Urocultivo - Informe de Microbiología

31/5/2014

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

CURSO DE MICROBIOLOGÍA - INFORME SOBRE UROCULTIVO

Profesor: Gerson LLallico Manzanedo Alumno: Paul Arturo Boza Huaroc

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“Año de la Promoción de la Industria Responsable y del Compromiso Climático”

TABLA DE CONTENIDO Breve Marco Teórico ............................................................ ................................................................. ....... 6 1)

Infección urinaria: .............................................................. ............................................................. 6 1.1 Definiciones.................................................................................................................................... Definiciones .................................................................................................................................... 6

2)

Agentes etiológicos: ....................................................................................................................... etiológicos: ....................................................................................................................... 6

3)

Patogenia ................................................................................................ Patogenia ................................................................................................ ........................................ 7

4)

MECANISMOS DE VIRULENCIA: ...................................................................................................... VIRULENCIA: ...................................................................................................... 8

5)

MANIFESTACIONES CLÍNICAS (Anexo 1) ........................................................... 1) ........................................................... ............................. 9

DIAGNOSTICO MICROIOLÓLOGICO DE LA INFECCIÓN URINARIA .......................................................... ..... 11 1)

OBTENCION DE LA MUESTRA ....................................................................................... MUESTRA ....................................................................................... ................ 11 RECOMENDACIONES: ......................................................................................................................... 11 Métodos para la obtención de la muestra de orina - (Anexo 2) ........................................................ 11 Solicitud de examen al laboratorio ................................................................ ..................................... 12

2)

TRANSPORTE DE LA MUESTRA ..................................................................................................... MUESTRA ..................................................................................................... 12

3)

PROCESAMIENTO EN LABORATORIO ........................................................................................... LABORATORIO ........................................................................................... 12

4)

Tests de screening rápidos ................................................................................ rápidos ................................................................................ ........................... 13 A)

Examen microscópico del sedimento urinario .......................................................... ................ 13

B)

Tira reactiva de orina ............................... ................................................................. ................ 13

C)

Tinción de Gram directa de la muestra .......................................................... ........................... 13

5)

Urocultivo ..................................................................................................................................... Urocultivo ..................................................................................................................................... 14 A)

Siembra microbiológica ............................................................................................................ 14

B)

Incubación ........................................................... ................................................................. ..... 14

C)

INTERPRETACIÓN DEL UROCULTIVO .............................................................. ........................... 14

INFORME SOBRE EL PROCEDIMIENTO DE PRÁCTICA “UROCULTIVO” REALIZADO EL DÍA – 27/MAYO/2014 – 27/MAYO/2014 ................................................................ .............................................................. ...................................... 15 1)

EXAMEN FÍSICO DE LA MUESTRA DE ORINA ................................................................................ ORINA ................................................................................ 15

2)

EXAMEN DE SEDIMENTO DE LA MUESTRA DE ORINA ................................................................. ORINA ................................................................. 15

3)

TINCIÓN DE GRAM EN FRESCO................................................................ FRESCO ................................................................ ..................................... 16 RESULTADO ........................................................................................................................................ 17

U.A.P – Informe Sobre Urocultivo

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4)

Presencia de Antimicrobiano Residual: PAR test

(Ver ANEXO 7) ....................... 17

RESULTADO ........................................................................................................................................ 17 5)

Cultivo ..................................................................................................... Cultivo ..................................................................................................... ...................................... 17 RESULTADO ........................................................................................................................................ 18

SOLUCIÓN DEL CUESTIONARIO ............................................ ................................................................. ..... 19 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS................................................................................................................... 22 Anexos ............................................................ ................................................................. ........................... 22


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INTRODUCCIÓN:

En el siguiente informe de práctica se explicara la definición de una infección urinaria, los agentes etiológicos, la patogenia, mecanismos de virulencia, manifestaciones clínicas y el diagnostico en el laboratorio orientado hacia la microbiología, y de esta forma dar un diagnostico final.


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OBJETIVOS: 





Expandir y comprender los fundamentos aplicados en los procedimientos aplicados en un urocultivo. Registrar los procedimientos que se realizaron en la práctica el 27 de mayo del 2014.

Presentar el cuestionario resuelto.


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BREVE MARCO TEÓRICO 1) INFECCIÓN URINARIA: Se considera infección urinaria a la presencia de bacterias en sectores normalmente estériles del aparato urinario, con la consiguiente respuesta inflamatoria. Las infecciones urinarias (IU) constituyen una patología muy frecuente, de elevada morbilidad, en muchos pacientes son recurrentes o pueden determinar complicaciones graves como sepsis o secuelas importantes, como daño renal. Desde el punto de vista anatómico, cabe recordar la división del tracto urinario en dos sectores, alto (riñones, pelvis renales y uréteres) y bajo (vejiga y uretra). (1) 1.1 DEFINICIONES 





Bacteriuria:: presencia de bacterias en la orina. Bacteriuria or ina. Bacteriuria sintomática o asintomát asintomática ica:: según se acompañe o no de síntomas vinculados al aparato urinario. Bacteriuria significativa: significativa: número de bacterias por mililitro de orina que se corresponde estadísticamente con una infección urinaria. En los años 50, Kass definió el recuento de 100.000 o más colonias por ml de orina (105 ufc/ml) como criterio de bacteriuria significativa, o sea indicadora de IU verdadera. Este criterio fue establecido comparando el número de bacterias por ml de orina en muestras obtenidas por punción suprapúbica (PSP) y chorro medio en mujeres con pieloniefritis sintomática. Con el correr del tiempo, otros autores han propuesto niveles menores para el diagnóstico de bacteriuria significativa, en ciertas poblaciones de pacientes sintomáticos, por ejemplo 103 ufc/ml y 102 ufc/ml. Bajos recuentos bacterianos podrían deberse también a IU por cocos grampositivos, diuresis forzada, antimicrobianos suministrados previamente, contaminación de la muestra, o muestras tomadas muy al inicio de la enfermedad. Es importante recordar que también se observan recuentos bajos en IU adquiridas por vía hematógena. (1). hematógena. (1).

