INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
CURSO
:
MICROBIOLOGÍA
TEMA
:
MICROCOCCUS
CICLO
:
VI
DOCENTE
:
Luis Castillo Amado
ALUMNOS
:
- Víctor Rosales Urbano
- Juan Acosta Quicaño - Dante Santos Erazo - Ángel Jesús Gonzáles
FECHA
:
02-11-2009
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INDICE. INTRODUCCION………………………………………………... 1.-
ESTUDIO DE BACTERIAS DEL GENERO MICROCOCCUS PLANTEAMIENTODELPROBLEMA, PLANTEAMIENTODELPROBLEMA, OBJETIVOS, ESPECTOS GENERALES DEL GENERO MICROCOCCUS. ……...
4.1.2.- DIAGNÓSTICO MICROBIOLOGICO COLORACIÓN GRAM MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E IDENTIFICACION MEDIO DE CULTIVO AGAR SANGRE PREPARACION DEL MEDIO BASE…………………... 4.1.32.2.-
PREPARACION DEL MEDIO BASE PREPARACION DEL AGAR SANGRE……………… …… …
- MEDIO MEDIO DE CULT CULTIVO IVO AGAR AGAR MANI MANITO TOL L SAL SALAD ADO O - AGAR MANITOL SALADO……………………………………
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Pag.5 Pag.6 Pag.7
- PRUEBA UEBAS S BIOQU IOQUÍM ÍMIC ICAS AS - PRUEBA DE LA CATALASA…………………………………
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- PRUEBA UEBA DE LA COA COAGU GUL LAS ASA A - PRUEBA DE UTILIZACION DE GLUCOSA - EN MEDIO HUGH-LEIFSON (OF)…………………………….
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- CARAC ARACTE TERÍ RÍST STIC ICAS AS BIOQU BIOQUÍM ÍMIC ICAS AS::
-
Son catalasa positiva…………………………………………….. Son no fermentadores de glucosa.
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- USOS INDUSTRIAL IALES - HIPÓTESIS - IDEN IDENTI TIFI FICA CACI CION ON DE DE MICR MICROC OCOC OCCU CUS S EN QUESO ARTESANAL…………………………………..
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- PROCEDIMIENTO - Prep Prepar arac ació iónn de de la mu mues estr traa - Cultivo de la Muestra……………………………………….
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- RESULTADOS - CONCLUSIONES - BIBLIOGRAFIA……………………………………………
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INTRODUCCION Los Micrococcus son células bacterianas esféricas de diámetro comprendido entre 0,5 y 3 micrómet micrómetros ros que típi típicam camente ente aparecen aparecen dispuesta dispuestass en tétradas. tétradas. Son Gram positivas positivas,, aerobias estrictas. Estas bacterias generalmente son organismos saprofíticos, están presentes normalmente en la microflora cutánea, productos lácteos, agua y suelo. El género es raramente asociado con enfermedades, aunque actualmente se cataloga como patógeno oportunista, particularmente particularmente en pacientes pacientes con inmunodeficiencia inmunodeficiencia,, tales como enfermos de VIH. en los que puede producir infecciones pulmonares y en raras ocasiones bacteriemia recurrente, Shock séptico, endocartidis o neumonía La importancia del estudio de los micrococos en alimentos nos permite conocer que algunas desdoblan las proteínas con producción de ácidos. Por esta capacidad capacidad proteolítica actúan actúan contami contaminant nantes es de aliment alimentos os cárnicos cárnicos,, otras otras especie especiess tol toleran eran concentr concentracio aciones nes elev elevad adas as de sal, sal, tamb tambié iénn son son capa capace cess de crec crecer er en salm salmue uera ras, s, Otra Otrass prod produc ucen en pigmentaciones y coloraciones anormales en la superficie de los alimentos, afectando su calidad, por ejemplo M. luteus produce un pigmento amarillo, mientras que M. roseus produce un pigmento rosado. Los Micrococ Micrococcos cos son aerobios aerobios estrict estrictos os y termorres termorresiste istentes ntes.. Durante Durante la maduraci maduración ón desciende su número. Elaboran proteasas y lipasas extracelulares que actúan durante la maduración de algunos quesos. Los micrococcos son débilmente fermentadores, forman parte de la flora inocua que contamina la leche cruda, tiene poca actividad enzimático por lo tanto son de muy poca importancia como agentes adulteradores en leche. Sin embargo por ser la flora más abundante en leche cruda y tener cierta capacidad proteo lítica pueden llegar a ser constantes de alteraciones en leche pasteurizadas mal almacenada.
