Acción bacteriostatica selectiva del Cristal Violeta

Acción bacteriostática selectiva del cristal violeta Acción oligodinámica de los metales pesados 2010

ACCIÓN BACTERIOSTÁTICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA 1. Objetivos: 

Obse bservar var la acci acción ón de cris ristal vio violeta sobre bre microorganismos, bacterias.



Comprender cómo actúa el cristal violeta para que tenga carácter bacteriostático selectivo.

2. Fu!" !"#e #e to te$ e$%%i& i&o: o: CONTROL DEL CRECI'IENTO BACTERIANO

El control de los microorganismos es importante para la prevención de enfermedades en el ombre, en animales ! plantas, para la industria alimentaria evitando el deterioro de los alimentos, para evitar la contaminación tanto en proc proces esos os indu indust stri rial ales es que que requi equier eran an cult cultiv ivos os pur puros, os, como como en labo labora rato tori rios os de dia diagnós gnósti tico co o investigación. "as "as sust sustan anci cias as usad usadas as para para mata matarr o ini inibi birr el crecimiento de los microorganismos se denominan agentes antimicrobianos. Algunas de estas, denominadas desinfectantes se usan para reducir el número de microorganismos en supe super# r#ci cies es inan inanim imad adas as $pis $pisos os,, most mostra rado dorres, es, utensilios de comer o se a%aden al agua para potabili&arla. Otras sustancias llamadas antis'pticos, se aplican sobre te(ido biológico $en el cuerpo), usándose en eridas, en abrasiones

25


en la piel para prevenir infecciones, en soluciones para gargarismo como en(uagues bucales. Algunas sustancias qu*micas matan microor microorgani ganismos smos $agente $agente bacterici bactericida), da), mientras mientras que que otra otrass solo solo ini inibe ben n su crec crecim imie ient nto o $age $agent nte e bact bacter erio iost stát átic ico) o)++ adem además ás,, unas unas actú actúan an cont contra ra mucas especies microbianas ! se dice que son de ampl amplio io espe espect ctrro, mien mientr tras as que que otras tras,, solo solo afectan a unas pocas especies. esafo afortun rtunad ada amente ente,, no e-is -iste una una agen gente qu*mico que sea optimo para todos los prop propós ósit itos os,, para para ello ello a! a! que que dete deterrmina minarr con con antelación cuál agente traba(ará me(or en una situación particular. no de los m'todos de control de microorganismos más empleados en los laboratorios de microbiolog*a ! en el área ospitalaria es la denominada t'cnica as'ptica, que combina el lavado de manos, el uso de antis'pticos ! desinfectantes, barreras protectoras ! protocolos para la manipulación de utensilios, entre otros aspectos. Este con(unto de acciones es esencial para la seguridad del personal ! de los pacientes $área ospitalaria). ¿Qué es el efecto o acción bacteriostática?

"a acci acción ón bact bacter erio iost stát átic ica a se fund fundam amen enta ta en la inibición del desarrollo microbiano mediante el bloqueo de diferentes factores de reproducción. /o las mata directamente, pues una población de bacterias sin capacidad de reproducción o con capaci pacida dad d dis disminu inuida ida para para la mism isma es una pobla blación conden denada a su desaparición. En

25


cambio un agente bactericida es aquel capa& de matar a las bacterias. 0racias a esta acción bacteriostática en la medic dicina ina se apl aplica ica para para elegi legirr el anti antibi bió ótico tico correcto para tratar cierta enfermedad+ pues al aplicarse el antibiótico en el paciente se efectúa la acción bacteriostática produciendo un enlentec tecimiento de la multip tiplicación de los g'rmenes patógenos, con lo que se tornan más vulnerables ante los procesos defensivos umorales ! celulares del organismo. As* tenemos antibióticos con acción bactericida ! bacteriostática propuestos por 1aet&. 0rupo 34 Antibióticos habitualmente bactericidas a las dosis habituales:

 6etalactaminas  Oligosacáridos Oligosacáridos  7olimi-inas

0rupo 334 Antibióticos habitualmente bacteriostáticos bacteriostáticos a las dosis usuales:

 Cloramfenicol Cloramfenicol  8etracicl etraciclinas inas  Eritromicina  Oleoandomicina Oleoandomicina  /ovobiocina

¿Qué es acción bacteriostática selectiva?