2) AGENTES ETIOLÓGICOS: En la gran mayoría de los casos, se trata de infecciones monomicrobianas y predominan los bacilos gramnegativos. Los agentes pueden variar según la edad, sexo y patología subyacente. El agente más frecuente es Escherichia coli . En las infecciones de pacientes ambulatorios predomina E. coli , seguido de Klebsiella spp., Proteus spp. y otros bacilos gramnegativos y cocos grampositivos, como S. saprophyticus, Enterococcus spp. y Streptococcus agalactiae. Proteus spp. Suele asociarse a anomalías de la vía urinaria, especialmente litiasis. Más raramente Haemophilus influenzae se aísla de U.A.P – Informe Sobre Urocultivo

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infecciones comunitarias. En infecciones hospitalarias, pacientes con enfermedad urológica subyacente o portadores de sondas, la frecuencia relativa de E. coli disminuye y se aíslan Pseudomonas spp., otros bacilos gramnegativos no fermentadores, enterobacterias como Klebsiella spp., Enterobacter spp., Serratia spp. y levaduras. Suele tratarse además de cepas más resistentes a los antibióticos. Infecciones por S. aureus o Salmonella spp. Indican generalmente infección renal metástasica en el curso de una bacteriemia. Cabe recordar que Mycobacterium tuberculosis también puede producir infección renal por vía hematógena. Las IU polimicrobianas son excepcionales y se observan en sondados o pacientes con fístulas que comunican la vía urinaria con intestino o vagina. Adenovirus tipo 11 causa cistitis hemorrágia epidémica, especialmente en niños varones. Chlamydia trachomatis produce uretritis que será tratada en otro capítulo. El papel de otros agentes (Gardnerella vaginalis , Mycoplasma hominis, Ureaplasma aclarado. (1). urealyticum) ha sido postulado, pero no del todo aclarado. (1). 3) PATOGENIA En la gran mayoría de los casos, la IU es causada por microorganismos del tubo digestivo del propio paciente, que alcanzan el tracto urinario por la vía ascendente. Más raramente lo hacen por vía hematógena, en el curso de una bacteriemia a partir de un foco a distancia. Una vez en la vía urinaria deben ser capaces de adherirse y multiplicarse. Como en otros casos, que se desarrolle o no IU depende de los mecanismos de defensa del huésped y los atributos patogénicos del germen. Los mecanismos de defensa del tracto urinario son los que se enumeran a continuación. (1). continuación. (1). 1.

2.

3.

4.

El libre flujo de orina, el vaciamiento vesical periódico, determina un lavado por arrastre que impide que gérmenes con escasa afinidad por el urotelio lo colonicen. El flujo urinario comprometido de forma mecánica o funcional es la condición predisponente más común en pacientes con infección urinaria. Esta obstrucción puede deberse a cálculos, hipertrofia prostática, etc. (1). etc. (1). Normalmente, la válvula vesicoureteral previene el reflujo de orina de la vejiga hacia sectores más altos. Alteraciones funcionales o anatómicas de esta determinan un mayor riesgo, que se observa especialmente en la infancia. (1). infancia. (1). La proteína de Tamm Horsfall, presente en la orina, contiene numerosos residuos de manosa que inhiben competitivamente competitivamente la adherencia mediada por los pili manosasensibles. (1). manosasensibles. (1). La mucosa intacta es también una efectiva barrera frente a la colonización. Algunas bacterias como S. saprophyticus requieren la presencia de fibras de colágeno que se exponen en la superficie luego de microtraumatismos


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5. 6.

(durante las relaciones sexuales), lo que explicaría la presencia de este agente en IU en mujeres en edad genital activa. (1). activa. (1). Ciertas características de la orina normal como la elevada osmolaridad, el contenido de urea y el pH ácido, inhiben el crecimiento bacteriano. (1). bacteriano. (1). El pH ácido de la vagina, determinado por la flora normal en la mujer y la actividad antimicrobiana de las secreciones prostáticas en el hombre contribuyen también a dificultar la colonización perineal por potenciales patógenos. (1). patógenos. (1). ADEMÁS DE LOS PACIENTES CON OBSTRUCCIÓN AL FLUJO DE ORINA, SE SE ENCUENTRAN PREDISPUESTO PREDISPUESTOS: S: A. LOS DIABÉTICOS CON DESCONTROL METABÓLICO, FAVORECE EL DESARROLLO BACTERIANO. (1 ) .

