Practica 8.Determinacion.de.Proteinas.totales.en.Suero.metodo.deburet.verde.de.Bromosol

PRACTICA #8 TITULO: DETERMINACION DE CLORUROS POR EL METODO VOLUMETRICO

Alumno: Correa Cortes

Universidad Autónoa de! Estado de More!os "au!tad de Mediina

LABORATORIO DE LABORATORIO BIOQUIMICA Catedrático: Leticia Garca G!me"

PRÁCTICA No. 8 DETERMINACIÓN DETERMIN ACIÓN DE PROTEÍNAS PROTEÍNAS TOT TOTALES ALES EN SUERO (Técnica (Técnica de Biue! Biue! " #e #ede de Bo$o%o&'



Alumno: Correa Cortes Francisco

Eui)o * Gru#o: $ %A&

OBJETIVOS 1. Conocer Conocer los mecanismos mecanismos de absorción absorción y digestión digestión de proteínas. proteínas. 2. Conocer Conocer las principales principales vías vías metabólicas metabólicas de las las proteínas. proteínas. 3. Conoce Conocerr algunas algunas implicac implicacione iones s clínicas clínicas de alterac alteracione iones s en el metabolism metabolismo o de las proteínas.

HIPÓTESIS La cantidad de proteínas en suero puede ser indicativo de ciertas enfermedades, más no puede dar su diagnóstico. Para poder acer un buen diagnóstico debe complementarse con otras pruebas.

INTRODUCCIÓN Generalidades Las proteínas s!ricas constituyen un micro ambiente muy variado. "on fuente de nutrición y un sistema amortiguador. Las inmunoglobulinas y proteínas similares funcionan como factores inmunológicos. Las proteínas transportadoras #por $%. &aptoglobina, &aptoglobina, prealbumina y transferina' transferina' acarrean ciertos iones y mol!culas mol!culas acia su destino. destino. Las antipro antiproteas teasas as #por $%. (ntitrips (ntitripsina ina alfa y macroglo macroglobuli bulina na alfa 2' regulan la actividad de las en)imas proteolíticas y de otros tipos de proteínas *ue a%ustan la presión oncotica, las presiones del componente gen!tico #cromosómico' y las sustanc sustancias ias metabóli metabólicas cas #ormona #ormonas'. s'. $l compon componente ente monoclon monoclonal al de las inmunog inmunoglobu lobulina linas s se busca busca en el suero suero y la orina orina mediant mediante e electrof electrofores oresis is de proteína sericas #"P$P'. Las inmunoglobulinas son el principal componente de la fracción de globulinas gama sericas. $n el individuo sano, las inmunoglobulinas son policlo policlonale nales s y no monoclo monoclonale nales. s. Cuando Cuando aparece aparece una banda banda monoclo monoclonal, nal, sign signif ific ica a *ue *ue e+is e+iste te un proc proces eso o neop neoplá lási sico co,, como como miel mielo oma mlt mltip iple le o macroglobulinemia de -aldenstrm. La "P$P facilita otras t!cnicas de control, como la cuantificación especifica de ciertas inmunoglobulinas #/g(, /g0, /g' y la inmunofi inmunofi%aci %acin. n. Constit Constituye uye una de las me%ores me%ores errami erramienta entas s para precisar precisar de manera general la salud del ser umano.

Explicación de la pruea

.

$stas $stas prueba pruebas s ayudan ayudan a diagnos diagnostica ticarr algunas algunas enferme enfermedad dades es inflamat inflamatoria orias s y neoplási neoplásicas, cas, síndrome síndrome nefrótic nefrótico, o, epatop epatopatia atias s y disfunci disfuncione ones s inmunoló inmunológica gicas s y



ayudan a valorar la nutrición y las presiones osmóticas en el paciente edematoso y desnutrido. La electroforesis de proteínas sericas separa.

Descripción Las proteínas s!ricas totales refle%an la cantidad total de albmina y de globulinas en el suero. Las proteínas s!ricas, *ue se producen en el ígado y en el siste sistema ma retic reticul uloen oendo dote telia lial, l, cons constit tituy uyen en mas de 1 1 susta sustanc ncias ias difer diferent entes es agrupadas como albmina y globulinas. Las proteínas sericas son esenciales para la regula regulaci ción ón de la presi presión ón osmót osmótica ica coloi coloide de y compr compren ende den n los factor factores es de coag coagul ulac ació ión n para para la emo emost stas asis is,, en)i en)ima mas, s, orm ormon onas as,, sust sustan anci cias as para para la repa repara raci ción ón y crec crecim imie ient nto o tisu tisula larr, y amor amorti tigu guad ador ores es del del p&. p&. "on "on part parte e de anticuer anticuerpos pos,, de compone componentes ntes transpo transportad rtadores ores sanguíne sanguíneos os #bilirru #bilirrubina bina,, calcio, calcio, lípido lípidos, s, metal metales, es, o+ige o+igeno, no, ester esteroid oides es,, ormo ormona nas s tiroid tiroidea eas s y vitam vitamina inas' s' y de conservadores de los cromosomas.

