no seguir los mismos ,asos -ue los dem*s gru,os. &a acción in(ibidora de los agentes bacteriost*tica tiene im,ortancia en la industria #armacutica+ ,ues son utili2ados en la industria #armacutica en la #abricación de antibióticos a nivel industrial. &a acción bacteriost*tica de,ende de la concentración del agente bacteriost*tico+ a ma)or concentración del agente+ es menor el crecimiento microbiano.

:. Recoendación    

Inocular las ,lacas ) no mu) ,ró/imas a la lnea de división de cultivo colonias ;$< al ;"< ,ara evitar un ,aso de colonias de una 2ona a la otra. &os ,asos se deben seguir como se indica en la gua+ ,ara no obtener resultados como el gru,o  -ue no tuvieron los resultados -ue se es,eraban. Me2clar bien el colorante con el agar+ ,ara obtener una buena distribución. !otar el tubo entre las manos ,ara obtener una buena distribución.


Accion Bacteriostatica Del Cristal Violeta

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