LA

GLUCOSURIA

B. EMBARAZADAS, YA QUE DURANTE ESA ETAPA EXISTE UN MAYOR RIESGO DE INFECCIÓN URINARIA DEBIDO A FACTORES MECÁNICOS (DISMINUCIÓN DE LA CAPACIDAD VESICAL PROVOCADA POR LA EXPANSIÓN DEL ÚTERO, LA PRESENCIA DE HIDROURÉTER, LA DISMINUCIÓN DE LA PERISTALSIS Y ATONÍA URETERAL) Y TAMBIÉN FACTORES HORMONALES QUE DETERMINAN CAMBIOS (METAPLASIA DE CÉLULAS DEL UROEPITELIO, AUMENTO DEL TAMAÑO RENAL Y DISMINUCIÓN DE LA CAPACIDAD DE CONCENTRAR). EVENTUALMENTE, LA PRESENCIA DE GLUCOSURIA, EN PACIENTES CON DIABETES GESTACIONAL CONTRIBUYE TAMBIÉN A UN MAYOR RIESGO. ADEMÁS LA ASOCIACIÓN DE BACTERIURIA (SINTOMÁTICA O NO) CON PARTO PREMATURO Y BAJO PESO AL NACER, HA SIDO FEHACIENTEMENTE DEMOSTRADA, POR ELLO SE RECOMIENDA LA DETECCIÓN SISTEMÁTICA DE LA BACTERIURIA, COMO RUTINA DE EMBARAZO. (1 ) .

C. NIÑOS PORTADORES DE REFLUJO VESICOURETERAL Y OTRAS ANOMALÍAS. SE ESTIMA QUE HASTA UN 50% DE LOS NIÑOS CON IU TI ENEN REFLUJO. (1 ) . D. PACIENTES CON VEJIGA NEURÓGENA EN LOS QUE EL INCORRECTO VACIADO DETERMINA ORINA RESIDUAL VESICAL QUE SE COLONIZA FÁCILMENTE. (1 ) .

4) MECANISMOS DE VIRULENCIA: Las cepas de E. coli uropatógenas (UPEC) suelen diferir de otras cepas de E. coli que integran la flora fecal y no se encuentran como agentes de IU (no uropatógenas). Cepas de UPEC demuestran una mayor capacidad de adherencia a células del epitelio vaginal y urinario, resistencia al poder bactericida del suero, producción de hemolisina, y mayor producción de antígeno capsular (antígeno K). Pertenecen además a un limitado número de serogrupos (O1,O2, O4, O6, O7, O8, O9, O11, O18, O22, O25, O62 Y O75) . La adherencia es importante no solo en la infectividad, sino que ciertas cepas exhiben una mayor capacidad de producir IU altas. La adhesión está mediada por ligandos específicos que se unen a receptores del huésped. Esos ligandos son pequeñas proteínas localizadas en los pili. (1). pili. (1). U.A.P – Informe Sobre Urocultivo

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Pili tipo 1: presente en muchas enterobacterias, se une a residuos manósidos presentes en las células del huésped. Esa unión puede ser inhibida competitivamente por la manosa, por lo que se denominan manosas sensibles. Se cree que no son las adhesinas más importantes. Fimbrias P: no se inhibe su unión por manosa, por lo que se denominan manosa resitentes. Son expresadas por el 90% de las cepas que causan infecciones altas. Anticuerpos anti fimbrias P impiden el desarrollo de pielonefritis en modelos animales. Otras adhesinas manosarresistentes como adhesinas X, han sido identificadas. La adhesión mediante fimbrias probablemente también esté presente en infecciones causadas por Klebsiella spp. o S. saprophyticus. Una vez que la bacteria logra adherirse intervienen otros factores. La hemolisina, presente en cepas UPEC, sería importante en el daño celular y en lograr que exista hierro disponible para la bacteria. La aerobactina es un sideróforo, proteína que proporciona hierro a la bacteria. El antígeno K, como en otros casos, su cápsula inhibe la fagocitosis. La endotoxina o LPS contribuye a la inflamación a nivel renal y a las manifestaciones sistémicas en pacientes sépticos. La ureasa, producida por Proteus spp., es una enzima que desdobla la urea presente en la orina en amonio y dióxido de carbono, determinando una elevación del pH urinario. El medio más alcalino da como resultado la precipitación de sales de calcio y magnesio y la formación de cálculos, que a su vez sirven como reservorio de bacterias. También producen ureasa aunque en menor cantidad, Klebsiella spp. y S. saprophyticus. Las cepas aisladas de pacientes con IU y patología urológica subyacente suelen exhibir menos atributos de virulencia. (1). virulencia. (1). 5) MANIFESTACIONES CLÍNICAS (ANEXO 1) Clásicamente la presencia de fiebre y dolor en una o ambas fosas lumbares se considera indicadora de pielonefritis, en tanto la disuria y la polaquiuria serían propias de la cisititis. Debido a diferencias terapéuticas y pronósticas de las infecciones altas y bajas, se han hecho numerosos esfuerzos en intentar localizar la altura de la infección sin que ninguna técnica fuera lo suficientemente práctica para su uso rutinario. Si bien los signos y síntomas pueden sugerir la localización de la infección (alta o baja), no son específicos. Es bueno entonces recordar que las manifestaciones clínicas no siempre permiten establecer un diagnóstico preciso de localización. En base a la presencia o ausencia de condiciones subyacentes que favorezcan la infección es clásico clasificar a las IU en complicadas y no complicadas. (2). complicadas. (2). 

