Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando cromatografía por adsorción.

Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biológicas Laboratorio de Métodos de Análisis Separación de una mezcla de azul de metileno  !uoresce"na usando cromatogra#"a por adsorción$ Pro#esora% &osas Sando'al (uillermina Alumno% Miranda )no#re *osé Manuel (rupo% +I,.ec/a de entrega% 01 de marzo de 20-3

Fundamento. En la cromatogra#"a por adsorción la separación depende de los e4uilibrios de adsorción5desorción de los componentes de la mezcla6 entre la #ase estacionaria  la #ase mó'il$ La #uerza con 4ue es adsorbido un componente depende de la polaridad de este6 de la acti'idad del adsorbente  de la polaridad de la #ase mó'il$ 7n colorante es una sustancia 4ue es capaz de te8ir las 9bras 'egetales  animales$ Los colorantes se /an usado desde los tiempos más remotos6 empleándose para ello di'ersas materias procedentes de  de animales as"  como distintos minerales$

Objetivos. •

•

Aplicar la técnica de cromatogra#"a por adsorción para la separación de dos colorantes$ Comprobar la separación con base en el per9l de elución$

Resultados. Volumen de elución. (ml)

A 493

A 668

3 6 9 12 15 18 21 2 2! 3" 33 36 39 2 5 8 51 5 5! 6" 63 66 69 !2 !5 !8

0$00: 50$00: 0$020 0$02; 0$0<1 0$02< 0$001 0$020$0-; 0$0-1 0$003 50$00: 50$00+ 50$002 50$001 50$003 0$0-0 0$00+ 0$00+ 50$0-0 50$00+ 0$-<1 -$< -$01< 0$<=< 0$01<

50$001 50$0-3 0$-+1 0$120$;0< 0$:23 0$2:+ 0$-31 0$-23 0$0=1 0$030 0$0+= 0$0<1 0$0+= 0$0+0$02; 0$0-3 0$0-0$022 0$00; 0$020$020 0$0-1 0$0-: 0$0-2 0$0-2

81 8 8! 9"  >abla -$5 ,alores de absorbancia obtenidos$

0$0+ 0$0<= 0$0<3 0$0-<

0$0-< 0$0-< 0$020 0$0

Azul de

Absorbancia a +;<  33= nm -$+

-

-$2

0$=

0$3

0$=

Absorbancia +;<

0$3

0$+

0$+

Absrobancia 33=

A +;< A 33=

0$2

0$2 0

0 50$2

50$2

,olumen de elucion ?mL@

(ra9ca -$5 Absorbancia para la separación de !uoresce"na  azul de metileno$

#iscusión.

urante la cromatogra#"a6 el primer colorante en salir #ue el azul de metileno6 seguido de algunas recolecciones incoloras6 esto se debe a 4ue la almina era de tipo acida ?carga positi'a@  el compleo de el azul de metileno de igual #orma tiene carga positi'a por lo cual las cargas se repelen impidiendo la 9ación de este colorante en la almina6 además de 4ue gracias a la gran solubilidad de azul de metileno en agua6 la #ase mó'il de agua pudo arrastrar con #acilidad el azul de metileno$ 7na 'ez 4ue todo el azul de metileno se recolecto6 se procedió a cambiar de #ase mó'il por regulador de #os#atos por4ue como la !uoresce"na es polar6 tiene carga contraria a la almina6 esto la 9a a ella ?puede #ormar puentes de /idrogeno@6  no la permite salir con la primera #ase mó'il ?agua@6 pero con la auda del regulador de #os#atos básico6 alcalinizamos la almina6 rompiendo las #uerzas 4ue #ormo con la !uoresce"na6 permitiéndola !uir$ Cabe destacar 4ue se tu'o un gra'e error en el proceso de la cromatogra#"a6 el cual #ue diluir la mezcla de colorantes al momento de agregarlo6 lo cual pro'ocó un maor uso de tubos de recolección además de una maor dispersión de nuestros datos al realizar la lectura en el espectro#otómetro por lo 4ue aumentó nuestras probabilidades de error$ Como se puede obser'ar en nuestros datos obtenidos6 este error en el método solo a#ecto en la recolección de azul de metileno6 a 4ue la recolección de !uoresce"na se lle'ó a cabo en una cantidad más pe4ue8a de tubos 4ue el azul de metileno$ En la grá9ca podemos obser'ar cual es la longitud de onda a la 4ue cada colorante tiene su maor absorbancia ?33=nm para azul de metileno D +;
$onclusión. La cromatogra#"a por adsorción es una metodolog"a bastante til para la separación  puri9cación de soluciones6 pero esta conlle'a muc/os cuidados  consideraciones 4ue se deben tener en cuenta para poder separar dos o más

reacti'os6 por lo cual debe lle'arse a cabo con etremado cuidado  una alta concentración$

%&e'untas et&a. -$5Especi94ue  de9na los elementos del sistema cromatográ9co para esta separación% .ase mó'il -  2% Agua  regulador de #os#atos6 #ase estacionaria% Almina acida6 soporte% Columna 2$ e9na el termino adsorción  empleando #ormulas es4uematice 4ue #uerzas intermoleculares participan en el proceso de separación de los solutos$ La adsorción es un proceso por el cual átomos6 iones o moléculas son atrapados o retenidos en la super9cie de un material en contraposición a la absorción6 4ue es un #enómeno de 'olumen$ <$ Considerando las propiedades de solubilidad de los colorantes6 indi4ue 4ue modi9caciones /ar"a para in'ertir el orden de elución$ Cambiar"a la almina acida por almina básica para 4ue as" se retu'iera primero el azul de metileno  la !uoresce"na pueda eluir6 además de 4ue la primer #ase mó'il 4ue se usar"a seria el regulador de #os#atos a 4ue la !uoresce"na no es soluble en agua  el azul de metileno si lo cual /ar"a 4ue no /ubiera una buena separación de los colorantes si se usara primero el agua$

iblio'&a*+a. /ttp%DDFFF$mncn$csic$esDdocsDrepositorioDesGESDin'estigacionDcromatogra9aDpri ncipiosGdeGcromatogra9a$pd#  P$ Molina Buend"a6 -;=;6 HPrácticas de 4u"mica orgánica ,olumen -: o#  Colección Blanca D 7ni'ersidad de Murcia6 EI>7M6 paginas consultadas 22$