Es aquel efecto que sólo inibe el crecimiento o reproducción de cierto grupo de micro croorgani ganissmos, os, mien ientra tras que que no afe afecta cta o afecta ecta en menos nos pro propor porción ción a otro tro gru grupo de microorganismos. 25


Es por ello que se agregan a medios de cultivos agentes bacteriostáticos para que 'stos tengan carácter selectivo. 9a! ciertos factores que tienen que ser considerados a la ora de aplicar agentes qu*micos o f*sicos para el control de microorganismos. Estos son4 

Concentración

del

agente

químico :

:ientras más concentrado est' el agente qu*mico, más rápido se destruirán los organismos. 











25

Intensidad del agente físico: Cuanto más

intenso es el agente f*sico $calor o radiación), rápidamente mata a los microorganismos Tiempo de exposición: A ma!or tiempo de e-posición, ma!or es el número de organismos destruidos. Temperatura4 A ma!or temperatura se acelera la destrucción de los organismos. !mero de organismos4 :ientras ma!or sea el número de microorganismos, más tiempo se requiere para destruirlos. Clase de organismo4 "as c'lulas vegetativas $las que están metabólicamente activas) son más susceptibles que las esporas bacteriales. "stado #siológico de las células: :ientras más vie(as sean las c'lulas, más rápido se destru!en.

Acción bacteriostática selectiva del cristal violeta Acción oligodinámica de los metales pesados 2010 

aturale$a del medio ambiente: Algunos

ambientes no favorecen la destrucción rápida de los microorganismos, como por e(emplo los medios viscosos. Factores físicos para el control de microorganismos:

"os factores f*sicos actúan generalmente como agentes selectivos, porque determinan el tipo de microorganismo capa& de crecer ! su in;uencia sobre la tasa de crecimiento en otros microorganismos. Temperatura: cada microorganismo es capa& de crecer solamente en un rango espec*#co de temperaturas. 7ara cada microorganismo e-iste una temperatura m*nima por deba(o de la cual no e-iste crecimiento+ una temperatura optima, en la cual a! crecimiento ! una temperatura má-ima a la cual no e-iste crecimiento. Como podemos darnos cuenta la temperatura es de suma importancia para el crecimiento de los organismos. A medida que esta aumenta, llega a estar por encima de la temperatura óptima, por tanto, ma!or es la velocidad de muerte de los microorganismos. Es por ello que altas temperaturas se usan en el control microbiológico. "as temperaturas altas pueden aplicarse de dos formas4 calor úmedo $con agua) o calor seco. El calor úmedo es muco más e#ciente que el calor seco, !a que este actúa mediante la coagulación de las prote*nas celulares, por otro lado el calor seco destru!e la c'lula por la o-idación de agentes qu*micos de la c'lula. 25


Contrario al calor, las temperaturas ba(as o el fr*o no desnaturali&an las prote*nas. "as ba(as temperaturas acen que la reproducción de los microorganismos se detenga, pero no las mata.
"a falta de agua detiene los procesos vitales en los microorganismos, por lo cual el crecimiento se detiene. "a desecación se logra evaporando el agua presente para lo cual se usa aire caliente. "a preservación de alimentos por secado aún se utili&a. Esta t'cnica tiene un efecto microbiostático, pues detiene el crecimiento bacterial, pero no mata los organismos. e eco los microorganismos pueden preservase por secado. Cuando se seca (unto con congelación el proceso se llama lio#li&ación.

%esecación:

&resión osmótica: "a pared celular de las

bacterias las protege de cambios en la presión osmótica del medio, pero si la presión osmótica 25


e-terna es muca, el organismo puede morir+ esto sucede si las concentraciones de solutos en el medio en que crece el organismo son e-tremos. Altas concentraciones de sal interrumpen los procesos de transporte a trav's de la membrana ! desnaturali&an las prote*nas, en cambio a! otros microorganismos que requieren concentraciones salinas mu! altas $=5>?@ de cloruro sódico) para crecer, estas son aló#los e-tremos. "os que crecen en altas concentraciones de a&úcar osmó#los ! en ambientes mu! secos -erof*licos. Ciertas formas de radiación pueden matar los microorganismos. =. R"!i"&i$ ioi("te: "os ra!os  ! gamma tienen un gran poder de penetración ! matan los microorganismos formando iones tó-icos. Estos iones afectan toda la bioqu*mica de la c'lula. "as esporas bacteriales son más resistentes a los diferentes tipos de radiación. 'adiación:

2. Lu( u)t%"vio)et" $B)4 "a lu& B no tiene poder de penetración, por lo que es útil para matar microorganismos en las super#cies. "as radiaciones de lu& B más germicidas son las de onda langa de 2? nm. El principal modo de acción de la lu& B es la formación de d*meros de timina en la mol'cula de /A. "a lu& B se utili&a para4 esterili&ar salas de ospitales, para el mantenimiento de cuartos as'pticos para el envasado de medicinas en la industria farmac'utica ! para el tratamiento de super#cies contaminadas en la industria de alimento ! de lece. 25


En general, los microorganismos suspendidos en un l*quido ! sometidos a la acción de ondas ultrasónicas de altas intensidades $2?,??? ciclosDseg.) durante cierto tiempo se destru!en porque se rompe la pared celular ! se pierde el contenido de la c'lula. (ndas

ultrasónicas

)sonicación*:

"a #ltración se emplea para esterili&ar l*quidos o soluciones que se afectan si se les aplica calor $sueros, algunas en&imas, vitaminas, antibióticos). 0eneralmente se usan #ltros que tienen unos poros de ?.2 micras de diámetros. "os poros de este tama%o retienen las bacterias, pero no los virus. +iltración:

Factores químicos para el control de microorganismos:

"os factores qu*micos pueden o no ser selectivos, !a que el carbono ! el nitrógeno se usan ! se requieren en formas espec*#cas, el :g ! e son usados en la misma forma por todos los microorganismos, es peque%as cantidades pueden e(ercer una presión selectiva. p,- .lcalinidad / acide$: se e-presa es una

escala en la que la neutralidad es F. Cada organismo tiene un rango de p9 dentro del cual es posible el crecimiento ! normalmente posee un p9 óptimo mu! bien de#nido. "a ma!or*a de los ambientes naturales tienen p9 de 5.G, sólo pocos crecen a p9 menores de 2 ! ma!ores de =?, "os que crecen a p9 menores de 2 son acidó#los, los ongos tienden a soportar la acide& más que las bacterias. "os 25


microorganismos que poseen un p9 ma!or de =? se denominan alcaló#los, se encuentran generalmente en suelos altamente carbonatados, son importantes industrialmente !a que poseen proteasas alcalinas. 3ndependientemente del p9 e-tracelular, el p9 intracelular debe permanecer cercano a la neutralidad, con el ob(etivo de impedir la destrucción de las macromol'culas. En acidó#los o alcaló#los e-tremos el p9 debe variar en =.? ! =.5 unidades respecto a la neutralidad, pero para los neutró#los $p9 H), el p9 del citoplasma es neutro o casi neutro. "as sustancias acidas o básicas usadas como desinfectantes ! antis'pticos actúan alterando la permeabilidad ! coagulando las prote*nas. En general los ácidos son más e#caces que los álcalis. "l fenol / sus derivados: El fenol se adiere a super#cies inertes ! proporciona lo que se llama una desinfección residual.

"os alcooles da%an la membrana, desnaturali&an las prote*nas, disuelven l*pidos ! desidratan la c'lula. "a concentración más efectiva de alcool es el F?@ ! los más utili&ados son el alcool et*lico e isoprop*lico. /o destru!en esporas ! tienen una acción germicida lenta. El poder bactericida aumenta a medida que crece la longitud de la cadena carbonada, pero los alcooles con peso molecular superior al del prop*lico $>C) no se me&clan en todas las proporciones con el agua, no se utili&an como desinfectantes. 0os

alco1oles:

,alógenos: "os alógenos actúan sobre los

microorganismos o-idando las prote*nas ! en&imas esenciales. /o matan las esporas. "os alógenos más comúnmente usados son el cloro ! el iodo. =.El &)o%o: Es uno de los desinfectantes más usados ! es microbicida contra la ma!or*a de los microorganismos.
25