CISTITIS AGUDA: AGUDA: OCURRE PRINCIPALMENTE EN MUJERES JÓVENES SIN PATOLOGÍA SUBYACENTE. SE MANIFIESTA POR ARDOR MICCIONAL, DISURIA, POLAQUIURIA, EVENTUALMENTE HEMATURIA Y DOLOR SUPRAPÚBICO. EL DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL SE DEBE ESTABLECER CON OTRAS CAUSAS DE DISURIA (VAGINITIS Y URETRITIS). SE ESTIMA QUE ENTRE 10% Y 35% DE LAS PACIENTES CON ESTE CUADRO CLÍNICO PRESENTAN ADEMÁS INFECCIÓN RENAL OCULTA. (2). OCULTA. (2).


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



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

PIELONEFRITIS AGUDA NO COMPLICADA: COMPLICADA: CARACTERÍSTICAMENTE LOS PACIENTES SE PRESENTAN CON DOLOR EN FOSAS LUMBARES, ASOCIADO A SÍNTOMAS SISTÉMICOS COMO FIEBRE, VÓMITOS, ETC., PUDIENDO O NO PRESENTAR SÍNTOMAS CONCOMITANTES DE CISTITIS. EL CUADRO CLÍNICO PUEDE SER DE GRAVEDAD VARIABLE, INCLUYENDO SEPSIS Y SHOCK SÉPTICO. (2). IU COMPLICADAS: EN COMPLICADAS: EN ESTE GRUPO SE CONSIDERAN TODAS LAS INFECCIONES EN PACIENTES DE SEXO MASCULINO Y LAS DE MUJERES CON FACTORES PREDISPONENTES. SUELEN PRESENTARSE DE MANERA MENOS TÍPICA, LAS COMPLICACIONES Y LAS FALLAS TERAPÉUTICAS SON MÁS FRECUENTES. (2). FRECUENTES. (2).

SÍNDROME URETRAL AGUDO: AGUDO: DEFINIDO COMO EL QUE SE PRESENTA EN MUJERES JÓVENES QUE TIENEN DISURIA Y PIURIA CON UROCULTIVOS CON RECUENTOS MENORES A 105 UFC/ML. ESTE SÍNDROME PUEDE DEBERSE A URETROCISTITIS (POR E.COLI, ETC.) O A OTRAS CAUSAS (VAGINITIS, INFECCIÓN POR N. GONORRHOEAE, C. TRACHOMATIS O HERPES GENITAL). DE ACUERDO A STAM Y COLS. EN ESTAS PACIENTES, RECUENTOS TAN BAJOS COMO 102 UFC/ML SON SIGNIFICATIVOS. SIGNIFICATIVOS. (2). (2).

PROSTATITIS: LA PROSTATITIS AGUDA SE PRESENTA CON FIEBRE Y DOLOR PROSTATITIS: PERINEAL Y LUMBAR Y DOLOR A LA PALPACIÓN PROSTÁTICA. USUALMENTE ES DEBIDA A E.COLI O MÁS RARAMENTE A N. GONORRHOEAE EN JÓVENES. LA PROSTATITIS CRÓNICA SE MANIFIESTA CON SÍNTOMAS MENOS PRECISOS O POR BACTERIURIA RECURRENTE. PARA EL TRATAMIENTO SE REQUIEREN DROGAS QUE ALCANCEN BUENA CONCENTRACIÓN EN EL TEJIDO PROSTÁTICO (TRIMETOPRIM-SULFA, QUINOLONAS FLUORADAS) POR PERÍODOS PROLONGADOS. (2). PROLONGADOS. (2). IU EN EL PACIENTE SONDADO: SONDADO: LUEGO DE COLOCADA LA SONDA, LA PROBABILIDAD DE DESARROLLAR BACTERIURIA AUMENTA CON LOS DÍAS DE PERMANENCIA. HABITUALMENTE EL PACIENTE ESTÁ ASINTOMÁTICO. SIN EMBARGO, LA BACTERIURIA ASOCIADA A SONDA VESICAL CONSTITUYE UNA CAUSA MUY IMPORTANTE DE INFECCIÓN HOSPITALARIA Y BACTERIEMIA POR GRAMNEGATIVOS. LOS GÉRMENES INGRESAN A LA VÍA URINARIA EN EL MOMENTO DE LA INSERCIÓN DE LA SONDA, POR VÍA PERIURETRAL O BIEN CONTAMINANDO EL SISTEMA DE DRENAJE. POR ELLO, LAS MEDIDAS DE PREVENCIÓN MÁS IMPORTANTES SON EXTREMAR LAS MEDIDAS DE ANTISEPSIA AL COLOCAR LA SONDA, PREFERIBLEMENTE POR PERSONAL BIEN ENTRENADO, MAXIMIZAR LA HIGIENE DEL ÁREA PERINEAL Y DEL MEATO URETRAL Y MANTENER EL SISTEMA COLECTOR CERRADO. (2). CERRADO. (2).


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DIAGNOSTICO DIAGNOST ICO MICROIOLÓLOGICO DE L A INFECCIÓN URINARIA

1 ) OBTENCION DE LA MUESTRA RECOMENDACIONES: Preferentemente se debe obtener la primera orina de la mañana (ya que se trata de una muestra más concentrada). De no ser posible posible, el paciente debe abstenerse de orinar durante las 3 horas previas pr evias al examen. (2). examen. (2). 

 

No forzar la ingestión de líquidos, ya que con ello se diluye la orina, alterando el recuento. Volumen recomendado a recolectar: 25 a 50 ml. Volumen mínimo: 3 ml.