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1.- ESTUDIO DE BACTERIAS DEL GENERO MICROCOCCUS 2.- PROBLEMA:
a. ¿Cómo identifico las bacterias del tipo Micrococcus? b. En que aliment alimentos os podemos podemos encontra encontrarr y que enferme enfermedade dadess pueden causar causar 3.- OBJETIVOS: a. Conocer Conocer y comprende comprenderr las caracterís característica ticass de las bacterias bacterias del género género Microco Micrococos cos y todos los aspectos relacionados. Determin inar ar método métodoss y técni técnica cass para para su ident identif ifica icaci ción ón en muestr muestraa de queso queso b. Determ artesanal. 4.- MARCO TEÓRICO: 4.1.- ASPECTOS GENERALES 4.1.1.- GENERO MICROCOCCUS Los Micrococcus son células bacterianas esféricas de diámetro comprendido entre 0,5 y 3 micrómet micrómetros ros que típi típicam camente ente aparecen aparecen dispuesta dispuestass en tétradas. tétradas. Son Gram positivas positivas,, aerobias estrictas. Taxonómicamente Taxonómicamente pertenecen a: Dominio:
Bacteria
Filo:
Actinobacteria
Clase:
Actinobacteria
Subclase:
Actinobacteridae
Orden:
Actinomycetales
Suborden:
Micrococcineae
Familia:
Micrococcaceae
Género:
Micrococcus
Especies:
M. Antarcticu, M. luteus, luteus, M. lylae, M. Mucilaginosis, Mucilaginosis, M. roseus
tiene una gruesa pared celular que puede abarcar el 50% del material celular. Su genoma es rico en guanina y citosina (65 al 75%). A menudo contienen plásmidos que proporcionan al organismo características útiles. Micrococcus
Estas bacterias generalmente son organismos saprofíticos, están presentes normalmente en la microflora cutánea, productos lácteos, agua y suelo. El género es raramente asociado con enfermedades, aunque actualmente se cataloga como patógeno oportunista, particularmente en pacientes con inmunodeficiencia, tales como enfermos de VIH en los 4
que puede producir infecciones pulmonares y en raras ocasiones bacteriemia recurrente, Shock séptico, endocartidis o neumonía. También a veces se encuentran contaminando alimentos. La mayoría de las especies que abundan en los alimentos son aerobias, no son patógenas (desprovistas de coagulasa y hemolisina) y catalasa positivas. La importancia de los micrococos en alimentos se debe a las siguientes características: •
•
•
•
Algunas especies desdoblan las proteínas con producción de ácidos. Por esta capacidad proteolítica actúan como contaminantes de alimentos cárnicos. Otras especies toleran concentraciones elevadas de sal, son capaces de crecer en las salmueras. La mayorí mayoríaa son son mesófi mesófilo los. s. Alguna Algunass espec especies ies son termo termodúr dúric icas, as, resis resisten ten al tratamiento comercial que se aplica a la leche ( M. varians). Algunos micrococos son psicrofilas y son capaces de crecer a temperaturas próximas o inferiores a los 10°C. Otras producen pigmentaciones y coloraciones anormales en la superficie de los alimentos, afectando su calidad, por ejemplo M. luteus produce un pigmento amarillo, mientras que M. roseus produce un pigmento rosado. Micrococcus en pescados refrigerados y congelados
Las especies de peces capturadas en mares y aguas tropicales y templadas presentan bacterias del Genero Micrococcus a nivel de branquias e intestinos. M. luteus forma parte de la microflora del pescado, y se le considera un potencial contaminante ambiental y que en algunas ocasiones puede causar infecciones. Sobrevive a bajas temperaturas y comienza su proliferación después de 9 días de almacenamiento, siendo capaz de producir diferentes enzimas descarboxilasas descarboxilasas productoras de cadaverina y putrescina que causan la descomposición del pescado mantenido en congelación. 4.1.2- DIAGNÓSTICO MICROBIOLOGICO A.-COLORACIÓN GRAM: Cocos Gram positivos, dispuestas en tétradas