2abones / detergentes: n (abón es una sal

de sodio o de potasio de un ácido graso. "os agentes que reducen la tensión super#cial del agua $surfactantes) ! que se emplean principalmente para la limpie&a de super#cies se llaman detergentes $el (abón es un e(emplo de un detergente). "os detergentes se clasi#can en catiónicos, aniónicos ! noiónicos. "os detergentes catiónicos son me(ores desinfectantes que los demás. Otro nombre con que se conocen a los detergentes catiónicos es cuaternario de amonio. Estos son bacteriostáticos a ba(as concentraciones ! bactericidas a concentraciones ma!ores. E(emplos de estos compuestos son el Iepiran ! el Joccal, que se usan como antis'pticos para la piel, además de usarse para el saneamiento de lecer*as ! plantas elaboradoras de alimentos. Estos compuestos no matan esporas. 3etales pesados / sus compuestos: "a

acción antimicrobial de los metales pesados ! sus compuestos se debe a la combinación del ión metálico con prote*nas ! las en&imas del microorganismo, da%ando as* el sistema. "a capacidad que tienen los metales pesados para e(ercer actividad antimicrobiana se denomina acción oligodinámica. 45 Co#*uestos !e #e%&u%io: "os más importantes de este grupo son los orgánicos como4 mercurocromo, metiolato ! metafen. 8odos estos se usan como antis'pticos ! son principalmente microbiostáticos.

25


65 Co#*uestos !e *)"t": El más que se usa

es el nitrato de plata en solución al =@ ! se usa en los o(os de los reci'n nacidos para prevenir infecciones gonocócicas.

75 Co#*uestos !e &ob%e: El sulfato de cobre

se usa como algicida en los recipientes abiertos que contienen agua. 8ambi'n es fungicida por lo que se utili&a para controlar las infecciones fúngicas de plantas

K. Co#*uestos !e (i&:
"os colorantes se utili&an ampliamente en bacteriolog*a para tinción ! como indicadores. Colorantes:

"a incorporación de un colorante a un medio de cultivo con frecuencia lo torna selectivo. "a acción bacteriostática de los colorantes se debe a la modi#cación del potencial de ó-ido reducción del medio, lo que inibe el desarrollo de los microorganismos. En general, son más activos contra bacterias gran positivas ! algunos ongos. "os principales colorantes son los derivados de la acridina $7ro;avina), ! los derivados del trifenilmetano $verde brillante, cristal violeta).  "os

derivados de la acridina inter#eren en la s*ntesis de ácidos nucleicos ! prote*nas. Este se inserta entre dos bases sucesivas del A/

25


separándolas f*sicamente, provocando errores es la duplicación del A/.  "os

derivados del trifenilmetano inter#eren en la s*ntesis de la pared celular. 7ara lograr su ob(etivo bloquean la conversión del ácido 7acetilmurámico en 7acetilmuramil p'ptido.

Cristal violeta:

El violeta cristal es un colorante básico bacteriostático potente perteneciente al grupo trifenilmetano, estos colorantes presentan una marcada acción bacteriostática selectiva sobre las bacterias 0ram positivas, en diluciones que aparentemente no afectan a las 0ram negativas. Esta propiedad se aproveca mediante la incorporación de alguno de esos colorantes en medios de cultivo con el #n de facilitar el aislamiento de bacterias 0ram negativas. Otros colorantes usados con estos propósitos son4 fucsina básica, verde brillante ! verde malaquita.

+. '"te%i")es: =. :edio agar nutritivo. 2. . Agua destilada. K. K placas petri esterili&adas. 25


5. 8ubos de ensa!o. . 7ipetas de =ml. F. :icroorganismos a inocular.

,. -%o&e!i#ieto: =. 7reparar medio agar nutritivo ! esterili&arlo en el autoclave. 2. 3nvertir la placa ! con un marcador dividir en dos partes iguales, rotular las cuatro placas

petri según el modelo4

>. Contar con solución acuosa de cristal violeta de concentración =D=??? $?.=@), si no se contara con esta solución ! s* con concentración al =??@ seguir los siguientes pasos4  8raspasar = ml de concentración al =??@ a un tubo que contiene G ml de agua, obteniendo as* concentración =D=?.  7asar =ml de concentración =D=? a otro tubo que contiene G ml de agua, para contar con concentración =D=??.

25


 7or último, para obtener concentración de =D=??? trasladar = ml de solución =D=?? a otro tubo que contiene G ml de agua, obteniendo lo deseado =D=???.