MÉTODOS PARA LA OBTENCIÓN DE LA MUESTRA DE ORINA - (ANEXO 2) Orina de segundo chorro: es la muestra más frecuentemente procesada para urocultivo, en especial por su fácil obtención; sin embargo, se puede contaminar frecuentemente con flora de la piel, uretra, y vagina en mujeres. Requiere de un aseo genital prolijo con tórulas, agua y jabón. (2). jabón. (2). Orina obtenida mediante recolector: no es una buena muestra, ya que generalmente se contamina con flora perineal. Es útil sólo si el cultivo resulta ser negativo o si se aisla, en recuento significativo, una especie uropatógena única. Para este procedimiento se recomienda el cambio de recolector cada 30 minutos hasta obtener la muestra de orina. (2). orina. (2). Orina obtenida a través de catéter vesical permanente: no es una buena muestra excepto que el catéter haya sido recientemente instalado. Generalmente los catéteres vesicales están colonizados ya a las 48 horas de instalados y los microorganismos aislados no necesariamente son el agente causal de la infección urinaria. (2). urinaria. (2). La superficie externa del catéter debe limpiarse con una tórula con alcohol 70% y esperar que seque. La punción se efectúa en un ángulo de 30° en el sitio indicado para ello. No debe pinzarse el catéter antes de obtener la muestra. (2). Punción vesical: es el método de referencia para la obtención de orina a cultivar ya que evita la contaminación con flora uretral; sin embargo, se reserva para casos especiales por ser un procedimiento invasor. (2). invasor. (2).


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Cateterización vesical transitoria: se considera una alternativa a la punción vesical pero es también un procedimiento invasor y puede generar arrastre retrógrado de microorganismos. (2). microorganismos. (2). SOLICITUD DE EXAMEN AL LABORATORIO El laboratorio debe educar a los médicos clínicos para que la solicitud de urocultivo contenga la siguiente información fundamental para el procesamiento y la interpretación de los resultados: (2). resultados: (2). 

Nombre, edad y sexo del paciente



Si es mujer, indicar la presencia de embarazo.



Existencia de patología de la vía urinaria



Método empleado en la recolección de la muestra



Diagnóstico clínico

 

Uso previo de antibióticos Hora de obtención de la muestra

2 ) TRANSPORTE DE LA MUESTRA La orina es un buen medio de cultivo que permite la multiplicación de los microorganismos incrementando el recuento bacteriano, por lo que las muestras deben procesarse antes de 2 horas de obtenidas. Si ello no es factible, las muestras deben refrigerarse a 4°C. Una muestra puede mantenerse refrigerada, sin que se altere el recuento bacteriano, durante 24 horas. Los preservantes que inhiben la multiplicación bacteriana no han resultado mejores que la refrigeración, son de alto costo y tienen el inconveniente de interferir con algunas determinaciones de la tira reactiva de orina. (2). orina. (2). 3 ) PROCESAMIENTO EN LABORATORIO Existen diversos procedimientos de ayuda en el diagnóstico de la ITU (Anexo 3). El método de referencia es el urocultivo cuyo procesamiento demora 24 a 48 horas. Se recomienda guardar las muestras de orina refrigeradas después de ser procesadas, hasta obtener el resultado del cultivo. En caso de resultados discordantes se recurrirá a la muestra almacenada para repetir los análisis. (2).


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4 ) TESTS DE SCREENING RÁPIDOS A) EXAMEN MICROSCÓPICO DEL SEDIMENTO URINARIO Se Sugiere en infección urinaria, sin embargo, no es confirmatorio. Permite aproximación correcta en ~ 70%. La recomendación es uniformar las variables susceptibles de controlar como el volumen de la orina a centrifugar (que debe ser idealmente de 10 a 12 ml), el tiempo de centrifugación (5 minutos) y la velocidad de centrifugación 2500 rpm. (2). rpm. (2). Se define piuria como la presencia de más de 10 leucocitos/μl o más de 6 leucocitos alterados por campo de 40x. La presencia de piuria indica inflamación del tracto urogenital. Cuando existe una infección, se observan las bacterias con los neutrófilos neutrófilos agrupados formando formando placas de pus y estas son de gran utilidad en la orientación de una infección urinaria pero inespecífica. (2). B) TIRA REACTIVA DE ORINA En general son dos los parámetros útiles a evaluar en la tira reactiva o examen químico de orina: (2). orina: (2). 



Presencia de leucocitos mediante la detección de su enzima: leucocito esterasa. Detecta leucociturias > 10 leucocitos /μl con una sensibilidad entre 53 y 95%. Presencia de nitritos. La mayoría de las especies uropatógenas reducen nitratos a nitritos excepto Staphylococcus saprophyticus y Enterococcus sp. (2). sp. (2).

Se requieren al menos 6 horas para producir niveles detectables de nitritos, por lo que debe realizarse en la primera micción matinal. La sensibilidad descrita es de ~ 80% en la primera micción matinal disminuyendo a 30% en otras muestras. Su especificidad es muy buena, cercana a 98%. (2). C) TINCIÓN DE GRAM DIRECTA DE LA MUESTRA Es un método rápido, económico, sensible y específico para detectar bacteriuria. Se recomienda realizarlo como respaldo frente a discordancias o hallazgos especiales más que como screening. Debe aplicarse a la muestra recién agitada sin centrifugar, con el mismo asa de 1μl (o de 10 μl) empleado en la siembra del urocultivo, depositando este volumen en un portaobjetos; pueden colocarse hasta 10 muestras por lámina. Estas se tiñen y pueden ser observadas cuando existen discordancias entre el urocultivo y el sedimento.