B.- MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E IDENTIFICACION: B.1.- Medio de cultivo AGAR SANGRE: Crece bien en agar sangre, tras 48h de incubación en aerobiosis, forma colonias que miden aproximadamente 1 ó 2 mm de diámetro y tienen un aspecto mate. No produce hemólisis (hemólisis gamma γ)
AGAR SANGRE 5
Es un medio enriquecido, constituido por una combinación de un medio base (agar nutritivo) mas el agregado de 5 % de sangre ovina, también también puede usarse sangre humana. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Fórmula (en gramos por litro) del medio base: Infusión de músculo de corazón 375.0 Peptona 10.0 Cloruro de sodio 5.0 Agar 15.0 PH final: 7.3 ± 0.2 PREPARACION DEL MEDIO BASE: BASE: Suspender 40 g del polvo del medio base en un litro de agua destilada. Mezclar muy bien hasta obtener una suspensión homogénea. Calentar en baño María con agitación frecuente hasta disolver muy bien el polvo. Esterilizar 20 minutos a 121°C. PREPARACION DEL AGAR SANGRE: Enfriar a 45° C el medio base y agregar en forma aséptica un 5% de sangre estéril desfibrinada (a temperatura ambiente). Homogenizar bien para mezclar la sangre con el medio base y distribuir en placas. Características del medio
Medio base: color ámbar. Medio base más 5% de sangre de carnero: color rojo cereza. FUNDAMENTO La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio de cultivo un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracion de 5 %, aporta nutrientes para para el creci crecimie miento nto bacte bacteria riano, no, y permit permitee detec detectar tar la capac capacida idadd hemol hemolíti ítica ca de los los microorganismos patógenos. Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:
Hemól Hemólisi isiss α o hemóli hemólisis sis parci parcial al:: se observ observaa una zona o halo halo verdoso alrededor de la colonia. Hemó Hemóli lisi siss β o hemó hemóli lisi siss tota total: l: las las bact bacter eria iass sint sintet etiz izan an una una hemolisina hemolisina que origina lisis total de los glóbulos rojos, formándose una zona transparente alrededor de la colonia. Hemólisis γ o no hemolítico: las bacterias no producen hemólisis (de poca importancia patógena).
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B.2.- Medio de cultivo AGAR MANITOL SALADO: Los Micrococcus crecen bien en este medio. Forman Forman colonias colonias rojas, rojas, relativa relativament mentee grandes, grandes, elevada elevadas, s, cupulif cupuliforme ormess y opacas, opacas, de consistencia cremosa, a las 18-24 horas de incubación a 35-37 °C, en aerobiosis. No fermentan el manitol. AGAR MANITOL SALADO Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación diferenciación de estafilococos, donde también desarrolla especies del Genero Micrococus, a partir de muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria. Fórmula (en gramos por litro) del medio base: Extracto de carne Pluripeptona D-Manitol Cloruro de sodio Agar Rojo de fenol PH final:
1.0 10.0 10.0 75.0 15.0 0.025 7.4 ± 0.2
PREPARACION DEL MEDIO: MEDIO: Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Mezclar muy bien hasta obtener una suspen suspensi sión ón homogé homogénea nea.. Calen Calentar tar en baño baño María María con agit agitaci ación ón frecue frecuent ntee hasta hasta disolver muy bien el polvo. Esterilizar 15 minutos a 121°C. Distribuir en placas. Características del medio: Medio preparado: color rojo FUNDAMENTO Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo a amarillo. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva (S.aureus) fermentan el manitol acidificando el medio, las colonias son amarilas, rodeadas de una zona del mismo color amarillo. Los estafilococos estafilococos coagulasa negativos (S.epidermidis) (S.epidermidis ) y los Micrococcus no fermentan el manitol, presentan colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color color rojo o púrpura (muchas veces veces se les confunde y se recurre a pruebas de diferenciación diferenciación bioquímica). 7