K. La obtenido la solución de cristal violeta de =D=???, transferir = ml a un tubo con G ml de agua destilada, obteniendo as* una dilución de =D=????. 5. Con la misma pipeta usada anteriormente, trasladar = ml de solución =D=???? a una placa petri, 'sta placa ! las demás estarán previamente esterili&ada. 25


.Con otra pipeta trasladar = ml de solución con concentración =D=???? a un tubo con G ml de agua, obteniendo la concentración =D=?????. F. Con la pipeta usada para obtener concentración =D=?????, trasferir =ml de dica solución a otra placa petri. H. 8rasladar =ml de concentración =D=????? a otro tubo con G ml de agua, obteniendo concentración =D=??????. G. 8rasferir = ml de concentración =D=?????? a una placa petri, con la misma pipeta usada anteriormente. =?. Berter medio agar nutritivo a las diferentes placas, que contienen las distintas concentraciones de cristal violeta. ==. Berter el cuarto tubo que contiene medio agar nutritivo a una cuarta placa petri que no contiene colorante $cristal violeta).

25


=2. Esperar a que solidi#que el agar para inocular en la &ona A de la placa el cultivo A ! en la &ona 6 el cultivo 6+ no se inoculará por el m'todo de las estr*as, se tomará cierta cantidad de cultivo A con el inoculador ! se pondrá esta cantidad sobre el agar solidi#cado en la &ona A, el mismo procedimiento se reali&ará para el cultivo 6. =>. 3nvertir la placa e incubarla a >FMC por KH oras.

. Resu)t"!os / obse%v"&ioes: Resu)t"!os !e )" "&&i$ b"&te%iostti&" !e) &%ist") vio)et": 25


CRECI'IENTO 0ru 0ru 0ru po 2 po > po K A 6 A 6 A 6 N N N N N N N N N N N N N N N N N N

CONCENTRACI 0ru ÓN po = A 6 CRISTAL 110000 N N VIOLET 1100000 N N 11000000 N N A CONTR Si &o)o%"te         OL )8* ,a/ crecimiento5 )-* o 1a/ crecimiento5

Obse%v"&ioes: 

7ara inocular las bacterias en el medio agar nutritivo con cristal violeta no se anali&ó si eran bacterias 0ram positivas o 0ram negativas, !a que no se contó con microscopios.



FMC. "as fotos que muestran los resultados de este laboratorio se presentan en los ane-os.





25

"as muestras que se utili&aron para inocular en el medio de cultivo se e-tra(eron de4

3R4O

INOC4LO 5ONA A

INOC4LO 5ONA B

=

8ubo A

8ubo 6

'4ESTRAS DEL E6-ERI'ENTO ermentación de carboidratos del grupo =  Estanque de Arquitectura.

0ru po 5 A 6 N N N N N N  


2

8ubo A

8ubo 6

>

Iona A

Iona 6

K

8ubo A

8ubo 6

5

8ubo A

8ubo 6

7. Co&)usioes: 







25

ermentación de carboidratos del grupo 2  Estanque de Arquitectura. 9idrólisis del almidón, placa del grupo 5  Estanque de Arquitectura ermentación de carboidratos del grupo 5  Estanque de Arquitectura. ermentación de carboidratos del grupo 5  Estanque de Arquitectura.

El eco que nuestras muestras tenga el mismo resultado se debe a que, sin percatarnos todos los grupos sembramos bacterias del un mismo lugar. 6asándonos en la teor*a concluiremos que las bacterias inoculadas son 0ram negativas, porque el cristal violeta no inibió su crecimiento. La que el cristal violeta sólo inibe el crecimiento de bacterias 0ram positivas. El cristal violeta tiene acción bacteriostática selectiva porque inibe el crecimiento de bacterias gran positivas sin afectando menos a las bater*as gran negativas. 7odemos observar en los resultados que la placa control tiene menos crecimiento que las placas que contienen cristal violeta, esto






puede deberse a que no se sembró igual cantidad de inoculo en las placas. Comparando las placas que contienen cristal violeta podemos concluir que efectivamente el cristal violeta inibe en menor grado el crecimiento de las bacterias si estas son 0ram negativas, pues mientras se va elevando la concentración de cristal violeta en las placas se va reduciendo el crecimiento "a acción bacteriostática del cristal violeta ! en general de los colorantes se debe a la modi#cación del potencial de ó-idoreducción del medio, lo que inibe el desarrollo de los microorganismos. El cristal violeta se adiciona en medios de cultivo para que el medio tenga carácter selectivo, con el #n de facilitar el aislamiento de bacterias gran negativas. El cristal violeta tiene acción bacteriostática !a que no mata a los microorganismos, sólo inibe su crecimiento. P