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La presencia de una bacteria/campo de inmersión tiene buena correlación con > 100.000 ufc/ml en ~ 85% de los casos. (2). casos. (2). 5 ) UROCULTIVO A) SIEMBRA MICROBIOLÓGICA La metodología de la inoculación de la muestra en medios de cultivo o siembra microbiológica depende de la forma de obtención de la muestra. (2). muestra. (2). Para orinas de segunda micción, recolector y catéter a permanencia, las muestras deben sembrarse con asa de 1 μl en placas de agar sangre y algún medio selectivo-diferencial: selectivo-diferencial: (2). (2). Mac Conkey; UTITM, Oxoid; CPSTM, bioMerieux. El desarrollo de una colonia en el cultivo debe multiplicarse por 1.000. (2). 1.000. (2). 



Para orinas obtenidas por cateterización vesical, las muestras pueden sembrarse con asa de 10μ (1 colonia = 100 ufc/ml) y 1 μl (1 colonia = 1.000 ufc/ml). (2). ufc/ml). (2). Para orinas obtenidas por punción vesical, se recomienda la siembra por inundación en agar sangre más un medio selectivo-diferencial para bacilos Gram negativos o siembra directa de 100 μl (1 colonia = 10 ufc/ml). (2). ufc/ml). (2).

B) INCUBACIÓN

Una vez sembradas las placas deben incubarse durante 16 a 18 horas a 35 37° C. (2). C. (2). Incube 48 horas aquellos urocultivos negativos con sedimento urinario alterado. (2). alterado. (2). C) INTERPRETACIÓN DEL UROCULTIVO Para el caso de pacientes con síntomas es suficiente con una muestra por chorro medio para la interpretación del estudio, y es por ello que se considera imprescindible contar con el dato clínico. Pueden requerirse muestras repetidas para el diagnóstico de pacientes asintomáticos. La especificidad aumenta al repetir la muestra. (1). muestra. (1). Es fundamental saber cómo se recolectó la muestra (chorro medio, punción suprapúbica, punción de sonda vesical, etc.), si el paciente tenía o no síntomas, el volumen sembrado y si se aisla un probable patógeno urinario o un contaminante. Recuento de bacterias por volumen de orina: se considera en la orina obtenida por chorro medio; en la orina de punción vesical todo U.A.P – Informe Sobre Urocultivo

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recuento es significativo. Si se siembran 100 microlitros (ansa 0,1 ml), se multiplica por 10 (cada colonia representa 10 colonias/ml). Si se usa un ansa de 10 microlitros (0.01 ml) cada colonia representa 100 por ml de orina. (1). orina. (1). (Ver Anexo 5).

INFORME SOBRE EL PROCEDIMIENTO DE PRÁCTICA “UROCULTIVO” REALIZADO EL DÍA – 27/MAYO/2014 1) EXAMEN FÍSICO DE LA MUESTRA DE ORINA La muestra de orina se encontraba contenida en un frasco limpio y estéril, asegurándome que la muestra es idónea para poder procesarla. Primeramente: Se homogenizo la muestra del frasco para luego transvasarlo a un tubo de ensayo limpio y estéril, para poder observar los siguientes parámetros: (Anexo 6)  

COLOR: AMARILLO ASPECTO: TURBIO

2) EXAMEN DE SEDIMENTO DE LA MUESTRA DE ORINA En el examen de sedimento se procedió a centrifugar la muestra de orina contenida en el tubo a 2500 rpm en un tiempo de 5 minutos. Se decanto todo el sobrenadante quedando solo el sedimento, luego se colocó una gota del sedimento en un portaobjeto, posterior a esto se esparce esta gota en el portaobjeto portaobjeto y se coloca encima un cubre objeto. objeto. Se observo al microscopio el sedimento de la muestra de orina a 40X y se observo lo siguiente:     

CÉLULAS EPITELIALES: DE 1 – 2 2 POR CAMPO EN 40 X (ESCASOS) LEUCOCITOS: DE 1 – 3 3 POR CAMPO EN 40 X (ESCASOS) HEMATÍES: MÁS DE 100 X CAMPO EN 40 X (ABUNDANTES) GÉRMENES: ESCASOS OTROS: NO SE ENCONTRO

*La presencia de glóbulos rojos en orina se denomina denomina hematuria e indican sangrado en algún lugar de las vía urinarias. (3).


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3) TINCIÓN DE GRAM EN FRESCO Cuando se menciona tinción de Gram en fresco, se hace referencia a la coloración aplicada a partir de la muestra de orina inicial, aquella muestra de orina que se encuentra contenida en el envase. A. CON UN ASA DE SIEMBRA CALIBRADA Y PREVIAMENTE ESTERILIZADA POR CALOR, SE PROCEDIO A COGER UN POCO DE MUESTRA PARA LUEGO PONERLA EN UNA LAMINA PORTAOBJETOS. B. SE ESPARCE LA MUESTRA EN EL CENTRO DEL PORTAOBJETOS CON UN DIÁMETRO DE 4CM DE LARGO Y 2CM DE ANCHO.

