INTRODUÇÃO As transaminases (aminotransferases) consistem num signicante grupo de enzimas, responsáveis por catalisar a transferência de um grupo amino de um aminoácido para um cetoácido (de Almeida Barbosa, Barbosa, 2010) As enzimas aspartato aspartato aminotransfe aminotransferase rase ! A"# (transamin (transaminase ase glut$mica%o glut$mica%o&alac't &alac'tica ica ! #) e alanina aminotransferase ! A*# A*# (transaminase glut$mica%pin+vica ! #) catalisam a transferência revers-vel dos grupos amino de um aminoácido para o a%cetoglutarato, formando cetoácido e ácido glut$mico (.otta, 2000) ara /ue tais reaes ocorram, ' necessário /ue a3a a presena da coenzima pirido&alfosfato, ocorrendo da seguinte forma4
#ais #ais enzimas e&ercem e&ercem funes fundamentais tanto na s-ntese como na degrada degrada5o 5o de aminoá aminoácid cidos, os, podend podendo o atuar atuar como como uma liga5 liga5o o entre entre o meta me tabo boli lism smo o dos dos amin aminoá oáci cido doss e ca carb rboi oidr drat atos os,, vist visto o /ue /ue as rea ea es es catalisadas por elas envolvem a interconvers5o dos aminoácidos a piruvato ou ácidos dicarbo&-licos, ambos intermediários necessários no metabolismo de carboidratos e aminoácidos, respectivamente (.otta, 2000) As enzi enzima mass pert perten ence cent ntes es ao grup grupo o das das amin aminot otra rans nsfer feras ases es podem podem se serr amplamente encontradas nos tecidos umanos "endo /ue, as atividades mais elevadas de A"# (#) encontram%se no miocárdio, f-gado, m+sculo es/uel'tico, es/uel'tico, com pe/uenas pe/uenas /uantidades /uantidades nos rins, p$ncreas, p$ncreas, bao, c'rebro, pulmes e eritr6citos (.otta, 2000) "egundo .otta, 2007, a A*# ' principalmente encontrada no citoplasma do epa epat6 t6ci cito to,, en/u en/uan anto to 809 809 da A"# A"# está está pres presen ente te na mitoc mitoc:n :ndr dria ia #al cara ca ract cter er-s -sti tica ca pode pode au&il au&ilia iarr no diag diagn6 n6st stic ico o e prog progn6 n6st stico ico de doen doena ass epá epátticas icas "end "endo o, a part partir ir disso isso,, pos poss-ve s-vell arm armar ar /ue, /ue, em dano dano epatocelular leve, a forma predominante no soro ' a citoplasmática (A*#), en/uanto em leses graves á libera5o da enzima mitocondrial (A"#), elevando a rela5o A"#;A*# aumento nos n-veis de A*# e A"# pode indicar leses ou, at' mesmo, destrui5o das c'lulas epáticas, liberando estas enzimas para a circula5o
FUNDAMENTO DO MÉTODO TRANSAMINASE (TGO/AST):
Metodologia: Reitmamm e Frankel
A transaminase catalisa a transferência do grupamento amino de um alfa% aminoácido para um alfa%cetoácido * % aspartato = Alfa%cetoglutarato > * % glutamato = o&alacetato o&alacetato reage com a dinitrofenilidrazina A intensidade de colora5o da idrazona formada, em meio alcalino, ' diretamente proporcional ? /uantidade de o&alacetato, em determinado tempo, /ue, por sua vez, ' fun5o da atividade enzimática
TRANSAMINASE (TGP/ALT): Metodologia: Reitmamm e Frankel
A transaminase catalisa a transferência do agrupamento amino de um alfa% aminoácido para um alfa%cetoácido * % Alanina = Alfa%cetoglutarato > * ! lutamato = iruvato piruvato reage com a dinitrofenilidrazina A intensidade de colora5o da idrazona formada, em meio alcalino, ' diretamente proporcional ? /uantidade de piruvato, em determinado tempo, /ue, por sua vez, ' em fun5o da atividade enzimática PROCEDIMENTOS: TRANSAMINASE (TGO/AST):
@nicialmente, foi preparada uma solu5o de idr6&ido de s6dio de uso (0, n) com a nalidade de ser usada no nal da rea5o ob3etivo da adi5o de idr6&ido de s6dio ' intensicar a cor do produto formado, uma vez /ue este apenas ' estável em meio alcalino, estabilizando a colora5o do meio
A cada tubo foi adicionado 1,0 m* de eagente de Cor DE2, omogeneizando os tubos /ue permaneceram em repouso por 20 minutos ? temperatura ambiente
Curva de Calibra5o #;A"# 07 f(&) H 0& = 011 I H 0JF
02F 02 01F 01 00F 0
0
20
0
G0
80
100 120 10 1G0 180 200
Keito isto, o tubo de ensaio para dosagem da # foi identicado, procedendo como a seguir4
tubo foi omogeneizado e dei&ado em repouso por F minutos, ? temperatura ambiente osteriormente, o conte+do foi transferido para a cubeta, medindo a absorb$ncia em F0F nm, acertando o zero com água destilada
TRANSAMINASE (TGP/ALT):
Assim como realizado para #;A"#, inicialmente foi preparada uma solu5o de idr6&ido de s6dio de uso (0, n) com a nalidade de ser usada no nal da rea5o, com o ob3etivo de intensicar a cor do produto formado pelo mecanismo 3á e&plicado Keito isto, foi constru-da uma curva de calibra5o, obedecendo os seguintes crit'rios4