8. Re&o#e!"&ioes:  3nocular

la misma cantidad de microorganismo en las placas.  8apar bien los tubos de ensa!o al momento de llevar el agar nutritivo al autoclave, pues podr*a introducirse agua en vapor en gran cantidad lo cual malograr*a el medio de cultivo. Ocasionando que el medio de cultivo no solidi#que bien.  Jeali&ar rápidamente pero con las precauciones correspondientes los e-perimentos, !a que el agar nutritivo se solidi#ca impidiendo reali&ar correctamente el e-perimento.

25


9. Bib)io%";<": 6acteriolog*a general principios ! prácticas de laboratorio. Evel!n Jodrigue& Cavallini, :aria del :ar 0amboa Coronado, rancisco 9ernande& Cavarr*a, 1orge anilo 0arc*a 9idalgo. 7ág. >F=. :icrobiolog*a Estomatolog*a fundamentos ! gu*a práctica. 2Q Edición. /egroni. 7ág. ==K. ttp4DDdocencia.udea.edu.coDbacteriologiaD:icro biologiaAmbientalDmicrobiologiaR2.pdf ... actores de crecimiento microbiológico. ttp4DDbc.inter.eduDfacultadD!serranoDfactores#sic osqui.tm ... actores de crecimiento microbiológico. ttp4DD.edeca.una.ac.crD#lesDcarlosmicrobiol ogiaDClases@2?"aboratorio @2?:icrobiologiaD:anual@2?"aboratorio @2?:icrobiologia.pdf S Acción bacteriostática del cristal violeta.

=. Ae>o:

=. otos de los resultados de la acción bacteriostática selectiva del cristal violeta4 0rupo = =4=???? =4=?????

=4=?????? 25


=4=????

0rupo >

=4=??????

=4=????

25

=4=?????

0rupo K

=4=?????


=4=??????

2. Acción 6acteriostática de las lagrimas Titu)o: TAcción 6acteriostática de las lagrimasU -)"te"#ieto !e) *%ob)e#": :ucas veces el ser umano, abitualmente no conoce como a totalidad su cuerpo ! por consiguiente todos aquellos procesos que se llevan a cabo para que su medio interno interactúe de forma rec*proca (unto con el medio e-terno que lo rodea. Es por eso que para que a!a la armon*a necesaria en los dos medios citados anteriormente, las c'lulas del cuerpo umano las cuales están encargadas de producir anticuerpos que van a a!udar a 25


mantener protegido nuestro sistema de los microorganismos, de la invasión no deseada ! la infección. E-isten mucas sustancias fabricadas orgánicamente por nuestro cuerpo que cumplen esta función una de ellas es la secreción de lágrimas. En el pasado se an reali&ado estudios en donde se a descrito la composición de las lágrimas ! como componente de su mecanismo de defensa al cuerpo, esta la presencia de "iso&ima, la cual es antis'ptica+ Esta sustancia puede eliminar al protoplasma, porción sub!acente a la pared celular, al tratar algunas bacterias con esta sustancia. 7or eso, surge la gran necesidad de tratar de demostrar la TAcción bacteriostática de las lágrimasU para as*, comprobar su efecto sobre aquellas bacterias a las que el cuerpo umano está e-puesto diariamente. ?usti@&"&i$: 9o! en d*a las personas conocen las bacterias como organismos vegetales unicelulares que se encuentran difundidas en el aire, agua ! suelo, en animales ! plantas, as* como tambi'n en la materia orgánica muerta. 7or consiguiente son agentes de fermentación ! putrefacción, además causan enfermedades al ombre los animales ! las plantas. A lo largo de los a%os, las bacterias an producido este efecto en el ser umano, debido a esto nuestro organismo se a encargado de la producción de ciertas sustancias como es el caso de las lágrimas las cuales participan en la defensa de nuestro cuerpo al frente de bacterias, que en este caso las que se encuentran en el aire, elemento que establece estreca relación con el o(o. 9e aqu* la importancia de la demostración de la acción bacteriostática de las lágrimas como proceso por 25


el cual lleva a cabo el organismo para as* disminuir el crecimiento de una bacteria. El comprobar lo anteriormente dico, permitir*a saber si las lágrimas a!udan a mantener el o(o limpio de bacterias polvo, entre otros, ! además saber si ellas son su#cientes para cumplir dica función. Evitando as* que constantemente suframos infecciones.