C. LUEGO SE DEJA SECAR A T° AMBIENTE O SE PUEDE OPTAR POR PONERLA EN LA CABINA DE FLUJO LAMINAR.

Fundamento sobre la tinción de Gram: Su propósito es dividir a los microorganismos en Gram positivas y Gram negativas. Los Gram positivas son aquellas que resisten la acción de colorante del disolvente alcohol-acetona, tras el tratamiento con un colorante básico y lugol, mientras que las Gram negativas son decoloradas siendo posteriormente teñidas con un colorante de contraste como puede ser la fucsina diluida o realizar la tinción de gran sobre células de cultivos jóvenes ya que algunos microorganismos son gran positivos solo en la fase de crecimiento. (3). crecimiento. (3).

D. EL FROTIS CON LA ORINA DEBE DE ESTAR FIJADO Y SECO. E.

SE TIÑE CON CRISTAL VIOLETA DURANTE UN MINUTO Y LUEGO SE LAVA CON AGUA. (3 ) .

F.

SE APLICA COMO MORDIENTE EL LUGOL DURANTE UN MINUTO MÁS. (3 ) .

G. SE DECOLORA CON ALCOHOL HASTA QUE YA NO ESCURRE LÍQUIDO AZUL. (3 (3)) .

H. SE LAVA CON AGUA. (3 (3)) .

I.

SE VUELVE A TEÑIR CON SAFRANINA QUE ES EL SEGUNDO COLORANTE DE CONTRASTE DURANTE UN MINUTO. (3 (3)) .

J.

SE LAVA CON AGUA Y SE SECA. (3 (3)) .

K. LUEGO OBSERVAR LA LAMINA CON ACEITE DE INMERSIÓN. (3 (3)) .


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RESULTADO

Gram Negativo – Negativo – No No se observaron estructuras bacterianas. 4) PRESENCIA DE ANTIMICROBIANO RESIDUAL: PAR TEST (VER ANEXO 7)

A. HISOPAR SUSPENSIÓN DE BACILLUS SUBTILIS SOBRE UNA PLACA DE AGAR MUELLER HINTON B. DIVIDIRLO EN CUADRICULAS Y ENUMERAR.

C. COLOCAR UNA GOTA DE MUESTRA DE ORINA EN CADA CUADRICULA SEGÚN CORRESPONDA. D. INCUBAR A 35º C POR 24 HORAS E.

PRESENCIA DE HALOS INDICAN PRESENCIA DE INHIBIDOR DE CRECIMIENTO BACTERIANO

RESULTADO

PAR TEST – TEST – Negativo Negativo a las 24 Horas 5) CULTIVO A) SE COGIÓ UN POCO DE ORINA NO CENTRIFUGADA DEL FRASCO INICIAL CON UN ASA CALIBRADA DE 1 UL (VOLUMEN DEL ASA 0.001 ML), QUE ES LO COMUNMENTE USADO, AUNQUE EL DIAMETRO DEL ASA PUEDE IR DE 1 UL A 10 UL. B) SE INOCULO LA MUESTRA POR ESTRÍA SIMPLE EN EL MEDIO DE CULTIVO AGAR AG AR SA SANG NGRE RE ,, SE ESTERILIZO EL ASA DE SIEMBRA AL FUEGO DEL MECHERO DE BUSTEN, HASTA DEJAR LA PUNTA A ROJO VIVO, LUEGO SE DEJO ENFRIAR EL ASA DE SIEMBRA POR UNOS 5 MINUTOS. *Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos con importancia clínica excepto el de los más exigentes. Se prepara añadiendo un 5% de sangre desfibrinada (oveja, caballo, conejo, etc.) a un agar base rico (agar Columbia, por ejemplo). Se utiliza tambié n para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos, por lo que se considera un medio diferencial. Ciertas bacterias producen enzimas extracelulares que actúan sobre los glóbulos rojos. Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que poseen: alfa, beta o gamma. Para leer con exactitud la hemólisis producida, se debe levantar la placa de agar sangre y observarla contra la


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luz. La hemólisis de tipo alfa es una hemólisis incompleta, caracterizada por la destrucción parcial de la membrana de los eritrocitos y pérdida de algo de hemoglobina en el agar. A simple vista este tipo de hemólisis se detecta por la aparición de una coloración verdosa alrededor de la colonia. La beta-hemólisis se caracteriza por la destrucción total de la membrana por lo que se detecta por la aparición de un halo transparente alrededor de la colonia. Cuando los microorganismos no producen ningún tipo de hemólisis se dice que son gamma-hemolíticos. (3). gamma-hemolíticos. (3).

C) SE REPITIÓ LOS MISMOS PROCEDIMIENTOS ANTERIORES EN EL MEDIO AGAR AG AR MA MACC CCON ONKE KEY Y (Ver. Anexo 9). Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se observa fácilmente en el medio por la l a aparición de zonas opacas alrededor al rededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. (3). transparentes. (3).

D) UNA VEZ SEMBRADAS LAS PLACAS, ESTAS FUERÓN INCUBADAS A 35 - 37° C. EN 18 - 24 HORAS.

RESULTADO

Después de 24 horas se observaron observaron las placas de Agar Sangre y Agar Macconkey en la zona de inoculación y no se hallo crecimiento de colonias bacterianas, por tal motivo se diagnostico como: Urocultivo negativo a las 24 horas.