C.- PRUEBAS BIOQUÍMICAS: Se realizan muchas pruebas de identificación y diferenciación: C.1.C.1.- PRUEBA PRUEBA DE LA CATALA CATALASA: SA: Las Las espec especie iess del del Genero Genero Microc Micrococ occus cus son son catalasa positiva. La catalasa es una enzima que descompone el peroxido de hidrogeno (H 2O2) en oxigeno y agua. El peroxido de hidrogeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo oxidativo aeróbico de los hidratos de carbono. Si se deja acumular el peróxido de hidrogeno es letal para las células bacterianas. La catalasa transforma al peroxido de hidrogeno en agua y oxigeno. H202
H2O + O2 (burbujas de gas) catalasa
Prueba de la Catalasa en lámina portaobjeto: 1. Con un asa de siemb siembra ra de punta punta recta transf transferir erir una pequeñ pequeñaa cantidad cantidad del del centro centro de una colonia bien aislada a la superficie de una lamina portaobjeto. 2. Añadir Añadir 1 a 2 gotas gotas de peroxido peroxido de hidroge hidrogeno no al 3%. 3. Real Realiz izar ar la la lec lectu tura ra.. Interpretación: La rápida aparición y producción sostenida de burbujas de gas o efervescencia indica una reacción positiva. Se puede usar como control positivo una cepa de Staphylococcus aureus y como control negativo a Streptococcus sp.
C.2.- PRUEBA DE LA COAGULASA: 8
Las especies del Genero Micrococcus son coagulasa negativa. La coagulasa es una enzima proteica, con actividad semejante a la protrombina que es capaz de transformar el fibrinógeno en fibrina provocando la formación de un coágulo visible. Prueba de la Coagulasa en tubo: 1. Colocar Colocar aséptic asépticamen amente te 0,5ml 0,5ml de plasma plasma de conejo conejo en un tubo estér estéril il 2. Añadi Añadirr 0,5 ml de un culti cultivo vo puro de 18 a 24 horas en caldo caldo (cald (caldoo infusió infusiónn de cerebro corazón) del organismo por investigar. investigar. 3. Mezclar por rotación rotación suave del tubo, tubo, evitando evitando remover remover o agitar agitar el contenido. contenido. 4. Coloc Colocar ar el tubo tubo en en baño baño María María (37°C (37°C). ). 5. Real Realiz izar ar la la lect lectur ura. a. Interpretación: La prueba es positiva cuando se observa la formación de un coagulo visible y permanente en el fondo del tubo .Se puede usar como control positivo una cepa de Staphylococcus aureus y como control negativo de Staphylococcus epidermidis.
POSITIVA
NEGATIVA
C.3.- PRUEBA DE UTILIZACION DE GLUCOSA EN MEDIO HUGH-LEIFSON (OF): Esta prueba permite diferenciar al género Micrococcus de Staphylococcus epidermidis en base a la utilización oxidativa o fermentativa de glucosa. Las especies de Micrococcus producen acido utilizando la glucosa por vía oxidativa,
Se emplea el medio de oxidación-fermentación de Hugh-Leifson (OF). MEDIO OF DE HUGH-LEIFSON 9
Peptona Agar Fosfato dipotásico PH
2,00 g 2,50g 0,30g 7,1
Glucosa Azul de bromotimol Cloruro de sodio Agua destilada
10,00g 0,03g 5,00g 1000,00ml
FUNDAMENTO Los ácidos formados por degradación oxidativa de la glucosa son sumamente débiles y para su detección se requiere un medio de oxido fermentación mas sensible, como el de Hugh y Leifson (medio OF). C.4.- Prueba de utilización de la Glucosa en el medio Hugh y Leifson (medio OF): El medio debe colocarse en tubo y estar en plano semi-inclinado, presentando presentando pico de flauta. 