FACULTAD DE MEDICINA HUMANA DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS BÁSICAS MÉDICAS
Guía de prácticas BIOLOGÍA BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR 2007-II Responsable de Prácticas: Dr Luis Rodríguez Delfín Profesores de Práctica : MSc Jhon W. García López Dr. Dr. Nestor Alayo Rodríguez MSc González Esparza Paola
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PRACTICA Nº 5
OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS EUCARIOTAS I. FUNDAMENTO En 1939, en base a observaciones realizadas por los científicos alemanes Schleiden y Schwan, se plasmó la teoría celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biológicas. Esta teoría postula que los “cuerpos de todos los animales y vegetales están formados de células y que solo pueden aparecer nuevas células por división de las células preexistentes”. De ahí que los organismos por muy sencillos que sean están constituidos por unidades vivas denominadas células. La célula eucariota es más compleja que la célula procariota y contiene, a diferencia de esta última, núcleo celular. Los organismos más simples (protozoarios) están constituidos de una sola célula eucariota mientras que los más complejos o multicelulares están formados por un gran número de células eucariota que se hallan organizadas en tejidos, órganos y sistemas. II. OBJETIVOS Observar
y caracterizar células eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla y mucosa bucal). Observar y caracterizar células eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre). III. MATERIALES Encontrarás en el laboratorio Microscopio óptico Cubeta de tinción Lugol Frasco lavador Mechero de Alcohol Alcohol absoluto
Lanceta
estéril Hematoxilina Formol Eosina Sudan III
Deberás traer de casa Cebolla Hisopos Tocino Agua estancada en frasco oscuro Materiales
Láminas
portaobjeto y cubreobjeto
Gotero Bisturí
u hoja de afeitar Levadura de pan
de disección: tijera, pinza, estilete.
IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Observación de células vegetales (Células epiteliales de Allium cepa) Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla, son de forma alargada y bastante grande. La pared celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Los núcleos son grandes y muy visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente coloreadas. 1Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la membrana epidérmica que cubre la parte interna de la cebolla y extiéndala en el portaobjetos. 2Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porción de medio centímetro cuadrado, cúbrala con una
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gota de lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio. 3Reconozca las partes de la célula vegetal. 4.2. Observación de organismos unicelulares 1 Coloque una gota de agua estancada sobre un porta objeto y cubran con una laminilla. 2 Observe con el objetivo de menor aumento. 3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste. 4 Observe la forma, tamaño y movimiento de los organismos unicelulares (ver figura adjunta).
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Protozoarios más representativo
4.3. Observación de levaduras del pan Diluya un trocito de levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae ) con agua destilada, en un tubo de ensayo. 2 Observe con el objetivo de mayor aumento. 3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste. 4 Observe la forma y tamaño de estos organismos. 1
4.4. Observación de células animales (Epitelio bucal) El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo y con menos color el citoplasma de las células. Éste suele ser algo granuloso. 1Con un hisopo limpio extraiga suavemente la mucosidad de la cavidad bucal. 2Deposite la mucosidad extraída en el centro de una lámina portaobjetos y extiéndalo con un frotis. 3Agregue unas gotas de AZUL de metileno y espere 3 minutos. 4Elimine el exceso de colorante utilizando agua y coloque un cubreobjetos. 5Observe la muestra a menor aumento y localice: células asociadas y dobladas. 6Luego visualice a mayor aumento y reconozca los componentes celulares. 4.5. Observación de células animales (Tejido adiposo) El Sudan III es un compuesto que tiñe lípidos de color rojo intenso. En el tejido adiposo, que contiene gran cantidad de grasas, se observarán los adipocitos teñidos por el Sudan III. 1Con ayuda de un bisturí, cortar una fina capa de grasa de tocino 2Colocarla en un portaobjetos y cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar 4 minutos. 3Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudán III. Dejar actuar unos 5 minutos. 4Volver a lavar la preparación con agua, cubrirla con un cubreobjetos 5Observar al microscopio. 4.6. Observación de células animales (Sangre) Al microscopio las células sanguíneas se verán predominantemente los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, teñido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos:
de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. -Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo grande, redondo, son los más móviles y su función principal es la fagocitosis. -Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinófilos, con abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos.
Los
eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el núcleo teñido de color azul marino. Estos glóbulos aumentan su número en caso de parasitosis o procesos alérgicos.
Los
basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy oscuro. -Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.
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Efectúa los siguientes pasos para ambas coloraciones, Wright y Hematoxilina-Eosina: Con ayuda de una lanceta desechable, realice una punción del pulpejo del dedo anular de la mano izquierda, previa desinfección con algodón y alcohol. 2 Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto 3 Colocar el frotis extendido ya seco, sobre una base plana en posición totalmente horizontal. 1
Para la coloración de Wright: 1Coloree
con unas gotas de colorante Wright, inmediatamente agregar sobre el colorante el mismo numero de gotas de agua destilada y mezclar rápidamente, soplando suavemente hasta que se forme una capa plateada . 2 Dejar reposar la mezcla por 8 - 10 minutos, observando la intensidad de color. 3Lave con agua corriente y dejar secar al medio ambiente, si es posible con la lamina en forma vertical. 4Observe al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observación de las células y núcleos. 5Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrófilos, basófilos , eosinófilos, monocitos y linfocitos. 6Dibuje cada forma de núcleo. Para la coloración de Hematoxilina-Eosina: 1Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación. 2Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecación del colorante agregando más líquido. 3Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto. 4Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. 5Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. 6Observar al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observación de las células y núcleos. Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrofilos, basofilos, eosinofilos, monocitos y linfocitos. Dibuje cada forma de núcleo. CUESTIONARIO 1¿Qué diferencias observó entre la célula vegetal y la animal? 2 Diseñe un cuadro donde aparezcan las principales diferencias entre las células bacterianas y las animales. 3Aliste 10 organismos unicelulares patógenos para el ser humano 4¿Qué es un protozoario?. ¿Cuáles son sus características mas importantes? 5¿Qué protozoarios patógenos son responsables de las siguientes enfermedades?. Especificar cual es el agente etiológico, agente vector, y en que consiste cada uno de ellos. a) Malaria terciaria. b) Disentería. c) Trychomonas o vaginitis. d) “Uta” o espundia e) Enfermedad de Chagas. 6¿Por qué los eritrocitos se tiñen con eosina y leucocitos con hematoxilina? 7¿Por qué hay que teñir las células adiposas con Sudán III? ¿Para qué sirve el formol?
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