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SOLUCIÓN DEL CUESTIONARIO 1) ¿Cuáles son los gérmenes más frecuentes causantes de una infección urinaria? A) Escherichia Coli

E) Enterobacter

B) Klebsiella

F) Enterococos

C) Proteus

G) Serratia

D) Stafilococo

2) ¿Cuál es el punto de corte para determinar una bacteriuria significativa? En los años años 50, Kass definió que que el recuento recuento de de 100.000 o más colonias colonias por ml de orina (100.000 (100.0 00 UFC/ml), determinaban una bacteriuria significativa. (3). *Sin embargo al correr del tiempo, otros autores han propuesto niveles menores para el diagnóstico de bacteriuria significativa, en ciertas poblaciones de pacientes sintomáticos, por ejemplo 1.000 ufc/ml y 100 ufc/ml. Bajos recuentos bacterianos podrían deberse también a IU por cocos grampositivos, diuresis forzada, antimicrobianos suministrados previamente, contaminación de la muestra, o muestras tomadas muy al inicio de la enfermedad. Es importante recordar que también se observan recuentos bajos en IU adquiridas por vía hematógena. (1). hematógena. (1).

3) ¿Qué volumen recoge el asa calibrada en los urocultivos? El volumen que recoge el asa calibrada es de 0.001 mL <> 1 uL.

Si: 1 mL 1 mL = 1000 uL; 1000 uL; 1 uL = 0.001 mL 0.001 mL 4) ¿Cuáles son los métodos de toma de muestra para los urocultivos? 

5) ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas mínimas, para la identificación de Escherichia coli? Las pruebas bioquímicas mínimas para identificar la Escherichia coli son:

TSI – Triple Triple Agar Hierro / 1) Evalúa la utilización de azucares / 2) Formación o producción de gas/ gas/ 3) Formación o producción de hidrógeno sulfurado. sulfurado. (3). A: Acidez = Amarillo – El El ph baja por la utilización de la glucosa. (3).


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K: Alcalinidad = rojo – El El ph se mantiene por qué no hay utilización de glucosa.

(3).

TSI

Lactosa Sacarosa Glucosa

Se da la formación de gas: se observan burbujas (3). La formación de hidrógeno sulfurado: El medio se vuelve negro totalmente o parcialmente. (3).

EL TSI: presenta como indicador el rojo de fenol. (3) (3)..

LIA – Agar Lisina Hierro / Evalua la desaminación y la descarboxilación/ Descarboxilación: Cuando la bacteria degrada el grupo carboxilo y es (k/K) / Desaminación: cuando la bacteria degrada el grupo amino y es (R/A) - (3). 

SI es LIA positivo el color se acentúa más, ósea se vuelve más azul. (K/K)

(3). 

Si es LIA negativo el color vira a Rojo en la superficie y Amarillo en la base. (R/A) (3).

El LIA: Presenta como indicador el purpura de bromo cresol. (3) (3)..

Citrato de Simmons – El citrato evalúa la utilización de carbono como única fuente de carbono: carbono: / positivo si es azul azul / Negativo si es verde. (3). El Citrato de Simmons: Presenta como indicador el Azul de Bromotimol. (3) (3).. SIM – SIM – Parámetros Parámetros que evalúa:  Sulfuro (H2S): Negro: va desde 1+ a 4+ / (3).


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

Indol: Se presenta como un anillo de color rojo a través del reactivo de Kovack/ 1) Se forma un Anillo rojo por que la bacteria posee la enzima triptofanasa e hidroliza el triptófano del reactivo/ 2), Si el anillo se mantiene amarillo entonces la bacteria no posee la enzima trptofanasa. (3).



Movilidad: Evalúa la difusión de la bacteria si esta posee la facultad de motilidad (flagelos). (3). (flagelos). (3).

El SIM: No presenta indicador / El medio es de color amarillo claro. (3) (3)..

Medios bioquímicos mínimos para la identificación de Escherichia coli.

TSI

–

LIA

– SIM – Citrato de Simmons

Ver Anexo 11 Para tabla de identificación bioquímica de la Escherichia coli


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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. M. Torres, A. Mattera. Infección urinaria. Revista. México: UNAM, Microbiología; 2006 Abril . Report No.: ISBN 712.

2. Miembros: Stephanie Braun J., Rossanna Camponovo C., Erna Cona T., Alejandra Fernández V., Patricia García C.. Recomendaciones para el diagnóstico microbiológico de la infección urinaria. Revista. CHILE: COMITE DE MICROBIOLOGIA CLINICA. SOCIEDAD CHILENA DE INFECTOLOGIA*, Laboratorio de Microbiología Universidad Católica de Chile; 2001. Report No.: 562.

3. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR, SPARE, INWOOD. MÉTODOS DE LABORATORIO. Segunda Edición ed. INTERAMERICANA , editor. MÉXICO; ESPAÑA; BRAZIL; COLOMBIA; ECUADOR; URUGUAY; VENEZUELA: INTERAMERICANA; 1984.

ANEXOS


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ANEXO 1

ANEXO 2

Métodos para la obtención y clasificación de la muestra de orina para urocultivo.

ANEXO 3

Procesamiento de la muestra en que se sospecha una infección urinaria.


Página 23

ANEXO 4

ANEXO 5

ANEXO 6

La muestra fue rotulada con el número 2. El color fue: Amarillo, El aspecto fue: turbio


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ANEXO 7


Página 25

ANEXO 8


Página 26

ANEXO 9

ANEXO 10


Página 27

ANEXO 11


Página 28

Una de las más grandes cualidades del hombre es la humildad”


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Urocultivo - Informe de Microbiología

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