ACCIÓN OLI3ODINÁ'ICA DE LOS 'ETALES -ESADOS 1.

Objetivos: 

2.

emostrar ! observar el efecto $la acción oligodinámica) que causan los metales pesados a los microorganismos.

Fu!"#eto te$%i&o:

En el laboratorio anterior $TAcción bacteriostática selectiva del cristal violeta) !a emos visto que metales pesados ! sus componentes son ideales para controlar el crecimiento microbiológico, es esta parte tocaremos más a fondo el tema. Ciertos metales pesados o sus combinaciones qu*micas e(ercen efecto antimicrobiano a concentraciones mu! ba(as $= parte en 2? millones), esta acción recibe el nombre de acción oligodinámica+ los más activos son el mercurio, la plata ! el cobre. "os mercuriales poseen propiedad antis'ptica ! desinfectante.

prote*nas tisulares. "os organomercuriales son menos tó-icos ! cáusticos que las sales inorgánicas. "a acción antimicrobiana se debe a la combinación del ión metálico con los grupos sulf*dricos de ciertas prote*nas que se desnaturali&an de la c'lula microbiana+ 'stas se inactivan, precipitan !, #nalmente, producen la muerte. ¿Qué es la acción oligodinámica?

Es la propiedad que tienen ciertos metales, especialmente la plata, de e(ercer efectos letales sobre las bacterias en cantidades peque%*simas. El t'rmino deriva de dos palabras griegas4 oligos, que signi#ca poco ! d!namis, fuer&a o poder. Este fenómeno puede demostrarse en el laboratorio si se coloca un tro&o peque%o de metal $plata, cobre) limpio sobre una placa con inóculo bacteriano. espu's de la incubación se presenta una &ona de inibición $no crecimiento) alrededor de la pie&a metálica, esta es la zona oligodinámica+ con frecuencia las colonias en el borde del alo de inibición son de ma!or tama%o que en el resto de la placa, debido a que tuvieron una ma!or disponibilidad de nutrientes que no fueron utili&ados en la &ona sin crecimiento. "a cantidad de metal que produce este efecto inibitorio es e-traordinariamente peque%o ! 25


puede e-presarse en partes por millón.
•

•

7eso4 >.5? g. :aterial4 "atón. iámetro4 2?.KF mm. Anverso4 Escudo /acional de Armas en octógono. Jeverso4 enominación ;anqueada por los dise%os dentro de octógono. Canto4 liso.

Como sabemos el latón es una aleación de cobre ! &inc, (ustamente metales pesados que tienen acción oligodinámica. El cobre ! en especial el sulfato de cobre son más usados contra algas ! ongos que contra bacterias para controlar el crecimiento en reservorios de agua. As* podemos observar en el siguiente esquema las &onas que presenta la placa petri donde se llevó a cabo la acción oligodinámica. Iona

25


Crecimiento

Iona de estimulación4 presenta un

+.

'"te%i")es:

=. :oneda de =? c'ntimos. 2. Xcido n*trico al =?@. >. Agua destilada. K. Baso de precipitado. 5. 7in&a. . :edio agar nutritivo $un apro-imadamente =5 ml). F. = placa petri esterili&ada. H. :icroorganismo a inocular.

,.

tubo

con

-%o&e!i#ieto:

=. Berter en un vaso de precipitado poca cantidad de ácido n*trico, tal que cubra la moneda de =? c'ntimos. 25


2.
>. Con una pin&a sacar la moneda de la solución de acido n*trico $=?@) ! lavarla con agua destilada para eliminar el ácido.