!"TERI"#$ !"TERI"#$ RE"CTIVOS$ E%UIPOS 4 5ubos de ensaye de 13 + 1 1 pipeta de "alí 1 0radilla 1 bo*uilla 1 pipeta de 1 mL 6a7o aría Centrifuga $spectrofotómetro "olución de traba%o. #8eactivo de 6iuret' $stándar de Proteínas "uero problema

!&TODO' 1.9 Centrifugar la muestra para obtención de suero. 2.9 Preparar tres tubos de ensaye de 13 + 1, rotularlos como 6lanco, $stándar y Problema 3.9 Colocar en cada tubo como se indica en el siguiente cuadro:

SO#UCIÓN Reac)i*+ de )raa,+ S+lución Es)-ndar Pr+le.a

B#"NCO

EST(ND"R

PROB#E!"

1. mL

1. mL .2 mL

1. mL .2mL



/ncubar a 3;< C durante 1 min= Leer en el espectrofotómetro a >2 nm.

C(#CU#OS' P' Lectura de ?.@. problema S)' Lectura de ?.@. $stándar .

P5A ?.@. muestra B alor alor del " 5 D ?.@. $stándar

@btenemos:

+

A

/0dl1

alor normal de Proteínas 5otales: E. a F.3 gDdl.

RESU#T"DOS PT =

( )( 7

g dl

)

0.581 =4 . 067 g / dL

8ango normal: E.E9F.3 mgDdL

DISCUSIÓN ?e acuerdo al resultado, el donador de la muestra presenta una ipoproteinemia, es decir, una concentración de proteínas más ba%a *ue el rango normal. $sto puede ser indicativo indicativo de agammaglobulinemia agammaglobulinemia,, ascitis, emorragias, enfermedades enfermedades renales renales #glomeru #glomerulone lonefrit fritis, is, síndrome síndrome nefrótic nefrótico, o, entre entre otros'. otros'. "in embargo embargo,, este este resultado puede estar erróneo debido a una mala medición de volmenes, error com comn n para para las las pers person onas as *ue *ue no está están n acos acostu tumb mbra rada das s a la medi medici ción ón de volmenes. (l traba%ar con volmenes tan pe*ue7os, del orden de micras, un pe*ue7o error, como una gota de más o de menos, puede considerarse como un aumento o disminución del >G, por mencionar un e%emplo. Como menciona la ipótesis, esta prueba no es diagnóstica, sino *ue simplemente da un indicativo acerca de ciertas enfermedades, las cuales deben corroborarse con otras pruebas de laboratorio, además de un buen diagnóstico clínico.

CONC#USIÓN La cuantificación de proteínas en suero es una prueba complementaria, *ue nos ayudará con el diagnóstico de ciertas enfermedades, más no nos lo dará entero.



Como m!dicos debemos ser capaces de ver al enfermo y distinguir los signos y síntomas síntomas de las enfermed enfermedades ades,, y despu! despu!s s corrobo corroborarl rarlas as con las pruebas pruebas de laboratorio.

CUESTION"RIO 213 4%u5 s+n las pr+)e6nas7 "on macromo macromol!cu l!culas las compues compuestas tas por aminoáci aminoácidos dos unidos unidos entre entre sí por enlace enlace peptídico. 5ienen una estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria.

8134Cu-les s+n las 9unci+nes :ue dese.pe;an las pr+)e6nas las principales7 5ransporte, estructural, catalítica, defensiva, ormonal, omeostática.

<134Có.+ es)-n c+ns)i)uidas c+ns)i)uidas la es)ruc)ura es)ruc)ura = sus enlaces cu-les cu-les s+n7 Primaria: secuencia de aminoácidos. $nlace peptídico. "ecundaria: alfa9!lices y plegamientos beta. /nteracciones no covalentes. 5erciaria: motivo, dominio, subunidad. $nlaces no covalentes. Cuaternaria: subunidades unidas por enlaces covalentes.