"endo adicionado a cada tubo 1,0 m* de eagente de Cor DE 2, omogeneizando os tubos /ue permaneceram em repouso durante 20 minutos ? temperatura ambiente
10,0 m* de idr6&ido de s6dio de uso (0, D), omogeneizando%os e submetendo%os a repouso por F minutos Keito isto, foram determinadas as absorb$ncias em F0F nm, acertando o zero com água destilada or m, a curva de calibra5o foi traada, colocando na ordenada os valores de absorb$ncia e na abcissa, os valores de unidades;m*, como observado a seguir4
Curva de Calibra05o #(,;A*# 07
f(&) H 0& = 01 I H 0J7
02F 02 01F 01 00F 0
0
20
0
G0
80
100
120
10
1G0
L importante salientar /ue cada reagente, do DM 1 ao DM consistem nas seguintes subst$ncias4 Número 1 - Substrato de TGP ou ALT - Cont'm4 #amp5o Kosfato 0,1
mol;* pN O,, *%Alanina 0,2 mol;*, Pcido Alfa Cetoglutárico 2 mmol;* e Azida "6dica O,O mmol;* Número 2 - Reagente de Cor - Cont'm4 2,%Qinitrofenilidrazina 1,0
mmol;* e Pcido Clor-drico 1,0 mol;* Número 3 - Hidróxido de Sódio Conentrado % Cont'm4 Nidr6&ido de
"6dio F mol;* Número ! - Padr"o % Cont'm4 iruvato de "6dio 2,F7 mmol;*, #amp5o
Kosfato 0,1 mol;* pN O, e Azida "6dica O,O mmol;* ealizados todos os procedimentos 3á descritos pata #;A*#, procedeu%se a identica5o do tubo de ensaio para dosagem da # como a seguir4
Ap6s tal procedimento, o tubo contendo a amostra foi omogeneizado e permaneceu em repouso durante F minutos, ? temperatura ambiente
CÁLCULOS E RESULTADOS TRANSAMINASE ( #;A"# ):
valor de # foi calculado atrav's da curva de calibra5o, utilizando a e/ua5o da reta obtida R H 0,001& = 0,1101 A absorb$ncia da amostra foi 0,11 Qesta maneira, foi aplicada na e/ua5o da reta da seguinte forma4 0,11 H 0,001& = 0,1101 0,11 ! 0,1101 H 0,001& 0,007J H 0,001& & H 0,007J;0,001 & H 7,J S;m* Qe acordo com o Tit utilizado, os valores de referência para #;A"#, em S;m*, para indiv-duos sadios deve ser entre a 7G S;m* Considerando o valor obtido a partir da amostra utilizada, ' poss-vel observar /ue este se encontra dentro da fai&a de valores esperados Uale ressaltar /ue, valores altos de atividade da enzima aspartato amino transferase % #;A"# pode indicar a ocorrência de les5o epática, atrav's da les5o ? membrana plasmática, liberando ent5o enzimas citoplasmáticas e, no caso da #;A"# uma poss-vel les5o mitocondrial, visto /ue esta enzima pode ser encontrada tamb'm na mitoc:ndria Uale ressaltar /ue leses cr:nicas elevam o n-vel de #;A"# na corrente sangu-nea em rela5o ao n-vel de #;A*#, devido ? les5o mitocondrial Al'm disso, o aumento da atividade da #;A"#, pode sugerir alteraes de vários tecidos, visto /ue tal enzima encontra%se em alta concentra5o no cora5o, f-gado, m+sculo es/uel'tico, rins e p$ncreas randes alteraes nos seus n-veis podem ocorrer em casos de epatites virais, t6&icas, doenas necr6ticas epáticas, mononucleoses, colestase intra%epática e distroas
TRANSAMINASE (TGP/ALT):
A partir da curva de calibra5o, o valor de # pode ser calculado atrav's da e/ua5o da reta a seguir, obtida na curva de calibra5o4 R H 0,001& = 0,107 Koi obtido 0,17G como valor de absorb$ncia da amostra, sendo aplicado na e/ua5o da reta como mostrado a seguir4 R H 0,001& = 0,107 0,17G H 0,001& = 0,107
0,17G ! 0,107 H 0,001& 0,077 H 0,001& & H 0,077;0,001 & H 27,FO S;m* #endo como base o Tit utilizado, os valores de referência para #;A*#, em S;m*, para indiv-duos sadios deve estar situado entre a 72 S;m* Qesta maneira, ' poss-vel armar /ue a amostra utilizada se encontra dentro dos valores considerados normais para #;A*# Caso o valor da enzima #;A*# estivesse aumentado, isso indicaria uma poss-vel les5o epática, visto /ue em casos de epatite viral e t6&ica, bem como em outras doenas epáticas, associadas ? necrose epática os n-veis de atividade dessa enzima encontram%se aumentados
CONCLUSÃO A partir dos testes de determina5o da atividade enzimática da aspartato aminotransferase, A"# (#ransaminase glut$mica%o&alac'tica, #) e alanina aminotransferase, A*# (transaminase glut$mica%pin+vica, # ), foram obtidos resultados dentro das fai&as aceitáveis, indicando /ue o metabolismo epático ocorre de maneira ade/uada Caso os valores dessas enzimas estivessem alterados, isso poderia indicar uma les5o epática ou, at' mesmo, destrui5o da membrana plasmática epática, gerando o e&travasamento de tais enzimas para a corrente sangu-nea
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