1. Se requieren requieren dos tubos tubos para la prueba, prueba, inoculados inoculados con el organismo organismo descon desconocid ocidoo con un asa de siembra de punta recta que atraviese el medio hasta llegar al fondo del tubo. 2. Cubrir un tubo de cada cada par con con una capa capa de un un cm de aceite mineral, mineral, y el otro tubo tubo dejar abierto expuesto al aire. 3. Incubar Incubar ambos ambos tubos tubos a 35°C 35°C durante durante 48 horas. horas. Interpretación: La producción de acido por metabolismo oxidativo se detecta en el medio por la aparición de color amarillo. En el caso de organismos oxidativos la producción de color se puede notar primero cerca de la superficie del medio, en caso de los organismos fermentativos la acidez se produce en el fondo del tubo. El siguiente cuadro indica las reacciones: En tubo abierto Tubo cubierto Tipo de metabolismo Acida Alcalina oxidativo (Amarillo) (Verde) Acida Acida fermentativo (Amarillo) (Amarillo) En este este medi medioo de oxid oxidac ació iónn-fe ferm rmen enta taci ción ón Hugh Hugh-L -Lei eifs fson on (OF) (OF) las las espe especi cies es de Micrococcus producen acido solo en el tubo abierto (utilización oxidativa), en tanto que el S.epidermidis produce acido en ambos tubos, abierto y cerrado, debido a su capacidad de fermentar hidratos de carbono. D.- CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS: D.1.- Son catalasa positiva.
La catalasa es una enzima que descompone el peroxido de hidrogeno (H2O2) en oxigeno y agua. El peroxido de hidrogeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo oxidativo aeróbico de los hidratos de Carbono. Si se deja acumular, el peróxido de hidrogeno es letal para las células bacterianas. La catalasa transforma al peroxido de hidrogeno en agua y oxigeno. H202
H2O + O2 (burbujas de gas) Catalasa
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Prueba de la Catalasa en lámina portaobjeto. 1.- Con un asa de siembra de punta recta transferir una pequeña cantidad del centro de una colonia bien aislada a la superficie de una lamina portaobjeto. 2.- Añadir 1 a 2 gotas de peróxido de hidrogeno al 3%. 3.- Realizar la lectura. Interpretación: La rápida aparición y producción sostenida de burbujas de gas o efervescencia indica una reacción positiva. Se puede usar como control positivo una cepa de Staphylococcus Staphylococcus aureus y como control negativo a Streptococccus ssp. D.2.- Son no fermentadores de glucosa.
Test de Fermentación de Glucosa Este te Este test st pe perm rmit itee di dife fere renc ncia iarr al gé géne nero ro Mi Micr croc ococ occu cuss de dell gé géne nero ro Staphylococcus ya que este último da esta prueba positiva. Staphylococcus Staphylococcus aureus:
Fermen Fermenta ta gluco glucosa sa,, se produc producee acid acidez ez (medio (medio amari amarillo llo). ). Micrococcus spp. : No fermenta glucosa (medio rojo-naranja) Los micrococos son bacterias gram positivas que necesitan oxígeno para vivir. Son células esféricas esféricas que a menudo se encuentran encuentran solas o por pares. Se dividen típicamente típicamente en más de un plano, produciendo tétradas, tétradas, paquetes cúbicos irregulares de cuatro células. No forman esporas y muchas de ellas no son móviles. Los micrococos son aerobios estrictos o facultativos. Respiran utilizando al oxígeno como aceptor aceptor final final de electro electrones. nes. Sint Sinteti etizan zan unos pigmento pigmentoss respirato respiratorios rios llamado llamadoss citocromos y una clase de quinonas también implicadas en la respiración, llamadas menaquinonas. menaquinonas. Muchas especies metabolizan metabolizan azúcares, como por ejemplo la glucosa que se oxida a acetato o totalmente a CO 2 y H2O. Metabolizan la glucosa por la vía de la hexosa monofosfato, en lugar de la vía de Embden-Meyerhof usada por las eucariotas y muchas bacterias heterótrofas. Algunas especies también oxidan compuestos orgánicos más pequeños, como piruvato, acetato lactato, succinato y glutamato mediante el ciclo de Krebs Krebs típi típico co de las mit mitocon ocondria drias. s. Algunos Algunos