K. Colocar la moneda dentro de una placa petri.

5. 3nocular el tubo que contiene agar nutritivo, agregando una gotita 25


del cultivo problema, mover suavemente para omogeni&ar la muestra. . Agregar el agar inoculado dentro de la placa petri que contiene la moneda.

F. e(ar solidi#car el agar. H.3nvertir la placa e incubarla a >FMC por KH oras.

.

Resu)t"!os / obse%v"&ioes:

En el e-perimento de acción oligodinámica no se pudo observar placa petri alguna con todas las &onas de crecimiento $Iona de inibición, &ona de ma!or crecimiento ! la &ona de normal crecimiento). A lo má-imo se pudo observar placas petri con dos &onas4 la &ona oligodinámica ! la &ona de crecimiento normal $0rupo K ! grupo 5). "as placas petri de los demás grupos no tuvieron los resultados deseados !a que el agar nutritivo no solidi#có.

25


El tiempo de incubación de las placas petri para demostrar la acción oligodinámica fue de > d*as.

7.

Co&)usioes:  "as

colonias en el borde del alo de la &ona de inibición $&ona oligodinámica) son de ma!or tama%o que en el resto de la placa, debido a que tuvieron una ma!or disponibilidad de nutrientes que no fueron utili&ados en la &ona sin crecimiento.  El que no sea visible las diferentes &onas de crecimiento en la placa donde está la moneda, puede deberse a que no se eliminó por completo las impure&as de la moneda. "a acción oligodinámica se debe a que los iones metálicos se combinan con los grupos sulf*dricos de ciertas prote*nas que poseen los microorganismos, produciendo la desnaturali&ación de las prote*nas presentes en ellos, por tanto evitando el crecimiento de los microorganismos. "os metales pesados son activos en mu! ba(as concentraciones. "a actividad antibacteriana de los metales pesados se reduce fuertemente en presencia de suero ! de prote*nas tisulares.

8.

Re&o#e!"&ioes: 

25

"a moneda debe de estar limpia para evitar impedimentos en la prueba a reali&ar.

Acción bacteriostática selectiva del cristal violeta Acción oligodinámica de los metales pesados 2010 

9.

Jeali&ar con sumo cuidado el lavado de la moneda con ácido n*trico.

Bib)io%";<": Y :icrobiolog*a Estomatolog*a fundamentos ! gu*a práctica. 2Q Edición. /egroni. 7ág. ==K. Y Compendio esencial de Zu*mica farmaceútica. A. [orol\ovas, 1.9. 6urc\alter. 7ag. 5. Y

ttp4DD.edeca.una.ac.crD#lesDcarlosmicro biologiaDClases@2?"aboratorio @2?:icrobiologiaD:anual@2?"aboratorio @2?:icrobiologia.pdf S Acción oligodinámica de metales pesados.

C4ESTIONARIO A&&i$ b"&te%iostti&" se)e&tiv" !e) &%ist") vio)et": 1.Aete b"&te%iostti&o:

"a acción bacteriostática se fundamenta en la inibición del desarrollo microbiano mediante el bloqueo de diferentes factores de reproducción. 25


/o las mata directamente, pues una población de bacterias sin capacidad de reproducción o con capacidad disminuida para la misma es una población condenada a su desaparición. En cambio un agente bactericida es aquel capa& de matar a las bacterias. 2.A&&i$ b"&te%iostti&" se)e&tiv":

Es aquel efecto que sólo inibe el crecimiento o reproducción de cierto grupo de microorganismos, mientras que no afecta o afecta en menos proporción a otro grupo de microorganismos. Es por ello que se agregan a medios de cultivos agentes bacteriostáticos para que 'stos tengan carácter selectivo. +.A*)i&"&ioes:  

 

25

El /aO9 se utili&a en la industria del vino para limpiar las cubas de madera. El o&ono es utili&ado desde antes para tratamiento de agua, aora se a e-tendido su utili&ación ! se aplica para tratar ambientes e incluso podemos tratar directamente sobre el organismo con #nes terap'uticos $concentraciones de ?.?= ppm a menos). "os antibióticos son usados para preservar los alimentos, as* tenemos las tetraciclinas. Agentes bacteriostáticos se utili&an en la industria te-til como protección de materiales. En la industria del maquilla(e para las cremas, lociones para despu's de afeitar, en perfumes.

Acción bacteriostatica selectiva del Cristal Violeta

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