Somogyi-Nelson adalah titrasi penetuan kadar gulaFull description
by nahnu aslamiaDeskripsi lengkap
Estimation of Reducing Sugar by Nelson-somogyi Method
La determinación de azúcares reductores mediante el método de Somogyi-Nelson se basa en la capacidad de estos azúcares para reducir agentes oxidantes suaves como el Cu2+.. El Cu2+ se reduce a Cu+, y en presencia de arsenomolibdato amónico forma un complejo de color azul, a partir del cual podemos conocer mediante espectrofotometría la cantidad de cobre reducido, y por lo tanto, de azúcar reductor.
Reactivo de Somogyi I Reactivo de Somogyi II Glucosa de 500 ppm (Sol A) Reactivo de Nelson 12 Tubos de ensayo (de tapa roscada) Vaso de precipitados 25 ml Vaso de precipitados 50 ml Probeta 25 ml Pipeta automática 1 ml Pipeta automática 5 ml Agua destilada destilada Tres muestras problema (A, B, C) Espectrofotómetro Agitadorr de tubos o vórtex Agitado Cubeta Incubadora
Para empezar, preparamos las muestras problema para realizar el experimento. Primero preparamos el Reactivo 1, compuesto por Reactivo de Somogyi I y
Reactivo de Somogyi II mezclados en proporción 4:1. Para ello mezclamos con ayuda de las pipetas automáticas 19,2 ml de Somogyi I con 4,8 ml de Somogyi II, hasta alcanzar un volumen final de 24 ml aproximadamente (dos por cada tubo de ensayo). Para continuar, mezclamos por duplicado 2 ml de cada muestra problema con 2 ml de Reactivo de Somogyi (anteriormente creado), homogeneizamos las disoluciones con ayuda de un vórtex y las incubamos en un baño de agua hirviendo durante 15 min. Una vez transcurrido ese tiempo, dejamos enfriar y añadimos 2 ml de Reactivo de Nelson y 4 ml de agua destilada. Homogeneizamos la nueva disolución y evaluamos la absorbancia de cada muestra mediante un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm. Una vez sometidas las muestras problema a la espectrofotometría obtenemos los siguientes
|Muestra |Absorbancia |Absorbancia media | |A1 |0.664 |0.6535 | |A2 |0.643 | | |B1 |0.071 |0.041 | |B2 |0.011 | | |C1 |1.049 |1.0145 | |C2 |0.980 | | A continuación, continuación, preparamos preparamos en seis tubos de ensayo seis disoluciones distintas formadas por agua destilada y una solución de glucosa de 500 ppm. En esta tabla se especifican las cantidades que hay que añadir de cada, y las respectivas concentraciones que tendrán las disoluciones resultantes: |Glucosa 500 ppm |Agua destilada |Concentración de glucosa | | | |resultante | |0 ml |2.0 ml |0 ppm |
|0.1 ml |1.9 ml |5 ppm | |0.2 ml |1.8 ml |10 ppm | |0.3 ml |1.7 ml |15 ppm | |0.4 ml |1.6 ml |20 ppm | |0.5 ml |1.5 ml |25 ppm |
Estas son las concentraciones de las muestras para el volumen final de 10 ml que se obtenía tras procesarlas. Ahora mediante una regla de tres, hallamos la concentración de las muestras iniciales: C = x · VFinal/VO
Después, las sometemos al mismo proceso que hemos realizado para las muestras problema. Las soluciones resultantes se introducirán en el espectrofotómetro para crear una curva de calibrado a partir de las concentraciones y su respectiva absorbancia a una longitud de onde de 540 nm. Los resultados serán:
|Agua destilada |Concentración |Absorbancia | |2.0 ml |0 ppm |0 | |1.9 ml |5 ppm |0.341 | |1.8 ml |10 ppm |0.562 | |1.7 ml |15 ppm |0.847 | |1.6 ml |20 ppm |1.072 | |1.5 ml |25 ppm |1.332 | [pic]
Utilizando la curva de calibrado anterior calculamos la cantidad de azúcares reductores presente en las tres muestras problemas. Para ello despejamos la x en: y= 0.0514x + 0.0587, entonces x= (y- 0.0587)/ 0.0514 | |Ecuación |Concentración | |Muestra A |x = (0.6535- 0.0587) / 0.0514 |x = 11.572 ppm | |Muestra B |x = (0.041- 0.0587) / 0.0514 |x = 0.344 ppm | |Muestra C |x = (1.0145-0.0587)/0.0514 |x = 18.595ppm |
El método utilizado para la determinación de lo azúcares se basa en la capacidad para absorber la luz del complejo formado por el cobre reducido por los azúcares y el arsenomolibdato amónico. A partir de la absorbancia de una muestra de este complejo, podemos conocer la cantidad de cobre reducido de la muestra, y por extensión, la cantidad de azúcares reductores que hay en ella.