micrococos micrococos pueden pueden crecer crecer en ambiente ambientess hipe hipers rsal alin inos os con con porc porcen enta taje jess de sal sal en el agua agua de 5% 5%(e (ell agua aguass de mar mar ti tien enee aproximadamente 3.4%). Todos descomponen el peroxido de hidrógeno mediante la enzima catalasa. El género Micrococcuss tiene varias especies, algunas de ellas con movimiento M.luteus se caracteriza por la producción de un pigmento amarrillo y M. Roseus por la de uno rojizo. La pared celular de M. Luteusse caracteriza por contener unidades peptídicas de Llisina. Las bacterias pertenecientes a este género tienen sistemas multienzimáticos de transp transport ortee de elect electron rones es li liga gados dos a la membra membrana na celul celular, ar, estos estos sistem sistemas as conti contiene enenn citocromos a, b y c y pigmentos carotenoides amarrillos amarrillos y rojizos. La temperatura óptima para muchas especies de Micrococcus es de unos 30º C. Micrococcus Micrococcus roseus tiene gran parecido con M. radiodurans radiodurans. Algunos bacteriólogos consideran que M. radiodurans es simplemente una cepas de M roseus, puesto que sus
ADN poseen similares proporciones de guanina y citosina y tienen pigmentos parecidos y otras características bioquímicas en común. Sin embargo, la composición de la pared 11
celular de M radiodurans radiodurans es totalmente diferente de la de todos los demás miembros del género, M radiodurans tiene una gran resistencia a las radiaciones gamma y ultravioleta. Quizás esta resistencia pueda relacionarse con la peculiar composición de su pared celular. 4.2.- USOS INDUSTRIALES: Por su versa versatil tilid idad ad meta metaból bólic icaa alguna algunass especi especies es del del Genero Genero Microc Micrococc occus us ti tiene enenn la capaci capacida dadd de util utiliza izarr un exten extenso so rango rango de substr substrato atos. s. Puede Puedenn tambi también én reali realiza zarr la biodegradación de muchos otros contaminantes ambientales y de esta manera participar en la conservación del ecosistema. Son sintetizadores de largas cadenas (C21-C34) de hidrocarbonos alifáticos utilizados para la producción de aceites lubricantes. 5.- HIPÓTESIS:
Las bacterias del genero micrococos son microorganismos patógenos Estas bacterias se desarrollan frecuentemente en sustancias salinas.
6.- IDENTIFICACION Y MUESTREO DE ALIMENTOS PARA ANALISIS IDENTIFICACION IDENTIFICACIO N DE MICROCOCCUS EN QUESO ARTESANAL No obstante que Micrococcus normalmente convive en armonía con el huésped humano o animal, formando parte de su flora sin causar daño, su importancia radica porque algunas especies producen pigmentaciones y coloraciones anormales en la superficie de los alimentos, afectando su calidad. 6.1.- MATERIALES
Balanza
Varilla
Tubo d ensayo
agua destilada
Gradilla
Cronómetro
Cuchillo 12
6.2.- PROCEDIMIENTO: Preparación de la muestra: - En esteri esterili lida dadd se pesa pesa 3gr. 3gr. de la mues muestra tra (queso (queso). ). - Se coloc colocaa en un mo mort rter eroo esté estéri rill y lueg luegoo se agreg agregaa So Solu luci ción ón salin salinaa estéril y se va desmenuzando hasta disgregar completamente el queso. - Luego, Luego, homo homoge geniz nizamo amoss la muest muestra, ra, agit agitam amos os hasta hasta que que se observ observee un líquido lechoso, el cual se pasa a un tubo de prueba estéril. Cultivo de la Muestra: - A parti partirr de la muest muestra ra conte conteni nida da en el tubo tubo (liq (liquid uidoo lechos lechoso) o) coger coger un inoculo (asada) con el asa de siembra estéril y sembrar por estrias en una placa que contiene el medio de cultivo Agar Manitol salado. Incubar a 35-37 ºC por 24h. - Pasado Pasado el tiemp tiempoo de incuba incubació ción, n, realizam realizamos os la lect lectura ura