>134 >134En En la na)u na)ura rale le?a ?a se encu encuen en)r )ran an cuan cuan)a )ass a.in a.in++-ci cid+ d+ss = cuan cuan)+ )+ss pr+)e6nas7 2 aminoácidos son los *ue se considera son usados en los organismos vivos, aun*ue aun*ue estos estos pueden pueden sufrir sufrir ciertas ciertas alterac alteracione iones s dando dando como resultad resultado o otros otros aminoácidos. "ólo en el cuerpo umano, se an identificado más de 4FE, proteínas.

@134Cu-les s+n l+s d+s )ip+s de isó.er+s = a :ue depende7 ?e+trógiros y levógiros, depende de su capacidad de desviar la lu) polari)ada, aun*ue en realidad se clasifican tomando como base la estructura del glicerol.

A134Cu-les s+n l+s a.in+-cid+s esenciales = n+ esenciales p+r l+ .en+s cua)r+ de cada un+7 $senciales: etionina, istidina, isoleucina, lisina, fenilalanina Ho esenciales: ácido glutámico, arginina, serina, alanina, tirosina.

134!en 134 !enci ci+n +naa l+s l+s .5)+ .5)+d+ d+ss de se sepa para raci ción ón de l+s l+s a.in a.in++-ci cid+ d+ss = en :u5 c+nsis)e cada un+ de ell+s7 $lectroforesis, se basa en el punto isoel!ctrico de cada aminoácido.



Cromatografía Cromatografía de ca capa pa fin fina a. $ste $ste m!t m!todo odo se bas basa en la sepa separa raci ción ón de las las mol!culas adsorbidas a una capa muy delgada de gel de sílice, mediante el flu%o de una una colum columna na de solve solvent nte e *ue se de%a de%a ascen ascender der median mediante te capi capilar larid idad. ad. La separación se reali)a en base a la polaridad de las mol!culas y la me)cla de solventes más empleada a sido butanol9 agua9acido ac!tico. Cromatografía lí*uida en columnas de intercamb intercambio io aniónic aniónico o . Los aminoácidos se acen pasar por una columna de resina con un grupo catiónico. Croma Cromatog tograf rafía ía lí*uid lí*uida a de alta alta resolu resolució ción n en colu columna mnas s de fase reve reversa rsa.. $ste $ste m!tod m!todo o consi consiste ste en aplica aplicarr los amino aminoáci ácido dos s disue disuelto ltos s en una una fase fase acuos acuosa a acidificada a una columna de sílice unida a una cadena idrocarbonada.

134%u5 s+n l+s enlaces pep)6dic+s7 "on los enlaces formados por el grupo carbo+ilo9terminal carbo+ilo9terminal y amino9terminal de otro aminoácido.

134%u5 es la alu.ina = d+nde se encuen)ra en el +r/anis.+7 La albmina es una proteína producida por el ígado. $l e+amen de albmina en suero mide la cantidad de esta proteína en la parte lí*uida y transparente de la sangre 1 "e encuentra en suero sanguíneo.

2134!enci+na la i.p+r)ancia de la es)ruc)ura = la 9isi+l+/6a celular 7 Las proteínas tienen una función muy importante tanto en la estructura como en la fisiología de la c!lula, pues entre sus funciones se encuentran las *ue mantienen a la c!lu c!lula la viva. viva. $n prime primerr lugar lugar,, el códig código o gen! gen!tic tico o se e+pre e+presa sa a part partir ir de proteínas, las cuales tienen mucas funciones. La función estructural es la *ue forma al Citoes*ueleto de la c!lula, además de *ue inmersas en la membrana ay muca mucas s prote proteína ínas. s. Iunc Iuncion ional almen mente, te, las proteí proteína nas s sirve sirven n como como mensa mensa%er %eros os intercelulares, transportan a otras mol!culas, sirven de defensa contra agentes e+tra7os, entre otros.

22134Descrie la 9unción i+ló/ica de las pr+)e6nas cinc+ de ellas en el si/uien)e +rden' )ip+s$ e,e.pl+s = 9unci+nes7 5ipos

$%emplos

Iunciones

5ransporte

&emoglobina, albmina

5ransportan macromol!culas.

$structurales

Colágeno

"on fibrosas, ayudan a mant manten ener er la estr estruc uctu tura ra celular y de los te%idos.

$n)imas

Pepsina, tripsina

Catali)an biológicas,

otras

reacciones rompen



enlaces, etc. ?efensa

/nmunoglobulinas (, ?, $, , 0

?efensiva, inmunitario

sistema

&ormonal

@+itocina

"on mensa%eros *uímicos

28134#+s a.in+-cid+s p+see di9eren)es car/as cuales s+n = :u5 +curre c+n es)as car/as7 Puede Puede ser positiv positiva a #básicos #básicos', ', negativ negativa a #ácidos #ácidos'' o neutros. neutros. $stas $stas cargas cargas están están dadas por las cadenas laterales de la estructura del aminoácido.

2<134En la pr-c)ica :ue reali?+ n+s a=uda en ap+=+ de dia/n+s)ic+ en las en9er.edades 7 &ipoprot &ipoprotein einemia emia:: agammag agammaglobu lobuline linemia, mia, ascitis, ascitis, emorra emorragias gias,, renales como glomerulonefritis, síndrome nefrótico.

enfermed enfermedades ades

&iperproteinemia: enfermedades inflamatorias crónicas, enfermedades infecciosas crónicas.

2>134!enci+na l+s di9eren)es Es)ruc)ura = :ue clasi9icación )ienen cada una7 Primaria: secuencia de aminoácidos. $nlace peptídico. "ecundaria: alfa9!lices y plegamientos beta. /nteracciones no covalentes. 5erciaria: motivo, dominio, subunidad. $nlaces no covalentes. Cuaternaria: subunidades unidas por enlaces covalentes.

2@134Cu-les s+n las Es)ruc)urales supra.+leculares7 $n ocasiones las proteínas proteínas asociadas asociadas a otras mol!culas se ensamblan ensamblan formando estructuras más comple%as denominadas supramoleculares y *ue ofrecen venta%as de una unidad funcional, teniendo en cuenta una comple%idad intermedia entre la conf confor orma maci ción ón cuat cuater erna nari ria a de las las prot proteí eína nas s olig oligom om!r !ric icas as por por un lado lado y los los lisosomas o las mitocondrias por otro. $%emplos son los virus y los ribosomas.

BIB#IOGR"F"



http://demedicina.com/aminocidos-esenciales-y-no-esenciales/ http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/estructura/EPamm2.html#AAcuant http://es.wikipedia.org/wiki/ormona!pept"$"A%dica& http://es.wikipedia.org/wiki/ormona!pept"$"A%dica & http://'iologia.laguia2(((.com/'ioquimica/propiedades-de-los-aminoacidos

REPORTE' 1.

Hiperpr+)eine.ia'

enfe enferm rmed edad ades es

infl inflam amat ator oria ias s

crón crónic icas as,,

enfe enferm rmed edad ades es

infecciosas crónicas. La iper iperpro prote teine inemia mia es una una condi condici ción ón *ue *ue se cara caracte cteri) ri)a a por por el aumen aumento to de la concentración de proteínas en suero. $n la iperproteinemia debida a desidratación, la proporción entre las diferentes fracciones proteicas se mantiene normal. $n las iperproteinemias absolutas ay un incremento de una o varias fracciones. Las alfa globulinas pueden estar aumentadas en cuadros inflamatorios agudos y en el inicio o reagudi)ación de procesos crónicos. Las beta y gamma globulinas pueden estar incrementadas en forma de gammapatía policlonal en cuadros inflamatorios crónicos y como como gamma gammapat patía ía monoc monoclon lonal al en enfe enferme rmeda dades des linfo linfopro prolif lifer erat ativa ivas s #miel #mieloma oma mltiple mltiple,, ciertos ciertos plasmoci plasmocitoma tomas, s, linfomas linfomas y leucemia leucemias'. s'. ?ebe ?ebe acerse acerse pruebas pruebas cuantitativas de proteínas. 2. agammaglobu lobuline linemia, mia, ascitis, ascitis, emorra emorragias gias,, enferme enfermedade dades s Hip+pr+)eine.ia: agammag renales como glomerulonefritis, síndrome nefrótico.

"sci)is' 8ecolección de orina en 24 oras Creatinina y electrolitos Pruebas de la función renal Pruebas de en)imas epáticas, bilirrubina, coagulación y proteína en suero (nálisis de orina orina

S6ndr+.e ne9ró)ic+' $+amen de albmina en la sangre $+ámenes de *uímica sanguínea tales como grupo de pruebas metabólicas básicas y el grupo de pruebas metabólicas completas Hitrógeno ureico en sangre #6JH' $+amen de creatinina en la sangre ?epuración de creatinina, e+amen de orina (nálisis de orina orina



Practica 8.Determinacion.de.Proteinas.totales.en.Suero.metodo.deburet.verde.de.Bromosol

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