de la la placa. placa. Se buscan buscan colon colonias ias características: características: colonias colonias rojas rodeadas de una zona zona del mismo color rojo o púrpura, no fermentan el manitol. - De las las colon colonia iass sospe sospech chos osas as (pre (presu sunt ntam amen entt e Micrococcus Micrococcus), se escoge una colonia y a partir de esta se siembra en 3 tubos que contienen Agar Manitol que debe estar a una temperatura de 50 ºC (por técnica de punción haciendo llegar el alambre de siembra hasta el fondo del tubo introduciendo en forma de espiral), luego inmediatamente se enfría colocando en un recipiente con hielo hasta que el medio se solidifique y se incuba a 35 ºC por 24 h. - El Agar Agar Manit Manitol ol presen presenta ta un colo colorr lila lila a morado, morado, antes antes de de la siembr siembra. a. Tiene Tiene como como indicador indicador de pH a purpura de bromocresol. Las bacterias pueden tener este comportamiento en el Agar Manitol: 1.-Amarillo en la superficie y morado en el fondo: se produce oxidación en la superficie del medio medio (posible Micrococcus) 2.-Todo el medio de color morado: inerte, no hubo ningún cambio en el medio de cultivo (posible otra especie de Staphylococcus pero no S.aureus) 3.-Todo el medio de cultivo de color color amarillo: amarillo: se produce produce fermentación fermentación del del manitol (Staphylococcus aureus) -
En mucha muchass ocasione ocasioness se les les confun confunde de a Microc Micrococcu occuss con S.epi S.epidermi dermidis dis y se recurre recurre a pruebas de diferenciación bioquímica: Prue rueba de la Cat Catalasa Prue rueba de de la la ox oxidasa Prue Prueba ba de de Resi Resist sten enci ciaa a la Fur Furaz azol olid idon onaa Prue Prueba ba de Resi Resist sten enci ciaa a la Baci Bacitr trac acin inaa Género
Catalasa
Oxidasa
Resistencia a Resistencia a Furazolidona Bacitracina
Micrococcus
positiva
positiva
positiva
negativa
Staphylococcus
positiva
negativa
negativa
positiva
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7.- RESULTADOS: -En Agar Manitol salado: salado: crecen colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color rojo o púrpura, no fermentan fermentan el manitol. manitol. -En Agar Manitol: Manitol: se obtiene el siguiente resultado: En los tres tubos se observaron: color amarillo en la superficie y morado en el fondo (se (se prod produc ucee oxid oxidac ació iónn en la supe superf rfic icie ie del del medi medio) o) lo que que indi indica ca que que la bact bacter eria ia posiblemente sea Micrococcus. - Se obtuvo el siguiente resultado en las pruebas de diferenciación bioquímica: - Prue Prueba ba de la Cata Catala lasa sa : posi positi tiva va - Prue Prueba ba de la oxid oxidas asaa : posi positi tiva va - Prueba de Resistencia a la Furazolidona: positiva - Prueba de Resistencia a la Ba Bacitracina: negativa 8.- CONCLUSIONES: La bact bacter eria ia aisl aislad adaa a part partir ir de la mu mues estr traa de ques quesoo arte artesa sana nall se trat trataa del del Géne Género ro Micrococcus. Tanto en el medio de aislamiento como en los medios de diferenciación bioquímica el comportamiento de la bacteria que se aisló indica que se trata del genero Micrococcus. 9.- BIBLIOGRAFÍA: http://www.slideshare.net/pedritopacheco/micrococcus . Greenblat, C.L., Baum, J., Klein, B.Y., Nachshon, S., Koltunov, V., Cano, R.J., (2004). Greenblat, “Luteus del micrococo”. Ecología microbiana 48: 120–127.
http://www.cepis.org.pe/bvsaidis/resisoli/iii-131.pdf . http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/ciencia/v01_n2/flavonoides.htm . http://www.cybertesis.edu.pe/sisbib/2003/alcantara_lj/pdf/alcantara_lj-TH.3.pdf . http://bvs.minsa.gob.pe/php/decsws.php?tree_id=B03.510.400.500.500&lang=es .
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